促紅細(xì)胞生成素組合加藥方案的制作方法

專利名稱：促紅細(xì)胞生成素組合加藥方案的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了有效增加成熟紅細(xì)胞的產(chǎn)生和保持并從而還通常增加血紅蛋白濃度的促紅細(xì)胞生成素組合加藥(dosing)方案。有利地，該組合加藥方案還可循環(huán)或重復(fù)進(jìn)行，以保持血紅蛋白濃度的增加或控制血紅蛋白濃度在所需水平。因此，該給藥方案相對(duì)于EPO的常規(guī)加藥方案可調(diào)整以滿足各種患者的特定需要。因而，本發(fā)明還公開了治療方法，用于實(shí)施該組合加藥方案和方法的藥包(kit)。
背景技術(shù)：
身體組織和器官的氧合作用是復(fù)雜的過程并依賴若干功能的有效進(jìn)行，如，氧攝取、經(jīng)由氧合動(dòng)脈血將氧遞送到組織、靜脈血的含氧量等。由于如肺機(jī)能異常、小動(dòng)脈阻塞或血管收縮、或血紅蛋白濃度降低等各種原因中的任一種而可能發(fā)生的上述這些功能的進(jìn)行不充分可導(dǎo)致組織氧合作用不足或組織缺氧。
由于牽涉到多種和復(fù)雜的作用，組織氧合作用充其量只能夠進(jìn)行間接評(píng)價(jià)。然而，因?yàn)殚L期組織缺氧(有時(shí)還稱為缺氧癥)可導(dǎo)致不可逆的組織損傷，組織缺氧的治療在任何患者的護(hù)理中具有極端的重要性。已經(jīng)開發(fā)了各種用于組織缺氧的治療方法，并且雖然一般而言，最佳的組織缺氧的治療方法將至少部分地基于以下原因許多患有組織缺氧的患者將在某種程度上受益于總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的增加，并且受益于通常同時(shí)發(fā)生的與總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有關(guān)的血紅蛋白的增加。
然而，所需的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的刺激、產(chǎn)生和保持也同樣是復(fù)雜的工作。也就是說，在血液系統(tǒng)中循環(huán)的每種細(xì)胞來自于非常原始的造血干細(xì)胞庫，并且通過一些分化途徑中的任一種發(fā)展形成。因此，有限數(shù)目的細(xì)胞通常在任何時(shí)候定向于任何所給途徑。一旦定向于某途徑，不保證這些定向祖先細(xì)胞成熟和存活成為特定細(xì)胞，并且即使達(dá)到成熟，成熟細(xì)胞通常還具有有限的壽命。即使可使更大百分?jǐn)?shù)的干細(xì)胞成為朝向例如導(dǎo)致成熟紅細(xì)胞的紅細(xì)胞系途徑的定向祖先細(xì)胞，然而這些定向祖先細(xì)胞中僅僅有一些或網(wǎng)織紅細(xì)胞將達(dá)到幼紅細(xì)胞階段，或變成新細(xì)胞(neocyte)。同樣地，任何這些產(chǎn)生的新細(xì)胞中僅有某些會(huì)實(shí)際存活從而變成成熟紅細(xì)胞。
EPO的常規(guī)加藥方案說明了在刺激和保持增加的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方面是困難的。也就是說，盡管這種加藥方案有效增加在血流中循環(huán)的網(wǎng)織紅細(xì)胞的濃度，但是它們通常在總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度方面不產(chǎn)生持續(xù)的增加或根本不產(chǎn)生任何增加。當(dāng)從現(xiàn)有的對(duì)EPO藥理學(xué)常識(shí)考慮，這種結(jié)果毫不驚奇；EPO結(jié)合于定向祖先細(xì)胞上的受體，從而防止細(xì)胞程序死亡和維持祖先細(xì)胞發(fā)展成為網(wǎng)織紅細(xì)胞。
例如，一種常規(guī)的EPO用藥方案，如EPO的皮下單次注射，事實(shí)上確實(shí)增加了循環(huán)血液中網(wǎng)織紅細(xì)胞的濃度，基于常規(guī)知識(shí)這是可預(yù)期的。然而，從使用該用藥方案治療的受試者得到的數(shù)據(jù)表明在總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度方面的增加是輕微的、短暫的、或二者皆有。每周皮下注射相同劑量的EPO的第二種常規(guī)加藥方案可以增加總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)并增加血紅蛋白濃度。然而，這種嚴(yán)格的加藥方案可能是次最優(yōu)的，因?yàn)槠淇赡懿焕诨颊叩捻槒男院?或價(jià)格過高。此外，這種加藥方案不能根據(jù)個(gè)別受試者的具體病因?qū)W或所需的治療結(jié)果提供調(diào)整治療的任何靈活性。
因此，希望提供使用EPO的加藥方案和/或治療方法，其將引起網(wǎng)織紅細(xì)胞產(chǎn)生的增加，并且還將增加成熟為新細(xì)胞的網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)目，并且進(jìn)一步增加這些存活從而變成成熟紅細(xì)胞的新細(xì)胞的數(shù)目。如果能夠相對(duì)于每周等價(jià)加藥以嚴(yán)格性較低的更靈活的加藥方案保持任何這樣的增加持續(xù)所需或要求的持續(xù)時(shí)間段，這種加藥方案將提供另外的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了EPO的組合加藥方案，該方案提供了如此增強(qiáng)的效力，同時(shí)還提供了比常規(guī)EPO加藥方案更大的加藥靈活性。更具體地，本發(fā)明的加藥方案可以有效增加成熟紅細(xì)胞的產(chǎn)生和保持，并從而增加血紅蛋白濃度。有利地，該組合加藥方案還可以循環(huán)或重復(fù)進(jìn)行以保持這種增加，或?qū)嶋H上提供所需的治療結(jié)果，使得該用藥方案相對(duì)于常規(guī)的EPO加藥方案可調(diào)整以滿足各類患者的特定需要。
因此在第一方面，本發(fā)明提供了EPO的加藥方案。該加藥方案包括給用至少第一加藥段，該第一加藥段包括于EPO下第一暴露和隨后的于EPO下第二暴露，于EPO下第一暴露有效地至少略微地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，于EPO下第二暴露至少略微地有效維持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)的網(wǎng)織紅細(xì)胞。理想地，第二暴露的給用在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始。因此每個(gè)加藥段具有增加總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的作用。另外，該加藥段可重復(fù)或循環(huán)進(jìn)行，根據(jù)所需或要求進(jìn)行多次，用于保持或調(diào)節(jié)總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白水平。另外，第一和第二暴露可包括任何劑型和任何用藥量，并且可相同或不同。
與常規(guī)的加藥方案不同，本發(fā)明的加藥方案不僅僅提供總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的顯著最初增加，而且可用于保持總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度在任何所需的水平。有利地，本發(fā)明的加藥方案能夠做到上述并且還提供先前EPO給藥中所缺乏的靈活性，并且實(shí)際上可以調(diào)整以滿足任何給定受試者的特定需要。因此該加藥方案在治療任何需要或希望增加和保持總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的受試者中具有應(yīng)用性。
