專利名稱：一種甲魚保健膠囊及其制備方法
技術領域：
本發明屬于保健食品制劑及其制造技術領域，尤其屬于一種以甲魚為主要原料的保健膠囊及其制備方法。
背景技術：
甲魚，營養豐富，食味鮮美，并具增強人體活力，促進健康等功效，歷來深受消費者歡迎。鱉肉及提取物能提高人體免疫，促進新陳代謝，增強抗病能力，并可改善大腦功能，增強記憶力，防治大腦功能衰退，故對體弱者和老年人來說，能有效地提高人體免疫力并預防老年性癡呆癥。因此近年來，甲魚養殖業發展較快，養殖規模不斷擴大，單一的作為名菜簡單食用既嚴重制約了甲魚的生產發展，又未能充分利用甲魚全身油、殼、骨等所含有的營養藥用價值，迫切需要加大開展甲魚深加工及綜合利用的研究。甲魚的開發途徑主要有方便食品、保健營養醫療食品、生物工程深加工以及甲魚保健食品復方制劑等產品。中藥是我國的國寶，根據古代醫學觀點和現代科學研究證實，甲魚身體的各個部位都有醫藥功能，如能應用現代科學技術，按照國際標準大力開發甲魚類保健品，前景將十分廣闊。以往國內、外圍繞甲魚的開發雖已申請了一批專利，例如ZL專利號91101134.X，JP 61-47505等均是以甲魚提取液或粉為主要原料，另添加蜂密、蛋白等組成的滋補保健品為主；目前市場上能見到的甲魚類開發產品，也主要是以提高免疫力為主的保健類食品，如純甲魚粉、甲魚保健飲料、甲魚酒、龜鱉丸等；存在加工粗淺，功能單一等問題。
發明內容
本發明的目的是針對上述存在不足，提供一種以甲魚粉為主要原料，配伍DHA微膠囊，銀杏葉提取物與乳酸鋅，具有提高人體免疫力與改善記憶力雙重功能，服用方便，效果顯著的甲魚保健膠囊；本發明的另一目的是提供該產品的制備方法。
本發明對原料的選擇是基于以下的技術原理與療效性能甲魚，又名鱉，性寒，味咸，其肉、頭、血、膽、脂肪、卵及背甲皆可藥用。據現代研究表明，甲魚中含有豐富的蛋白質、維生素、亞油酸，即使大量攝入也不會使體內膽固醇的水平升高，并有助于防治動脈硬化、心臟病及腦血管意外，具有提高人體免疫力、促進血管末梢循環，提高內臟活動能力，促進新陳代謝、增強抗病能力、養顏美容并延緩衰老等功效。
DHA，系甲魚油所含的高度不飽和脂肪酸，化學名稱為二十二碳六烯酸(以下均簡稱為DHA)，在我國被稱作“腦黃金”，存在于腦細胞的線粒體、突觸體和微粒體中，與這些細胞器的功能密切有關，可改善大腦功能，增強記憶力和提高智商，延緩大腦萎縮，修復腦神經的受損和破壞，防治大腦功能衰退。國內外多數研究表明，隨著年齡的增長，神經細胞脫落增多，學習能力下降，因此，攝取一定量DHA對哺乳動物神經發育和學習行為會產生有益影響，延緩學習記憶的下降，是預防老年性癡呆的一種有效措施。
銀杏葉提取物，其主要有效成分為黃酮類和內酯類，國內、外大量基礎和臨床研究表明，這些有效成分對多種不同動物種類、動物模型及人體均有明顯的促智作用，國外臨床上大量使用銀杏葉提取物治療老年性腦功能障礙、腦傷后遺癥等，療效顯著。它使病人的反應加快，記憶改善，癥狀好轉。我國上海中醫學院、安徽醫科大學相繼用銀杏葉黃酮做了類似的試驗，也取得了幾乎相同的結果。
微量元素鋅，參于人體100多種酶的活動，是酶活性所必須的元素之一，它對核酸、蛋白質合成、氨基酸的新陳代謝及很多酶素系統具有重要的生理功能和營養作用。兒童營養性缺鋅可表現為食欲不振、個子矮小、智力發育不全，老年人缺鋅，易衰老，動作呆滯等。上海市疾病預防控制中心營養與食品安全科高圍溦等進行“鋅對D-半乳糖誘導的衰老小鼠學習和記憶行為的影響”的研究表明，補鋅可以有效改善缺鋅引起的學習和記憶能力下降，提高獲取學習記憶和保持記憶能力。
