專利名稱：1－(吲哚－6－羰基－d－苯基甘氨酰基)－4－(1－甲基哌啶－4－基)哌嗪d－酒石酸鹽的制作方法
技術領域：
本發明涉及絲氨酸蛋白酶-因子Xa的選擇性抑制劑的化合物，其藥用組合物及其治療人或動物體的用途。
絲氨酸蛋白酶是一類蛋白裂解酶，其共同的催化機理的特征為對絲氨酸殘基有特異性反應活性。絲氨酸蛋白酶的實例包括胰蛋白酶、類胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶、凝血酶、纖溶酶、血管舒緩素、補體C1、頂體蛋白酶、溶酶體蛋白酶、繭酶、α-裂解蛋白酶、蛋白酶A、蛋白酶B、絲氨酸羧肽酶II、枯草桿菌蛋白酶、尿激酶、因子VIIa、因子Ixa和因子Xa。對絲氨酸蛋白酶的研究在過去幾十年里已經十分深入，絲氨酸蛋白酶抑制劑的治療價值也廣為人之。因此，例如，因子Xa抑制劑具有作為抗凝劑的治療劑的價值，例如用于治療和預防血栓形成疾病。由于因子Xa的作用的選擇性，其用作抗凝劑十分理想。許多經臨床證明的抗凝劑由于其對凝血級聯作用的非特異性性質因而伴有副作用。
WO 00/76971公布了化合物1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪是一種因子Xa的強效選擇性抑制劑，具有非常理想的生物學性質。該化合物及其藥學可接受鹽因此可望用于預防或治療血栓形成疾病，其中有靜脈血栓形成、肺栓塞、動脈血栓形成、心肌局部缺血、心肌梗死和腦血栓形成，包括預防心房纖維性顫動突然發作。它們也可望有益于治療溶栓治療相關急性血管閉鎖以及再狹窄，例如在透照冠狀血管成形術后或冠狀或外周動脈搭橋術后，以及在透析患者長時間保持血管通路開放中。
為將該候選化合物進一步開發為藥物，則該化合物必須在具備理想的生物性質的同時還要具備適于將其制成藥品的物理學性質。具體而言，該化合物應形成穩定、優選晶體形式的固體，以易于生產和配制。
已經證明特別難于形成穩定、晶體形式的1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪。
形成結晶固體的1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪的鹽在WO 01/96323的實施例48a(鹽酸鹽)和48b(富馬酸氫鹽)中有公開。WO 02/100847要求WO 01/96323的優先權，指出鹽酸鹽的不利性質，并公開了富馬酸氫鹽可以多于一種結晶形式存在，每種形式都在申請中要求保護。富馬酸氫鹽的晶體的性質優于鹽酸鹽晶體。此外，這方面的進一步試驗表明需要性質進一步改善的鹽。因此，WO 02/100847公開的晶型1為細針狀。該細針狀形態有其制劑上的優點，因為其形成簇晶并且總體密度低。此外，還發現晶型1在極高的相對濕度下(80％以上)轉化為不同的(更高)水合物，并在水性懸浮液中轉化成WO 02/100847中公開的晶型2。WO 02/100847中公開的晶型2有其缺點，例如粒徑太小，導致極難于過濾。
因此，需要形成結晶固體的1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪的鹽形式，該固體有所需的形態，在水存在下及在極高相對濕度條件下(80％以上)穩定，并且易于大規模制備。
現已發現一種新的鹽形式的1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪可易于制備成穩定的結晶形式。
因此，從一方面來看，本發明提供1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽，又稱為1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽(1∶1)。
可以理解該堿性化合物可以外消旋形式(D/L)或手性形式存在，且優選的D-異構體可單獨或與L-異構體以外消旋混合物形式給藥。D構型是指制備該化合物的原料的D-苯基甘氨酸的構型。
根據本發明的另一方面，本發明提供1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽的結晶形式。
發現結晶形式的鹽在水中穩定、溶解度高并易于處理或加工。
現已發現1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽可從各種水-有機溶劑體系中結晶，其中包括水/丙酮和水/(1-4C)烷醇體系如水/乙醇、水/正丙醇和水/異丙醇。用水/丙酮可以得到特別高的產率，尤其是用體積比為約15/85的水/丙酮。簡便地將1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪和一當量的D-酒石酸溶于水，然后加入有機溶劑。加入少量預先制備的晶種可有助于引發結晶。
