用4－羥基三苯氧胺治療和預防良性乳房疾病的制作方法

專利名稱：用4－羥基三苯氧胺治療和預防良性乳房疾病的制作方法
技術領域：
本發明涉及用4-羥基三苯氧胺(4-OHT)治療和預防良性乳房疾病。
背景技術：
良性乳房疾病指乳房組織中普通的非惡性畸變癥狀。這些畸變包括眾多的具有明確定義的組織學特性的損害，可分為增殖類或非增殖類。著名的例子包括腺病、囊腫、導管擴張、纖維腺瘤、纖維性囊腫病、纖維癥、增生和化生。良性乳房疾病是雌激素相關的，因此影響人群主要是成年的絕經期前的女性。在這些人群中，良性乳房疾病可以影響分娩和避孕，目前的治療選項對患者的生活質量有負面影響。
盡管良性乳房疾病很少對患者的健康造成直接威脅，它通常會引起持續的情緒焦慮和軀體疼痛。特別是，必須對良性損害進行組織學評估，以將它們和乳癌區分開來。這樣的評估是昂貴的、費時的、頻繁侵入的(例如，反復的針吸、活組織切片檢查和導管灌洗)和疼痛的，使患者經受大量情緒壓力。
另外，大量的研究證明，有良性乳房疾病史的女性具有較高的患乳癌的風險(Dupont，1985；Fitzgibbons，1998；Carter 1988；and Krieger，1992)。風險水平隨良性損害的種類而變化。例如，纖維腺瘤使患侵入性乳癌的風險增加了2.2倍，腺病使風險增加了3.7倍，非典型導管使風險增加了3.9倍，非典型增生使風險增加了5.3倍(Dupont，1985；Bodian，1993；Dupont，1994)。當良性乳房疾病的存在與乳癌家族史結合時，發展成乳癌的風險進一步增加。例如，非典型與乳癌家族史結合時，患者發展成乳癌的風險增加了11倍(Dupont，1985)。
乳癌藥物三苯氧胺的給藥顯著地降低了患者良性乳房疾病發展的風險(Tan-Chiu，2003)。在這方面，三苯氧胺通過與雌激素受體的竟爭結合而起作用，從而阻斷了雌激素對乳房細胞的作用。大體而言，三苯氧胺使良性乳房疾病發展的風險降低了28％，但是這種降低根據疾病類型而改變。一項最近的研究統計上地報道了顯著的降低對腺病為41％，對囊腫為34％，對導管擴張為28％，對纖維性囊腫病為33％，對增生為40％，對化生為49％。對50歲以下的女性，三苯氧胺給藥使乳房活組織切片檢查的需要減少了41％。這種減少對心理上和經濟上的意義是巨大的。
盡管有它的優點，三苯氧胺具有明顯的缺點。它的作用潛在地影響著體內的每一個帶有雌激素受體的細胞，并且，三苯氧胺同時作為激動劑和拮抗劑，引起各種各樣的大范圍全身效應。這些影響提高了患子宮內膜癌和肉瘤、子宮內膜增生和息肉、卵巢囊腫、深靜脈血栓癥和肺栓塞、肝臟酶水平改變和肝性脂肪變性、高脂血癥和眼睛毒性包括白內障的風險(Shushan，1996；Nishino，2003；Hoxumi，1988)。口服攝入三苯氧胺防礙懷孕，這種防礙甚至持續到停止治療之后的兩個月，并防礙激素避孕的使用。另外，口服三苯氧胺治療的患者報告有潮熱、陰道分泌物、憂郁癥、閉經和惡心(Ibis，2002；Fentiman 1986，1988，1989)。
因此，仍然存在對治療和預防良性乳房疾病方法的強烈需要，該方法沒有令人煩惱的明顯而不利的全身性副作用，特別對絕經期前人群。

發明內容
本發明提供一種以4-羥基三苯氧胺給藥治療良性乳房疾病的方法。這種治療方法優選局部用藥，得到比口服三苯氧胺低的血漿藥物水平。
本發明還提供一種通過以4-羥基三苯氧胺給藥預防良性乳房疾病的方法。如同治療方法，預防方法也優選局部用藥。
出于預防或治療目的，4-羥基三苯氧胺可以通過任何能將它釋放到體內帶有雌激素受體的細胞的方式給藥。如同所指出的，該給藥方式優選為經皮(局部)給藥，以避免4-羥基三苯氧胺的首過效應和相關的肝臟代謝作用。對于經皮給藥，4-羥基三苯氧胺可以敷于任何皮膚表面。經皮給藥方式應用于乳房是有利的，因為當經皮給藥時，4-羥基三苯氧胺趨于集中在帶有雌激素受體的局部皮下組織中。
大量局部劑型適于實施本發明，但優選水醇性溶液劑和水醇性凝膠劑。4-羥基三苯氧胺在這些劑型里的濃度可以改變，但劑量應該使局部的4-羥基三苯氧胺組織濃度能有效地對抗雌激素驅動作用。


圖1表示三苯氧胺的代謝。
圖2表示健康女性皮膚給藥后4-羥基三苯氧胺的血漿濃度。
具體實施例方式