本發明目的通過以下具體技術方案來實現一種甲魚保健膠囊，該膠囊的組分與各組分的重量份配比為甲魚粉 10-15DHA微膠囊 5-10銀杏葉提取物 1-3乳酸鋅 0.3-0.5其中，DHA微膠囊含DHA≥10％，銀杏葉提取物含總黃酮≥15％，乳酸鋅純度98-103％，其中鋅含量為22.65％。
所述的甲魚保健膠囊，其優化的組分與各組分的重量份配比為甲魚粉12，DHA微膠囊10，銀杏葉提取物2，乳酸鋅0.4。
一種甲魚保健膠囊的制備方法，按以下步驟工藝制備而成(1)甲魚粉的制備鮮活甲魚清洗，宰殺，剖腹，去內臟，切成塊在-198℃低溫中冷凍并粉碎后，再進行冷凍干燥至水分≤5％，備用；(2)DHA乙酯化提取新鮮甲魚油采取真空脫水處理，使其水分含量在0.1％以下；將真空脫水的甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉按重量體積比0.5-2Kg∶0.5-1.5L∶0.01-0.05Kg稱量備料，先把脫水甲魚油加熱至50℃-75℃，在攪拌下緩慢加入無水乙醇與氫氧化鈉，在恒溫下反應1-4小時，然后用15％的鹽水洗滌，洗去皂腳和其他不溶物，得到甲魚油乙酯，將其放入-20℃冰箱中過夜，過濾、除去沉淀，即為DHA提取物；提取中用薄層層析法判斷乙酯化率，確定最佳提取工藝。
(3)DHA提取物純化將尿素溶于無水乙醇至飽和溶液，另將DHA提取物與無水乙醇按體積比1∶1混合，兩液分別加熱到70℃，按體積10-22∶0.8-1.5將尿素-乙醇飽和液緩慢加入到DHA提取物-乙醇溶液中，恒溫下攪拌至溶液澄清，室溫下持續攪拌2-5小時，所得溶液放入-20℃冰箱中過夜，冷卻結晶，離心得上清液，加10％鹽酸至PH2-3，加適量水充分洗滌，除去尿素，分離有機相，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水干燥或真空脫水干燥，蒸去溶劑，上述包合工藝操作1次或2次后混合，得高度不飽和脂肪酸DHA，其純度達75％以上。
(4)DHA微膠囊的制備以精制玉米蛋白粉為囊材，DHA與精制玉米蛋白粉按重量份1∶3-5配比，先加入少量蒸餾水潤濕精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按總重量1.5-2.5％的乳化劑單甘酯、蔗糖酯或吐溫-80，攪拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏靜置過夜，噴霧干燥，醚洗后得DHA微膠囊，備用；(5)按產品比例將DHA微膠囊、銀杏葉提取物、乳酸鋅加入到甲魚粉中，混合均勻；(6)膠囊填充，拋光，成品檢驗，包裝將步驟(5)混合物灌入藥用明膠硬膠囊，拋光機拋光，檢驗合格后包裝即成產品。
所述DHA乙酯化提取的最佳工藝為甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉的重量體積比為1Kg∶0.75L∶0.03Kg，在65℃條件下回流提取2小時。
所述DHA提取物純化的最佳工藝條件為尿素-無水乙醇飽和溶液與DHA提取物-無水乙醇溶液比為15∶1，反應時間3小時，包合次數1次。
本發明的有益效果，一是充分利用了甲魚全身肉、油、殼、骨等營養藥用資源，尤其是廢棄物甲魚油在最佳的提取條件下有較高的乙酯化率，采用尿素包合法純化，其高度不飽和脂肪酸(DHA)純度可以達到75％以上，高度不飽和脂肪酸得率可達6％；二是本發明在充分利用甲魚藥用資源的同時，合理添加了銀杏葉提取物與乳酸鋅，組合后食用安全并增強了對動物或人體免疫力及改善記憶力的功能(見試驗例)；三是本法生產成本低廉，操作簡單，并適用于大批量生產，既為產量日增的甲魚生產開辟了一條新的開發利用途徑，又為體弱者和老年人群長期方便服用，易于吸收，增強人體免疫力及改善記憶力提供了一只理想的雙功能保健產品，具有廣闊的應用前景。
