葡萄球菌腸毒素a基因及其編碼蛋白的新用途的制作方法

專利名稱：葡萄球菌腸毒素a基因及其編碼蛋白的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及葡萄球菌腸毒素A基因及其編碼蛋白的新用途，特別是涉及葡萄球菌腸毒素A基因在作為DNA疫苗免疫原性增強佐劑和該基因的編碼蛋白作為重組亞單位免疫原性增強佐劑中的應用。
背景技術：
葡萄球菌腸毒素A(staphylococcal enterotoxin A，SEA)是金黃色葡萄球菌產生的葡萄球菌腸毒素家族中的一員，是最有效的T細胞活化因子之一。SEA是含233個氨基酸殘基的蛋白質分子，富含絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)和天門冬氨酸(D)殘基。分子量較小，約27.8kD，等電點PI＝7.3，對酸和熱穩定。SEA分子中心有一個由二硫鍵形成的環，該環的完整性是SEA活化T淋巴細胞所必需的。SEA具有超抗原所具有的兩個特點，一是SEA不需經過抗原加工或蛋白酶解過程，可被直接呈遞給T淋巴細胞，而產生相應的免疫效應。該過程需要表達MHC II分子的輔佐細胞參與；二是SEA的呈遞不受MHC限制，人類細胞可將SEA有效呈遞給鼠T淋巴細胞，反之亦然。微量(10-9～10-12g)SEA能有效激活免疫細胞，產生一系列淋巴因子，主要有IL-1，IL-1，IL-2，IL-6，TNF-α，TNF-β和INF-γ，這些淋巴因子可直接產生抗腫瘤作用，也可繼發激活NK細胞而產生LAK活性。更重要的是，SEA能高效激活某些含有特定TCR V的T細胞，主要是CTLs細胞，對MHC II+細胞產生SDCC(staphylococcal-enterotoxin-dependent cell-mediated cytotoxicity)作用。
DNA疫苗是指攜帶有抗原蛋白基因及表達必需的調控元件的質粒DNA的表達載體。將其導入到宿主的有機體中，從而誘導機體產生免疫應答，可達到免疫的目的。優點是易于構建；成本低廉；制劑穩定；可組建多價復合疫苗聯合免疫。但是，有些抗原基因的免疫原性比較弱，單獨注射這些疫苗不能誘發足夠的保護性免疫。因此，尋找合適的DNA疫苗佐劑，有助于提高其免疫性及免疫效果。
重組亞單位疫苗是指重組抗原表達載體在原核或真核細胞表達的多肽抗原，經純化后制成的蛋白疫苗，與死菌苗和減毒活疫苗相比，副作用減少的同時，其免疫原性較低，因此，需添加適當的免疫佐劑。

發明內容
本發明的目的是提供葡萄球菌腸毒素A基因在作為DNA疫苗免疫原性增強佐劑和該基因的編碼蛋白(rSEA)作為重組亞單位免疫原性增強佐劑中的應用。
本發明發明人的實驗證實，葡萄球菌腸毒素A基因能夠顯著改善動物對DNA疫苗的反應性，可以用作DNA疫苗免疫原性增強佐劑或重組亞單位；葡萄球菌腸毒素A基因的編碼蛋白能夠顯著改善動物對重組亞單位疫苗的反應性，可以用作重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑。
在實際應用中，葡萄球菌腸毒素A基因與DNA疫苗的基因可以存在于不同的重組質粒中，使用時聯合注射，也可以使葡萄球菌腸毒素A基因與DNA疫苗的基因融合，形成一個重組質粒，使用起來會更方便。rSEA與重組亞單位疫苗的蛋白可獨立存在，在使用時聯合注射，也可以使rSEA與重組亞單位疫苗的蛋白融合，形成融合蛋白。當然，在制備上述佐劑時，也不排除添加其它藥學上可接受的輔料及載體。
葡萄球菌腸毒素A基因可以使乙肝病毒表面抗原DNA疫苗、瘧疾多表位抗原DNA疫苗等各種DNA疫苗免疫原性均得到增強，具有廣譜性，是一種不可多得的DNA疫苗免疫原性增強佐劑，葡萄球菌腸毒素A可以使各種重組亞單位疫苗的免疫原性得到增強，是一種不可多得的重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑，葡萄球菌腸毒素A基因及其編碼蛋白在DNA疫苗及重組亞單位疫苗的生產和應用中意義重大。


圖1為質粒pmSEA的酶切鑒定圖譜圖2為質粒pS2S的酶切鑒定圖譜具體實施方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法。
實施例1、質粒的制備1、含有葡萄球菌腸毒素A基因的重組質粒pmSEA的構建使用上游引物P15’-cgcggatccagcgagaaaagcgaagaaa-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶BamH I識別位點)和下游引物P25’-atgaattcagaattcacttgtatataatatAGCaata tgcat-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶EcoR I識別位點)，以金黃色葡萄球菌標準株ATCC 13565的基因組DNA為模板，PCR擴增SEA基因，反應條件為(1)96℃ 10分鐘；(2)94℃ 60秒，50℃ 90秒，72℃ 90秒，共30個循環；(3)72℃ 10分鐘。