的詳細描述本發明的一個重要方面是驚人的發現以4-羥基三苯氧胺經皮給藥對治療和預防良性乳房疾病均有效。此外，以4-羥基三苯氧胺經皮給藥使藥物(4-OHT)血漿水平比口服標準劑量三苯氧胺更低，并且幾乎沒有口服攝入三苯氧胺后發現的其他代謝物，這可以使不良副作用更少(Lee，2003)。因此，在本文中4-羥基三苯氧胺經皮給藥是三苯氧胺同時用于治療和預防的替換方式。
化合物4-羥基三苯氧胺，或1-[4-(2-N-二甲基氨基乙氧基)苯基]-1-(4-羥基苯基)-2-苯基丁-1-烯，構成了具有良好抗雌激素特性的化合物三苯氧胺的活性代謝物。由于兩個碳原子之間雙鍵的存在，4-羥基三苯氧胺以兩種立體異構形式存在。根據醫學和生物化學文獻，4-羥基三苯氧胺的異構形式通常命名為順式和反式異構體。然而，從純化學觀點看，這個名稱不是嚴謹精確的，因為每個雙鍵碳原子不帶同樣的化學基團。因此，更適當的應稱為異構體E(所謂的順式)和Z(所謂的反式)構型。根據本發明，單獨的或混合的4-羥基三苯氧胺的E和Z異構體都是有效的。然而，優選Z異構體，因為它比E異構體更具活性。
4-羥基三苯氧胺作為一種選擇性的雌激素受體調節器(SERM)，其對易于接受雌激素的組織顯示組織專一性。在乳房組織里，它作為雌激素拮抗劑。研究表明，4-羥基三苯氧胺可以調節雌激素相關受體的轉錄活性，這可能有助于它的組織比活性。通過與雌激素受體、或Ers的結合親和力測定，4-羥基三苯氧胺在體外比三苯氧胺顯示出更多的效力，其結合親合力類似于雌二醇的親和力(Robertson etal.，1982，IZuiper et al.et al.，1997)。Z-4-羥基三苯氧胺對培養中的正常人乳房上皮細胞的生長的抑制能力超過Z-三苯氧胺100倍(Malet etal.，1988)。
盡管4-羥基三苯氧胺是三苯氧胺的代謝物，它對良性乳房疾病的有效性不是通過上述三苯氧胺本身的在先經驗所預知的。如圖1所示，三苯氧胺在人體中大量代謝。因此，，其體內作用是母體化合物和它的代謝化合物在靶組織內競爭結合受體的個體作用最終結果。例如，見Jordan，1982。每一種這類化合物在不同的細胞里顯示不同的和不可預見的生物活性，其部分地由每種化合物對雌激素受體結構的個體影響所確定。亦即，雌激素受體結合每種化合物，產生一種獨特的受體-配位體結構，其補充了不同的輔助因子，并導致不同化合物的各種藥理(Wijayaratne et al.，1999；Giambiagiet al.，1988)。
各種效應的若干例子已經被證明。例如，三苯氧胺而不是4-羥基三苯氧胺是一種有效的老鼠肝臟致癌物質(Carthew et al.，2001；Sauvez etal.，1999)。另外，據傳道，三苯氧胺而不是4-羥基三苯氧胺引發p53(-)正常人乳房上皮細胞的死亡(Dietze etal.，2001)。相反，4-羥基三苯氧胺對乳癌細胞系中的雌激素酮硫酸酯酶的活性顯示明顯的抑制效果，而三苯氧胺在這方面很少或沒有效果(Chetrite etal.，1993)。
用于制備4-羥基三苯氧胺的方法為大家所熟知。例如，序列號為4,919,937的美國專利描述了來自Robertson和Katzenellenbogen，1982的合成法，其分步驟進行步驟14-(-二甲基氨基乙氧基)-α-乙基脫氧苯偶姻和對-(2-四氫吡喃基氧代)溴化苯鎂進行反應；步驟2從階段1中分離，通過羥基化1，2-二苯基-1-丁酮形成1-(4-羥苯基)-2-苯基-1-丁酮；步驟3步驟1和2的產物進行反應，生成1-(4-二甲基氨基乙氧基苯基)-1-[對-2-四氫吡喃基氧代]苯基]-2-苯基丁-1-醇；步驟4用甲醇/鹽酸脫水，生成1-[對-(β-二甲基氨基乙氧基)苯基]-Z-1-(對-羥苯基)-2-苯基-1-丁-1-烯，即4-羥基三苯氧胺，E和Z異構體的混合物；步驟5通過色譜法和結晶法分離E和Z異構體，得到恒定的比活性。
根據本發明，4-羥基三苯氧胺可以給藥予診斷患有良性乳房疾病的患者。這里使用的術語“良性乳房疾病”是指乳房組織中非惡性畸變的癥狀。畸變可以是本質上增殖的或非增殖的。優選地，它們包含雌激素相關的組分，因為據信，4-羥基三苯氧胺主要通過作用于雌激素受體發揮它的效果。能通過本發明方法治療的典型的良性乳房疾病包括腺病、囊腫、導管擴張、纖維腺瘤、纖維癥、增生、化生及其他纖維囊性的改變。由于它們的流行及具有明確定義的組織學和臨床特性，通常這些疾病的每一種被稱為“變化”或“狀況”。