具體實施例方式
通過以下實施例和試驗例將對本發明的制備與動物試驗及人體臨床效果作進一步的具體說明。
本發明所采用的甲魚和甲魚油 杭州中得保健食品有限公司甲魚場生產；銀杏葉提取物 寧波雙林中藥飲片廠生產 含總黃酮≥15％；乳酸鋅鄭 州瑞普生物工程公司生產 純度98-103％，其中鋅含量為22.65％。
尿素(脲)寧波化學試劑廠生產含量不低于99％。
氫氧化鈉、無水乙醇、無水硫酸鈉等試劑均為國產分析純試劑。
實施例1(甲魚保健膠囊制備1)(1)甲魚粉制備稱取鮮活甲魚10公斤，經清洗，宰殺，剖腹，去內臟，切成塊在-198℃低溫中冷凍，粉碎機粉碎后，再進行冷凍干燥至水分≤5％，備用；(2)DHA的乙酯化提取從宰殺場稱取廢棄甲魚油3公斤，采取真空脫水處理，必須使其水分含量控制在0.1％以下；將脫水甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉按重量體積比1Kg∶0.75L∶0.03Kg稱量備料；先把脫水甲魚油加熱至65℃，在攪拌下緩慢加入無水乙醇與氫氧化鈉，在恒溫下反應2小時，然后用15％的鹽水洗滌，洗去皂腳和其他不溶物，得到甲魚油乙酯，將其放入-20℃冰箱中過夜，過濾、除去沉淀，即為DHA提取物；(3)DHA提取物純化將尿素溶于無水乙醇至飽和液，另將DHA提取物與無水乙醇按體積比1∶1混合，兩液分別加熱到70℃，按體積15∶1將尿素-無水乙醇飽和液緩慢加入到DHA提取物-無水乙醇溶液中，恒溫下攪拌至溶液澄清，室溫下持續攪拌3小時，所得溶液放入-20℃冰箱中過夜，冷卻結晶，離心得上清液，加10％鹽酸至PH2-3，加適量水充分洗滌，除去尿素，分離有機相，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水干燥或真空脫水干燥，蒸去溶劑，即得高度不飽和脂肪酸DHA，其純度達75％以上；(4)DHA微膠囊的制備以精制玉米蛋白粉為囊材，DHA與精制玉米蛋白粉按重量份1∶4配比，先加入少量蒸餾水潤濕精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按總重量2％的乳化劑單甘酯，攪拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏靜置過夜后，按原料預處理40-60℃，進風160-180℃，排風60-80℃噴霧干燥，醚洗后得DHA微膠囊；(5)膠囊組分的混配將步驟(1)所制甲魚粉和經步驟(2)、(3)、(4)所制成的DHA微膠囊及市場所購銀杏葉提取物與乳酸鋅按重量份12∶10∶2∶0.4混配；(6)膠囊填充，拋光，成品檢驗，包裝將步驟(5)各組分混合物在潔凈度10萬級膠囊車間灌膠囊，所用膠囊必須符合GB13731藥用明膠硬膠囊要求，室內工作環境使用除濕器除濕，維持相對濕度在45％以下，裝量負偏差控制在9％以下，裝好的膠囊移于拋光機拋光，檢驗合格，包裝即成產品。
實施例2(甲魚保健膠囊制備2)本實施例中DHA乙酯化提取工藝條件為脫水甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉的重量體積比為0.6Kg∶1.3L∶0.015Kg，加熱溫度50℃，反應3小時；
DHA提取物純化工藝條件為尿素-無水乙醇飽和液與DHA提取物-無水乙醇溶液體積比為11∶1.5，室溫下持續攪拌2小時，包合次數2次；DHA微膠囊制備工藝條件為DHA與精制玉米蛋白粉按重量份1∶3配比，再加入按總重量1.5％的乳化劑蔗糖酯；膠囊組分的混配比例為甲魚粉、DHA微膠囊、銀杏葉提取物及乳酸鋅重量份比為10∶8∶1.5∶0.3混配。
