一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑及其制備方法及應用的制作方法

            文檔序號:970070閱讀:449來源:國知局
            專利名稱:一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑及其制備方法及應用的制作方法
            技術領域
            本發明涉及一種中藥提取物制劑、其制備方法及其應用,具體為一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑及其制備方法、以及其在制備治療高血壓藥物中的應用。
            背景技術
            高血壓病是當今世界發病率最高的慢性病,也是死亡率和致殘率最高的疾病之一。在中國,每一小時就有120人死于高血壓引起的各種心腦血管疾病,每一小時就有600人因高血壓而致殘。它嚴重危害人體健康,影響生活質量,臨床表現為頭痛,頭暈,頭脹,頸部扳住感,耳鳴、眼花、健忘、失眠,煩悶,乏力,四肢麻木,心悸等。它也是造成肢體偏癱、心力衰竭、腦梗塞、腦出血、腎衰竭的重要原因,臨床上因高血壓病發生致殘致死的病例屢見不鮮,故學者稱之謂“隱形殺手”,是全世界醫學界一重大難題。各國都在參與高血壓的研究與探索,也研制了不少治療高血壓的藥品,它們都有較好的近期療效,但治療上有針對性、局限性、片面性、有時需要同時使用幾種藥品、也只能起到控制血壓的作用,容易發生停藥反彈,更為嚴重的是毒副作用大。目前臨床上經常使用的西藥長期服用毒副作用較大,療效較差,且價格比較昂貴。例如利血平、降壓靈可引起鼻塞、四肢無力、精神疲倦、嗤睡、陽痿、腹瀉、大量長期服用會出現精神憂郁癥、震顫麻痹,還可誘發胃及十二指腸潰瘍出血;受體阻斷劑,如心得安,可誘發和患支氣管痙攣、降低肌肉收縮力和病人的運動耐力,同時增加血中的甘油三脂,加速動脈硬化;腎上腺受體阻滯劑如派唑嗪可使患者出現疲乏心悸和惡心等。而中藥治療高血壓病,療效鞏固,長期服用毒副作用小,已為臨床所重視。但目前存在的主要問題在于其發揮作用較慢,質量較難控制等,因此藥物的使用也受到一定的局限。與西藥相比,中醫藥治療高血壓療效確切,副作用小,這是西藥所不能比擬的優勢。因此隨著高血壓患者的增多,尋找療效確切,使用方便的治療高血壓中藥新制劑是一項非常有意義的工作。
            白花前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn),又名姨媽菜、羅鬼菜、水前胡、野芹菜等,為多年生草本植物,作為藥用始于宋代,其味苦、辛,性涼。前胡在民間有較多的應用。我國古代醫藥學家對白花前胡的功用有詳細的闡述。《別錄》記載前胡“味苦,微寒,無毒,主療痰滿胸肋中痞,心腹結氣,風頭痛”。《本草綱目》“清肺熱,化痰熱,散風邪”[1]。我們經過對前胡提取分離工藝的深入研究,提取得到有效部位,經在臨床上應用,取得較好效果。臨床證明,本發明的中藥制劑使用劑量小,療效好,毒性低,質量可控,是一種比較理想的中藥治療高血壓及左心室肥大的藥物。

            發明內容
            本發明的目的在于提供一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑,其藥效作用強,毒副作用小,安全范圍大,產品純度高,服用劑量較小,使用攜帶方便,質量可控,而且經過對制劑輔料的選擇,提高了藥物活性成分的溶出度和崩解效果,從而更有利于藥物的釋放和吸收。
            本發明另一個目的是提供該白花前胡總香豆素提取物中藥制劑的制備方法。
            本發明還有一個目的是提供該白花前胡總香豆素提取物中藥制劑在制備治療高血壓藥物中的應用。
            本發明第四個目的在于提供該白花前胡總香豆素提取物中藥制劑的質量控制方法。
            為解決上述技術問題,本發明提出如下技術方案。
            1、本發明的白花前胡總香豆素提取物中藥制劑一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑,按重量份計,含有白花前胡總香豆素提取物30-70份和藥用輔料250-350份;其中藥用輔料選自聚山梨酯80、微粉硅膠、甘露醇、蔗糖、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂中的一種或多種的組合;優選白花前胡總香豆素提取物40-60份,聚山梨酯80 8-15份、微粉硅膠10-20份、甘露醇200-250份、蔗糖10-20份、羧甲基淀粉鈉8-15份、硬脂酸鎂1-5份;更優選白花前胡總香豆素提取物55份,聚山梨酯80 10份、微粉硅膠15份、甘露醇250份、蔗糖15份、羧甲基淀粉鈉10份、硬脂酸鎂3份;本發明的白花前胡總香豆素提取物中含有白花前胡丙素50-95%;優選含白花前胡丙素65-90%;更優選白花前胡丙素70-85%;本發明的白花前胡總香豆素提取物中藥制劑為藥學上可接受的任意劑型,優選膠囊劑。
            2、本發明白花前胡總香豆素提取物中藥制劑的制備方法1)白花前胡提取工藝將白花前胡根,粉碎成粗粉,乙醇加熱回流提取,過濾,濾液濃縮回收乙醇至無醇味,得到的膏狀物加入蒸餾水拌散,用乙酸乙酯萃取,回收乙酸乙酯,濃縮成稠膏狀,加入石油醚,超聲20分鐘后靜置,析出沉淀,過濾,沉淀用石油醚洗滌至淺黃色,即得白花前胡總香豆素提取物;其中提取所用的乙醇的濃度優選60-95%,優選85%-95%,更優選乙醇的濃度為95%;乙醇的用量優選8-10倍量;更優選乙醇加熱回流提取3次,每次0.5-2小時,第一次加10倍量的乙醇,第二、三次各加8倍量的乙醇;乙酸乙酯的用量優選為1-3倍量;乙酸乙酯萃取次數優選為3-5次;更優選使用1倍量的乙酸乙酯萃取3次。
            2)制劑工藝將白花前胡總香豆素提取物粉碎過160目篩,微粉硅膠、甘露醇、糖粉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂過100目篩,備用;按處方量稱取聚山梨酯80,置于微粉硅膠中混合均勻,再加入處方量的白花前胡總香豆素提取物、甘露醇、糖粉、羧甲基淀粉鈉,混勻,噴入適量的70%乙醇溶液制軟材,過40目篩制濕顆粒,50~60℃干燥2小時,過30目篩整粒,加入處方量滑石粉,混勻,按照本領域常規技術制成各種藥物制劑。
            3、本發明的白花前胡總香豆素提取物中藥制劑的質量控制方法1.總香豆素的含量測定對照品溶液的配制取減壓干燥至恒重的白花前胡丙素標準品10.0mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。
            供試品溶液的配制取本發明的提取物約10mg,置10ml量瓶中,加入甲醇約8ml,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,棄去初濾液,精密吸取續濾液1ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。
            標準曲線的制備精密吸取對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。取處方量的空白輔料,按上述方法制備空白對照溶液。照分光光度法(附錄VB),在323nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。
            測定法取供試品溶液在323nm處測定吸收度,按標準曲線計算樣品中總香豆素含量,即得。
            2.白花前胡丙素的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
            色譜條件與系統適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-水(25∶60∶15)為流動相;檢測波長323nm;流速1.0ml/min,柱溫35℃;理論塔板數按白花前胡丙素峰計算應不低于3000。
