專利名稱：吉西他濱衍生物納微粒的制作方法
技術領域：
本發明的目的是提出新的2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物(吉西他濱)，這些新衍生物對于它們以納米粒子狀態成形能力是特別有意義。
吉西他濱是一種抗腫瘤劑，脫氧胞苷的類似物，抗結腸、肺、胰腺、乳房、膀胱、卵巢癌類等固體腫瘤活性劑(Hertel L.W.等人，《癌研究》(《CancerRes.》)，50；1990，4417-4422和Plunkett W.等人，《抗癌藥物》(AnticancerDrugs)，6(補編6)；1995，7-13)。它的化學結構與阿糖胞苷(Ara-C)的化學結構類似，只是有兩個位于糖脫氧核糖2′位的對稱氟原子。這種不同的結構的有利作用在于與阿糖胞苷相比增加了吉西他濱分子的親油性和膜滲透性，因此使它的毒性更高(Heinemann V.等人，《癌研究》，48；1988，4024-4031)。吉西他濱的作用機制解釋如下。
在細胞內水平通過脫氧胞苷-激酶的作用由5′位的磷酸化激活吉西他濱，于是它轉變成其三磷酸酯衍生物。這個衍生物這時以復制方式嵌入DNA鏈中，并且作為結果鏈伸長停止，細胞死亡(Plunkett W.等人，《Semin.Oncol.》，22(4Suppl.11)；1995，3-10)。
然而，通過主要位于血、肝和腎臟中的脫氧胞苷脫氨酶的作用同時使吉西他濱代謝成其尿嘧啶衍生物，它顯得完全沒有活性(Heinemann V.等人，《癌研究》，52；1992，533-539)。因此，通過靜脈內途徑給藥吉西他濱時，考慮到它顯著降低的血漿半衰期，它不具有最佳的抗癌活性(Storniolo A.M.等人，《Semin.Oncol.》，24(2Suppl.7)；1997，S7-2-S7-7)。
為了防止吉西他濱受到這種脫氨基作用，曾提出以共價方式將其在4位的氨基與無環鏈偶合起來。在專利EP 986 570中特別考慮了這種選擇，該專利描述了吉西他濱酯和酰胺，其中3′-和/或5′-OH基團和/或N4-含胺基團是用C18-C20飽和或單飽和鏈衍生的。但是，在這種情況下達到與吉西他濱相比，這些親脂衍生物所觀察到的抗癌活性增加，不利于它們在含水介質中的溶解度。事實上，考慮到它們的非常親脂特性，這些衍生物被證實很難與靜脈內給藥相容。
本發明的目的是明確地提出新的吉西他濱衍生物，它們具有比吉西他濱高的抗癌活性，因為對代謝作用有意義的穩定性和延長的血漿半衰期，而且它還與不經腸的，特別靜脈內給藥相容。
更確切地，本發明按照第一個方面涉及下式(I)2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物 式中R1、R2和R3，相同或不同，彼此獨自代表氫原子或至少C18含烴酰基，具有如此構象，以致它能使所述的式(I)化合物在極性溶劑介質中特別具有納米粒子類的致密形態，R1、R2和R3基團中至少一個基團不同于氫原子。
本發明按照另一個方面涉及本發明的吉西他濱衍生物納米粒子。
本發明按照另一個方面涉及這些納米粒子的制備方法，其特征在于它包括-本發明的吉西他濱衍生物在至少一種有機溶劑中溶解，在攪拌下把得到的混合物加到含水相中時，其衍生物濃度足以達到在所述的含水相中瞬時生成懸浮狀的所述衍生物納米粒子，以及如果必要，-分離所述的納米粒子。
本發明按照另一個方面還涉及這些衍生物和納米粒子在制備具有抗癌或抗病毒活性的藥物組合物中的用途。
它還涉及藥物組合物，它含有至少一種本發明的衍生物，特別呈納米粒子形式的本發明衍生物作為活性物質。
最后，本發明還涉及角鯊烯酸或其衍生物中的一種衍生物在配制具有極性性質的活性組分以及特別為納米粒子狀態的核苷或類似物中的用途，所述活性組分的分子量高于或等于100Da，特別地高于150Da，更特別地高于200Da。這種用途特別地牽涉至少一個角鯊烯酸分子或其中一個衍生物與所考慮的活性組分分子的偶合，特別是共價偶合。
出乎意料地，本發明人如此觀察到，吉西他濱與至少一種至少C18含烴衍生物分子的這種共價偶合，在這種含烴衍生物具有能在極性溶劑介質中呈密集形式成形的構象的條件下，能夠得到吉西他濱基納米粒子。
這些吉西他濱衍生物因許多理由是有利的。