在第二方面，本發(fā)明提供了用于增強(qiáng)成熟紅細(xì)胞的產(chǎn)生和保持的方法，并且結(jié)果是，通常還增加血紅蛋白濃度。更具體地，該方法包括給用至少第一加藥段，該第一加藥段包括于EPO下第一暴露和隨后的于EPO下第二暴露，于EPO下第一暴露有效地至少略微地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，于EPO下第二暴露有效地至少些微地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞的能力。于EPO下第二暴露的給用理想地在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始，從而在新細(xì)胞預(yù)期成熟為紅細(xì)胞的時(shí)間將EPO暴露于任何經(jīng)由第一暴露而形成的新細(xì)胞下。在某些實(shí)施方案中，可能希望使用于EPO下持續(xù)的暴露來提供新發(fā)展成的新細(xì)胞，例如，使用多個(gè)較低的日劑量，EPO植入物或貼片，或長效EPO。
然后，加藥段可有利地以任何所需間隔重復(fù)進(jìn)行，以提供任何所需結(jié)果，這可根據(jù)受試者的特定需要而定，例如，以定時(shí)為基本上保持、增加或減少紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的間隔重復(fù)進(jìn)行。這種紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的管理可以對(duì)各種受試者有利，包括但不限于那些經(jīng)受由以下任何原因所致的組織缺氧的受試者如貧血或慢性貧血，接受化療的受試者，和經(jīng)受外傷性損傷的受試者。本發(fā)明的方法可用于治療任何這些受試者。
用于實(shí)施本發(fā)明的加藥方案和方法的組分，即加藥形式的EPO，可容易地購自市場。然而，為了增強(qiáng)加藥方案和方法的方便、靈活、有效和可用性，要求實(shí)施本發(fā)明方案和方法的組分可以彼此結(jié)合地以藥包形式被提供，并且這種藥包被認(rèn)為處在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的藥包將如所需地至少包括第一EPO加藥段，該第一EPO加藥段包括第一EPO加藥單元和第二EPO加藥單元，第一EPO加藥單元能夠提供有效地至少略微地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞產(chǎn)生的于EPO下暴露，第二EPO加藥單元包括與于EPO下第一暴露不同的劑量或劑型的EPO并能夠提供至少略微地有效保持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)的網(wǎng)織紅細(xì)胞的于EPO下暴露。藥包可進(jìn)一步包括標(biāo)明第二暴露的給用將在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始的說明書。在某些實(shí)施方案中，說明書可進(jìn)一步標(biāo)明該加藥段可重復(fù)進(jìn)行，例如在前面的加藥段給用之后重復(fù)至少約2周、或至少約4周、或甚至至少約8周。在某些藥包的實(shí)施方案中的說明書還可能調(diào)整以適于特定受試者例如經(jīng)歷化療的受試者，該說明書可標(biāo)明加藥段可如所需地與化療合作重復(fù)進(jìn)行。


本發(fā)明的幾個(gè)方面。附圖的簡要說明如下圖1是通常理解的EPO的藥理學(xué)圖，即，在健康受試者中給用皮下單次劑量的EPO產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的平均百分?jǐn)?shù)增加，這可與EPO給用劑量的大小直接相關(guān)(以網(wǎng)織紅細(xì)胞％的濃度-時(shí)間曲線下面積表示)；圖2是在常規(guī)加藥EPO如單次皮下給用40,000IU的EPO后健康受試者中的平均血清EPO水平的圖，表明在加藥時(shí)達(dá)峰，之后在約10天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；
圖3是在給用如圖2所示的同樣的常規(guī)劑量的EPO后健康個(gè)體中網(wǎng)織紅細(xì)胞平均百分?jǐn)?shù)水平的圖，顯示了在單次皮下給用EPO后約7天，網(wǎng)織紅細(xì)胞水平達(dá)峰，之后在約15天內(nèi)回到給藥前水平；圖4是在給用如圖2所示的同樣的常規(guī)劑量的EPO后健康個(gè)體中平均紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的圖，顯示了在常規(guī)加藥EPO時(shí)或之后未觀察到紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增加；圖5是在給用如圖2所示的同樣的常規(guī)劑量的EPO后健康個(gè)體中平均血紅蛋白水平的圖，顯示了常規(guī)加藥EPO未產(chǎn)生血紅蛋白水平的顯著增加或持續(xù)增加；圖6是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血清EPO水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥EPO時(shí)產(chǎn)生EPO峰，之后在約5天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖7是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥時(shí)產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞峰，之后在約30天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖8是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較紅細(xì)胞水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增加；圖9是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血紅蛋白水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生血紅蛋白的顯著和持續(xù)的增加；圖10是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血清EPO水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥EPO時(shí)產(chǎn)生EPO峰，之后在約5-7天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖11是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥時(shí)產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞峰，之后在約30天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖12是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較紅細(xì)胞水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增加；圖13是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給藥400IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于400IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血紅蛋白水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生血紅蛋白的顯著增加；圖14是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血清EPO水平的圖，顯示所有加藥方案都在加藥EPO時(shí)產(chǎn)生EPO峰，之后在約5-7天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖15是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的圖，顯示所有加藥方案都在加藥時(shí)產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞峰，之后在約30天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖16是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較紅細(xì)胞水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增加；圖17是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射25IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于25IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血紅蛋白水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生血紅蛋白的顯著增加；圖18是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血清EPO水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥EPO時(shí)產(chǎn)生EPO峰，之后在約5-7天內(nèi)回到內(nèi)源性水平；圖19是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的圖，顯示了所有加藥方案都在加藥時(shí)產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞峰，并且，根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥在約30天產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞水平的第二峰；圖20是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較紅細(xì)胞水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增加；圖21是在(i)常規(guī)加藥EPO，即，單次皮下給用800IU/kg劑量的EPO，(ii)每日低水平注射50IU/kg/天的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明所考慮的加藥段的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行加藥，即，于800IU/kgEPO下第一暴露，然后在第一暴露后第4-16天于50IU/kg/天EPO下第二暴露，之后，比較血紅蛋白水平改變的圖，顯示了根據(jù)該加藥段的實(shí)施方案的加藥相對(duì)于常規(guī)加藥和每日低水平加藥EPO產(chǎn)生血紅蛋白的顯著增加；和圖22是顯示在(i)常規(guī)加藥EPO，即，每周皮下給用600IU/kg劑量的EPO，持續(xù)4周，(ii)在第5周給用1800IU/kg的EPO和在第8周再次給用1800IU/kg的EPO，和(iii)根據(jù)本發(fā)明的組合加藥方案的一個(gè)實(shí)施方案加藥，即，在第5周于600IU/kg EPO下第一暴露和在第6周于1200IU/kg EPO下第二暴露的加藥段，在第8周(600IU/kg的EPO)和第9周(1200IU/kg的EPO)重復(fù)該加藥段，之后，血紅蛋白水平改變的圖，顯示了盡管對(duì)于那些常規(guī)加藥而言在第6周血紅蛋白開始下降，但是對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的組合加藥方案加藥的那些，血紅蛋白保持在升高的狀態(tài)。
發(fā)明詳述如下所述的本發(fā)明的實(shí)施方案并非詳盡描述本發(fā)明或?qū)⒈景l(fā)明限制到在以下詳細(xì)說明中所公開的特定實(shí)施方案。而是，描述實(shí)施方案是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以了解本發(fā)明的原則和實(shí)踐。
本發(fā)明提供了EPO的組合加藥方案，該方案不僅可以刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，而且可以令人驚訝地維持由網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)展成的新細(xì)胞，使得顯著部分的新細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞。因而，本發(fā)明的加藥方案可以提供總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度的最初增加，該增加大于通過給用常規(guī)的單劑量EPO所實(shí)現(xiàn)的增加。此外，本發(fā)明的組合加藥方案可以循環(huán)或重復(fù)進(jìn)行，從而令人驚訝地基本上保持該最初的增加，而不通過比常規(guī)的每周一次加藥更嚴(yán)格的加藥方案進(jìn)行，而是實(shí)際上，在加藥段之間具有更長的持續(xù)時(shí)間長度。實(shí)際上，本文公開的新發(fā)現(xiàn)的EPO藥理學(xué)功能性可以各種方式被利用，從而為衛(wèi)生保健提供者提供了非常大的靈活性，以根據(jù)本發(fā)明的加藥組合調(diào)整治療從而適于任何特定受試者的需要或要求。
更具體地，本申請(qǐng)人現(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在新細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)，EPO看起來至少在某種程度上幫助維持新細(xì)胞。雖然未得到EPO藥理學(xué)活性常識(shí)的支持，申請(qǐng)人還是獲得了支持該新發(fā)現(xiàn)的活性的引人注意的數(shù)據(jù)，其中一些數(shù)據(jù)如本申請(qǐng)的圖6-22中所示。實(shí)際上，藥理學(xué)常識(shí)沒有為該新發(fā)現(xiàn)的活性提供基礎(chǔ)，因此目前不了解網(wǎng)織紅細(xì)胞或新細(xì)胞上的任何EPO受體，這就使得新發(fā)現(xiàn)的活性更令人驚訝和意想不到。利用該新發(fā)現(xiàn)的活性的優(yōu)點(diǎn)提供了許多用于EPO治療用途的新途徑，并且，依賴于將網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞偶爾或連續(xù)暴露于EPO下從而增強(qiáng)它們的存活和成熟為成熟紅細(xì)胞，任何這些應(yīng)用被考慮為處在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