            對照品溶液的制備 取減壓干燥至恒重的白花前胡丙素對照品10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取1ml置100ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻作為對照品溶液。
            供試品溶液的制備 取本發明的提取物細粉10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入甲醇適量,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,棄去初濾液,精密量取續濾液1.0ml,置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
            測定法 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測定,按外標法以峰面積計算,即得。
            基于有關白花前胡的古代醫家記述及現代藥理和臨床研究取得的試驗結果,本發明經過長期摸索研究,確證白花前胡治療高血壓病的有效部位,并提取分離得到本發明的白花前胡總香豆素提取物,用以治療高血壓。本發明解決了長期以來存在的發揮作用較慢,質量較難控制等中藥使用局限,本發明藥物的藥效學和藥理學深入系統研究表明,本發明藥物具有藥效作用強,毒副作用小,安全范圍大,以及產品純度高,服用劑量較小,質量可控等優點。以下就通過幾個方面的研究來說明本發明技術方案的有益效果。
            一、藥效學實驗本發明藥物試驗用其原料;性狀淡黃色粉末。山東大學藥學院提供。使用時,根據大鼠劑量要求用0.5%羧甲基纖維素鈉制成混懸液。根據犬劑量要求用3ml 0.5%羧甲基纖維素鈉和生理鹽水配制成所需濃度的混懸液。
            硝苯地平規格10mg/片。批號020411。山東省德州制藥廠。
            馬來酸依那普利片10mg×16片。批號04092203。由揚子江藥業集團江蘇制藥股份有限公司提供。
            氯化鈉注射液250ml/瓶,批號04092203。山東臨淄制藥廠提供。
            3.動物雄性Wistar大鼠120只,180±10g,購自山東大學實驗動物中心。合格證號魯動質字20001003。自發性高血壓大鼠50只,雌雄各半,200±10g,購自中國醫學科學院實驗動物研究所繁育場,許可證編號SOXK京2000-0006。適應性飼養1周后,測量各鼠血壓。雜種犬20只,體重11.58±1.23kg,雌雄兼用,購自濟南郊區。實驗前馴養1周,擇其正常、健康、雌性無孕者供試驗用。
            4.儀器大鼠尾套法血壓計,型號GB4727-44。湖南醫科大學心血管生理研究室提供。
            BioPAC多導生理信號采集分析系統,美國BioPAC公司。
            CBI激光多普勒血流計,美國CBI公司。
            DGD-300C-2醫用電腦高頻電刀,北京貝林電子有限公司5.動物實驗室條件濕度40-70%,溫度20-24℃,合格證號魯動環字H2002120672。籠具蘇州新區楓橋凈化設備廠,許可證號SCXK(蘇)2002-0034。塊狀鼠飼料山東省實驗動物中心提供。魯動飼字200001001。
            6.方法6.1本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響將自發性高血壓大鼠按血壓、體重均衡的原則分為五組,即本發明藥物大劑量組50.0mg/kg、中劑量組25.0mg/kg、小劑量組12.5mg/kg、陽性藥硝苯地平組20mg/kg、模型對照組。每組10只。灌胃給藥。給藥體積為1ml/200g。模型對照組給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉。動物在清醒非麻醉及保溫狀態下,用大鼠尾套法血壓計測量血壓,連續測量3~4次取平均值。每天灌胃一次,分別于給藥第5、10、15、20、30天同法測量血壓。
            6.2本發明藥物對腎型高血壓大鼠血壓的影響雄性Wistar大鼠,在1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉下,右側臥位,在肋緣下1cm處逐層打開腹壁,游離左腎動脈,將直徑0.20mm的銀夾夾住腎動脈,使其產生部分狹窄,右腎不作處理。假手術組的大鼠,除不鉗夾左腎動脈外,手術步驟同上。術后大鼠均給予抗生素4天預防感染。術后4周血壓趨于穩定,測定血壓3~4次,取其平均值,選收縮壓在150mmHg以上者進行實驗。動物分組和給藥劑量、方法及測量方法同6.1。
            6.3本發明藥物逆轉腎型高血壓大鼠左心室肥厚試驗腎型高血壓動物模型的建立同6.2。參照文獻,腎型高血壓大鼠術后8周可形成明顯的左室肥厚,據此,我們擬定術后9周開始給藥觀察供試品的逆轉左室肥厚作用。將已造模動物按血壓、體重均衡的原則分為六組,本發明藥物大劑量組50.0mg/kg、中劑量組25.0mg/kg、小劑量組12.5.0mg/kg、陽性藥依那普利片組10mg/kg、模型對照組、假手術組。灌胃給藥。給藥體積為1ml/200g。假手術組、模型對照組均給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉。連續給藥9周,分別測量給藥前和給藥9周后血壓。實驗結束后,立即處死動物,開胸,迅速取出心臟,用4℃生理鹽水沖洗,去掉心房、右心室及其他組織,稱左心室重量,計算左室指數,同時進行心肌組織病理學檢查。
            6.4本發明藥物對麻醉犬血流動力學的影響將正常健康犬20只隨機分為4組,即本發明藥物大劑量組10.0mg/kg(1、2、4、5、7號犬),本發明藥物小劑量組5.0mg/kg(8、10、13、15、16號犬),陽性對照藥依那普利片組2.5mg/kg(11、12、18、19、20號犬)及空白對照組(3、6、9、14、17號犬)。動物用2.5%戊巴比妥鈉(25mg/kg)靜脈麻醉,分離頸總動脈和氣管,頸總動脈插管經壓力換能器與BioPAC多導生理信號采集分析系統相連記錄血壓;氣管插管備接電動呼吸器行人工呼吸。分離十二指腸并插管供給藥用。犬右側臥位,于左側第四肋間隙開胸,做心包床,暴露心臟。左心室尖部插管連接Biopac通用放大器記錄左心室內壓(LVP)和左室內壓最大變化速率(±dp/dtmax)。分離冠狀動脈左旋支及主動脈根部,分別放置合適的血流計卡式探頭與多普勒血流計相連,分別測量冠脈血流量(CBF)及心輸出量(CO)。同時計算總外周阻力、冠脈阻力、每搏心排出量和左室作功。所有上述指標均同步記錄于BioPAC多導生理信號采集分析系統。術后緩慢恒速靜脈滴注生理鹽水,以補充體液。
            術后穩定30min,待觀察指標穩定后,記錄上述各指標作為藥前值。然后經十二指腸插管給藥。給藥體積為2.0ml/kg。空白對照組給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉和生理鹽水。分別于給藥后30、60、90、120、180和240min記錄各項指標。實驗結果分別與空白對照組比較,進行統計學分析處理。
            7.結果7.1本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響結果表明,本發明藥物大劑量組灌胃給藥10天開始明顯降低血壓,與藥前相比差異顯著(P<0.05),15天差異更顯著(P<0.01),20、30天時差異最明顯(p<0.001)。本發明藥物中劑量組灌胃給藥15天開始降低血壓(P<0.05),20、30天時差異最明顯(p<0.001)。小劑量組與藥前比較雖無顯著性差異(P>0.05),但有降低趨勢。結果詳見表1。
            表1本發明藥物對自發性高血壓大鼠收縮期血壓(mmHg)的影響(n=10,X±s)