由于它們非常疏水和不溶于水的特性，所以它們能通過納米沉淀而以微粒狀態自發地成形。
考慮到它們的微粒尺寸小，它們以含水懸浮液形式通過靜脈內途徑是可給藥的，因此是與血管微循環相容的。
本發明考慮的這些C18含烴衍生物一般通過共價鍵固定在吉西他濱的3′-和/或5′-OH基團和/或4-氨基基團上。
這些不飽和的、非直鏈的非環含烴衍生物非常特別適合于本發明，尤其具有萜烯衍生物圖象的所述衍生物，例如像角鯊烯及其衍生物。
有利地，這種含烴衍生物是羧酸。在任何情況下，這個共價鍵在3′或5′-OH基團的情況下更特別地是酯性質的，在4-氨基基團的情況下是酰胺性質的。
當然，本發明的吉西他濱衍生物可以是包括兩次衍生作用，甚至三次衍生作用的衍生物，它們可以是相同的或不同的。
根據本發明的一個特別具體實施方案，本發明的衍生物在4-氨基基團具有至少一個含烴酰基衍生物。這時它可用R1基表示。
更特別地，本發明的吉西他濱衍生物滿足下式(IA)
式中R2和R3如前面所定義，R′1代表角鯊烯酰基及其衍生基。
在本發明的意義上，術語角鯊烯酰基衍生物應該理解是覆蓋角鯊烯酰基的取代衍生物，只要這個或這些取代基的存在對該基起源構象沒有有意義的影響。換句話說，使用這個基以及極性溶劑時，從某個濃度開始，它應該保持其被致密、造成表面張力顯著降低或表面張力快速降低的能力。
圖1或2具體地描述了這種現象。
更特別地，R2和R3這時可以表示氫原子。
本發明非常特別地涉及4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱衍生物(SQgem)。
出乎意料地，本發明人如此觀察到，本發明的這些衍生物含有作為含烴基的角鯊烯酰基時，它們應對溶劑的極性、角鯊烯圖象特別敏感。他們于是觀察到，采用這些吉西他濱衍生物與例如具有水圖象的極性溶劑，應導致自發生成納米級的微粒，因此有利地與靜脈內給藥相容。
已證明借助例如在Fessi H.等人，《Int.J.Pharm.》，55；1989，R1-R4中描述的經典納米沉淀技術可獲得本發明的吉西他濱衍生物納米粒子。
更確切地，將本發明的衍生物溶于具有丙酮和/或乙醇圖象的有機溶劑中可得到本發明的這些納米粒子。在攪拌下，把如此得到的混合物加到在一種或多種表面活性劑存在或不存在的含水相中即刻導致生成期望的納米粒子。
有利地，該方法在得到本發明的納米粒子時不要求一定要有一種或多種表面活性劑。這種性質是特別重要的，只要沒有被證實大量的表面活性劑與在活體內的應用是相容的。
然而，應該理解在本發明的范圍內期望使用一般有利地沒有任何毒性的表面活性劑。這類表面活性劑在形成納米粒子時還可以允許達到更小的尺寸。作為能用于本發明的這類表面活性劑的實例，特別可以列舉聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物、磷脂衍生物和聚乙二醇親脂衍生物。作為聚乙二醇親脂衍生物，例如可以提到聚乙二醇膽固醇。
作為聚氧化乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物實例，更特別地可以列舉聚氧化乙烯-聚氧化丙烯-聚氧化乙烯三嵌段共聚物，也稱之Poloxamers、Pluronics或Synperonics，它們具體地是BASF公司銷售的產品。與這些組的共聚物類似，還可以使用Poloxamines，它們是由(聚氧化丙烯基)疏水鏈段、親水鏈段(聚氧化乙烯基)和由乙二胺結構單元衍生的中心部分組成的。
這種微粒膠體懸浮液可以原樣保存，甚至可以蒸發以濃縮本發明的納米粒子。
一般而言，如此得到的納米粒子具有重均尺寸30-500nm，特別地50-250nm，尤其70-200nm，甚至100-175nm，其尺寸是采用光散射法使用CoulterN4MD分級機，Coulter Electronics，Hialeah，USA測量的。
本發明衍生物導致形成納米粒子的這種能力顯然是這些衍生物在含水介質中具有特別性質的結果。因此，如由下面描述實施例所得出的，4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱衍生物被證明在含水介質中具有與吉西他濱或4-(N)-硬脂酰基吉西他濱衍生物非常不同的性質。僅僅本發明的衍生物導致水的表面張力顯著降低。