1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽結晶成薄片狀，其高度聚結并形成密度提高的流動粉末。
晶體酒石酸鹽的熱穩定性和溶劑化狀態用TA同時TG/DTA單位根據差示量熱/熱重量分析鑒別。樣品在開口鋁鍋中加熱，熱程25-≥300℃，10℃/min，氮氣流速150mL/min。溫度用銦校正。重量校正用廠商提供的標準進行，并用去溶劑化酒石酸鹽鈉確證。發現D-酒石酸鹽晶體含約5-6％重量的溶劑(主要是水)，與二水合物晶體一致。當二水合物加熱到約50℃，水分喪失。在約145℃，剩余的無水固體融化。冷卻后，融體形成無定型固體。
D-酒石酸鹽晶體的水分吸附等溫線可用真空微量天平確定，開始收集數據前用40℃干燥。經過最初的干燥步驟，觀察到最初6％的重量減少，與結晶水的去除一致。隨相對濕度的提高，樣品重新吸收水分，當相對濕度達到約20％時重新水化完成。一旦二水合物形成，其在室溫下在5-95％的相對濕度下保持穩定。
在低和高的相對濕度下的穩定性對產品來說是理性的，因為產品的使用和銷售環境非常廣泛。
將晶體材料進行X-射線粉末衍射分析。所得X-射線粉末衍射圖中發現銳強峰，在°2θ＝11.5，15.9，17.4，18.1，18.5和21.9。在°2θ＝5.2和12.0的峰也是該晶型的特征峰。峰的更詳細的分析見下表1。X-射線粉末衍射圖示于
圖1。
表1
X-射線粉末衍射(XRD)圖用Siemens D5000 X-射線粉末衍射儀測得，該儀器配有CuKα源(λ＝1.54056)以及Kevex固態Si(Li)檢測器，操作電壓和電流為50kV和40mA。樣品掃描角度2θ為3°-40°，2θ步移幅度為0.02°，掃描率為9.0秒/步，發散和接收狹縫為1mm，檢測器狹縫為0.1mm。將干粉末壓在低背景樣品架上，用載玻片使表面光滑。
X-射線粉末衍射分析領域技術人員容易理解所測的°2θ(或相應的d-間隔)的精確值會隨所分析的具體樣品以及使用的儀器和具體的分析程序而變化。誤差值通常在±0.1°2θ。
D-酒石酸鹽晶體用固態13C核磁共振(NMR)光譜儀測定。固態13C化學位移反應晶體中分子結構和分子的電子環境。該晶體的光譜包括藥物陽離子和酒石酸鹽陽離子的各相同性峰，其化學位移為25.3，26.2，42.6，45.8，46.2，47.1，48.3，50.3，52.1，54.0，55.5，57.1，61.8，73.4，74.2，76.4，101.5，102.2，112.9，114.9，117.3，118.2，119.6，121.1，125.6，126.2，127.4，128.5，129.5，130.6，132.2，136.7，139.5，167.6，169.0，170.4，174.9，175.8，178.6和179.2ppm。
13C交叉極化/磁角自旋(Cross polarization/magic anglespinning)(CP/MAS)NMR(固態NMR或SSNMR)光譜用Varian Unity Inova400MHz NMR光譜儀測得，操作時碳頻率為100.573MHz，該儀器配有完全固體附件以及化學磁(Chemagnetics)4.0mm T3探針。使用在62kHz的Ramped-振幅交叉極化(RAMP-CP)和在70kHz的TPPM去偶。獲得參數如下90°質子r.f.脈沖寬度4.0μs，接觸時間3.0ms，脈沖重復時間10s，MAS頻率10.0kHz，光譜寬度50kHz，取數時間50ms。化學位移通過樣品置換參考六甲基苯的甲基(δ＝17.3ppm)。
D-酒石酸鹽晶體在水中以及在0.01M HCl中的平衡溶解度于25℃檢測，發現其分別為≥126mg/mL和≥125mg/mL(按游離堿計)。
因此還發現D-酒石酸鹽提供的晶體材料穩定，具有極佳的加工性質且水溶性高。
可以理解本發明D-酒石酸鹽可以溶劑化物如二水合物的形式分離，且所有這類溶劑因此包括在本發明中。可以領會非生理學可接受溶劑決不可以用于藥品的制備，例如在純化步驟中。
本發明D-酒石酸鹽可通過任何常規途徑給藥，如給入胃腸道(如直腸或口腔)、鼻、肺、肌肉系統或脈管系統或透皮給予。D-酒石酸鹽可以多種形式給藥，如片劑、散劑、膠囊劑、溶液劑、分散劑、混旋劑、糖漿劑、噴霧劑、栓劑、凝膠劑、乳劑、貼劑等。這類組合物可含有藥物制劑中常用的成分，如稀釋劑、載體、pH調節劑、甜味劑、膨脹劑和其它活性劑。優選的注射或輸注組合物是無菌的合適的溶液或混懸液形式。這類組合物構成本發明的進一步方面。
根據本發明的另一方面，提供了包含本發明D-酒石酸鹽的藥用組合物，以及至少一種藥學可接受載體或賦形劑。該藥用組合物還任選包含至少一種另外的抗凝血形成和/或溶栓藥物。該化合物可有益于與不同作用模式的抗凝劑或與溶栓藥物形成聯合治療的一部分。
根據本發明的另一方面，提供了本發明D-酒石酸鹽在制備治療(即治療或預防)人或非人動物體(例如敏感物種的不如動物體)的相應于所述抑制劑的疾病(如上所述的血栓形成疾病)的用途。