            注與藥前相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與模型組相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.0017.2本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響結果表明,本發明藥物大劑量組灌胃給藥5天起開始有效,降壓作用顯著(P<0.05),10天起差異更顯著(P<01),20天時差異最明顯(p<0.001)。中劑量組灌胃給藥10天起有差異(P<0.05),30天差異最明顯(p<0.001)。小劑量組灌胃給藥與藥前比有降低趨勢,但無顯著性差異。結果詳見表2。
            7.3本發明藥物對腎型高血壓大鼠左心室肥厚的影響從表3中可以看出,大鼠腎動脈狹窄術后第9周,高血壓形成已經恒定,此時左心室肥厚已經形成。連續給藥9周后,本發明藥物大、中劑量組和依那普利片組能顯著降低腎型高血壓大鼠的血壓,與模型組相比有顯著差異(P<0.001)。
            表2本發明藥物對腎型高血壓大鼠收縮期血壓mmHg影響(n=10,X±s)

            注藥前相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與模型組相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001表3本發明藥物逆轉腎型高血壓左心室肥厚的作用(X±s)


            注與模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001小劑量組無顯著性差異(P>0.05)。本發明藥物大、中劑量組能夠明顯降低腎型高血壓大鼠的左室系數(P<0.05)。說明本發明藥物能夠逆轉腎型高血壓大鼠的左心室肥厚。結果詳見表3。
            本發明藥物逆轉腎型高血壓大鼠左心室肥厚病理學檢查結果假手術組心內膜、外膜、心肌及心肌間質組織結構正常,心肌纖維未見變性、壞死等形態學改變。
            模型組心肌纖維束明顯腫脹增大,心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性及水樣變性,部分心肌纖維可見少數灶狀壞死,心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中可見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁明顯增厚,管腔明顯變小,管周纖維結締組織增多。
            大劑量組多數動物心肌纖維束未見明顯改變,僅個別動物心肌纖維束輕度腫脹增大。個別部位少數心肌纖維輕度濁腫、變性,小血管壁未見增厚,管周纖維結締組織未見增多。
            中劑量組心肌纖維束腫脹增大,心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性,部分心肌纖維可見少數灶狀壞死,心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中偶見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁增厚,管腔未見明顯變小,管周纖維結締組織也未見增多。
            小劑量組心肌纖維束腫脹增大,心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性,部分心肌纖維可見少數灶狀壞死,心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中偶見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁增厚,管腔變小,管周纖維結締組織輕度增多。
            陽性對照組多數動物心肌纖維束未見明顯改變,僅個別動物心肌纖維束輕度腫脹增大。個別部位少數心肌纖維輕度濁腫、變性,小血管壁未見增厚,管周纖維結締組織未見增多。
            7.4本發明藥物對麻醉犬血流動力學的影響7.4.1本發明藥物對心輸出量及冠脈血流量的影響本發明藥物大、小劑量組均對心輸出量無明顯影響。依那普利片組給藥后60min使心輸出量降低。結果詳見表4。
            本發明藥物大劑量組于給藥后180min使冠脈流量明顯增加(P<0.01),小劑量組有增加趨勢。依那普利片組給藥后60min使冠脈流量明顯增加(P<0.05)。
            7.4.2本發明藥物對左室內壓、+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片均對左室內壓無明顯影響。
            本發明藥物大、小劑量組皆于給藥后120min使+dp/dtmax明顯降低。依那普利片于給藥后30~120min使+dp/dtmax明顯降低。
            本發明藥物大、小劑量組和依那普利片均對-dp/dtmax無明顯影響。
            7.4.3本發明藥物對總外周阻力和冠脈阻力的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片對總外周阻力均無明顯影響。
            本發明藥物大劑量組別于給藥180min明顯降低冠脈阻力,小劑量組和依那普利片有降低趨勢。
            7.4.4本發明藥物對血壓和心率的影響與空白對照組比較,本發明藥物大、小劑量組和依那普利片組均對平均血壓和心率無明顯影響。與給藥前比較,本發明藥物大劑量組于給藥后180~240mi明顯降低平均血壓,小劑量組無明顯影響,依那普利片240min有降低趨勢。
            7.4.5本發明藥物對每搏心排出量和左室作功的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片組均對每搏心排出量無明顯影響。
            本發明藥物大、小劑量組對左室作功無明顯影響。依那普利片組于給藥后60min明顯降低左室作功。
            8.小結8.1本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg分別從灌胃給藥10天、15天開始明顯降低自發性高血壓大鼠收縮壓,小劑量組12.5mg/kg雖無顯著性差異,但有降低趨勢。
            8.2本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg分別從灌胃給藥5天、10天開始明顯降低腎型高血壓大鼠收縮壓,12.5mg/kg雖無顯著性差異,但有降低趨勢。
            8.3本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg能逆轉腎型高血壓大鼠的左心室肥厚,小劑量組12.5mg/kg雖無顯著性差異,但有逆轉趨勢。
            8.4本發明藥物10.0mg/kg給藥后180~240min能明顯降低麻醉犬平均血壓。
            8.5本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均于給藥后120min使麻醉犬+dp/dtmax明顯降低。
            8.6本發明藥物10.0mg/kg于給藥180min明顯降低麻醉犬冠脈阻力,并顯著增加冠脈流量;5.0mg/kg有增加趨勢。
            8.7本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均對麻醉犬左室內壓、-dp/dtmax、心輸出量無明顯影響。
            8.8本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均對麻醉犬總外周阻力、每搏心排出量和左室作功無明顯影響。
            8.9本發明藥物在降低平均血壓和改善冠脈流量等方面顯示了一定的藥效作用。
            二、本發明藥物的工藝研究1、白花前胡提取工藝研究根據白花前胡活性成分的化學性質及藥理學研究,我們對本發明藥物中的提取物的提取工藝、分離純化工藝進行了系統的研究。
            1)白花前胡醇提工藝研究考察了不同醇提工藝對白花前胡丙素含量的影響,采用正交試驗,篩選最佳醇提工藝條件。