根據(jù)該新發(fā)現(xiàn)的加藥，即，支持網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞的保持和成熟，可以提供的一個(gè)示例性優(yōu)點(diǎn)是，可通過所述維持和成熟提供的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的增加可以被保持，或者被管理，通過比常規(guī)的EPO加藥方案靈活得多和嚴(yán)格性較低的加藥方案進(jìn)行。依賴于常規(guī)的藥理學(xué)的常規(guī)加藥方案暗示了EPO起作用以刺激祖先細(xì)胞定向經(jīng)歷紅細(xì)胞系循環(huán)。新發(fā)現(xiàn)的EPO活性與成熟紅細(xì)胞通常存活約120天的知識(shí)相結(jié)合，使得可進(jìn)行嚴(yán)格性較低的EPO加藥，同時(shí)提供總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的類似的或甚至更好的增加。
因此，本發(fā)明提供了EPO的組合加藥方案，該方案通過給用至少一個(gè)加藥段進(jìn)行，刺激祖先細(xì)胞定向變成網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞，然后幫助所述細(xì)胞在所述細(xì)胞發(fā)展成為成熟紅細(xì)胞時(shí)的維持和成熟。術(shù)語“加藥段”是指包括以下的加藥時(shí)間表于EPO下最初暴露，其中該暴露有效刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生的可測增加(無論該可測增加可能是多么的微弱)，隨后是于EPO下第二暴露，其有效保持網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞并幫助其成熟為成熟紅細(xì)胞。因?yàn)榫W(wǎng)織紅細(xì)胞一旦被引入血流中，預(yù)期在約2天內(nèi)成熟為新細(xì)胞，且據(jù)信新細(xì)胞在將網(wǎng)織紅細(xì)胞引入血流后至少約10-15天開始成熟過程，第二暴露理想地和最有利地在第一暴露停止后約3到約10天開始。另外，因?yàn)檫M(jìn)一步認(rèn)為可能需要暴露于EPO(天然的EPO或外源性給予的EPO)下用于維持新細(xì)胞在其成熟期間的存活，因此第二暴露理想地和最有利地在第一暴露停止后不超過約10天開始，并且可進(jìn)一步有利地維持至少約7天和最多至少約15天，通過重復(fù)給用或給用長效EPO進(jìn)行，或通過其它的于EPO下連續(xù)暴露(即，如通過貼片或植入物)進(jìn)行。
如本文中使用的，術(shù)語“暴露”是指單一劑量，重復(fù)的單獨(dú)劑量，或在單一給用諸如長效EPO)、施用諸如包括EPO的透皮貼片或植入EPO植入物后可提供相對(duì)連續(xù)的加藥。也就是說，特定的加藥模式及其實(shí)際量對(duì)于實(shí)踐本發(fā)明的加藥段或方案不是關(guān)鍵性的。所有這些都要求以有效刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生的任何量和任何方式給用第一暴露，隨后是以有效增強(qiáng)網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞的維持和成熟為成熟紅細(xì)胞的任何量和任何方式給用第二暴露。另外，可使用任何給用模式用于二者中任一種暴露，包括目前已知的那些和在將來可能開發(fā)出的那些模式。此外，術(shù)語“暴露”是指對(duì)患者給用一定劑量的EPO，以與患者自身可能具有的天然水平的內(nèi)源性EPO的暴露區(qū)別開來。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠容易地確定在任何情況中暴露的適當(dāng)?shù)牧亢头绞?。也就是說，并且僅僅出于提供附加指導(dǎo)的目的而并非必需與其綁定的目的，總的治療方針建議受試者將如所需地具有超過至少約9g/dL的血紅蛋白濃度，能提供這種血紅蛋白水平的EPO的劑量是適當(dāng)?shù)牟⑶铱捎杀绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員輕易地和容易地確定。本領(lǐng)域通常認(rèn)為超過目前臨床醫(yī)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的高水平的血紅蛋白在某些情況中可能與患者增加的血栓性血管事件的危險(xiǎn)有關(guān)。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解應(yīng)該在任何EPO治療方案的整個(gè)過程中常規(guī)性地監(jiān)控血紅蛋白水平。
同樣地，在任何所給加藥段的任何特定暴露中的EPO的待用量僅僅出于患者安全性的考慮而受到限制，并且每次暴露、每次加藥段、或每次組合加藥方案中可給用任何量的EPO，只要基本上沒有由EPO給用所致的毒性作用即可。然而，認(rèn)為盡管在給用劑量段的第一暴露時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞的刺激是劑量響應(yīng)性的，但是在劑量大于約2400IU/kg時(shí)達(dá)到劑量飽和。因此，盡管可能沒有害處，但是如果以過量劑量給用第一暴露將不能觀察到進(jìn)一步的益處。如果僅出于經(jīng)濟(jì)上的考慮，則在加藥段中的于EPO下第一暴露可提供約150IU/kg約2400IU/kg的EPO，或優(yōu)選地，提供約600IU/kg到約1200IU/kg的EPO。如上所述，暴露可以任何已知的或最新開發(fā)的加藥形式被提供。也就是說，因?yàn)榈谝槐┞兜乃杞Y(jié)果是刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的量最大化，并且因?yàn)檫@種刺激據(jù)信是劑量依賴性的，因此于EPO下第一暴露可如所需地以可基本上即刻提供所述暴露的諸如以下的方式被提供例如通過注射，無論是皮下注射、肌內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。
同樣地，雖然據(jù)信在加藥段中給用的于EPO下第二暴露越大，則血液中EPO水平升高的持續(xù)時(shí)間越久，且對(duì)新細(xì)胞的存活和變成紅細(xì)胞的成熟速率的影響越大，但是，可預(yù)期在提供大于約2400IU/kg的EPO的暴露時(shí)發(fā)生劑量飽和。因此，用于劑量段的于EPO下第二暴露的EPO的適當(dāng)?shù)慕o用量可為約600IU/kg到約2400IU/kg的EPO，或優(yōu)選地，為約900IU/kg到約1500IU/kg的EPO。
如上文所述，本申請(qǐng)人目前令人驚訝地發(fā)現(xiàn)進(jìn)行定時(shí)給用以與網(wǎng)織紅細(xì)胞和/或新細(xì)胞成熟為成熟紅細(xì)胞相符的于EPO下第二暴露可以幫助所述細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞。本申請(qǐng)人的研究進(jìn)一步暗示了在該階段的暴露持續(xù)時(shí)間可能與網(wǎng)織紅細(xì)胞/新細(xì)胞所暴露的劑量本身的總的大小具有同樣的或甚至更重要的意義。同樣地，第二暴露可以有利地和如所需地以多次低水平暴露的方式被提供，如小于約100IU/kg/天的低水平，或小于約50IU/kg/天，或甚至小于約25IU/kg/天，可通過例如皮下注射、透皮貼片、植入物、長效EPO給用等被提供。許多長效EPO是已知的并且可在市場上買到，任何這些可被使用。
根據(jù)本發(fā)明的組合加藥方案進(jìn)行的各個(gè)加藥段可以通過第一暴露提供網(wǎng)織紅細(xì)胞濃度的劑量依賴性增加，這如同基于EPO的藥理學(xué)常識(shí)預(yù)期的。各個(gè)加藥段還可令人驚訝地幫助顯著百分?jǐn)?shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞和新細(xì)胞的維持和成熟為成熟紅細(xì)胞，該結(jié)果基于常規(guī)知識(shí)是不能預(yù)期的，并且在給用常規(guī)劑量如皮下單劑量EPO后實(shí)際上也是觀察不到的。