根據本發明的另一方面，提供了本發明D-酒石酸鹽治療(即治療或預防)人或非人動物體(例如敏感物種的不如動物體)的相應于因子Xa抑制劑的疾病(如上所述的血栓形成疾病)的方法，所述方法包括給予其有效量的本發明的D-酒石酸鹽。
本發明化合物的劑量將取決于待治療的疾病的性質和嚴重程度、給藥途徑和患者的種類。但是一般而言，給藥量在0.01-100μmol/kg體重。
所用本文參考的出版物通過引用結合至本文中。
通過參考以下非限制性實施例對本發明做進一步描述。
試驗1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪可根據如WO 01/96323所述方法得到。
實施例11-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽二水合物的制備1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(50mg)和D-酒石酸(0.5摩爾當量，約8.3mg)輕微加熱，使其溶于無水乙醇(1mL)。冷卻后，觀察到細小固體/渾濁。滴加幾滴水，室溫攪拌該澄清溶液。4天后，真空抽濾分離形成的沉淀得到題述產物(典型的，30mg)的白色粉末。
或者，1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(200mg)和D-酒石酸(一摩爾當量，65mg)室溫溶于水(2mL)。重力過濾除去溶液中的一些渾濁。向澄清溶液中加入異丙醇(8mL)至渾濁持續不退。15-20分鐘后，觀察到粘性固體，隨后形成白色漿狀物。漿狀物變稠后，添加異丙醇(2mL)；并室溫保持漿狀物過夜。真空抽濾分離該固體沉淀并用異丙醇洗滌，隨后在對流干燥箱中70℃干燥1h得到標題產物(典型的產量，190mg)。
實施例21-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽二水合物的制備向1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(46.0g，0.1mol)和D-酒石酸(15.0g，0.1mol，Aldrich 99％對映體過量)中加入水(230mL)和丙酮(800mL)。混合物室溫攪拌15分鐘，其間該原料溶解得到澄清溶液。向該溶液中一次性加入1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽二水合物晶種(100mg)。向該漿狀物中以極低速度(60-100mL/h)加入第二部分抗溶劑丙酮(800mL)。加入完成后，將該混懸液室溫攪拌4h，然后在冰水浴中冷至5℃再保持2h。
收集晶體并用冷丙酮(100mL)洗滌。40℃真空干燥(約15mm，2kPa)該晶體24h得到標題鹽(55.7g，86.8％)。或者，可用氮氣吹干該晶體以避免除去產物中的水合水。
權利要求
1.1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽。
2.1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽的晶體形式。
3.1-(吲哚-6-羰基-D-苯基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪D-酒石酸鹽的晶體形式，其X-射線粉末衍射圖在°2θ＝11.5，15.9，17.4，18.1，18.5和21.9有銳強峰。
4.一種藥用組合物，所述組合物包含權利要求1-3中任一項的D-酒石酸鹽以及至少一種藥學可接受的載體或賦形劑。
5.權利要求1-3中任一項的D-酒石酸鹽，其用于治療。
6.權利要求1-3中任一項的D-酒石酸鹽在制備治療血栓形成疾病的藥物中的用途。
7.一種治療人或非人動物體的血栓形成疾病的方法，所述方法包括給予人或非人動物體有效量的權利要求1的D-酒石酸鹽。
8.一種治療人或非人動物體的血栓形成疾病的方法，所述方法包括給予人或非人動物體有效量的權利要求2的D-酒石酸鹽。
9.一種治療人或非人動物體的血栓形成疾病的方法，所述方法包括給予人或非人動物體有效量的權利要求3的D-酒石酸鹽。
10.一種包含權利要求1-3中任一項的D-酒石酸鹽的藥用組合物，所述組合物用于治療血栓形成疾病。
全文摘要
1－(吲哚－6－羰基－D－苯基甘氨酰基)－4－(1－甲基哌啶－4－基)哌嗪D－酒石酸鹽形成穩定的晶體形式，并且是絲氨酸蛋白酶－因子Xa的抑制劑，用于治療心血管疾病。
文檔編號A61P7/02GK1984903SQ200580021409
公開日2007年6月20日 申請日期2005年6月13日 優先權日2004年6月30日
發明者J·K·布什 申請人:伊萊利利公司