            2)白花前胡分離純化工藝研究(1)比較了不同乙酸乙酯用量對總香豆素得率及含量得影響,確定采用乙酸乙酯萃取,優選采取等量的乙酸乙酯。
            (2)比較了不同乙酸乙酯萃取次數對總香豆素得率及含量的影響,確定根據所用萃取溶劑的量,優選采用3次萃取。
            (3)提取物內控質量標準的制定通過以上工藝研究,制定了本品的制備工藝,并經中試放大,成品各項指標均符合規定要求,進一步確證了本工藝合理、科學并適應規模生產的需要,保證了制劑質量。
            1.1)儀器與試藥Agilent 1100高效液相色譜儀所用試劑均為色譜純所用藥材由山東大學藥學院溫學森教授鑒定對照品白花前胡丙素對照品由實驗室制備1.2)試驗方法采用正交表L9(34)篩選了乙醇回流提取的最佳工藝條件1.2.1)制備工藝取白花前胡100g,共稱取9份,分別按不同的提取工藝提取,回收乙醇,并濃縮至每g相當于1.5g原藥材的清膏。
            1.2.2)白花前胡丙素含量測定色譜條件流動相甲醇-水-乙腈=25∶15∶60,流速1.0ml/min,柱溫25℃,檢測波長323nm,進樣量20μl。
            對照品溶液的配制精取干燥至恒重的白花前胡丙素標準品約10.0mg,精密稱重,置10ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml置100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(含白花前胡丙素10ug/ml)。
            供試品溶液的配制取相當于1.0g原藥材的清膏,置10ml量瓶中,加入甲醇約8ml,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,從中精密量取1ml,置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度,作為供試品溶液。
            精密量取對照品溶液與供試品溶液20μl,在上述色譜條件下進樣,測定峰面積,計算不同工藝白花前胡丙素含量,試驗方案和結果見表2,方差分析見表3。
            1.2.3)方差分析正交試驗結果分析,A因素即醇濃度對白花前胡丙素含量有顯著差異,選擇乙醇的濃度在60%-95%,但95%醇提清膏中白花前胡丙素含量明顯高于75%醇提工藝及85%醇提工藝,故優選85-95%醇提工藝,更優選95%的乙醇;B因素即加醇量對白花前胡丙素含量的影響較大,故優選加醇量為8-10倍量,更優選10倍量;C因素即提取時間對白花前胡丙素含量無顯著影響,故選擇提取時間為60-120分鐘。
            2.1)不同萃取次數的考察萃取一步是該生產工藝中的關鍵步驟,它直接影響到白花前胡香豆素的產率,乙酸乙酯的用量和生產能耗等。考察萃取次數與得率,得到最佳萃取次數。
            2.1.1)供試品的制備取白花前胡藥材5kg,按選定的提取工藝提取,回收乙醇至無醇味,至相對密度為1.20(60℃)稠膏,平均分成3份,加水適量,分散,加1倍量乙酸乙酯分別萃取2、3、5次,回收溶劑,加入適量的石油醚,結晶析出淡黃色固體,得到白花前胡總香豆素提取物。
            2.1.2)白花前胡丙素的含量測定色譜條件流動相甲醇-水-乙腈=25∶15∶60,流速1.0ml/min,柱溫25℃,檢測波長323nm,進樣量20μl。
            對照品溶液的配制精取干燥至恒重的白花前胡丙素標準品約10.0mg,精密稱重,置10ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml置100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(含白花前胡丙素10ug/ml)。
            供試品溶液的配制取白花前胡總香豆素提取物15mg,置10ml量瓶中,加入甲醇約8ml,超聲處理30分鐘,放冷,補足溶劑至刻度,搖勻,精密量取1ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。
            精密量取對照品溶液與供試品溶液20μl,在上述色譜條件下進樣,測定峰面積,計算不同工藝白花前胡丙素含量。
            2.1.3)總香豆素的含量測定對照品溶液的配制精密稱取干燥至恒重的白花前胡丙素標準品10.0mg,置10ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取0.5、2.0ml分別置100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,制備得對照液。
            供試品溶液的配制取本發明的提取物15mg,置10ml量瓶中,加入甲醇約8ml,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,從中精密量取1ml,置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度,作為供試品溶液。
            照紫外分光光度法(中國藥典2005版一部附錄28頁VA)測定。分別取對照品溶液和供試品溶液在323nm處測定吸收度,計算總香豆素含量。
            結果表明,萃取次數為3次和5次得到的提取物的得率及含量沒有明顯的差別,而萃取2次所得的的提取物的得率較低,因此確定萃取次數為3-5次,優選3次。
            2.2)不同萃取劑用量得考察考察了不同乙酸乙酯用量對本發明提取物得率及含量的影響。
            取白花前胡藥材5kg,按選定的提取工藝提取,回收乙醇至無醇味,至相對密度為1.20(60℃)稠膏,平均分成3份,加水適量,分散,每份200ml,分別加0.5倍、1倍量2倍量(V/V)乙酸乙酯,分別萃取3次,回收溶劑,加入適量的石油醚,結晶析出淡黃色固體,得到白花前胡總香豆素提取物。
            以上不同提取工藝提取得到的供試品分別按2.1.2項下方法測定白花前胡丙素含量,按2.1.3項下方法測定總香豆素的含量。
            結果表明,萃取劑用量為1倍量和2倍量(V/V)所得提取物的得率及含量無明顯差別,為0.5倍時,得率較低,因此確定優選的萃取劑用量為1-3倍量(V/V),優選1倍量(V/V)。
            在上述一系列工藝條件研究后,確定了從白花前胡藥材中提取、分離、純化有效部位白花前胡丙素的各步工藝的具體條件,將各部最佳的工藝條件組合在一起確定白花前胡總香豆素提取物的制備工藝,確定采用乙酸乙酯萃取后,回收溶劑,加入適量石油醚,重結晶,得到本發明提取物,并進一步制定了提取物的內控標準。
            2、本發明藥物制劑工藝研究在確定白花前胡提取物的制備工藝之后,又放大中試多批,認為這些工藝條件基本可行,產品收率、含量、色澤都比較穩定,且各項指標均符合提取物質量標準要求。在此前提下,進行了制劑工藝研究,其中包括制劑處方設計、制劑成型工藝及中試等研究。
            1)制劑處方的確定根據藥效學試驗結果,并經臨床應用,確定處方中提取物約為50~60mg/粒,用法為用法為一日3次,每次1粒。
            2)處方的篩選與確定選擇不同的輔料及配比進行處方篩選試驗。由于白花前胡有效部位難溶于水,為促進其溶出,故以溶出度為指標對中藥制劑內容物的處方組成進行了篩選。結果見表4。
            表4中藥制劑內容物處方篩選


            結果表明,由處方1制備的顆粒硬度較大,在溶出介質中較難崩解溶出;在加入表面活性劑吐溫以及以5%淀粉漿為粘合劑后,處方2制成的顆粒溶出度雖有改善,但仍崩解困難;由于甘露醇的加入,處方3、4、5制成的顆粒溶出度雖有明顯增大,但仍崩解較慢;為了加快崩解以增大溶出,在處方6、7中分別選擇了70%乙醇溶液和含30%pvp70%乙醇溶液為粘合劑或潤濕劑,發現顆粒崩解迅速,溶出度達80%以上,而二者無明顯差別。在處方7的基礎上,對所用輔料的量進行了調整,最后確定處方9為最佳藥物處方。