“腺病”指普遍的乳房腺性疾病。它通常包括乳房小葉的增生，其比正常狀態包含更多的腺。在“硬化性腺病”或“纖維腺病”中，類瘢痕纖維組織使增生的小葉變形。
“囊腫”是由小葉結構發展的不正常的充滿液體或半固體物質的囊，有乳房上皮細胞襯里。它們以乳腺內的過量液體開始，生長成拉伸周圍的乳房組織的部分，引起疼痛。“纖維樣囊腫”是囊性的損害，由數量顯著的纖維性結締組織限定，或位于其中。
“導管擴張”指乳腺導管被脂質和細胞碎屑擴張。導管的破裂導致其被粒細胞和漿細胞浸潤。
“纖維腺瘤”指源自腺上皮的良性腫瘤，包括明顯的增生纖維原細胞和結締組織的基質。
“纖維癥”僅指乳房里纖維組織的隆起。
“增生”指細胞的過度生長，其處若干層細胞排成基底膜，沒有腫瘤形成。增生增加了乳腺組織的體積。“上皮細胞增生”中包括細胞排成乳管和小葉，術語“導管增生”和“小葉增生”由此而來。基于組織學鑒定，增生可以分為“通常的”或“非典型的”。
“化生”指一類分化型組織轉變為另一類分化型組織的現象。化生通常由環境變化引起，且使細胞能夠更好的經受這種變化。
本發明還考慮4-羥基三苯氧胺的預防性給藥。特別是，預防性給藥對于有較高風險發展為乳癌的患者而言是有利的。許多乳癌的風險因素被良好地建立。例如，乳癌家族史、乳癌個人史、在先良性乳房疾病和在先乳房照射都將患者置于發展為乳癌的高風險中。特殊的遺傳風險因素包括BRCA1、BRCA2、ATM、CHEK-2和p53突變。某些與女性的生活方式相關的風險因素包括30歲之后的晚育、長期使用口服避孕藥和長期使用激素代替療法。有經驗的執業醫生可以評估這些及其他風險因素，來確定4-羥基三苯氧胺的預防性使用是否有助于患者。為制訂這樣一個評估，執業醫生可以使用蓋爾(Gail)模型。
4-羥基三苯氧胺對絕經前女性預防良性乳房疾病特別有用。在這些人群里，抗雌激素必須與高循環量的雌激素競爭，以占據雌激素受體。因為4-羥基三苯氧胺與雌激素受體的親合力比三苯氧胺多100倍，它能在低劑量更好地競爭受體。低劑量使用的能力在預防性背景中有著特殊的重要性，因為患者與藥物的接觸是長期的，更難以忍受副作用。
按照本發明，4-羥基三苯氧胺可以通過任何劑型和任何系統給藥，將活性物質釋放到體內的乳房雌激素受體。優選地，4-羥基三苯氧胺通過“經皮給藥”釋放，該術語表示那些藥物從患者皮膚的表面，經過角質層、表皮和真皮層，釋放入微循環的任何模式。通常這通過濃度梯度下的擴散而實現。這種擴散可以經由細胞內滲透(經由細胞)、細胞間滲透(在細胞之間)、經附屬物滲透(經由毛囊、汗腺和皮脂腺)，或任何這些途徑的組合而發生。
經皮給藥4-羥基三苯氧胺具有若干優勢。第一，它避免了口服給藥出現的肝臟代謝(Mauvais-Jarvis eteel.，1986)。第二，經皮給藥顯著地降低了全身藥物接觸，以及伴隨的非特異激活遍及全身雌激素受體的危險性；這是因為局部應用的4-羥基三苯氧胺主要被吸收入局部組織。特別是，當4-羥基三苯氧胺經皮涂敷于乳房時，大概由于乳房組織中有許多雌激素受體，藥物高濃度聚集在其中，而不造成高的血漿濃度(Mauvais-，Tarvis et al.et al.，supra)。因此，按照本發明，4-羥基三苯氧胺可涂敷于任何皮膚表面，但是優選涂敷于一個或兩個乳房。
盡管本發明不約束于任何特殊的理論，但是用抗雌激素劑取代非靶標組織里的雌二醇時，會發生明顯的臨床副作用。因為4-羥基三苯氧胺和雌二醇對雌激素受體具有類似的結合親合力，當一種化合物的濃度接近另一個時，它們之間結合受體的競爭將近似相等。如果4-羥基三苯氧胺的濃度超過雌二醇的濃度，前者將優先結合雌激素受體，反之亦然。
因此，4-羥基三苯氧胺的劑量優選為使形成的血漿濃度小于約80pg/mL，或小于正常絕經期前女性的平均雌二醇濃度。更優選地，4-羥基三苯氧胺的劑量為使形成的血漿濃度小于約50pg/mL。最初，每日給藥劑量可以基于4-羥基三苯氧胺的吸收系數、所需的乳房組織濃度和不該被超過的血漿濃度來估計。當然，取決于個體反應，每個患者的首次劑量都可以最佳化。