雖然這種新細(xì)胞成熟速率的增強(qiáng)本質(zhì)上或及其自身而言是有利的，但是其可進(jìn)一步被加以利用以提供另外的優(yōu)點(diǎn)。也就是說，因?yàn)樾录?xì)胞成熟的增強(qiáng)可以產(chǎn)生成熟紅細(xì)胞數(shù)目的增加，因此在加藥EPO以保持成熟紅細(xì)胞方面具有更大的靈活性。這與目前集中于使用每周大劑量的EPO以連續(xù)刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的方案形成對(duì)比。另外，如果總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的增減是所需的或要求的，則一個(gè)或多個(gè)加藥段的給用可相應(yīng)地發(fā)生變化。同樣地，本發(fā)明的組合加藥方案可適于受試者的特定需要或要求。
因此，有利地是，加藥段可以適于實(shí)現(xiàn)所需結(jié)果的時(shí)間間隔重復(fù)進(jìn)行，或至少約2周、或甚至約4周后給用，并且實(shí)際上，在某些情況中，在約8周后重復(fù)該加藥段可能足以保持通過前面緊鄰的加藥段所提供的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白的增加，同樣地，該加藥段可以根據(jù)需要或要求重復(fù)進(jìn)行以提供能夠跨越任何所需治療時(shí)段的組合加藥方案，且重復(fù)次數(shù)不以任何方式受限。
如本文中使用的，“促紅細(xì)胞生成素”或“EPO”應(yīng)當(dāng)包括那些具有重組人促紅細(xì)胞生成素(r-HuEPO)的生物學(xué)活性的那些多肽和蛋白質(zhì)，就是說，它們與EPO受體結(jié)合并最終刺激血紅蛋白產(chǎn)生的增加。如本文中使用的術(shù)語EPO還指促紅細(xì)胞生成素類似物，促紅細(xì)胞生成素異構(gòu)體，促紅細(xì)胞生成素模擬物，促紅細(xì)胞生成素片段，雜合促紅細(xì)胞生成素蛋白，融合蛋白，上述物質(zhì)的低聚物和多聚體，上述物質(zhì)的同系物，上述物質(zhì)的糖基化形式變體(包括PEG化(pegylated)EPO)，上述物質(zhì)的突變蛋白質(zhì)，并且進(jìn)一步與其合成或生產(chǎn)方法無關(guān)，所述方法包括但不限于重組的(無論是否從cDNA或基因組DNA生產(chǎn))、合成的、轉(zhuǎn)基因的、和基因活化方法，并且進(jìn)一步包括含上述所述小修飾的EPO分子。設(shè)計(jì)和合成如肽模擬物的方法是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所公知的，并且在例如美國專利4,833,092、4,859,765、4,853,871和4,863,857中描述。
特別優(yōu)選的EPO分子是那些能夠刺激哺乳動(dòng)物中紅細(xì)胞生成的那些分子。促紅細(xì)胞生成素的具體例子包括Epoetinα(EPREX、ERYPO、PROCRIT)，以及紅細(xì)胞生成刺激蛋白(NESPTM、ARANESPTM、darbepoetinα)和重組人促紅細(xì)胞生成素的高糖基化類似物(Epoetin)如那些在歐洲專利申請(qǐng)EP640619中所述的，以及CERATM，人促紅細(xì)胞生成素類似物(諸如在國際專利申請(qǐng)WO99/66054中所述的人血清白蛋白融合蛋白)，在國際專利申請(qǐng)WO99/38890中所述的促紅細(xì)胞生成素突變體，促紅細(xì)胞生成素ω，其可以從美國專利5,688,679中所述的人促紅細(xì)胞生成素基因的Apa I限制片段生產(chǎn)，國際專利申請(qǐng)WO 99/11781和EP 1064951中所述的改變的糖基化人促紅細(xì)胞生成素，和在WO 98/05363、WO 01/76640或美國專利5,643,575中所述的與PEG結(jié)合的促紅細(xì)胞生成素類似物。經(jīng)修飾用于表達(dá)內(nèi)源性人促紅細(xì)胞生成素的細(xì)胞系的具體例子在國際專利申請(qǐng)WO 99/05268和WO 94/12650中有述。EPO的優(yōu)選形式為純化的重組人EPO(r-HuEPO)，目前以商品名EPREX、ERYPO、PROCRIT或ARANESPTM進(jìn)行配制和銷售。
還考慮了長效形式的EPO，并且實(shí)際上可在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中優(yōu)選作為加藥段中的第二暴露用于給用。如本文中使用的，“長效EPO”包括具有增加的循環(huán)半衰期的EPO持續(xù)釋放組合物和制劑，通常通過減少免疫原性或改變清除速率的修飾來實(shí)現(xiàn)。還包括包封在聚合物微球體中的EPO?！伴L效EPO”的例子包括但不限于在PCT公開WO 2002049673(Burg等人)中公開的促紅細(xì)胞生成素與聚乙二醇(PEG)的結(jié)合物，在PCT公開WO 02/32957(Nakamura等人)中公開的PEG修飾的EPO，在PCT公開WO94/28024(Chyi等人)中公開的具有紅細(xì)胞生成活性并具有至少一個(gè)與非抗原性聚合物共價(jià)連接的氧化碳水化合物部分的糖蛋白的結(jié)合物，和其它使用SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG制備的PEG-EPO分子。
優(yōu)選的聚乙二醇部分是甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分。該部分優(yōu)選使用甲氧基聚乙二醇物質(zhì)的琥珀酰亞胺基酯衍生物被附加。在一個(gè)例子中，優(yōu)選的甲氧基聚乙二醇物質(zhì)的琥珀酰亞胺基酯衍生物包括下式的羧甲基化聚乙二醇的琥珀酰亞胺基酯(SCM-PEG) (R是C1-8烷基，n是整數(shù))SCM-PEG下式的聚(乙二醇)丙酸的琥珀酰亞胺基衍生物(SPA-PEG)，其中R是C1-8烷基，n是整數(shù)，(R-(OCH2CH2)n-O-CH2CH2-CO-OSu)；和下式的聚(乙二醇)丁酸的琥珀酰亞胺基衍生物(SBA-PEG)，其中R是C1-8烷基，n是整數(shù)。
制備SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG的方法在本領(lǐng)域是公知的。例如，授權(quán)給Harris等人的美國專利描述了PEG酸的活性酯和具有單個(gè)的丙酸或丁酸部分而沒有其它酯鍵的相關(guān)聚合物。SCM-PEG的制備例如已經(jīng)在Veronese等人989)的Journal of ControlledRelease，110145-54中有述。
術(shù)語“SPA-PEG”的使用包括mPEG-SPA(甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺基丙酸酯)，術(shù)語“SBA-PEG”的使用包括mPEG-SBA(甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺基丁酸酯)。諸如SBA-PEG和SPA-PEG的活化聚合物都可購自市場并可購自例如Nektar，Inc.，Huntsville，Alabama，U.S.A。
術(shù)語“SCM-PEG”(R-(OCH2CH2)n-O-CH2-CO-OSu；R是C1-8烷基且n是整數(shù))包括羧甲基化PEG的甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺基酯(mPEG-SCM)。根據(jù)Greenwald等人公開的，SCM-PEG“與蛋白質(zhì)的反應(yīng)將形成穩(wěn)定的酰胺，但是已經(jīng)報(bào)道了t1/2水解(Nektar，Huntsville，AL，Jan 1996 catalog，p 46)在pH 8為＜1min，因此其在水溶液中用于蛋白質(zhì)修飾的用處最小化....”(Bioconjugate Chem.，7(6)，638-641，1996)。