            2.1)輔料的選擇與作用本品原料藥白花前胡有效部位性質穩定,難溶于水,故選擇能增進本發明藥物藥物活性成分溶解的輔料進行處方篩選。
            (1)甘露醇作為稀釋劑,由于其易溶于水,分散于前胡提取物周圍可促進其溶出。
            (2)微粉硅膠作為吸附劑和助流劑。本品可吸附液體聚山梨酯80使成粉末,有利于顆粒成型。
            (3)聚山梨酯80作為表面活性劑以改善難溶性藥物的溶出。
            (4)蔗糖干燥粘合劑。處方中加入蔗糖粉可增大顆粒的硬度。
            (5)羧甲基淀粉鈉崩解劑。可促進中藥制劑內容物顆粒的崩解。
            (6)硬脂酸鎂作為潤滑劑。顆粒中加入硬脂酸鎂后,可起到助流作用利于中藥制劑的灌裝。
            2.2)輔料的來源與質量標準(見表5)表5各輔料的來源及質量標準


            具體實施方式
            實施例1白花前胡總香豆素提取物55份聚山梨酯8010份微粉硅膠 15份甘露醇250份蔗糖 15份羧甲基淀粉鈉 10份硬脂酸鎂 3份70%乙醇溶液 適量實施例2白花前胡總香豆素提取物30份聚山梨酯808份微粉硅膠 20份甘露醇200份蔗糖 20份羧甲基淀粉鈉 8份硬脂酸鎂 1份70%乙醇溶液 適量實施例3白花前胡總香豆素提取物55g聚山梨酯8010g微粉硅膠 20g甘露醇200g蔗糖 20g羧甲基淀粉鈉 10g硬脂酸鎂 3g70%乙醇溶液 適量實施例4
            白花前胡總香豆素提取物60份聚山梨酯8010份微粉硅膠 20份甘露醇250份蔗糖 20份羧甲基淀粉鈉 15份硬脂酸鎂 3份70%乙醇溶液 適量實施例5白花前胡總香豆素提取物70份聚山梨酯8015g微粉硅膠 20g甘露醇250g蔗糖 15g羧甲基淀粉鈉 10g硬脂酸鎂 5g70%乙醇溶液 適量
            權利要求
            1.一種中藥提取物,其特征為其中含有白花前胡。
            2.一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑,按重量份計,含有白花前胡總香豆素提取物30-70份和藥用輔料250-350份。
            3.如權利要求1所述的中藥制劑,其中的藥用輔料選自聚山梨酯80、微粉硅膠、甘露醇、蔗糖、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂中的一種或多種的組合。
            4.如權利要求2或3所述的中藥制劑,其中所含的白花前胡總香豆素提取物40-60份,聚山梨酯80 8-15份、微粉硅膠10-20份、甘露醇200-250份、蔗糖10-20份、羧甲基淀粉鈉8-15份、硬脂酸鎂1-5份。
            5.如權利要求4所述的中藥制劑,其中所含的白花前胡總香豆素提取物55份,聚山梨酯80 10份、微粉硅膠15份、甘露醇250份、蔗糖15份、羧甲基淀粉鈉10份、硬脂酸鎂3份。
            6.如權利要求1-5任意一項所述的中藥制劑,其中白花前胡總香豆素提取物中含有白花前胡丙素為65-90%。
            7.如權利要求1-6任意一項所述的中藥制劑,其中的白花前胡總香豆素提取物的制備方法為,將白花前胡根,粉碎成粗粉,用60-95%乙醇加熱回流提取3次,每次0.5-2小時,第一次加8-10倍量的乙醇,第二、三次各加6-8倍量的乙醇,過濾,濾液濃縮回收乙醇至無醇味,得到的膏狀物加入蒸餾水拌散,用乙酸乙酯萃取,回收乙酸乙酯,濃縮成稠膏狀,加入石油醚,超聲20分鐘后靜置,析出沉淀,過濾,沉淀用石油醚洗滌至淺黃色,即得到所述的提取物。
            8.如權利要求7所述的中藥制劑,其中提取白花前胡總香豆素所用的乙醇的濃度為95%。
            9.如權利要求7或8所述的中藥制劑,其中用1的乙酸乙酯萃取三次。
            10.如權利要求1-8任意一項所述的中藥制劑,其劑型為膠囊劑。
            11.如權利要求9所述的中藥制劑的制備方法為,將白花前胡總香豆素提取物粉碎過160目篩,微粉硅膠、甘露醇、糖粉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂過100目篩,備用,取聚山梨酯80,置于微粉硅膠中混合均勻,再加入白花前胡總香豆素提取物、甘露醇、糖粉、羧甲基淀粉鈉,混勻,噴入70%乙醇溶液制軟材,過40目篩制濕顆粒,50~60℃干燥2小時,過30目篩整粒,加入滑石粉,混勻,裝入0號膠囊即得。
            12.如權利要求1-19任意一項所述的中藥制劑在制備治療高血壓藥物中的應用。
            13.如權利要求1-9任意一項所述的白花前胡總香豆素提取物中藥制劑的質量控制方法,包括1.總香豆素的含量測定對照品溶液的配制取減壓干燥至恒重的白花前胡丙素標準品10.0mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。供試品溶液的配制取本發明的提取物約10mg,置10ml量瓶中,加入甲醇約8ml,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,棄去初濾液,精密吸取續濾液1ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。標準曲線的制備精密吸取對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。取處方量的空白輔料,按上述方法制備空白對照溶液。照分光光度法(附錄VB),在323nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。測定法取供試品溶液在323nm處測定吸收度,按標準曲線計算樣品中總香豆素含量,即得。2.白花前胡丙素的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-水(25∶60∶15)為流動相;檢測波長323nm;流速1.0ml/min,柱溫35℃;理論塔板數按白花前胡丙素峰計算應不低于3000。對照品溶液的制各取減壓干燥至恒重的白花前胡丙素對照品10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取1ml置100ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻作為對照品溶液。供試品溶液的制備取本發明的提取物細粉10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入甲醇適量,超聲處理30分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,棄去初濾液,精密量取續濾液1.0ml,置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。測定法精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測定,按外標法以峰面積計算,即得。
            全文摘要
            本發明涉及一種中藥提取物制劑、其制備方法及其應用,具體為一種白花前胡總香豆素提取物中藥制劑及其制備方法、以及其在制備治療高血壓藥物中的應用。本發明經過長期摸索研究,確證白花前胡治療高血壓病的有效部位,并提取分離得到本發明的白花前胡總香豆素提取物,用以治療高血壓。本發明解決了長期以來存在的發揮作用較慢,質量較難控制等中藥使用局限,本發明藥物的藥效學和藥理學深入系統研究表明,本發明藥物具有藥效作用強,毒副作用小,安全范圍大,以及產品純度高,服用劑量較小,質量可控等優點,而且經過對藥物輔料的選擇,本發明藥物的活性成分溶出度好,崩解性好。
            文檔編號A61P9/00GK1977871SQ20051012762
            公開日2007年6月13日 申請日期2005年12月6日 優先權日2005年12月6日
            發明者趙志全 申請人:魯南制藥集團股份有限公司
            網友詢問留言 已有0條留言
            • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
            1
            婷婷六月激情在线综合激情,亚洲国产大片,久久中文字幕综合婷婷,精品久久久久久中文字幕,亚洲一区二区三区高清不卡,99国产精品热久久久久久夜夜嗨 ,欧美日韩亚洲综合在线一区二区,99国产精品电影,伊人精品线视天天综合,精品伊人久久久大香线蕉欧美
            亚洲精品1区 国产成人一级 91精品国产欧美一区二区 亚洲精品乱码久久久久久下载 国产精品久久久久久久伊一 九色国产 国产精品九九视频 伊人久久成人爱综合网 欧美日韩亚洲区久久综合 欧美日本一道免费一区三区 夜夜爽一区二区三区精品 欧美日韩高清一区二区三区 国产成人av在线 国产精品对白交换绿帽视频 国产视频亚洲 国产在线欧美精品 国产精品综合网 国产日韩精品欧美一区色 国产日韩精品欧美一区喷 欧美日韩在线观看区一二 国产区精品 欧美视频日韩视频 中文字幕天天躁日日躁狠狠躁97 视频一二三区 欧美高清在线精品一区二区不卡 国产精品揄拍一区二区久久 99久久综合狠狠综合久久aⅴ 亚洲乱码视频在线观看 日韩在线第二页 亚洲精品无码专区在线播放 成人亚洲网站www在线观看 欧美三级一区二区 99久久精品免费看国产高清 91麻豆国产在线观看 最新日韩欧美不卡一二三区 成人在线观看不卡 日韩国产在线 在线亚洲精品 亚洲午夜久久久久中文字幕 国产精品成人久久久久久久 精品国产一区二区在线观看 欧美精品国产一区二区三区 中文在线播放 亚洲第一页在线视频 国产午夜精品福利久久 九色国产 精品国产九九 国产永久视频 久久精品人人做人人综合试看 国产一区二区三区免费观看 亚洲精品国产电影 9999热视频 国产精品资源在线 麻豆久久婷婷国产综合五月 国产精品免费一级在线观看 亚洲国产一区二区三区青草影视 中文在线播放 国产成人综合在线 国产在线观看色 国产亚洲三级 国产片一区二区三区 久久99精品久久久久久牛牛影视 亚洲欧美日韩国产 四虎永久免费网站 国产一毛片 国产精品视频在 九九热在线精品 99精品福利视频 色婷婷色99国产综合精品 97成人精品视频在线播放 精品久久久久久中文字幕 亚洲欧美一区二区三区孕妇 亚洲欧美成人网 日韩高清在线二区 国产尤物在线观看 在线不卡一区二区 91网站在线看 韩国精品福利一区二区 欧美日韩国产成人精品 99热精品久久 国产精品免费视频一区 高清视频一区 精品九九久久 欧美日韩在线观看免费 91欧美激情一区二区三区成人 99福利视频 亚洲国产精品91 久热国产在线 精品久久久久久中文字幕女 国产精品久久久久久久久99热 成人自拍视频网 国产精品视频久久久久久 久久影院国产 国产玖玖在线观看 99精品在线免费 亚洲欧美一区二区三区导航 久久久久久久综合 国产欧美日韩精品高清二区综合区 国产精品视频自拍 亚洲一级片免费 久久久久久九九 国产欧美自拍视频 视频一区二区在线观看 欧美日韩一区二区三区久久 中文在线亚洲 伊人热人久久中文字幕 日韩欧美亚洲国产一区二区三区 欧美亚洲国产成人高清在线 欧美日韩国产码高清综合人成 国产性大片免费播放网站 亚洲午夜综合网 91精品久久一区二区三区 国产无套在线播放 国产精品视频网站 国产成人亚洲精品老王 91在线网站 国产视频97 欧美黑人欧美精品刺激 国产一区二区三区免费在线视频 久久久国产精品免费看 99re6久精品国产首页 久久精品91 国产成人一级 国产成人精品曰本亚洲 日本福利在线观看 伊人成综合网 久久综合一本 国产综合久久久久久 久久精品成人免费看 久久福利 91精品国产91久久久久久麻豆 亚洲精品成人在线 亚洲伊人久久精品 欧美日本二区 国产永久视频 国产一区二 一区二区福利 国产一毛片 亚洲精品1区 毛片一区二区三区 伊人久久大香线蕉综合影 国产欧美在线观看一区 亚洲国产欧洲综合997久久 国产一区二区免费视频 国产91精品对白露脸全集观看 久久亚洲国产伦理 欧美成人伊人久久综合网 亚洲性久久久影院 久久99国产精一区二区三区! 91精品国产欧美一区二区 欧美日韩亚洲区久久综合 日韩精品一二三区 久久久夜色精品国产噜噜 国产在线精品福利91香蕉 久久久久久久亚洲精品 97se色综合一区二区二区 91国语精品自产拍在线观看性色 91久久国产综合精品女同我 日韩中文字幕a 国产成人亚洲日本精品 久久国产精品-国产精品 久久国产经典视频 久久国产精品伦理 亚洲第一页在线视频 国产精品久久久久三级 日韩毛片网 久久免费高清视频 麻豆国产在线观看一区二区 91麻豆国产福利在线观看 国产成人精品男人的天堂538 一区二区三区中文字幕 免费在线视频一区 欧美日韩国产成人精品 国产综合网站 国产资源免费观看 亚洲精品亚洲人成在线播放 精品久久久久久中文字幕专区 亚洲人成人毛片无遮挡 国产一起色一起爱 国产香蕉精品视频在 九九热免费观看 日韩亚洲欧美一区 九九热精品在线观看 精品久久久久久中文字幕专区 亚洲欧美自拍偷拍 国产精品每日更新 久久久久国产一级毛片高清板 久久天天躁狠狠躁夜夜中文字幕 久久精品片 日韩在线毛片 国产成人精品本亚洲 国产成人精品一区二区三区 九九热在线观看 国产r级在线观看 国产欧美日韩精品高清二区综合区 韩国电影一区二区 国产精品毛片va一区二区三区 五月婷婷伊人网 久久一区二区三区免费 一本色道久久综合狠狠躁篇 亚洲综合色站 国产尤物在线观看 亚洲一区亚洲二区 免费在线视频一区 欧洲精品视频在线观看 日韩中文字幕a 中文字幕日本在线mv视频精品 91精品在线免费视频 精品国产免费人成在线观看 精品a级片 中文字幕日本在线mv视频精品 日韩在线精品视频 婷婷丁香色 91精品国产高清久久久久 国产成人精品日本亚洲直接 五月综合视频 欧美日韩在线亚洲国产人 精液呈暗黄色 亚洲乱码一区 久久精品中文字幕不卡一二区 亚洲天堂精品在线 激情婷婷综合 国产免费久久精品久久久 国产精品亚洲二区在线 久久免费播放视频 五月婷婷丁香综合 在线亚洲欧美日韩 久久免费精品高清麻豆 精品久久久久久中文字幕 亚洲一区网站 国产精品福利社 日韩中文字幕免费 亚洲综合丝袜 91精品在线播放 国产精品18 亚洲日日夜夜 伊人久久大香线蕉综合影 亚洲精品中文字幕乱码影院 亚洲一区二区黄色 亚洲第一页在线视频 一区二区在线观看视频 国产成人福利精品视频 亚洲高清二区 国内成人免费视频 精品亚洲性xxx久久久 国产精品合集一区二区三区 97av免费视频 国产一起色一起爱 国产区久久 国产资源免费观看 99精品视频免费 国产成人一级 国产精品九九免费视频 欧美91精品久久久久网免费 99热国产免费 久久精品色 98精品国产综合久久 久久精品播放 中文字幕视频免费 国产欧美日韩一区二区三区在线 精品久久蜜桃 国产小视频精品 一本色道久久综合狠狠躁篇 91在线免费观看 亚洲精品区 伊人成综合网 伊人热人久久中文字幕 伊人黄色片 99国产精品热久久久久久夜夜嗨 久久免费精品视频 亚洲一区二区三区高清不卡 久久久久国产一级毛片高清板 国产片一区二区三区 久久狠狠干 99久久婷婷国产综合精品电影 国产99区 国产精品成人久久久久 久久狠狠干 青青国产在线观看 亚洲高清国产拍精品影院 国产精品一区二区av 九九热在线免费视频 伊人久久国产 国产精品久久久久久久久久一区 在线观看免费视频一区 国产精品自在在线午夜区app 国产精品综合色区在线观看 国产毛片久久久久久国产毛片 97国产免费全部免费观看 国产精品每日更新 国产尤物视频在线 九九视频这里只有精品99 一本一道久久a久久精品综合 久久综合给会久久狠狠狠 国产成人精品男人的天堂538 欧美一区二区高清 毛片一区二区三区 国产欧美日韩在线观看一区二区三区 在线国产二区 欧美不卡网 91在线精品中文字幕 在线国产福利 国内精品91久久久久 91亚洲福利 日韩欧美国产中文字幕 91久久精品国产性色也91久久 亚洲性久久久影院 欧美精品1区 国产热re99久久6国产精品 九九热免费观看 国产精品欧美日韩 久久久久国产一级毛片高清板 久久国产经典视频 日韩欧美亚洲国产一区二区三区 欧美亚洲综合另类在线观看 国产精品自在在线午夜区app 97中文字幕在线观看 视频一二三区 精品国产一区在线观看 国产欧美日韩在线一区二区不卡 欧美一区二三区 伊人成人在线观看 国内精品91久久久久 97在线亚洲 国产在线不卡一区 