正如以上所指出的，通過將4-羥基三苯氧胺定向到乳房組織，該組織可獲得高濃度，同時4-羥基三苯氧胺的血漿水平不會升高到出現明顯的全身性競爭結合雌二醇受體的地步。在1mg/乳房/天的經皮劑量，4-羥基三苯氧胺在乳房組織里的濃度超過乳房組織中正常的雌二醇濃度四分之一(Barrat etal.，1990；Pujol et al.，supra)。此外，以這種方式使用的4-羥基三苯氧胺在乳房組織里達到的濃度比在血漿里的濃度高一個數量級，即，10∶1。相反，三苯氧胺口服后，4-羥基三苯氧胺的乳房組織濃度與血漿濃度的比例為約5∶1。
在經皮制劑中，4-羥基三苯氧胺的劑量在約0.25-2.0mg/乳房/天應該能獲得所需的結果，優選的劑量為約0.5-1.0mg/乳房/天。在具體的實施例中，4-羥基三苯氧胺的劑量為約0.25、0.5、0.75、1.0、1.5或2.0mg/乳房/天。
經皮給藥主要可以以兩種不同的方式實現(i)將治療量的活性物質或其非毒性的藥學上可接受的鹽和適當的藥物載體以及任選的滲透增強劑混合，以形成油膏、乳劑、洗液、溶液、乳膏、凝膠等等，其中將所述適量制劑敷到皮膚的某一面積上，或(ii)根據已知技術，將治療量的活性物質引入貼片或經皮釋藥系統中。
經皮給藥的效果取決于許多因素，包括藥物濃度、涂敷的表面積、涂敷時間和持續時間、在先的照射、皮膚水合作用、皮膚溫度、藥物的理化性質和藥物在制劑和皮膚之間的分離。為經皮使用而設計的藥物制劑利用這些因素以獲得最佳的釋放。這種制劑通常包括滲透增強劑，其可以通過可逆地改變角質層的物理化學特性、改變角質層中的水合作用、作為助溶劑，或改變細胞間隙里脂質和蛋白質的結構，而減少角質層阻力，從而改善經皮吸收。這種經皮吸收增強劑包括表面活性劑、二甲基亞砜、醇、丙酮、丙二醇、聚乙二醇、脂肪酸或脂肪醇及其衍生物、醇酸、吡咯烷酮、尿素、香精油以及它們的混合物。除了化學增強劑，物理方法也可以提高經皮吸收。例如，封閉的繃帶可引起皮膚的水合作用。其他的物理方法包括離子電滲療法和聲滲療法，其分別使用電場和高頻率超聲波，以提高由于其大小和離子特性吸收較差的藥物的吸收。
許多與經皮給藥有關的因素和方法在REMINGTONThe SCIENCE andPRACTICE OF PHARMACY，Alfonso R.Gel-largo (Lippincott Williams&Wilkins，2000)，836-58頁，以及PERCUTANEOUS ABSORPTIONDRUGSCOSMETICS MECHANISMS METHODOLOGY，Bronaugh and Maibach(Marcel Decker，1999)中有評論。如同這些出版物所證明的，藥物領域的技術人員可以使用各種因素和方法來實現有效的經皮釋放。
4-羥基三苯氧胺是大且非常親脂性的分子；因此，沒有滲透增強劑的幫助，它不能很好地穿透皮膚。因此，本發明的4-羥基三苯氧胺制劑優選包含一種或多種滲透增強劑。乙醇是優選的增強劑，因為4-羥基三苯氧胺可溶于醇。十四烷酸異丙酯也是優選的增強劑。
對經皮給藥，4-羥基三苯氧胺可以從油膏、乳膏、凝膠、乳狀液(洗液)、粉末、油劑或類似的制劑中釋放。為此目的，該制劑可以包含通常的賦形添加劑，包括植物油例如杏仁油、橄欖油、桃油、花生油、蓖麻油等等、動物油、二甲基亞砜、脂肪和類脂肪物質、羊毛脂質、磷脂、烴例如石蠟、石油膏、石蠟、去污乳化劑、卵磷脂、乙醇、葉紅素、多羥基化合物或聚乙二醇例如甘油(或甘油丙三醇)、甘油醚、乙二醇、乙二醇醚、聚乙二醇、聚丙二醇、非揮發性脂肪醇、酸劑、酯、易揮發醇化合物、尿素、硅酸鎂、纖維素衍生物、著色劑、抗氧化劑和防腐劑。
根據本發明，4-羥基三苯氧胺還可以通過經皮貼片釋放。在一個實施方式中，該貼片包括4-羥基三苯氧胺配方的儲備層。該貼片可包含(a)溶液不可滲透的背襯層，(b)具有空腔的類層單元，(c)多微孔的或半滲透膜，(d)自粘合層，和(e)任選地，可移動的背膜。具有空腔的類層單元可由背襯層和背膜形成。或者，該貼片可包含(a)溶液不可滲透的背襯層，(b)開孔泡沫，閉孔泡沫，如同儲備層的類組織層或類纖維質基料層，(c)如果(b)層不是自粘合劑時的自粘合層，和(d)任選地，可移動的背膜。