反應結束后，將PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后回收702bp的目的片段，再用限制性內切酶BamHI和EcoRI對回收的基因片段酶切，將酶切產物克隆入經同樣酶酶切的質粒載體pcDNA3(Invitrogen，USA)上，得到重組質粒，命名為pmSEA。轉化大腸桿菌DH5α，經藍白斑篩選后挑選陽性克隆，對其進行DNA序列分析，分析結果表明所克隆的葡萄球菌腸毒素A基因序列正確(序列1)，其編碼的氨基酸殘基序列為序列表中的序列2。對該重組質粒用限制性內切酶BamHI和EcoRI作進一步酶切鑒定，酶切鑒定結果如圖1所示(泳道1為Marker DL-2000；泳道2為pmSEA的BamHI和EcoRI酶切產物，小片段約700bp；泳道3為未酶切的pmSEA)，表明獲得了含有葡萄球菌腸毒素A基因的重組質粒。
2、含有乙肝表面抗原基因的重組質粒pS2S的構建使用上游引物B25’-GGAAGATCTCAGGCCATG CAGTGGAATT-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶Bgl II識別位點)和下游引物S35’-AGGGGGCCCAGCCCATGAAGTTTAGGGAA-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶Apa I識別位點)，以質粒HBV2(張彤等；中華微生物和免疫學雜志。1997，16(6)421-424)為模板，PCR擴增乙肝表面抗原中蛋白preS2-S的基因片段，反應條件為(1)95℃5分鐘；(2)95℃ 30秒，58℃ 30秒，72℃ 50秒，共25個循環；(3)72℃ 5分鐘。反應結束后，將PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后回收回收843bp的目的片段，再用限制性內切酶BamH I和Apa I對回收的基因片段酶切，將酶切產物克隆入質粒載體pcDNA3(Invitrogen，USA)的多克隆位點BamHI和Apa I之間，得到重組質粒，命名為pS2S。轉化大腸桿菌DH5α，經藍白斑篩選后挑選陽性克隆，對其進行DNA序列分析，分析結果表明所克隆的乙肝表面抗原preS2-S基因序列正確(序列3)，其編碼的氨基酸殘基序列為序列表中的序列4。對該重組質粒用限制性內切酶BamHI和Apa I作進一步酶切鑒定，酶切鑒定結果如圖2所示(泳道1為pS2S的BamHI和ApaI酶切產物，約843bp；泳道2為Marker DL-2000)，表明獲得了含有乙肝表面抗原基因的重組質粒。
3、含有瘧疾多表位抗原基因的重組質粒AWTE的構建使用上游引物5’-cgcggatccatgaacgctaaccctgg tgat-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶BamH I識別位點)，下游引物5’agggggcccttacgatggtaccacaacgtt-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶Apa I識別位點)。以重組質粒CTB-AWTE(鐘輝等。科學通報.43(13)1417-1422.)為模板，PCR擴增瘧疾多表位抗原AWTE基因片段，反應條件為(1)95℃ 5分鐘；(2)45℃ 20秒，72℃ 30秒，共5個循環；(3)95℃ 30秒，55℃ 20秒，72℃ 30秒，共25個循環；(4)72℃ 5分鐘。反應結束后，將PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后回收366bp的目的片段，再用限制性內切酶BamHI和Apa I對回收的基因片段酶切，將酶切產物克隆入質粒載體pcDNA3的多克隆位點BamH I和Apa I之間，得到重組質粒，命名為AWTE。轉化大腸桿菌DH5α，經藍白斑篩選后挑選陽性克隆，對其進行DNA序列分析，分析結果表明所克隆的瘧疾多表位抗原AWTE基因序列正確(序列5)。
4、含有葡萄球菌腸毒素A和人表皮生長因子融合基因EGF-SEA的重組質粒pEGF-SEA的構建利用引物15’-AACATATGAATTCCGACTCTGAATGCCC-3’和引物25’-AAGGATCCGGCCAGGAGGTCCGCATGCTCGCAGCGTGCACCAACGTAGCCAGAATGG-3’(帶下劃線堿基為限制性內切酶Nde I和BamH I識別位點)，以重組質粒pET22b(+)-Ang-EGF(許偉立，陳東立，馬清鈞。中國專利“抗腫瘤作用的融合蛋白及該蛋白的應用”，申請號01120099.5；授權號CN 1161467C)為模板，PCR擴增人表皮生長因子(Epidermal Growth Factor，EGF)多肽編碼基因，反應條件為(1)95℃ 5分鐘；(2)94℃ 60秒，64℃ 30秒，72℃ 30秒，72℃ 10分鐘，共30個循環。反應結束后，將PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后回收147bp的目的片段，克隆至原核表達載體pmTSA上(胥全彬，博士論文，軍事醫學科學院，2003)，得到重組質粒，命名為pEGF-SEA。轉化大腸桿菌DH5α，經藍白斑篩選后挑選陽性克隆，對其進行DNA序列分析，分析結果表明所克隆的EGF基因序列(序列6)正確，其編碼的氨基酸殘基序列為序列表中的序列7。