久久久全免费全集一级全黄片 国产精品v欧美精品∨日韩 亚洲毛片网站 在线不卡一区二区 99re热在线视频 久久激情网 国产毛片一区二区三区精品 久久亚洲综合色 中文字幕视频免费 国产视频亚洲 婷婷伊人久久 国产一区二区免费播放 久久99国产精品成人欧美 99国产在线视频 国产成人免费视频精品一区二区 国产不卡一区二区三区免费视 国产码欧美日韩高清综合一区 久久精品国产主播一区二区 国产一区电影 久久精品国产夜色 国产精品国产三级国产 日韩一区二区三区在线 久久97久久97精品免视看 久久国产免费一区二区三区 伊人久久大香线蕉综合电影网 99re6久精品国产首页 久久激情网 亚洲成人高清在线 国产精品网址 国产成人精品男人的天堂538 香蕉国产综合久久猫咪 国产专区中文字幕 91麻豆精品国产高清在线 久久国产经典视频 国产精品成人va在线观看 国产精品爱啪在线线免费观看 日本精品久久久久久久久免费 亚洲综合一区二区三区 久久五月网 精品国产网红福利在线观看 久久综合亚洲伊人色 亚洲国产精品久久久久久网站 在线日韩国产 99国产精品热久久久久久夜夜嗨 国产综合精品在线 国产区福利 精品亚洲综合久久中文字幕 国产制服丝袜在线 毛片在线播放网站 在线观看免费视频一区 国产精品久久久精品三级 亚洲国产电影在线观看 最新日韩欧美不卡一二三区 狠狠综合久久综合鬼色 日本精品1在线区 国产日韩一区二区三区在线播放 欧美日韩精品在线播放 亚洲欧美日韩国产一区二区三区精品 久久综合久久网 婷婷六月激情在线综合激情 亚洲乱码一区 国产专区91 97av视频在线观看 精品久久久久久中文字幕 久久五月视频 国产成人福利精品视频 国产精品网址 中文字幕视频在线 精品一区二区三区免费视频 伊人手机在线视频 亚洲精品中文字幕乱码 国产在线视频www色 色噜噜国产精品视频一区二区 精品亚洲成a人在线观看 国产香蕉尹人综合在线 成人免费一区二区三区在线观看 国产不卡一区二区三区免费视 欧美精品久久天天躁 国产专区中文字幕 久久精品国产免费中文 久久精品国产免费一区 久久无码精品一区二区三区 国产欧美另类久久久精品免费 欧美精品久久天天躁 亚洲精品在线视频 国产视频91在线 91精品福利一区二区三区野战 日韩中文字幕免费 国产精品99一区二区三区 欧美成人高清性色生活 国产精品系列在线观看 亚洲国产福利精品一区二区 国产成人在线小视频 国产精品久久久久免费 99re热在线视频 久久久久久久综合 一区二区国产在线播放 成人国产在线视频 亚洲精品乱码久久久久 欧美日韩一区二区综合 精品久久久久免费极品大片 中文字幕视频二区 激情粉嫩精品国产尤物 国产成人精品一区二区视频 久久精品中文字幕首页 亚洲高清在线 国产精品亚洲一区二区三区 伊人久久艹 中文在线亚洲 国产精品一区二区在线播放 国产精品九九免费视频 亚洲二区在线播放 亚洲狠狠婷婷综合久久久久网站 亚洲欧美日韩网站 日韩成人精品 亚洲国产一区二区三区青草影视 91精品国产福利在线观看 国产精品久久久久久久久99热 国产一区二区精品尤物 久碰香蕉精品视频在线观看 亚洲日日夜夜 在线不卡一区二区 国产午夜亚洲精品 九九热在线视频观看这里只有精品 伊人手机在线视频 91免费国产精品 日韩欧美中字 91精品国产91久久久久 国产全黄三级播放 视频一区二区三区免费观看 国产开裆丝袜高跟在线观看 国产成人欧美 激情综合丝袜美女一区二区 国产成人亚洲综合无 欧美精品一区二区三区免费观看 欧美亚洲国产日韩 日韩亚州 国产欧美日韩精品高清二区综合区 亚洲午夜国产片在线观看 精品久久久久久中文字幕 欧美精品1区 久久伊人久久亚洲综合 亚洲欧美日韩精品 国产成人精品久久亚洲高清不卡 久久福利影视 国产精品99精品久久免费 久久久久免费精品视频 国产日产亚洲精品 亚洲国产午夜电影在线入口 精品无码一区在线观看 午夜国产精品视频 亚洲一级片免费 伊人久久大香线蕉综合影 国产精品久久影院 久碰香蕉精品视频在线观看 www.欧美精品 在线小视频国产 亚洲国产天堂久久综合图区 欧美一区二区三区不卡 日韩美女福利视频 九九精品免视频国产成人 不卡国产00高中生在线视频 亚洲第一页在线视频 欧美日韩在线播放成人 99re视频这里只有精品 国产精品91在线 精品乱码一区二区三区在线 国产区久久 91麻豆精品国产自产在线观看一区 日韩精品成人在线 九九热在线观看 国产精品久久不卡日韩美女 欧美一区二区三区综合色视频 欧美精品免费一区欧美久久优播 国产精品网址 国产专区中文字幕 国产精品欧美亚洲韩国日本久久 日韩美香港a一级毛片 久久精品123 欧美一区二区三区免费看 99r在线视频 亚洲精品国产字幕久久vr 国产综合激情在线亚洲第一页 91免费国产精品 日韩免费小视频 亚洲国产精品综合一区在线 国产亚洲第一伦理第一区 在线亚洲精品 国产精品一区二区制服丝袜 国产在线成人精品 九九精品免视频国产成人 亚洲国产网 欧美日韩亚洲一区二区三区在线观看 在线亚洲精品 欧美一区二区三区高清视频 国产成人精品男人的天堂538 欧美日韩在线观看区一二 亚洲欧美一区二区久久 久久精品中文字幕首页 日本高清www午夜视频 久久精品国产免费 久久999精品 亚洲国产精品欧美综合 88国产精品视频一区二区三区 91久久偷偷做嫩草影院免费看 国产精品夜色视频一区二区 欧美日韩导航 国产成人啪精品午夜在线播放 一区二区视频在线免费观看 99久久精品国产自免费 精液呈暗黄色 久久99国产精品 日本精品久久久久久久久免费 精品国产97在线观看 99re视频这里只有精品 国产视频91在线 999av视频 亚洲美女视频一区二区三区 久久97久久97精品免视看 亚洲国产成人久久三区 99久久亚洲国产高清观看 日韩毛片在线视频 综合激情在线 91福利一区二区在线观看 一区二区视频在线免费观看 激情粉嫩精品国产尤物 国产成人精品曰本亚洲78 国产成人精品本亚洲 国产精品成人免费视频 国产成人啪精品视频免费软件 久久精品国产亚洲妲己影院 国产精品成人久久久久久久 久久大香线蕉综合爱 欧美一区二区三区高清视频 99热国产免费 在线观看欧美国产 91精品视频在线播放 国产精品福利社 欧美精品一区二区三区免费观看 国产一区二区免费视频 国产午夜精品一区二区 精品视频在线观看97 91精品福利久久久 国产一区福利 国产综合激情在线亚洲第一页 国产精品久久久久久久久久久不卡 九色国产 在线日韩国产 黄网在线观看 亚洲一区小说区中文字幕 中文字幕丝袜 日本二区在线观看 日本国产一区在线观看 欧美日韩一区二区三区久久 欧美精品亚洲精品日韩专 国产日产亚洲精品 久久综合九色综合欧美播 亚洲国产欧美无圣光一区 欧美视频区 亚洲乱码视频在线观看 久久无码精品一区二区三区 九九热精品免费视频 久久99精品久久久久久牛牛影视 国产精品成久久久久三级 国产一区福利 午夜国产精品视频 日本二区在线观看 99久久网站 国产亚洲天堂 精品国产一区二区三区不卡 亚洲国产日韩在线一区 国产成人综合在线观看网站 久久免费高清视频 欧美在线导航 午夜精品久久久久久99热7777 欧美久久综合网 国产小视频精品 国产尤物在线观看 亚洲国产精品综合一区在线 欧美一区二区三区不卡视频 欧美黑人欧美精品刺激 日本福利在线观看 久久国产偷 国产手机精品一区二区 国产热re99久久6国产精品 国产高清啪啪 欧美亚洲国产成人高清在线 国产在线第三页 亚洲综合一区二区三区 99r在线视频 99精品久久久久久久婷婷 国产精品乱码免费一区二区 国产在线精品福利91香蕉 国产尤物视频在线 五月婷婷亚洲 中文字幕久久综合伊人 亚洲精品一级毛片 99国产精品电影 在线视频第一页 久久99国产精品成人欧美 国产白白视频在线观看2 成人精品一区二区www 亚洲成人网在线观看 麻豆91在线视频 色综合合久久天天综合绕视看 久久精品国产免费高清 国产不卡一区二区三区免费视 欧美国产中文 99精品欧美 九九在线精品 国产中文字幕在线免费观看 国产一区中文字幕在线观看 国产成人一级 国产精品一区二区制服丝袜 国产一起色一起爱 亚洲精品成人在线 亚洲欧美精品在线 国产欧美自拍视频 99精品久久久久久久婷婷 久99视频 国产热re99久久6国产精品 视频一区亚洲 国产精品视频分类 国产精品成在线观看 99re6久精品国产首页 亚洲在成人网在线看 亚洲国产日韩在线一区 久久国产三级 日韩国产欧美 欧美在线一区二区三区 国产精品美女一级在线观看 成人午夜免费福利视频 亚洲天堂精品在线 