本發明的優選實施例中，4-羥基三苯氧胺制備成水醇凝膠劑。這種凝膠中，每100克凝膠中4-羥基三苯氧胺的含量可以為約0.001到約1.0克。優選地，每100克凝膠中4-羥基三苯氧胺的含量為約0.01到約0.2克。因此，每100克凝膠中4-羥基三苯氧胺的量可以為約0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19或0.20克。
優選地，4-羥基三苯氧胺制劑包含一種或多種脂肪酸酯作為滲透增強劑。脂肪酸酯滲透增強劑的特別優選的例子是十四烷酸異丙酯。當凝膠中使用十四烷酸異丙酯時，每100克凝膠中十四烷酸異丙酯的量可以為約0.1到約5.0克。優選地，每100克凝膠中十四烷酸異丙酯的量為約0.5到約2.0克。因此，每1 00凝膠中十四烷酸異丙酯的量可以為約0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0克。
本發明的4-羥基三苯氧胺制劑通常包含一種或多種非水溶媒，例如醇溶媒。這些溶媒應該能夠溶解4-羥基三苯氧胺和所使用的任何滲透增強劑。它們還應該具有低沸點，常壓下優選小于100℃，以使它們一經接觸皮膚就可以快速的蒸發。優選的醇溶媒為乙醇和異丙醇。特別是，通過一經接觸皮膚就迅速蒸發，乙醇有效促使4-羥基三苯氧胺的經皮吸收。根據本發明制劑，通常無水醇溶媒的含量為重量的3 5％到99.9％，優選50％到85％，更優選60％到75％。因此，凝膠劑中無水非水溶媒的含量為重量的約60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。
制劑中還可以包括水溶媒，其對制劑中的疏水微粒有增溶作用，以及使皮膚濕潤。水溶媒還可以調節PH。水溶媒包括堿性和堿式的緩沖溶液，包括磷酸緩沖液(例如，二元的或一元的磷酸鈉)，檸檬酸緩沖液(例如，檸檬酸鈉或檸檬酸鉀)和簡單的凈化水。水溶媒的含量優選為藥物組合物重量的0.1％到65％，較優選為15％到50％，更優選為25％到40％。因此，水溶媒的含量可以是約25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。當制劑中包括水溶媒時，制劑中無水醇溶媒的含量優選為約60到約75％。
另外，4-羥基三苯氧胺制劑可以包括一種或多種膠凝劑，以增加制劑的粘度和/或起增溶劑的作用。取決于膠凝劑的性質，它可以為制劑重量的0.1％到20％，優選為0.5％到10％，更優選為0.5％到5％。因此，膠凝劑含量可以是約0.5％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9.0％、9.5％或10％。優選的膠凝劑包括卡波姆、纖維素衍生物、泊洛沙姆和poloxamines。更特別地，優選的膠凝劑是殼聚糖、低分子右旋糖酐、果膠、天然膠和纖維素衍生物例如乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)等等。特別優選的膠凝劑是羥丙基纖維素。
當制劑中包括膠凝劑，特別是非預中和的丙烯酸類聚合物時，有利地，該制劑還可以包括中和劑。中和劑/膠凝劑的比例優選為10∶1到0.1∶1，較優選為7∶1到0.5∶1，更優選為4∶1到1∶1。因此，中和劑/膠凝劑的比例可以為約7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1或0.5∶1。在存在聚合物的情況下，中和劑應該形成可溶于溶媒的鹽。在裝料中和和聚合物鹽形成過程中，中和劑還應該使得聚合物鏈的最優溶脹成為可能。有效的中和劑包括氫氧化鈉、氫氧化銨、氫氧化鉀、精氨酸、氨基甲基丙醇、三乙醇胺和氨基丁三醇。根據用于制劑的膠凝劑種類，本領域的技術人員可以選擇中和劑。然而，當使用纖維素衍生物作為膠凝劑時，不需要中和劑。
表1描述了兩種特別優選的4-羥基三苯氧胺凝膠劑的組分。
表14-羥基三苯氧胺凝膠劑的組分

參考以下說明性實施例有助于更完整地理解本發明。
實施例14-羥基三苯氧胺經皮釋放的驗證在手術切除病灶組織之前，以12小時到7天的規定間隔，將[3H]-4-羥基三苯氧胺的酒精溶液直接敷到四位乳癌患者的乳房上。手術之后，切除組織和腫瘤周圍的乳房組織均抑制放射性(Kuttenn et al.，1985)。