本發明人還觀察到，通過這種納米沉淀時使用吉西他濱衍生物的量有可能控制這些微粒的尺寸。事實上，增加4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱一般會引起這種尺寸的增加，反之也然，如由下面的實施例2所得出的。另外，如前面所提到的，在一種或多種表面活性劑存在下生成納米粒子時也可以控制這個尺寸。
還被證明本發明的這些衍生物的抗腫瘤活性遠高于吉西他濱的抗腫瘤活性。因此，下面列出的這些結果清楚地表明，已證明4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱納米粒子的毒性比吉西他濱高5-7倍。
如前面明確指出的，這些本發明化合物以種種理由因此被證實是有利的，首先吉西他濱在4-氨基位官能化能夠有效地防止含胺官能受到脫氧胞苷脫氨酶的作用，一旦通過靜脈內給藥時，這種酶自然地是對吉西他濱降低血漿半衰期負責。
不過，這種保護作用可能借助細胞酶的作用同時有效地被消除，因此導致釋放吉西他濱。
另外，根據本發明吉西他濱與含烴衍生物結合，更具體地與角鯊烯酸結合，使吉西他濱分子具有一些物理-化學特性，這些特性足以使它具有通過納米沉淀形成微粒的能力，即其尺寸被證明對于腸胃外給藥，特別通過靜脈內途徑給藥是一致的。
本發明的衍生物還可以采用任何合適的途徑給藥。不過，如前面明確指出的，特別當這些組合物呈腸胃外給藥的納米粒子形式時，它們是特別有意義的。
本發明的另一個方面因此涉及藥物組合物，它含有至少一種本發明的化合物，特別是呈納米粒子形式的本發明化合物作為活性物質。本發明的衍生物可以與至少一種在藥物上可接受的賦形劑并用。
作為與本發明組合物相容的藥物配方實例，特別可以列舉-靜脈內注射液或灌注液；-鹽水或純凈水溶液；-吸入組合物；-眼用組合物；-膠囊、糖衣丸劑和膠囊藥劑，其中主要加入作為賦形劑水、磷酸鈣、糖，例如果糖、dactrose或甘露醇，滑石、硬脂酸、淀粉、碳酸氫鈉和/或明膠。
使用在含水溶液中呈分散狀的組合物時，它們可以與多價螯合劑或螯合劑、抗氧化劑、調節pH的試劑和/或緩沖劑類的賦形劑并用。
本發明的納米粒子當然能在表面有許多的反應性官能團，例如具有羥基或含胺官能團圖象的反應性官能團。因此可考慮的是在這些官能團上固定任何種類的分子，特別是通過共價鍵固定這些分子。
作為能與這些納米粒子結合的這類分子的非限制性說明，特別可以列舉標記物類分子、能保證靶功能的化合物，以及能使它們具有特定藥物代謝動力學特性的任何化合物。涉及到這后一方面，于是可以考慮在表面上固定這些親脂聚乙二醇衍生物納米粒子，例如像聚乙二醇膽固醇或聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺。以這樣一種化合物為基的表面糖衣對于因顯著降低肝巨噬細胞捕獲納米粒子而使血管密度增加事實上是有利的。
還可能考慮本發明的化合物和/或相應的納米粒子與例如前面定義的附屬分子通過非共價途徑結合。這種結合特別由于本發明化合物與這些其它分子之間的親合性例如使得吸附現象更突出。
于是，如在實施例4中所說明的，呈與膽固醇共軛形式的聚乙二醇可以與本發明的分子結合。事實上，考慮到角鯊烯對膽固醇的自然親合性，共軛的聚乙二醇膽固醇在此情況下與活性角鯊烯-吉西他濱共軛體結合，于是導致在表面形成被聚乙二醇覆蓋的納米粒子。另外，如前面所提到的，在角鯊烯-吉西他濱納米粒子形成過程中，共軛的聚乙二醇膽固醇因其兩親特性則有利地起到表面活性劑的作用，因此穩定這種膠體溶液，于是降低所形成納米粒子的尺寸。
除了上述化合物外，本發明的藥物組合物可以含有防腐劑、潤濕劑、增溶劑、著色劑類的劑以及香料。
由于明顯的理由，根據使用方式和給藥預定途徑，特別在抗癌結束后能使用本發明衍生物的量是能進行有意義地改變的。
例如對于通過系統途徑用于成人類病人的治療時，可以考慮使用本發明的衍生物，其劑量是每天約0.1-150mg/kg體重，更特別地每天1-40mg/kg。
另一方面，對于外用藥，可以考慮配制至少一種本發明的衍生物，其量是以考慮藥物配方的總重量計0.1-40重量％，甚至更高。