本實施例的其余步驟工藝均同于實施例1。
實施例3(甲魚保健膠囊制備3)本實施例中DHA乙酯化提取工藝條件為脫水甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉的重量體積比2Kg∶0.5L∶0.045Kg，加熱溫度75℃，反應1小時；DHA提取物純化工藝條件為尿素-無水乙醇飽和液與DHA提取物-無水乙醇溶液體積比為20∶0.8，室溫下持續攪拌4小時，包合次數1次；DHA微膠囊制備工藝條件為DHA與精制玉米蛋白粉按重量份1∶5配比，再加入按總重量2.5％的乳化劑吐溫-80；膠囊組分的混配比例為甲魚粉、DHA微膠囊、銀杏葉提取物及乳酸鋅重量份比為14∶6∶2.5∶0.5混配；本實施例的其余步驟工藝均同于實施例1。
試驗材料中得甲魚膠囊 杭州中得保健食品有限公司 本發明實施例1產品。
試驗例1(增強免疫力的功能)經南京醫科大學衛生分析檢測中心檢驗證明，經口連續給予小鼠250mg/kg.bw、500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw的中得甲魚膠囊1個月，結果顯示
(1)細胞免疫功能1500mg/kg.bw組ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化率顯著高于0mg/kg.bw組；500mg/kg.bw組小鼠耳殼增重顯著大于0mg/kg.bw組。
(2)體液免疫功能500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw組小鼠HC50顯著高于0mg/kg.bw組；500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw組小鼠溶血空斑數顯著高于0mg/kg.bw組。
(3)NK細胞活性500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw組小鼠NK細胞活性顯著高于0mg/kg.bw組。
因此認為甲魚膠囊具有增強免疫力的功能。
試驗例2(改善動物記憶)經中國疾控中心營養與食品安全所的動物試驗結果判斷，認為甲魚膠囊有改善動物記憶的作用。實驗方法與結果如下1.方法選擇6周齡雌性昆明種小鼠165只，體重24-28g，適應1周后，將小鼠隨機分為水迷宮、跳臺、避暗3項試驗，在實驗前對動物進行初篩，水迷宮試驗經訓練后，3分鐘內不能游至終點者淘汰；跳臺和避暗試驗，動物經5分鐘訓練仍不能回避者或電擊受傷者淘汰，各組共保留小鼠48只，分別分為正常、低、中、高劑量組，每組12只，經灌胃給予受試物，劑量設定分別為0.25g/kgbw、0.50g/kgbw、0.75g/kgbw，溶于去離子水中，連續給樣30天，進行跳臺、水迷宮試驗和避暗試驗的訓練，24小時后進行24小時測驗，一周后進行消退試驗。試驗期間連續給樣，重復實驗同上。
2.結果水迷宮試驗中，到達終點所需時間，中、高劑量組訓練成績均顯著優于對照組(p＜0.05)；錯誤總數，中、高劑量組訓練成績和高劑量組24小時測驗成績及中、高劑量組1周后測驗的消退成績均顯著優于對照組(p＜0.05)。
跳臺試驗中，受電擊動物數，中、高劑量組1周后測驗的消退成績均顯著優于對照組(p＜0.05)；動物的潛伏期，高劑量組24小時測驗成績和1周后測驗的消退成績均顯著優于對照組(p＜0.05)；錯誤總數，中、高劑量組訓練成績、24小時測驗成績及1周后測驗的消退成績均顯著優于對照組(p＜0.05)。