在繼續研究中，12位預定了外科切除激素依賴性乳癌的患者中的9位接受了60％醇溶液的Z-[3H]4-羥基三苯氧胺(80μCi)治療，3位接受了Z-[3H]-三苯氧胺(80μCi)的治療用于對比。在手術切除病灶組織之前，以12小時到7天的規定間隔，將[3H]-標記的藥物直接敷到患者的得病乳房上。腫瘤、緊鄰腫瘤周圍的組織和正常組織這三個區域的乳房組織被切除并立即冷凍于液氮中。另外，于預定的間隔得到血漿和尿樣品并冷凍用于分析。
表2顯示了分析結果。4-羥基三苯氧胺主要集中在乳房組織的細胞溶質和細胞核部分，其中存在雌激素受體。在這些胞內位點中，4-羥基三苯氧胺并未代謝，除了Z到E型的有限的異構化。4-羥基三苯氧胺組在乳房中的保留持續了大約4天，但是三苯氧胺組的時間短且更弱。
表2繼經皮給藥[3H]4-羥基三苯氧胺到得病乳房后，在乳房腫瘤組織里確認的[3H]4-羥基三苯氧胺和代謝物

1給藥Z-[3H]-4-羥基三苯氧胺后的時間經皮給藥后，乳房組織中確認為[3H]4-羥基三苯氧胺的放射性百分比在七天內緩慢降低(從97％到65％)。在這期間，逐漸發生Z異構體到E異構體的異構化，第七天觀察到相似的的百分比(32％和33％)。
血液中由[3H]-4-羥基三苯氧胺而引起的放射性逐漸增加，第4天到第6天為平臺期。這與[3H]-三苯氧胺相反，后者在血液中是快速出現的，平臺期在第2天。繼經皮給藥[3H]-4-羥基三苯氧胺之后36小時，血液中僅顯示出0.5％的放射性。
與乳房組織中4-羥基三苯氧胺幾乎不發生代謝相反，血液中發生了明顯的代謝。給藥24小時之后，在血液中，68％的放射性代表4-羥基三苯氧胺，18％代表N-脫甲基-4-羥基三苯氧胺，及11％代表雙酚。
與經皮給藥三苯氧胺相比，經皮給藥4-羥基三苯氧胺后，尿消除峰出現得比較晚。給藥4-羥基三苯氧胺后，尿中觀察到代謝物的逐漸增加，主要是N-脫甲基-4-羥基三苯氧胺和雙酚。
該實施例證明，4-羥基三苯氧胺經皮給藥到乳房使藥物具有顯著的和持久的局部組織濃度、極少的代謝、穩定的和極低的血漿濃度、以及緩慢的經尿液消除。
實施例2與口服20mg三苯氧胺相比，經皮給藥4-羥基三苯氧胺的藥代動力學和藥效學驗證該研究比較經皮給藥水醇性凝膠后的4-羥基三苯氧胺的組織和血漿濃度和口服三苯氧胺后的4-羥基三苯氧胺的組織和血漿濃度(Pujol，1995)。
將三十一位預定了乳癌手術的患者隨機分配到5組中的1組。如表3所列，她們或接受口服三苯氧胺的治療，或接受4-羥基三苯氧胺經皮給藥的治療。在手術之前，治療每日進行并持續3-4周。該研究評估了4-羥基三苯氧胺的三種不同的劑量(0.5、1或2mg/天)和兩種區域的涂敷(涂敷到兩個乳房或包括手臂、前臂和肩部的大的皮膚表面)。一組患者接受口服三苯氧胺(Nolvaldex)20mg/天(每次10mg，一天兩次)的治療。
表3治療組

a每次10mg，一天兩次b每日涂敷2次早晨1mg和晚上1mg
4-羥基三苯氧胺凝膠(20mg4-羥基三苯氧胺/100g水醇性凝膠；Besins國際實驗室)包裝在密封的劑量-限量泵中，釋放1.25g凝膠/限量劑(即，0.25mg的4-羥基三苯氧胺/劑)。
在手術過程中，乳房組織的兩個樣本(每樣本1厘米3)被切除，一個為腫瘤，另一個為肉眼正常的。它們立即被冷凍直到分析。得到當天和手術前一天的血樣。用氣相色譜儀/質譜法(GC-MS)分析所有的組織和血漿樣品的4-羥基三苯氧胺濃度。
分析治療前和治療后血樣的全血細胞計數(CBC)、膽紅素、血清谷-丙轉氨酶(SGPT)、血清谷-草轉氨酶(SGOT)、堿性磷酸酯酶、肌酐、雌二醇、促卵泡激素(FSH)、促黃體生成激素(LH)、性激素結合球蛋白(SHBG)、膽固醇、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酸酯、纖維蛋白原和抗凝血因子III。
下表4概括了乳房組織和血漿中發現的4-羥基三苯氧胺的濃度。所有五組治療組中，正常和腫瘤乳房組織包含相似的4-羥基三苯氧胺的濃度。當凝膠直接涂敷那乳房而不是其他大的皮膚表面時，4-羥基三苯氧胺高度集中在乳房組織中。
表44-羥基三苯氧胺的濃度