91精品国产手机 欧美日韩视频在线播放 狠狠综合久久综合鬼色 九一色视频 青青视频国产 亚洲欧美自拍一区 中文字幕天天躁日日躁狠狠躁97 日韩免费大片 996热视频 伊人成综合网 亚洲天堂欧美 日韩精品亚洲人成在线观看 久久综合给会久久狠狠狠 日韩精品亚洲人成在线观看 日韩国产欧美 亚洲成aⅴ人片在线影院八 亚洲精品1区 99久久精品免费 国产精品高清在线观看 国产精品久久久免费视频 在线亚洲欧美日韩 91在线看视频 国产精品96久久久久久久 欧美日韩国产成人精品 91在线亚洲 热久久亚洲 国产精品美女免费视频观看 日韩在线毛片 亚洲永久免费视频 九九免费在线视频 亚洲一区网站 日本高清二区视频久二区 精品国产美女福利在线 伊人久久艹 国产精品久久久久三级 欧美成人精品第一区二区三区 99久久精品国产自免费 在线观看日韩一区 国产中文字幕一区 成人免费午夜视频 欧美日韩另类在线 久久99国产精品成人欧美 色婷婷中文网 久久天天躁夜夜躁狠狠躁2020 欧美成人伊人久久综合网 国产精品福利资源在线 国产伦精品一区二区三区高清 国产精品亚洲综合色区韩国 亚洲一区欧美日韩 色综合视频 国语自产精品视频在线区 国产高清a 成人国内精品久久久久影 国产在线精品香蕉综合网一区 国产不卡在线看 国产成人精品精品欧美 国产欧美日韩综合精品一区二区三区 韩国电影一区二区 国产在线视频www色 91中文字幕在线一区 国产人成午夜免视频网站 亚洲综合一区二区三区 色综合视频一区二区观看 久久五月网 九九热精品在线观看 国产一区二区三区国产精品 99久热re在线精品996热视频 亚洲国产网 在线视频亚洲一区 日韩字幕一中文在线综合 国产高清一级毛片在线不卡 精品国产色在线 国产高清视频一区二区 精品日本久久久久久久久久 亚洲国产午夜精品乱码 成人免费国产gav视频在线 日韩欧美一区二区在线观看 欧美曰批人成在线观看 韩国电影一区二区 99re这里只有精品6 日韩精品一区二区三区视频 99re6久精品国产首页 亚洲欧美一区二区三区导航 欧美色图一区二区三区 午夜精品视频在线观看 欧美激情在线观看一区二区三区 亚洲热在线 成人国产精品一区二区网站 亚洲一级毛片在线播放 亚洲一区小说区中文字幕 亚洲午夜久久久久影院 国产自产v一区二区三区c 国产精品视频免费 久久调教视频 国产成人91激情在线播放 国产精品欧美亚洲韩国日本久久 久久亚洲日本不卡一区二区 91中文字幕网 成人国产在线视频 国产视频91在线 欧美成人精品第一区二区三区 国产精品福利在线 久久综合九色综合精品 欧美一区二区三区精品 久久国产综合尤物免费观看 久久99青青久久99久久 日韩精品免费 久久国产精品999 91亚洲视频在线观看 国产精品igao视频 色综合区 在线亚洲欧国产精品专区 国产一区二区三区在线观看视频 亚洲精品成人在线 一区二区国产在线播放 中文在线亚洲 亚洲精品第一国产综合野 国产一区二区精品久久 一区二区三区四区精品视频 99热精品久久 中文字幕视频二区 国产成人精品男人的天堂538 99精品影视 美女福利视频一区二区 久久午夜夜伦伦鲁鲁片 综合久久久久久久综合网 国产精品国产欧美综合一区 国产99视频在线观看 国产亚洲女在线精品 婷婷影院在线综合免费视频 国产亚洲3p一区二区三区 91成人爽a毛片一区二区 亚洲一区二区高清 国产欧美亚洲精品第二区首页 欧美日韩导航 亚洲高清二区 欧美激情观看一区二区久久 日韩毛片在线播放 亚洲欧美日韩高清中文在线 亚洲日本在线播放 国产精品一区二区制服丝袜 精品国产一区二区三区不卡 国产不卡在线看 国产欧美网站 四虎永久在线观看视频精品 国产黄色片在线观看 夜夜综合 一本色道久久综合狠狠躁篇 欧美亚洲综合另类在线观看 国产91在线看 伊人久久国产 欧美一区二区在线观看免费网站 国产精品久久久久三级 久久福利 日韩中文字幕a 亚洲午夜久久久久影院 91在线高清视频 国产亚洲一区二区三区啪 久久人精品 国产精品亚洲午夜一区二区三区 综合久久久久久 久久伊人一区二区三区四区 国产综合久久久久久 日韩一区精品视频在线看 国产精品日韩欧美制服 日本精品1在线区 99re视频 无码av免费一区二区三区试看 国产视频1区 日韩欧美中文字幕一区 日本高清中文字幕一区二区三区a 亚洲国产欧美无圣光一区 国产在线视频一区二区三区 欧美国产第一页 在线亚洲欧美日韩 日韩中文字幕第一页 在线不卡一区二区 伊人久久青青 国产精品一区二区在线播放 www.五月婷婷 麻豆久久婷婷国产综合五月 亚洲精品区 久久国产欧美另类久久久 99在线视频免费 伊人久久中文字幕久久cm 久久精品成人免费看 久久这里只有精品首页 88国产精品视频一区二区三区 中文字幕日本在线mv视频精品 国产在线精品成人一区二区三区 伊人精品线视天天综合 亚洲一区二区黄色 国产尤物视频在线 亚洲精品99久久久久中文字幕 国产一区二区三区免费观看 伊人久久大香线蕉综合电影网 国产成人精品区在线观看 日本精品一区二区三区视频 日韩高清在线二区 久久免费播放视频 一区二区成人国产精品 国产精品免费精品自在线观看 亚洲精品视频二区 麻豆国产精品有码在线观看 精品日本一区二区 亚洲欧洲久久 久久中文字幕综合婷婷 中文字幕视频在线 国产成人精品综合在线观看 91精品国产91久久久久福利 精液呈暗黄色 香蕉国产综合久久猫咪 国产专区精品 亚洲精品无码不卡 国产永久视频 亚洲成a人片在线播放观看国产 一区二区国产在线播放 亚洲一区二区黄色 欧美日韩在线观看视频 亚洲精品另类 久久国产综合尤物免费观看 国产一区二区三区国产精品 高清视频一区 国产精品igao视频 国产精品资源在线 久久综合精品国产一区二区三区 www.五月婷婷 精品色综合 99热国产免费 麻豆福利影院 亚洲伊人久久大香线蕉苏妲己 久久电影院久久国产 久久精品伊人 在线日韩理论午夜中文电影 亚洲国产欧洲综合997久久 伊人国产精品 久草国产精品 欧美一区精品二区三区 亚洲成人高清在线 91免费国产精品 日韩精品福利在线 国产一线在线观看 国产不卡在线看 久久99青青久久99久久 亚洲精品亚洲人成在线播放 99久久免费看国产精品 国产日本在线观看 青草国产在线视频 麻豆久久婷婷国产综合五月 国产中文字幕一区 91久久精品国产性色也91久久 国产一区a 国产欧美日韩成人 国产亚洲女在线精品 一区二区美女 中文字幕在线2021一区 在线小视频国产 久久这里只有精品首页 国产在线第三页 欧美日韩中文字幕 在线亚洲+欧美+日本专区 精品国产一区二区三区不卡 久久这里精品 欧美在线va在线播放 精液呈暗黄色 91精品国产手机 91在线免费播放 欧美视频亚洲色图 欧美国产日韩精品 日韩高清不卡在线 精品视频免费观看 欧美日韩一区二区三区四区 国产欧美亚洲精品第二区首页 亚洲韩精品欧美一区二区三区 国产精品视频免费 在线精品小视频 久久午夜夜伦伦鲁鲁片 国产无套在线播放 久热这里只精品99re8久 欧美久久久久 久久香蕉国产线看观看精品蕉 国产成人精品男人的天堂538 亚洲人成网站色7799在线观看 日韩在线第二页 一本色道久久综合狠狠躁篇 国产一区二区三区不卡在线观看 亚洲乱码在线 在线观看欧美国产 久久福利青草精品资源站免费 国产玖玖在线观看 在线亚洲精品 亚洲成aⅴ人在线观看 精品91在线 欧美一区二三区 日韩中文字幕视频在线 日本成人一区二区 日韩免费专区 国内精品在线观看视频 久久国产综合尤物免费观看 国产精品系列在线观看 一本一道久久a久久精品综合 亚洲免费播放 久久精品国产免费 久久人精品 亚洲毛片网站 亚洲成a人一区二区三区 韩国福利一区二区三区高清视频 亚洲精品天堂在线 一区二区三区中文字幕 亚洲国产色婷婷精品综合在线观看 亚洲国产成人久久笫一页 999国产视频 国产精品香港三级在线电影 欧美日韩一区二区三区四区 日韩国产欧美 国产精品99一区二区三区 午夜国产精品理论片久久影院 亚洲精品中文字幕麻豆 亚洲国产高清视频 久久免费手机视频 日韩a在线观看 五月婷婷亚洲 亚洲精品中文字幕麻豆 中文字幕丝袜 www国产精品 亚洲天堂精品在线 亚洲乱码一区 国产日韩欧美三级 久久999精品 伊人热人久久中文字幕 久热国产在线视频 国产欧美日韩在线观看一区二区三区 国产一二三区在线 日韩国产欧美 91精品国产91久久久久 亚洲一区小说区中文字幕 精品一区二区免费视频 国产精品视频免费 国产精品亚洲综合色区韩国 亚洲国产精品成人午夜在线观看 欧美国产日韩精品 中文字幕精品一区二区精品