避暗試驗中，受電擊動物數，中劑量組訓練成績均顯著優于對照組(p＜0.05)；動物的潛伏期，高劑量組訓練成績均顯著優于對照組(p＜0.05)；錯誤總數，中、高劑量組訓練成績顯著優于對照組(p＜0.05)。
試驗例3(人體輔助改善記憶)經中國疾控中心營養與食品安全所的人體試驗結果判斷，認為甲魚膠囊具有輔助改善記憶的作用。實驗方法與結果如下1.方法挑選年齡在40-60歲的健康受試者111名，文化程度大專以上，未參加過類似測試，受試前未服用與改善記憶功能有關保健食品與藥品，經臨床體檢，無嚴重的心血管疾病，嚴重的循環系統疾病，嚴重的代謝系統疾病，嚴重的泌尿系統疾病，嚴重的消化系統疾病。其中試食組56名，對照組55名，對照組服用外觀一致的空白安慰劑，試食組與對照組均為每人每日口服2次，每次2粒(2×2×0.5克/人.天)，連續服用45天，期間共11名受試者因未按服用方法服用受試物或自愿退出試食試驗，試驗結束時共有100名受試者參加測試，試食組與對照組各50名。
2.結果在試食前二組受試者的各分量表和記憶商均衡的前提下，經45天的試食試驗，試食組受試者的指向記憶、圖象自由回憶和無意義圖形再認分量表的測試中量表分顯著高于對照組(p＜0.05)。試食組受試者的指向記憶、聯想學習、圖像自由回憶分量表的量表分較試食前均有顯著的升高(p＜0.05)。試食組試驗后圖像自由回憶分量表量表分的增加值顯著高于對照組(p＜0.05)。同時試食前受試者的試食后記憶商顯著高于對照組(p＜0.001)，并較試食前有非常顯著的升高(p＜0.001)，試食組記憶商的增加值顯著高于對照組(p＜0.05)。根據《保健食品檢驗與評價技術規范2003版》中的判斷標準，認為甲魚膠囊具有輔助改善記憶的作用。
試驗例4(毒性試驗)本發明所制備的甲魚膠囊安全有效，服用劑量小。
經國家食品藥品監督管理局指定食品毒理學檢測單位--浙江省醫學科學院保健食品研究所毒理學研究表明1.急性毒性試驗1.1小鼠急性毒性試驗按霍恩氏法將小鼠隨機分為1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.0g/kg四個體重劑量組，每組10只，雌雄各半。甲魚膠囊對雌雄小鼠經口LD50均大于10g/kg體重，屬實際無毒。
1.2大鼠急性毒性試驗按霍恩氏法將大鼠隨機分為1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.0g/kg四個體重劑量組，每組10只，雌雄各半。甲魚膠囊對雌雄大鼠經口LD50均大于10g/kg體重，屬實際無毒。
2.小鼠微核試驗結果甲魚膠囊對小鼠微核率的影響雌雄各劑量組與陰性對照組比較，微核千分率均無顯著性差異，而陽性對照組微核率則顯著高于陰性對照組，其差異有非常顯著性意義(P＜0.01)。表明甲魚膠囊對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率未見明顯影響，檢測結果為陰性。
3、精子畸形發生率結果甲魚膠囊對小鼠精子畸形發生率的影響試驗表明，各劑量組與陰性對照組比較，小鼠精子畸形發生率均無顯著性差異，而陽性對照組則明顯高于陰性對照組，其差別有非常顯著性意義(P＜0.01)，表明甲魚膠囊對小鼠精子畸形發生率未見明顯影響，檢測結果為陰性。
4. Ames試驗結果不同濃度受試物在加和不加S9條件下的回變菌落與陰性對照組相近似，而陽性對照回變菌落數均高于陰性對照回變菌落數2倍以上。甲魚膠囊Ames試驗檢測結果為陰性。
權利要求