an＝5bn＝4c4位患者的4-羥基三苯氧胺水平檢測不到(LOQ＝20pg/ml)d3位患者的4-羥基三苯氧胺水平檢測不到e2位患者的4-羥基三苯氧胺水平檢測不到f1位患者的4-羥基三苯氧胺水平檢測不到副作用沒有造成明顯的問題。皮膚治療沒有導致任何局部刺激性。組2(0.5mg/天的4-羥基三苯氧胺凝膠)中的一位女性報道治療第七天有頭暈、膀胱炎和輕微的陰道炎發生。組1(口服三苯氧胺)中的一位女性報道治療第五有潮熱和輕微的陰道炎發生。
在接受4-羥基三苯氧胺凝膠治療的患者中，用于任何血液病學或血清化學評價的治療前和治療后血樣之間沒有差異存在。然而，在口服三苯氧胺組中，觀察到抗凝血因子III和纖維蛋白原的統計上的顯著減少和血小板和淋巴細胞計數的統計上的顯著增加，與在其他研究中觀察到的該藥物的生物效應一致。
實施例3健康女性經皮給藥4-羥基三苯氧胺的耐受性和藥代動力學驗證該研究表明年齡在18-45歲的健康絕經前女性局部涂敷4-羥基三苯氧胺凝膠的耐受性和藥代動力學。每一位參與者在兩個月經周期中的每天涂敷凝膠。
測試了如表5所概括的三種劑量和兩種凝膠濃度。對組A-C，每100g中含20mg4-羥基三苯氧胺的凝膠從密封的劑量-限量泵中分配，所述泵每劑釋放0.25mg4-羥基三苯氧胺。組C的研究被中斷，因為對于單個乳房來說，凝膠的數量太大。組D和E接受了濃度更高的凝膠，其包含了幾乎3倍的4-羥基三苯氧胺57mg4-羥基三苯氧胺/100g凝膠，或50mg4-羥基三苯氧胺/100ml凝膠。該濃度更高的凝膠也通過劑量-限量泵釋放，所述泵每劑供應0.25mg4-羥基三苯氧胺。
表5治療組

在一次月經周期結束時，每個患者接受單劑量，然后在0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、12、18、24、36、48和72小時收集連續的血樣。
在下列月經期的第一天，由兩個月經周期內每日涂敷凝膠所組成的治療開始了。在第一周期和第二周期的第7、20和25天的早上涂敷凝膠后的24小時收集血樣。在給藥的最后一天，第二月經周期的第25天，涂敷之前以及涂敷凝膠后0.5、1、1.5、2、3、4、6、12、18、24、36、48和72小時收集連續的血樣。分析樣品的4-羥基三苯氧胺、雌二醇、黃體酮、FSH和LH。
末次涂敷凝膠之后的72小時，可檢測出4-羥基三苯氧胺的血漿濃度。因此，為保證直至血液中的4-羥基三苯氧胺變得不可檢測時還能得到數據點，繼末次涂敷凝膠之后，每隔一段時間，直到92天，從一部分參與者中收集額外的血樣。
表6顯示4-羥基三苯氧胺血漿濃度的平均標準偏差(SD)，括號里為范圍。單一劑量為0.5mg時沒有產生可檢測出的4-羥基三苯氧胺血漿濃度，但是，給藥單一劑量為1mg后，12位患者中的6位有可檢測出的血漿濃度(＞5pg/mL)。
表6兩個月經周期內，健康女性每日皮膚給藥后4-羥基三苯氧胺的平均±SD血漿濃度


1凝膠濃度為每100g凝膠中含20mg4-羥基三苯氧胺2凝膠濃度為每100g凝膠中含57mg4-羥基三苯氧胺3時間點0為第24天涂敷之后24小時，第25天最后涂敷之前。
LOQ＝量化的極限(＜5pg/mL)圖2顯示繼第二月經周期的第25天的末次給藥之后的血漿濃度-時間曲線。表7顯示第二月經周期的第25天的涉及末次給藥的平均藥代動力學參數。
表7健康女性末次給藥后4-羥基三苯氧胺的平均藥代動力學參數。

a凝膠濃度為每100g凝膠中含20mg4-羥基三苯氧胺b凝膠濃度為每100g凝膠中含57mg4-羥基三苯氧胺AUC0-24＝0-24小時內濃度-時間曲線下面積；Cav＝24小時內曲線下面積除以24小時的計算結果；Cmax＝血漿最大濃度；t1/2＝半衰期；T(1stC＜LOQ)＝血漿濃度小于量化極限的第一時間點；tmax＝血漿最大濃度的時間。
數據與所測試的三種劑量(0.5、1和2mg)一致。基于AUC和Cav濃度較高的凝膠的吸收比濃度較低的凝膠更佳。
在所有36位患者中，生物耐受性是優異的。該治療沒有影響月經周期期間FSH、LH、雌二醇或黃體酮激素水平。此外，治療結束時，所有患者的超聲波回波描記試驗是正常的，顯示正常尺寸發展的卵泡。一位患者對凝膠產生變態反應，10位患者報道了面部粉刺(其中的5位以往有粉刺史)。