實施例2、pmSEA對乙肝病毒表面抗原DNA疫苗免疫原性的增強作用小鼠Balb/c，雌性，4-6周齡。
分組(1)空載體組(pcDNA3)，10只；(2)乙肝蛋白疫苗組(rHBsAg)，10只；(3)pS2S組，10只；(4)pS2S+pmSEA佐劑組，10只。
免疫方案(1)空載體組(pcDNA3)200ug/只/次；(2)乙肝蛋白疫苗組(rHBsAg)400ng/只/次；(3)pS2S組100ug pS2S+100ug pcDNA3/只/次；(4)pS2S+pmSEA佐劑組100ug pS2S+100ug pmSEA/只/次。
在小鼠麻醉狀態下(75mg/kg sodium pentobarbital IP)，在小鼠的兩后肢的股四頭肌肉各注射50uL樣品，然后用活體基因導入儀(浙江新芝公司)，在注射部位進行電擊，電壓為120V/cm，時長2ms，2次。
免疫次數共兩次，初次免疫后，在第14天加強免疫一次。初次免疫后，每隔2周，取血檢測抗HBsAg抗體產生的滴度。用ELISPOT法檢測IFN-γ產生情況。
結果表明，含有pmSEA質粒佐劑的第4組初次免疫后2周的HBsAb陽性率為37.5％，加強免疫后2周，HBsAb陽性率為75％；而未加佐劑的第3組初次免疫后2周的HBsAb陽性率為10％，加強免疫后2周，HBsAb陽性率為27％。14周后，第4組的HBsAb陽性率均為100％，而未加佐劑的第3組的HBsAb陽性率僅為50％。ELISPOT檢測結果第4組產生的IFN-γ是第3組的2-3倍，表明pmSEA可顯著增強乙肝表面抗原質粒在小鼠體內激發的體液免疫和細胞免疫反應。
實施例3、pmSEA對瘧疾多表位抗原DNA疫苗免疫原性的增強作用小鼠Balb/c，雌性，4-6周齡。
分組(1)空載體組(pcDNA3)，6只；(2)AWTE質粒組，6只；(3)AWTE質粒+pmSEA質粒佐劑組，6只。
免疫方案(1)空載體組(pcDNA3)200ug/只/次；(2)AWTE質粒組100ugAWTE+100ug pcDNA3/只/次；(3)AWTE質粒+pmSEA質粒佐劑組100ug AWTE+100ugpmSEA/只/次。
在小鼠麻醉狀態下(75mg/kg sodium pentobarbital IP)，在小鼠的兩后肢的股四頭肌肉各注射50ul樣品，然后用活體基因導入儀(浙江新芝公司)，在注射部位進行電擊，電壓為120V/cm，時長2ms，2次。
免疫次數共兩次，初次免疫后，在第14天加強免疫一次。初次免疫后，每隔2周，取血檢測抗AWTE抗體產生的滴度。末次免疫3周后，取脾淋巴細胞進行CTL細胞活性檢測。
結果表明，含有pmSEA質粒佐劑的第3組初次免疫后2周的AWTE滴度為1∶400，加強免疫后2周，AWTE陽性率為1∶5000；第2組初次免疫后2周的AWTE滴度檢測不到，加強免疫后2周，AWTE陽性率為1∶100。CTL活性檢測在效應細胞/靶細胞為100∶1時，第3組為67％，第2組為20％，表明pmSEA可顯著增強瘧疾多表位抗原免疫原性，誘導體液免疫和細胞免疫反應。
實施例4、rSEA對重組亞單位疫苗EGF的佐劑作用小鼠C57BL/6，雌性，5周齡。
分組(1)EGF-SEA融合蛋白組，10只；(2)EGF多肽陽性對照組，10只；(3)生理鹽水陰性對照組，10只。
免疫方案(1)EGF-SEA融合蛋白組10ug/只/次；(2)EGF多肽陽性對照組10ug/只/次；(3)生理鹽水陰性對照組200uL/只/次。
免疫次數共四次，初次免疫前采血，然后連續免疫4次，每次間隔10天；免疫前均采小鼠尾血，ELISA檢測血清效價。
結果表明在EGF-SEA融合蛋白組檢測到高滴度的抗EGF的抗體(1∶32,000)，而單獨用EGF多肽免疫小鼠的血清，未檢測到抗EGF的抗體，表明EGF與SEA融合后，可顯著提高抗EGF的抗體滴度，證明SEA具有較強的免疫佐劑效應。