至少一種本發明的衍生物與至少一種對于所考慮病理可能也是有益的其它活性物質共給藥也是可能的。
作為能與本發明衍生物結合使用的這些活性物質代表，特別可以列舉其它抗癌分子或大分子或細胞分裂抑制劑(例如鉑鹽、antracyclines、有絲分裂紡垂體毒素、拓撲異構酶、激酶或金屬蛋白酶抑制劑)、腎上腺皮質激素(例如地塞米松)或非腎上腺皮質激素類消炎劑，或具有免疫佐劑活性的分子(例如具有抗癌活性的抗體)。可以考慮與某些化療中采用的高熱并用。本發明的衍生物還可以與用于治療癌的外科治療和/或放射治療結合起來。
本發明的另一個方面涉及角鯊烯酸或其衍生物中的一種在配制具有極性性質的活性組分中的用途，其分子量高于或等于100Da，特別地高于150Da，更特別地高于200Da，尤其在配制為納米粒子形態的核苷或類似物中的用途。事實上，本發明人已證明，以共價方式與角鯊烯衍生物締合的抗病毒核苷可以形成納米粒子。實施例6、7和8更具體地說明了這一方面。
作為根據本發明能配制的抗病毒核苷或結構類似物的非限制性說明，特別可以列舉地達諾新、齊多夫定和阿昔洛韋，但也可以列舉扎西胞苷、更昔洛韋、伐昔洛韋、司他夫定、拉米夫定、阿波卡韋、恩曲他濱、amdoxovir、dOTC或甚至sidophovir。
作為本發明范圍非限制性說明提出了下面列出的實施例和數據。
1它表示吉西他濱(Gem)、4-(N)-硬脂酰基吉西他濱(C18gem)和4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱(SQgem)溶液的表面張力(γ)隨溶液濃度的變化。
圖2它表示SQgem(NP SQgem)納米粒子懸浮液的表面張力(γ)隨溶液濃度的變化。
圖3它表示在有或沒有插入片段(MTT試驗)(n＝3)時，使用兩種細胞系在100μM SQgem納米粒子培養后，細胞成活力隨時間的變化。
實施例14-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱(SQgem)的制備a)合成角鯊烯酸(SOCOOH)往11ml蒸餾水添加1.16ml硫酸；然后輕輕地添加0.615g(2.06mmol)Na2Cr2O7-2H2O，以便得到鉻酸。在磁攪拌下把0.794g(2.06mmol)角鯊烯酸酐(SQCHO)(Ceruti M.等人，《J.Chem.Soc，PerkinTrans》，1；2002，1477-1486)溶于16ml乙醚中，然后把該圓底燒瓶冷卻到0℃。其次，往SQCHO溶液滴加鉻酸。在0℃與磁攪拌下保持其反應兩小時。這種粗制產物再用水洗滌有機相，然后采用閃式硅膠色譜法，使用石油醚/乙醚95∶5作為洗脫劑進行純化。產率35％(0.286g，0.714mmol)。
1H RMN(CD3COCH399.5％300MHz)δ5.11(5H，m，乙烯CH)、2.38(2H，t，CH2CH2COOH)、2.26(2H，t，CH2CH2COOH)、2.13-1.86(16H，m，烯丙基CH2)、1.65-1.59(15H，m，烯丙基CH3)、1.26(3H，s，烯丙基CH3)。
CIMS(異丁烷)m/z 401(100)。
EIMS m/z 400(5)、357(3)、331(5)、289(3)、208(6)、136(3)、81(100)。
b)合成4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱在裝有流量計的三頸圓底燒瓶中，把0.209g(0.522mmol)在a)得到的SQCOOH溶于1ml無水四氫呋喃(THF)中，然后在磁攪拌與氬氣流下添加溶于0.5ml無水THF中的0.053g(0.522mmol)三乙胺(TEA)。再將該圓底燒瓶冷卻到-15℃。往該反應混合物中，滴加0.057g(0.522mmol)溶于2.15ml無水THF中的氯甲酸乙酯。在-15℃下20分鐘后，添加0.137g(0.522mmol)溶于2.72ml二甲基甲酰胺(DMF)的吉西他濱，該溫度升至+5℃，最后升到室溫。采用薄層色譜法(二氯甲烷/丙酮50∶50)跟蹤該反應，該反應在磁攪拌下進行幾天直到生成酰胺。這種粗制產物再采用閃式硅膠色譜法，使用二氯甲烷/丙酮95∶5作為洗脫劑進行純化。產率55％(0.185g，0.287mmol)。