總之，該研究顯示，局部使用后與4-羥基三苯氧胺的接觸隨著劑量而增加，4-羥基三苯氧胺的血漿濃度比通常的雌二醇濃度(80pg/mL)低，而且沒有檢測出全身效應的實驗室或臨床證據。
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權利要求
1. 4-羥基三苯氧胺用于制備治療良性乳房疾病的藥物的用途。
2.如權利要求1所述的用途，其中所述藥物為適合于經皮給藥的形式。
3.如權利要求1或2所述的用途，其中所述的4-羥基三苯氧胺存在于含滲透增強劑的媒介物中。
4.如權利要求1或2所述的用途，其中所述4-羥基三苯氧胺能以約0.25到2.0mg/乳房，優選約0.5到1.0mg/乳房每天給藥予所述患者。
5.如權利要求2所述的方法，其中所述4-羥基三苯氧胺能以約0.25mg/乳房，優選約0.5mg/乳房，較優選約0.75mg/乳房，更優選約1.0mg/乳房每天給藥予所述患者。
6.如權利要求1-5中任一項所述的用途，其中所述的4-羥基三苯氧胺配制在水醇性凝膠、水醇性溶液、貼片、油膏、乳膏、乳狀液(洗液)、粉劑或油劑中，優選水醇性凝膠。
7.如權利要求6所述的用途，其中所述的4-羥基三苯氧胺配制在含滲透增強劑、水性媒介物、醇性媒介物和膠凝劑的水醇性組合物中。
8.如權利要求7所述的用途，其中所述的水醇性組合物包含中和劑。
9.如權利要求7或8所述的用途，其中所述的滲透增強劑包含至少一種脂肪酸酯。
10.如權利要求7到9中任一項所述的用途，其中水醇性組合物包含a)約0.01％到0.20wt％的4-羥基三苯氧胺，b)約0.5％到2.0wt％的十四烷酸異丙酯，c)約60％到75wt％的無水醇，d)約25％到40wt％的水性媒介物，e)約0.5％到5wt％的膠凝劑，其中各組分百分比為組分重量相對組合物重量比。
11.如權利要求10所述的用途，其中所述的4-羥基三苯氧胺占組合物重量的約0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％或0.20％。
12.如權利要求10或11所述的用途，其中所述的十四烷酸異丙酯占組合物重量的約0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2.0％。
13.如權利要求10到12任一項所述的用途，其中所述的醇為乙醇或異丙醇，且占組合物重量的約60％到75％。
14.如權利要求10到13任一項所述的用途，其中所述的水溶媒為磷酸緩沖溶液，且占組合物重量的約25％到40％。
15.如權利要求10到14任一項所述的用途，其中所述的膠凝劑是聚丙烯酸、羥丙基纖維素或其他的纖維素衍生物，占組合物重量的約0.5％到5％。
16.如權利要求10到15任一項所述的用途，其中所述的水醇組合物還包含中和劑，所述中和劑選自下列化合物氫氧化鈉、氫氧化銨、氫氧化鉀、精氨酸、氨基甲基丙醇、三乙醇胺和氨基丁三醇，中和劑以中和劑/膠凝劑為約4∶1到1∶1的比例存在。
17.如權利要求10到16任一項所述的用途，其中所述的水醇性組合物包裝到單劑量包裝內或帶計量泵的多劑量容器內。
18.如權利要求10到17任一項所述的用途，其中所述的良性乳房疾病是一種增生性乳房疾病。
19.如權利要求1到17任一項所述的用途，其中所述的良性乳房疾病具有雌激素相關的組分。
20.如權利要求18所述的用途，其中所述的增生性乳房疾病選自腺病、囊腫、導管擴張、纖維腺瘤、纖維囊性病、纖維癥、增生和化生。
21.4-羥基三苯氧胺在制備預防有發展成乳癌風險患者的良性乳房疾病的藥物中的用途。
22.如權利要求21所述的用途，其中所述的患者是絕經期前的。
全文摘要
本發明提供一種以4－羥基三苯氧胺給藥予患者來治療和預防良性乳房疾病的方法。當經皮給藥到患者的乳房時，4－羥基三苯氧胺局部集中，并發揮抗雌激素作用。在良性乳房疾病患者中，該作用促使疾病消退。在有發展成乳癌風險的患者中，抗雌激素作用能預防可致癌的良性乳房疾病形成。
文檔編號A61K47/14GK1946387SQ200580009172
公開日2007年4月11日 申請日期2005年3月10日 優先權日2004年3月22日
發明者伊麗莎白·萊內斯圖爾 申請人:法國法杏大藥廠