序列表<160>7<210>1<211>702<212>DNA<213>金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus)<400>1agcgagaaaa gcgaagaaat aaatgaaaaa gatttgcgaa aaaagtctga attgcaggga 60acagctttag gcaatcttaa acaaatctat tattacaatg aaaaagctaa aactgaaaat120aaagagagtc acgatcaatt tttacagcat actatattgt ttaaaggctt ttttacagat180cattcgtggt ataacgattt attagtagat tttgattcaa aggatattgt tgataaatat240aaagggaaaa aagtagactt gtatggtgct tattatggtt atcaatgtgc gggtggtaca300ccaaacaaaa cagcttgtat gtatggtggt gtaacgttac atgataataa tcgattgacc360gaagagaaaa aagtgccgat caatttatgg ctagacggta aacaaaatac agtacctttg420gaaacggtta aaacgaataa gaaaaatgta actgttcagg agttggatct tcaagcaaga480cgttatttac aggaaaaata taatttatat aactctgatg tttttgatgg gaaggttcag540aggggattaa tcgtgtttca tacttctaca gaaccttcgg ttaattacga tttatttggt600gctcaaggac agtattcaaa tacactatta agaatatata gagataataa aacgattaac660tctgaaaaca tgcatattgc tatatattta tatacaagtt aa 702<210>2<211>243<212>PRT<213>金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus)<400>2Thr Leu Thr Thr Ser Pro Leu Val Asn Gly Ser Glu Lys Ser Glu Glu1 5 10 15Ile Asn Glu Lys Asp Leu Arg Lys Lys Ser Glu Leu Gln Gly Thr Ala20 25 30Leu Gly Asn Leu Lys Gln Ile Tyr Tyr Tyr Asn Glu Lys Ala Lys Thr35 40 45
Glu Asn Lys Glu Ser His Asp Gln Phe Leu Gln His Thr Ile Leu Phe50 55 60Lys Gly Phe Phe Thr Asp His Ser Trp Tyr Asn Asp Leu Leu Val Asp65 70 75 80Phe Asp Ser Lys Asp Ile Val Asp Lys Tyr Lys Gly Lys Lys Val Asp85 90 95Leu Tyr Gly Ala Tyr Tyr Gly Tyr Gln Cys Ala Gly Gly Thr Pro Asn100 105 110Lys Thr Ala Cys Met Tyr Gly Gly Val Thr Leu His Asp Asn Asn Arg115 120 125Leu Thr Glu Glu Lys Lys Val Pro Ile Asn Leu Trp Leu Asp Gly Lys130 135 140Gln Asn Thr Val Pro Leu Glu Thr Val Lys Thr Asn Lys Lys Asn Val145 150 155 160Thr Val Gln Glu Leu Asp Leu Gln Ala Arg Arg Tyr Leu Gln Glu Lys165 170 175Tyr Asn Leu Tyr Asn Ser Asp Val Phe Asp Gly Lys Val Gln Arg Gly180 185 190Leu Ile Val Phe His Thr Ser Thr Glu Pro Ser Val Asn Tyr Asp Leu195 200 205Phe Gly Ala Gln Gly Gln Tyr Ser Asn Thr Leu Leu Arg Ile Tyr Arg210 215 220Asp Asn Lys Thr Ile Asn Ser Glu Asn Met His Ile Ala Ile Tyr Leu225 230 235 240Tyr Thr Ser<210>3<211>843<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>3atgcagtgga actccacgac attccaccaa gctctgctag atcccagagt gaggggccta 60tattttcctg ctggtggctc cagttccgga acagtaaacc ctgttccgac tactgcctca120cccatatcgt caatcttctc gaggactggg gaccctgcac cgaacatgga gagcacaaca180tcaggattcc taggacccct gctcgtgtta caggcggggt ttttcttgtt