1H RMN(吡啶-d599.5％300MHz)δ12.05(1H，s，NHCO)、8.77(1H，d，CH-6)、7.74(1H，d，CH-5)、6.99(1H，t，CH-1′)、5.30-5.02(1H，m，CH-3′和5H，m，乙烯CH)、4.47-4.31(3H，m，CH-4′和CH2-5′)、2.81(2H，t，NHCOCH2)、2.53(2H，t，NHCOCH2CH2)、2.18-2.00(16H，m，烯丙基CH2)、1.68-1.55(18H，m，烯丙基CH3)。
CIMS(異丁烷)m/z 646(100)。
EIMS m/z 645(10)、577(8)、523(7)、509(18)、494(10)、454(15)、429(24)、372(100)。
c)制備由4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱組成的納米粒子根據在Fessi H.等人，《Int.J.Pharm.》，55；1989，R1-R4中描述的納米沉淀技術得到由SQgem組成的微粒。按照所希望的濃度取10mg/ml SQgem乙醇溶液試樣并添加到丙酮中，以這樣一種方式得到總共2ml有機相。在磁攪拌下，把這種SQgem在乙醇/丙酮混合物中的溶液添加到4ml MilliQ水中。即刻形成了這些微粒。在真空蒸去有機溶劑后，得到了穩定的SQgem膠體微粒懸浮液。該懸浮液應該保存在+4℃下。
實施例2微粒的物理-化學表征a)測定納米粒子尺寸使用分級機(CoulterN4MD，Coulter Electronics，Hialeah，USA)通過光的準彈性散射控制實施例1得到的膠體微粒的尺寸。
這些膠體懸浮液稀釋在MilliQ水中，以便每ml的微粒數應適合于測量儀器。
納米粒子尺寸是100-200nm。通過在實施例1描述的納米沉淀方法中使用不同濃度的SQgem控制其尺寸。得到的結果列于下表I中。
表I
b)測量4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱溶液的表面張力與其穩定性研究使用Wilhelmy薄片式表面張力計，在不變的表面上測量不同濃度SQgem水溶液的表面張力，并與吉西他濱(Gem)和4-(N)-硬脂酰基吉西他濱(C18gem)溶液的表面張力進行比較(Myhren F.等人，吉西他濱衍生物，US專利號2002/0042391)。為了制備不同稀釋度的SQgem和C18gem，需要使用乙醇溶液；在該最后溶液中的乙醇百分濃度是10％(乙醇的存在使水的表面張力從72mN/m降低到約50mN/m)。圖1示出這些結果。
應該指出，僅僅SQgem在濃度4×10-6M降低表面張力，這嚴格地相應于形成納米粒子。
通過測量不同稀釋度的SQgem微粒懸浮液不變面積的表面張力評價了在該稀釋液中SQgem微粒的穩定性。圖2說明了這種穩定性。
實施例3測定4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱微粒的抗腫瘤活性使用兩種人的腫瘤細胞系(KB3-1，鼻咽癌和MCF-7，乳腺癌)，通過與SQgem接觸72小時評價SQgem的細胞毒素活性，并且與吉西他濱活性進行比較。在DMEM介質中在37℃、5％CO2、95％濕度下保存這些細胞系，其介質含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、50mg/l抗生素。在96孔板中以1×104/孔接種這些細胞；在24小時后，添加不同稀釋度的吉西他濱和SQgem微粒，培養72小時。然后通過MTT試驗測定了細胞生存力。這些結果以CI50表示，它是50％細胞為活的時的分子濃度。
這些得到的結果列于下表II中。它們清楚地表明這些SQgem納米粒子的細胞毒素比吉西他濱分子高5-7倍。
表II
在有或沒有插入片段(0.02μm)(MTT試驗)(n＝3)時，使用兩種細胞系，通過培養100μM SQgem納米粒子也能評價在不同時間SQgem細胞毒素活性。