目前，SCM-PEG可通過例如Delmar Chemicals，Inc，Quebec，Canada進(jìn)行定制合成。
SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG主要與賴氨酸的伯氨基和N末端氨基反應(yīng)。對(duì)于SCM-PEG5K、SPA-PEG5K和SBA-PEG5K分別與EPO的反應(yīng)如下所示，其中OSu表示N-羥基琥珀酰亞胺，m是1-4，n是整數(shù)
本發(fā)明的組合加藥方案可以在其中可希望總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的最初增加的任何受試者中給用。受試者還可受益于該組合加藥方案，條件是如果需要或要求保持或管理總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度。也就是說，可以在預(yù)期影響總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的事件之前預(yù)防性地給用該組合用藥方案以提供受試者中總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白的增加或保持或管理。可受益于該加藥方案的受試者未特別限制，并且可包括人和動(dòng)物受試者，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物受試者。
如上詳細(xì)討論的，本文中所述的組合加藥方案令人驚訝地和意想不到地不僅刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，而且可以在這些網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)展成為新細(xì)胞和最終成熟為紅細(xì)胞時(shí)維持顯著部分的網(wǎng)織紅細(xì)胞。另外，可通過以大于常規(guī)EPO加藥所建議的時(shí)間增量循環(huán)加藥段來維持該作用。因此，該加藥方案可以對(duì)需要這種治療的任何受試者、或預(yù)計(jì)總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的任何受試者適當(dāng)?shù)亟o用。因此還提供了治療其中要求或需要增加總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的受試者的方法，以及用于預(yù)防受試者經(jīng)歷總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的不希望的減少的方法。
有許多情況或事件可導(dǎo)致受試者具有小于最佳紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白，通過本發(fā)明的方法可適當(dāng)?shù)刂委熁蚧旧项A(yù)防任何這些情況或事件。一般而言，任何可導(dǎo)致偶爾或慢性組織缺氧的狀況或事件可通過本發(fā)明的方法適當(dāng)?shù)刂委?，這些狀況或事件的例子包括體力耗盡、旅行至高海拔高度、失血、飲食不當(dāng)、不健康，或某些其它治療劑如化療劑的給用等。因?yàn)楸景l(fā)明的方法如此有效地增加和維持總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度，可預(yù)期證明當(dāng)施用于遭受急性和/或慢性缺氧的受試者，如遭受導(dǎo)致大量失血的外傷性損傷的那些受試者、經(jīng)歷化療的患者等時(shí)特別有利。
雖然EPO及其加藥方法可容易地購自市場，但是給用本發(fā)明加藥段或?qū)嵺`本發(fā)明方法的方便性可進(jìn)一步通過提供為此所需的以藥包形式存在的組分被進(jìn)一步增強(qiáng)，并且這種藥包也預(yù)期處在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如希望的，用于給用加藥段或?qū)嵺`本發(fā)明方法的藥包將包括至少第一EPO加藥段，其包括第一EPO加藥單元，第一EPO加藥單元能夠提供有效地至少略微地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞產(chǎn)生的于EPO下第一暴露。如上所述，第一暴露可包括以任何所需加藥形式的任何劑量，但是如果以快速起效、大丸藥(bolus)給用形式如適于皮下給用的注射器的形式被提供，則可提供最佳結(jié)果。還可有利地提供第二EPO加藥單元，其包括與于EPO下第一暴露不同的劑量和/或劑型的EPO并能夠提供至少略微地有效維持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)的網(wǎng)織紅細(xì)胞的于EPO下第二暴露。與第一暴露相似，第二暴露可包括以任何所需加藥形式的任何劑量。然而，并且如上述討論的，如果第二暴露以提供相對(duì)維持地暴露于EPO下的形式被提供，如適于每日低水平皮下劑量的多注射器，用于每日給用的多口服劑型，以任何加藥形式的長效EPO，透皮貼片等，則可提供最佳結(jié)果。說明書可以任何形式被引入，其將如所需地標(biāo)明，如果第二暴露在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始，則兩個(gè)加藥段給用的結(jié)果可最佳化。
可通過藥包提供多個(gè)加藥段，每個(gè)加藥段包括用于各個(gè)暴露的相同或不同的劑量或加藥形式，使得單獨(dú)的藥包可根據(jù)需要或要求方便地以持續(xù)數(shù)天、數(shù)周、或數(shù)月的治療或預(yù)防被提供。然而，為了完全利用由本發(fā)明的組合加藥方案提供的靈活性，藥包可如所需地提供為包括被要求用以給用單一加藥段的組分，使得包括任何加藥段的多個(gè)藥包可合并，從而提供用于實(shí)施任何所需或要求的組合加藥方案的組分，這如同可在用最初加藥段治療之前或在給用和分析其結(jié)果之后確定的。藥包甚至可進(jìn)一步被優(yōu)化用于具有各種不同病因?qū)W的受試者。例如，可提供藥包，其標(biāo)明對(duì)治療化療患者特別有益，在該情況下，說明書可標(biāo)明在藥包中提供的加藥段如所需地重復(fù)進(jìn)行，和在各個(gè)化療結(jié)束之前如所需地開始重復(fù)。
提供以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，其不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。本發(fā)明將參考以下方案和實(shí)施例得以更好地理解，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易地理解這些方案和實(shí)施例只是示例性地說明本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明更完全的描述參見權(quán)利要求書。
比較例1皮下單次劑量40,000IU EPO(EPREX，Ortho Biotech，Toronto，ON)對(duì)健康受試者給用(n＝8)。在29天內(nèi)采集血清樣品并試驗(yàn)其EPO水平以及網(wǎng)織紅細(xì)胞、血紅蛋白和總紅細(xì)胞濃度。如圖2所示，血清EPO水平在加藥時(shí)達(dá)峰值，然后在約10天內(nèi)回到內(nèi)源性水平。另外，如圖3所示，網(wǎng)織紅細(xì)胞水平在給用后約10天達(dá)峰值，在第15天回到基線。最后，分別如圖4和圖5所示，在皮下單次給用通常治療劑量的EPO后，總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度的增加未得以維持。