gacaagaatc240ctcacaatac cacagagtct agactcgtgg tggacttctc tcaattttct agggggagca300cccacgtgtc ctggccaaaa ttcgcagtcc ccaacctcca atcactcacc aacctcttgt360cctccaactt gtcctggcta tcgctggatg tgtctgcggc gttttatcat attcctcttc420atcctgctgc tatgcctcat cttcttgttg gttcttctgg actaccaagg tatgttgccc480gtttgtcctc tacttccagg aacatcaact accagcacgg gaccatgcaa gacctgcacg540attcctgctc aaggaacctc tatgtttccc tcttgttgct gtacaaaacc ttcggacgga600aactgcactt gtattcccat cccatcatcc tgggctttcg caagattcct atgggagtgg660gcctcagtcc gtttctcctg gctcagttta ctagtgccat ttgttcagtg gttcgtaggg720ctttccccca ctgtttggct ttcagttata tggatgatgt ggcattgggg gccaagtctg780tacaacatct tgagtccctt tttacctcta ttaccaattt tcttttgtct ctgggtatac840att 843<210>4<211>281<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>
<400>4Met Gln Trp Asn Ser Thr Thr Phe His Gln Ala Leu Leu Asp Pro Argl 5 10 15Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly Ser Ser Ser Gly Thr Val20 25 30Asn Pro Val Pro Thr Thr Ala Ser Pro Ile Ser Ser Ile Phe Ser Arg35 40 45Thr Gly Asp Pro Ala Pro Asn Met Glu Ser Thr Thr Ser Gly Phe Leu
50 55 60Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile65 70 75 80Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe85 90 95Leu Gly Gly Ala Pro Thr Cys Pro Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr100 105 110Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Thr Cys Pro Gly Tyr Arg115 120 125Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu130 135 140Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro145 150 155 160Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys165 170 175Lys Thr Cys Thr Ile Pro Ala Gln Gly Thr Ser Met Phe Pro Ser Cys180 185 190Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro195 200 205Ser Ser Trp Ala Phe Ala Arg Phe Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg210 215 220Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly225 230 235 240Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Val Ile Trp Met Met Trp His Trp245 250 255Gly Pro Ser Leu Tyr Asn Ile Leu Ser Pro Phe Leu Pro Leu Leu Pro260 265 270Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile275 280<210>5<211>366