圖3列出這些得到的結果。應該指出，與沒有插入片段的細胞毒素試驗相比沒有降低SQgem的抗癌活性。
實施例4制備peggylées 4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱納米粒子2mg4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱和1.4mg與聚乙二醇偶合的膽固醇(Chol-PEG CHOLESTEROL PEGYLE，SUNBRIGHT CS-020)溶于1mL丙酮中。在磁攪拌下，把這個有機相加到2mL MilliQ水中。在真空蒸去丙酮后，得到穩定的納米粒子懸浮液。根據實施例2描述的方案評價的納米粒子尺寸是約75nm，ζ電位-32.7mV。
實施例5制備由4-(N)-角鯊烯酰基阿糖胞苷(SQara-C)組成的納米微粒按照實施例1關于4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱所描述的方法，通過與阿糖胞苷的反應，使用角鯊烯酸合成4-(N)-角鯊烯酰基阿糖胞苷。根據這種納米沉淀技術，如關于SQgem微粒所描述的納米沉淀技術，得到由SQara-C組成的微粒，在最后懸浮液中SQara-C濃度為1mg/ml(多分散性指數0.168)時，平均流體動力學直徑是110.4±34.1nm。
實施例6合成5′-角鯊烯酰基-地達諾新納米微粒；(2S，5R)-((4，8，13，17，21-五甲基-二十二碳-4，8，12，16，20-五烯酸-5-(6-氧代-1，6-二氫-嘌呤-9-基)-四氫-呋喃-2-基-甲酯往31mg(4，8，13，17，21-五甲基-二十二碳-4，8，12，16，20-五烯酸(SqCO2H，0.15mmol)在無水二甲基甲酰胺(1.2mL)中的溶液添加28mg N-羥基苯并三唑(0.18mmol)、36mg地達諾新(ddI，0.15mmol)、70mg六氟硼酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲(0.18mmol)和最后62mg二異丙基乙胺(0.5mmol)。該混合物在氮氣氣氛下在20℃攪拌84h，然后減壓濃縮(0.05Torr)。該殘留物溶于5mL飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有機相用NaCl水溶液洗滌，用MgSO4干燥，再真空濃縮。該殘留物采用硅膠色譜法進行純化(CH2Cl2/MeOH92/8)，得到37mg 5′-角鯊烯酰基地達諾新(Rdt58％)，為無色無定形固體形式。
IR(cm-1)3550-2700、2921、2856、1734、1691、1590、1548、1449、1380、1261。
1H RMN(200MHz，CDCl3)δ13.0(寬s，1H)、8.18(s，1H)、8.08(s，1H)、6.38(t，J＝4.2Hz，1H)、5.17-5.00(m，5H)、4.40-4.20(m，3H)、2.60-1.90(m，24H)、1.67(s，3H)、1.60(寬s，15H)。
13C RMN(50MHz，CDCl3)δ173.27(CO2)、159.20(CO)、148.34(C)、144.3(CH)、138.60(CH)、135.23(C)、135.03(C)、135.00(C)、133.09(C)、131.31(C)、125.56(CH)、125.38(C)、125.54(CH)、124.53(CH)、124.40(2CH)、85.94(CH)、79.60(CH)、65.07(CH2)、39.86(CH2)、39.83(CH2)、39.68(CH2)、34.67(CH2)、33.12(CH2)、33.01(CH2)、28.39(CH2)、28.38(CH2)、29.9(CH2)、26.83(CH2)、26.79(CH2)、26.28(CH2)、25.77(CH3)、17.77(CH3)、16.51(2CH3)、16.10(CH3)、16.00(CH3)。
使用EDCI作為偶合劑可以得到同樣的化合物，其產率10％，而角鯊酰基酰基氯與ddI縮合得到該化合物，其產率15％。