實(shí)施例1使用三組狗(每組n＝3)用于該研究。一組接受常規(guī)的EPO加藥，即，在加藥的第一天給用400IU/kg的單次皮下劑量，第二組在試驗(yàn)的第4-16天接受每日低水平(25IU/kg)的皮下劑量的EPO，第三組接受根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的加藥段，即，在加藥的第一天給用第一暴露，其包括400IU/kg的單次皮下劑量的EPO，隨后是在試驗(yàn)的第4-16天給用第二暴露，包括每日25IU/kg皮下劑量的EPO。每日采集血清樣品并測定EPO、網(wǎng)織紅細(xì)胞和血紅蛋白水平，以及總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。
該實(shí)施例的結(jié)果如圖6-9所示，其清楚地表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的加藥段相對(duì)于常規(guī)的加藥以及每日低水平加藥二者產(chǎn)生總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度二者的更大的增加。據(jù)信，如果該加藥段在至少約14天后循環(huán)進(jìn)行，或甚至在多達(dá)至少約32天后循環(huán)進(jìn)行，通過給用第一加藥段產(chǎn)生的增加可基本上得以保持。
實(shí)施例2使用三組狗(每組n＝3)用于該研究。一組接受常規(guī)的EPO加藥，即，在加藥的第一天給用400IU/kg的單次皮下劑量，第二組在試驗(yàn)的第4-16天接受每日低水平(50IU/kg)的皮下劑量的EPO，第三組接受根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的加藥段，即，在加藥的第一天給用第一暴露，其包括400IU/kg的單次皮下劑量的EPO，隨后是在試驗(yàn)的第4-16天給用第二暴露，其包括每日50IU/kg皮下劑量的EPO。每日采集血清取樣并試驗(yàn)其EPO、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血紅蛋白水平以及總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。
該實(shí)施例的結(jié)果如圖10-13所示，其清楚地表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的加藥段相對(duì)于常規(guī)的加藥以及每日低水平加藥二者產(chǎn)生總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度二者的更大的增加。據(jù)信，如果該加藥段在至少約14天后循環(huán)進(jìn)行，或甚至在多達(dá)至少約32天后循環(huán)進(jìn)行，通過給用第一加藥段產(chǎn)生的增加可基本上得以保持。
實(shí)施例3使用三組狗(每組n＝3)用于該研究。一組接受常規(guī)的EPO加藥，即，在加藥的第一天給用800IU/kg的單次皮下劑量，第二組在試驗(yàn)的第4-16天接受每日低水平(25IU/kg)的皮下劑量的EPO，第三組接受根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的加藥段，即，在加藥的第一天給用第一暴露，其包括800IU/kg的單次皮下劑量的EPO，隨后是在試驗(yàn)的第4-16天給用第二暴露，包括每日25IU/kg皮下劑量的EPO。每日采集血清樣品并試驗(yàn)其EPO、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血紅蛋白水平以及總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。
該實(shí)施例的結(jié)果如圖14-17所示，其清楚地表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的加藥段相對(duì)于常規(guī)的加藥以及每日低水平加藥二者產(chǎn)生總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度二者的更大的增加。據(jù)信，如果該加藥段在至少約14天后循環(huán)進(jìn)行，或甚至在多達(dá)至少約32天后循環(huán)進(jìn)行，通過給用第一加藥段產(chǎn)生的增加可基本上得以保持。
實(shí)施例4使用三組狗(每組n＝3)用于該研究。一組接受常規(guī)的EPO加藥，即，在加藥的第一天給用800IU/kg的單次皮下劑量，第二組在試驗(yàn)的第4-16天接受每日低水平(50IU/kg)的皮下劑量的EPO，第三組接受根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的加藥段，即，在加藥的第一天給用第一暴露，其包括800IU/kg的單次皮下劑量的EPO，隨后是在試驗(yàn)的第4-16天給用第二暴露，包括每日50IU/kg皮下劑量的EPO。每日采集血清樣品并試驗(yàn)其EPO、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血紅蛋白水平以及總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。
該實(shí)施例的結(jié)果如圖18-21所示，其清楚地表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的加藥段相對(duì)于常規(guī)的加藥以及每日低水平加藥二者產(chǎn)生總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度二者的更大的增加。據(jù)信，如果該加藥段在至少約14天后循環(huán)進(jìn)行，或甚至在多達(dá)至少約32天后循環(huán)進(jìn)行，通過給用第一加藥段產(chǎn)生的增加可基本上得以保持。
實(shí)施例5使用三組狗(每組n＝3)用于該研究，所有組接受常規(guī)加藥的EPO(600IU/kg/周)，歷時(shí)4周。然后A組停止加藥，作為對(duì)照組，而B組在第5周和第8周接受1800IU/kg的EPO，C組接受本發(fā)明的組合加藥方案，包括給用第一加藥段，其包括在第5周于600IU/kgEPO下的第一暴露，在第6周于1200IU/kg EPO下的第二暴露，在該組中在第8和9周重復(fù)該加藥段，即，在第8周給用于600IU/kgEPO下的第一暴露，在第9周給用于1200IU/kg EPO下的第二暴露。所有組每周測量其血紅蛋白。
該實(shí)施例的結(jié)果如圖22所示。從圖可見，A組中血紅蛋白水平自然下降到內(nèi)源性水平，即使在常規(guī)加藥等劑量歷時(shí)4周之后。相比之下，C組的血紅蛋白保持在升高狀態(tài)下，其根據(jù)本發(fā)明的組合加藥方案的一個(gè)實(shí)施方案給藥，不僅在加藥段之間保持該升高的狀態(tài)，而且在最后一次加藥段的第二暴露給用后至少約4周內(nèi)都保持升高的狀態(tài)。另外，圖22表明盡管B組接受與C組相同的總劑量，B組比A組保持了更高水平的血紅蛋白，但是B組沒有保持與C組的血紅蛋白同樣高的升高，表明本發(fā)明的組合加藥方案與通過不同加藥方案給用相同的總劑量相比提供了更好的血紅蛋白響應(yīng)。
雖然前述說明書教導(dǎo)了本發(fā)明的原則，并提供實(shí)施例用于例證的目的，但應(yīng)該理解，本發(fā)明的實(shí)踐包含所有通常的變化、改編和/或變體，其處在權(quán)利要求及其等價(jià)物的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.促紅細(xì)胞生成素的組合加藥方案，包括給用至少第一加藥段，所述第一加藥段包括于EPO下第一暴露和隨后的于EPO下第二暴露，于EPO下第一暴露有效地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，于EPO下第二暴露有效地維持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)的網(wǎng)織紅細(xì)胞，其中第二暴露的給用在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始。