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>5atgaacgcta accctggtga tgaactggaa acccagaacg tgtacgcagc cccgaatgcg 60aatccgtaca gcctgttgca gaaagagaaa atggtgctgc cgaacgccaa cccgccggcg120aacaagaaga acgcgggtcc caacaagaac gatgataaca agaacgatga taacaagaac180gatgataaca agaacgatga taacaagaac gatgataaca agaacgatga taacaagaac240gatgataaca agaacgatga taacaagggg aaacctaaag acgaattaga ttatgaagat300attgaaaaga agatcgctaa gatggaaaag gctagcagtg ttttcaacgt tgtggtacca360tcgtaa 366<210>6<211>843<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>6aattccgact ctgaatgccc gctgtctcac gacggttact gcctacacga tggtgtttgc 60atgtatatcg aagctctgga caaatacgcg tgcgtgtgcc attctggcta cgttggtgca120cgctgcgagc atgcggacct cctggcc147<210>7<211>49<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>
<400>7Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His1 5 10 15Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Val20 25 30Cys His Ser Gly Tyr Val Gly Ala Arg Cys Glu His Ala Asp Leu Leu35 40 45Ala
權利要求
1.葡萄球菌腸毒素A基因作為DNA疫苗免疫原性增強佐劑的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述葡萄球菌腸毒素A基因與DNA疫苗的基因存在于不同的重組質粒中。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于所述DNA疫苗為乙肝病毒表面抗原DNA疫苗或瘧疾多表位抗原DNA疫苗。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于所述葡萄球菌腸毒素A基因與DNA疫苗的基因是融合基因，存在于同一重組質粒中。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述DNA疫苗為乙肝病毒表面抗原DNA疫苗或瘧疾多表位抗原DNA疫苗。
6.葡萄球菌腸毒素A基因在制備DNA疫苗免疫原性增強佐劑中的應用。
7.葡萄球菌腸毒素A作為重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于所述葡萄球菌腸毒素A與重組亞單位疫苗的蛋白獨立存在。
9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于所述葡萄球菌腸毒素A與重組亞單位疫苗的蛋白融合成為融合蛋白。
10.葡萄球菌腸毒素A在制備重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑中的應用。
全文摘要
本發明公開了葡萄球菌腸毒素A基因及其編碼蛋白的新用途。本發明發明人的實驗證實，葡萄球菌腸毒素A基因能夠顯著改善動物對DNA疫苗的反應性，可以用作DNA或重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑。葡萄球菌腸毒素A基因可以使乙肝病毒表面抗原DNA疫苗、瘧疾多表位抗原DNA疫苗等各種DNA疫苗免疫原性均得到增強，具有廣譜性，是一種不可多得的DNA疫苗免疫原性增強佐劑，葡萄球菌腸毒素A可以使各種重組亞單位疫苗的免疫原性得到增強，是一種不可多得的重組亞單位疫苗免疫原性增強佐劑，葡萄球菌腸毒素A基因及其編碼蛋白在DNA疫苗及重組亞單位疫苗的生產和應用中意義重大。
文檔編號A61P31/12GK1853731SQ20051006811
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月26日 優先權日2005年4月26日
發明者馬清鈞, 靳彥文, 胥全彬, 曹誠 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所