根據實施例2描述的方案評估微粒尺寸。平均流體動力學直徑是152nm，其測定標準偏差34.4nm，多分散性指數0.1。
實施例7合成5′-角鯊烯酰基-齊多夫定納米微粒；(2S，3S，5R)-4，8，13，17，21-五甲基-二十二碳-4，8，12，16，20-五烯酸-3-疊氮基-5-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶-1-基)-四氫-呋喃-2-基-甲酯往50mg(4，8，13，17，21-五甲基-二十二碳-4，8，12，16，20-五烯酸(SqCO2H，0.15mmol)在無水二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液添加45mg N-羥基苯并三唑(0.29mmol)、79mg齊多夫定(AZT，0.24mmol)、113mg六氟硼酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲(0.29mmol)以及最后102mg二異丙基乙胺(0.5mmol)。該混合物在氮氣氣氛下在20℃攪拌90h，然后減壓濃縮(0.05Torr)。該殘留物溶于10mL飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯(3×15mL)提取。有機相用NaCl水溶液洗滌，用MgSO4干燥，再真空濃縮。該殘留物采用硅膠色譜法進行純化(CH2Cl2/MeOH97/3)，得到52mg 5′-角鯊烯酰基-齊多夫定(Rdt 43％)，為無色無定形固體形式。
IR(cm-1)3158、2920、2854、2105、1741、1690、1449、1381、1270。
1H RMN(200MHz，CDCl3)δ8.2(寬s，1H)、7.22(s，1H)、6.12(t，J＝6.4Hz，1H)、5.17-5.00(m，5H)、4.40(dd，J＝12.2Hz，4.6Hz，1H)、4.30(dd，12.2Hz，3.8Hz，1H)、4.10-4.05(m，1H)、2.55-2.20(m，5H)、2.10-1.90(m，18H)、1.94(s，3H)、1.69(s，3H)、1.60(寬s，15H)。
13C RMN(50MHz，CDCl3)δ172.87(CO2)、163.57(CO)、150.12(CO)、135.31(C)、135.27(CH)、135.04(C)、134.91(C)、132.86(C)、131.35(C)、125.79(CH)、124.67(CH)、124.56(CH)、124.40(CH)、124.37(CH)、111.43(C)、85.64(CH)、82.00(CH)、63.36(CH2)、60.81(CH)、39.88(CH2)、39.85(CH2)、39.68(CH2)、37.75(CH2)、34.62(CH2)、33.18(CH2)、29.81(CH2)、28.41(CH2)、28.39(CH2)、26.91(CH2)、26.82(CH2)、26.81(CH2)、25.80(CH3)、17.79(CH3)、16.17(2CH3)、16.16(CH3)、16.12(CH3)、16.05(CH3)、12.73(CH3)。
根據實施例2描述的方案評估微粒尺寸。平均流體動力學直徑是150-170。
實施例8制備由4-(N)-角鯊烯酰基阿昔洛韋(SQACV)組成的納米微粒通過與阿昔洛韋的反應使用角鯊烯酸合成4-(N)-角鯊烯酰基阿昔洛韋。根據該采用的方法，有可能在角鯊烯鏈與阿昔洛韋之間生成酯鍵，或者酰胺鍵。由SQACV組成的微粒是根據納米沉淀技術得到的，如對SQgem微粒所描述，在最后懸浮液中SQACV濃度為1mg/ml(多分散性指數0.038)時，它們的平均流體動力學直徑是217.5+37.9nm。
權利要求
1.下式(I)2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物 式中R1、R2和R3相同或不同，彼此獨自代表氫原子或至少C18含烴酰基，具有如此構象，以致它能使所述的式(I)化合物在極性溶劑介質中具有致密形態，R1、R2和R3基團中至少一個基團不同于氫原子。