2.權(quán)利要求1的組合加藥方案，其中加藥段重復(fù)進(jìn)行以在所需時(shí)間段內(nèi)提供所需的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度。
3.權(quán)利要求1的組合加藥方案，其中第一暴露包括EPO皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和腹膜內(nèi)注射。
4.權(quán)利要求3的組合加藥方案，其中第二暴露包括一個(gè)或多個(gè)小于約100IU/kg的EPO每日皮下注射。
5.權(quán)利要求3的組合加藥方案，其中第二暴露包括施用包括EPO的透皮貼片。
6.權(quán)利要求3的組合加藥方案，其中第二暴露包括植入包括EPO的植入物。
7.權(quán)利要求3的組合加藥方案，其中第二暴露包括給用長效EPO。
8.權(quán)利要求1的組合加藥方案，其中第一暴露包括與第二暴露不同的總EPO加藥。
9.權(quán)利要求2的組合加藥方案，其中總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度在至少兩個(gè)加藥段之間得以保持。
10.權(quán)利要求9的組合加藥方案，其中加藥段在給用第二暴露后至少約8周重復(fù)進(jìn)行。
11.權(quán)利要求10的組合加藥方案，其中加藥段在給用第二暴露后至少約4周重復(fù)進(jìn)行。
12.權(quán)利要求11的組合加藥方案，其中加藥段在給用第二暴露后至少約2周重復(fù)進(jìn)行。
13.權(quán)利要求1的組合加藥方案，其中加藥段重復(fù)至少約6次。
14.權(quán)利要求13的組合加藥方案，其中加藥段重復(fù)至少約4次。
15.權(quán)利要求12的組合加藥方案，其中加藥段重復(fù)至少約2次。
16.增強(qiáng)所需的成熟紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度的產(chǎn)生和保持的方法，該方法包括至少給用第一加藥段的步驟，所述第一加藥段包括于EPO下第一暴露和隨后的于EPO下第二暴露，于EPO下第一暴露有效地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，于EPO下第二暴露有效地維持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)的網(wǎng)織紅細(xì)胞，其中第二暴露的給用在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)開始。
17.權(quán)利要求16的方法，其中加藥段可重復(fù)進(jìn)行以在所需時(shí)間段內(nèi)提供所需的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度。
18.權(quán)利要求16的方法，其中該方法是用于治療遭受貧血的受試者。
19.權(quán)利要求18的方法，其中貧血是慢性貧血。
20.權(quán)利要求16的方法，其中該方法是用于治療經(jīng)歷化療的受試者。
21.權(quán)利要求16的方法，其中該方法是用于治療遭受外傷性損傷的受試者。
22.權(quán)利要求16的方法，其中第一暴露包括的EPO劑量大于第二暴露的EPO劑量。
23.權(quán)利要求16的方法，其中第一暴露包括EPO皮下注射。
24.權(quán)利要求16的方法，其中第二暴露包括至少兩個(gè)小于約100IU/kg的EPO每日皮下注射。
25.權(quán)利要求16的方法，其中第二暴露包括施用包括EPO的透皮貼片。
26.權(quán)利要求16的方法，其中第二暴露包括植入包括EPO的植入物。
27.權(quán)利要求16的方法，其中第二暴露包括給用長效EPO。
28.權(quán)利要求17的方法，其中隨后的加藥段的給用保持了由前面的加藥段所產(chǎn)生的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度。
29.權(quán)利要求28的方法，其中加藥段在給用第二暴露后至少約8周時(shí)給用。
30.權(quán)利要求29的方法，其中加藥段在給用第二暴露后至少約4周時(shí)給用。
31.權(quán)利要求30的方法，其中加藥段在給用第二暴露后至少約2周時(shí)給用。
32.權(quán)利要求16的方法，其中加藥段給用至少約6次。
33.權(quán)利要求32的方法，其中加藥段給用至少約4次。
34.權(quán)利要求33的方法，其中加藥段給用至少約2次。
35.至少包括第一EPO加藥段的藥包，所述第一加藥段包括第一EPO加藥單元和第二EPO加藥單元，第一EPO加藥單元能夠提供有效地增加網(wǎng)織紅細(xì)胞產(chǎn)生的于EPO下暴露，第二EPO加藥單元包括比第一劑量段處在更低濃度下的EPO劑量并能夠提供有效地維持在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為紅細(xì)胞時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞的于EPO下暴露，并且藥包進(jìn)一步包括說明書，其標(biāo)明第二暴露的給用將在第一暴露后約3天但不超過約10天內(nèi)的時(shí)間開始。
36.權(quán)利要求35的藥包，其中說明書進(jìn)一步標(biāo)明加藥段可重復(fù)進(jìn)行。
37.權(quán)利要求35的藥包，其中說明書進(jìn)一步標(biāo)明，對(duì)于經(jīng)歷化療的受試者，加藥段可如所需地與化療合作重復(fù)進(jìn)行。
38.權(quán)利要求35的藥包，其中說明書標(biāo)明加藥段將在給用第二暴露后至少約8周后重復(fù)進(jìn)行。
39.權(quán)利要求38的方法，其中說明書標(biāo)明加藥段將在給用第二暴露后至少約4周后重復(fù)進(jìn)行。
40.權(quán)利要求39的方法，其中說明書標(biāo)明加藥段將在給用第二暴露后至少約2周后重復(fù)進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于促紅細(xì)胞生成素(EPO)的組合加藥方案。更具體地，本發(fā)明的加藥方案包括至少給用第一加藥段，所述第一加藥段包括于EPO下第一暴露和隨后于EPO下第二暴露，所述于EPO下第一暴露能刺激網(wǎng)織紅細(xì)胞的產(chǎn)生，所述于EPO下第二暴露能夠維持網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟為新細(xì)胞和最終變成紅細(xì)胞。有利地，該加藥段可循環(huán)或重復(fù)進(jìn)行任意次數(shù)并根據(jù)任何所需時(shí)間表進(jìn)行，從而提供或保持任何所需的總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和/或血紅蛋白濃度。本發(fā)明還提供了使用該組合加藥方案的治療方法、以及藥包。
文檔編號(hào)A61P7/06GK1960745SQ200580017191
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2005年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月26日
發(fā)明者W·K·鐘 申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司