1.一種甲魚保健膠囊，其特征是該膠囊的組分與各組分的重量份配比為甲魚粉10-15DHA微膠囊 5-10銀杏葉提取物 1-3乳酸鋅0.3-0.5
2.根據權利要求1所述的甲魚保健膠囊，其特征是該膠囊的組分與各組分的重量份配比為甲魚粉12，DHA微膠囊10，銀杏葉提取物2，乳酸鋅0.4。
3.一種制備權利要求1或2所述甲魚保健膠囊的方法，其特征是按以下步驟條件制備而成(1)甲魚粉的制備鮮活甲魚清洗，宰殺，剖腹，去內臟，切成塊在-198℃低溫中冷凍并粉碎后，再進行冷凍干燥至水分≤5％，備用；(2)DHA乙酯化提取將真空脫水的甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉按重量體積比0.5-2Kg∶0.5-1.5L∶0.01-0.05Kg稱量備料，先把脫水甲魚油加熱至50℃-75℃，在攪拌下緩慢加入無水乙醇與氫氧化鈉，在恒溫下反應1-4小時，然后用15％的鹽水洗滌，得到甲魚油乙酯，將其放入-20℃冰箱中過夜，過濾、除去沉淀，即為DHA提取物；(3)DHA提取物純化將尿素溶于無水乙醇至飽和溶液，另將DHA提取物與無水乙醇按體積比1∶1混合，兩液分別加熱到70℃，按體積10-22∶0.8-1.5將尿素-乙醇飽和液緩慢加入到DHA提取物-乙醇溶液中，恒溫下攪拌至溶液澄清，再室溫下持續攪拌2-5小時，所得溶液放入-20℃冰箱中過夜，冷卻結晶，離心得上清液，加10％鹽酸至PH2-3，加適量水充分洗滌，除去尿素，分離有機相，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，蒸去溶劑，上述包合工藝操作1次或2次后混合，得DHA純品；(4)DHA微膠囊的制備以精制玉米蛋白粉為囊材，DHA與精制玉米蛋白粉按重量份1∶3-5配比，先加入少量蒸餾水潤濕精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按總重量1.5-2.5％的乳化劑，攪拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏靜置過夜，噴霧干燥，醚洗后得DHA微膠囊，備用；(5)按比例將DHA微膠囊、銀杏葉提取物、乳酸鋅加入到甲魚粉中，混合均勻；(6)膠囊填充，拋光，成品檢驗，包裝將步驟(5)混合物灌入藥用明膠硬膠囊，拋光機拋光，檢驗合格后包裝。
4.根據權利要求3所述甲魚保健膠囊的制備方法，其特征是所述DHA乙酯化提取的工藝條件為甲魚油和無水乙醇及氫氧化鈉的重量體積比為1Kg∶0.75L∶0.03Kg，在65℃條件下回流提取2小時。
5.根據權利要求3所述甲魚保健膠囊的制備方法，其特征是所述DHA提取物純化的工藝條件為尿素-無水乙醇飽和液與DHA提取物-無水乙醇溶液比為15∶1，反應時間3小時，包合次數1次。
全文摘要
本發明公開了一種甲魚保健膠囊及其制備方法。該膠囊以甲魚粉為主要原料，配伍DHA微膠囊，銀杏葉提取物與乳酸鋅，經特定的甲魚冷凍磨粉、甲魚油中所含DHA的乙酯化提取、尿素包合提純與微膠囊化、各組分按比例混配及填充膠囊等加工工藝制備而成。該產品食用安全，服用方便，效果顯著，具有提高人體免疫力與改善老年人記憶力的雙重功能；本發明既為產量日增的甲魚生產開辟了一條新的開發利用途徑，又為體弱者和老年人群提供了一只理想的甲魚保健膠囊產品，具有廣闊的應用前景。
文檔編號A61K9/52GK1733024SQ20051006044
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月23日 優先權日2005年8月23日
發明者王茵, 周淡宜, 蔣有水, 王淼 申請人:杭州中得保健食品有限公司