2.根據權利要求1所述的2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物，其特征在于所述的含烴酰基是非環、非直鏈和不飽和的。
3.根據權利要求1或2所述的2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物，其特征在于所述的基是角鯊烯酰基或其衍生的基。
4.根據權利要求1-3中任一項權利要求所述的2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物，其特征在于它含有含烴衍生物作為R1基。
5.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷衍生物，其特征在于它滿足下式(IA) 式中R2和R3如權利要求1-4中任一項權利要求所定義，R′1代表角鯊烯酰基及其衍生的基。
6.根據權利要求5所述的衍生物，其特征在于R2和R3兩個都代表氫原子。
7.根據權利要求1-6中任一項權利要求所述衍生物的納米微粒。
8.4-(N)-角鯊烯酰基吉西他濱納米微粒。
9.根據權利要求7或8所述的納米微粒，其特征在于它們的重均尺寸是30-500nm。
10.根據權利要求7-9中任一項權利要求所述的納米微粒，其特征在于它們與至少一種親水的聚乙二醇衍生物締合。
11.根據權利要求10所述的納米微粒，其特征在于所述的親水聚乙二醇衍生物是聚乙二醇膽固醇。
12.根據權利要求7-10中任一項權利要求所述的納米微粒的制備方法，其特征在于它包括至少-至少一種根據權利要求1-6中任一項權利要求所述的衍生物在至少一種有機溶劑中溶解，在攪拌下把相應的混合物加到含水相中時，其衍生物濃度足以達到在所述的含水相中瞬時生成懸浮狀的納米粒子，以及如果必要，-分離所述的納米粒子。
13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于該方法在沒有表面活性劑的條件下進行。
14.根據權利要求12所述的方法，其特征在于該方法在親水的聚乙二醇衍生物的存在下進行。
15.根據權利要求14所述的方法，其特征在于所述的親水聚乙二醇衍生物是聚乙二醇膽固醇。
16.藥物組合物，它含有至少一種根據權利要求1-6中任一項權利要求所述的衍生物或根據權利要求7-10中任一項權利要求所述的納米微粒作為活性物質，它們與至少一種在藥物上可接受的賦形劑并用。
17.根據權利要求7-11中任一項權利要求所述的納米微粒作為抗癌劑。
18.根據權利要求7-11中任一項權利要求所述的納米微粒作為抗病毒劑。
19.根據權利要求1-6中任一項權利要求所述的衍生物或根據權利要求7-11中任一項權利要求所述的納米微粒在制備具有抗癌或抗病毒活性的藥物組合物中的用途。
20.角鯊烯酸或其衍生物在配制至少一種呈納米微粒狀態的、其分子量高于100Da的具有極性性質的活性組分中的用途。
21.根據上述權利要求所述的用途，其特征在于它利用了至少一種所述角鯊烯酸分子與至少一種所述活性組分分子的共價偶合。
22.根據權利要求20或21中任一項權利要求所述的用途，其特征在于所述的活性組分是至少一種核苷或其類似物中的一種。
23.根據權利要求22所述的用途，其特征在于所述的核苷是2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷。
24.根據權利要求20-23中任一項權利要求所述的用途，其特征在于所述的核苷選自吉西他濱、阿糖胞苷、地達諾新和齊多夫定、阿昔洛韋、扎西胞苷、更昔洛韋和伐昔洛韋。
全文摘要
本發明涉及式(I)的2′，2′－二氟－2′－脫氧胞苷衍生物式中R
文檔編號A61K31/706GK101061131SQ200580021877
公開日2007年10月24日 申請日期2005年6月23日 優先權日2004年6月30日
發明者芭芭拉·斯泰拉, 路易吉·卡泰爾, 弗拉維奧·羅科, 帕特里克·庫夫勒爾, 雅克-米歇爾·勒努瓦, 韋羅尼克·羅西略 申請人:國家科學研究中心, 南巴黎大學, 芭芭拉·斯泰拉, 路易吉·卡泰爾, 弗拉維奧·羅科