專利名稱：豬用中益合生素飼料添加劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飼料添加劑，具體涉及豬用中益合生素飼料添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
1907年，俄國的細菌學(xué)家Metchnicoff發(fā)現(xiàn)在牛奶中加入乳酸菌制成的酸奶對人有益，能幫助消化、治療腹瀉。從而引起了眾多科學(xué)家對有益微生物研究的極大興趣。1977年德國的魯西(Volkoer Rusch)首先建立起第一個微生態(tài)學(xué)研究所，主要從事雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌等活菌制劑(生理性細菌)作生態(tài)調(diào)整療法的研究與應(yīng)用。日本人首先將人用的有益活菌制成用于治療家畜腹瀉和腸炎的商品(即益生素)出售。后來在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，這些有益活菌不僅可以防治疾病，而且可以提高動物的生產(chǎn)性能。與添加抗生素相比，使用效果相同，有時甚至更好，而且無任何毒副作用，不在體內(nèi)殘留，不產(chǎn)生耐藥性。于是益生素得到廣泛的推廣應(yīng)用。隨后歐美也開始普及這類微生態(tài)制劑，現(xiàn)有產(chǎn)品已上百種，并在繼續(xù)增長。
中國于20世紀(jì)70年代末，開始研究飼用和治療用的微生態(tài)制劑，當(dāng)時(1980)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)的何明清教授等主要致力于畜禽下痢的研究，針對服用抗生素導(dǎo)致的二重感染，耐藥菌增多等問題，率先篩選到無病原性大腸桿菌SY-30菌株，制成活菌制劑，在預(yù)防仔豬黃痢中收到良好的效果。同年，江蘇農(nóng)學(xué)院的方定一教授用NY-10(大腸桿菌+乳酸桿菌)預(yù)防仔豬黃痢也取得了明顯的效果。隨后陸續(xù)研制出的調(diào)痢生、健復(fù)生、菌痢康、痢速康等微生態(tài)制劑。隨著生物獸藥的研究與應(yīng)用，研究者發(fā)現(xiàn)，這些生物獸藥不但具有防病治病的效果，而且還有增加動物采食量和促進生長、提高增重的作用。
為了更好地發(fā)揮乳酸菌的有益作用，人們不斷地尋找和研究協(xié)同劑，以求能提高乳酸菌在產(chǎn)品中的數(shù)量和生存率，延長其作用時間，使乳酸菌能以更多的數(shù)量到達畜禽體內(nèi)，刺激腸道內(nèi)源性及外源性乳酸菌的定植和生長，增強乳酸菌的代謝活性等。研究表明，中草藥作為畜禽飼料添加劑，不僅可以提高動物的生產(chǎn)性能，還能促進乳酸桿菌和雙岐桿菌增殖，而且毒、副作用極小。
中草藥或微生態(tài)制劑作為“綠色”飼料添加劑開發(fā)并在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中推廣應(yīng)用，對生產(chǎn)無公害畜禽產(chǎn)品，促進“綠色”養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展將起到了積極的作用。而兩者在飼料添加劑中協(xié)同配合的效果如何？目前還未見報道。因此，我們在研究畜禽微生物飼料添加劑的基礎(chǔ)上，進行了中藥協(xié)同劑與益生素配合在飼料添加劑中的作用的研究，并獲得了顯著成效。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種豬用中益合生素飼料添加劑，既能顯著促進畜禽腸道中有益菌的增殖，抑制有害菌的生長，又能促進畜禽的生長，還能降低飼料的消耗；穩(wěn)定性好，安全、無毒副作用、無殘留、無污染。特別適合于生豬的飼養(yǎng)，也適合于其它畜禽的飼養(yǎng)。并提供這種豬用中益合生素飼料添加劑的制備方法。
本發(fā)明所述的豬用中益合生素飼料添加劑，其組分為25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑，其特征在于混合益生菌劑為蠟樣芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中藥協(xié)同劑為杜仲葉、黃芪和山楂飲片混合的提取物。
所述的豬用中益合生素飼料添加劑，其特征在于混合益生菌劑為40％臘樣芽孢桿菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物，混合益生菌粉劑中含活菌數(shù)50億/g。
所述的豬用中益合生素飼料添加劑，其特征在于中藥協(xié)同劑為黃芪29％-40％、山楂29％-40％和杜仲葉29％-40％的飲片混合的提取物。
所述的豬用中益合生素飼料添加劑的制備方法，其步驟為分別制備混合益生菌劑和中藥協(xié)同劑；將25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑混合，制成豬用中益合生素飼料添加劑；(1)混合益生菌劑的制備；①乳酸菌的制備菌種為凍干保存的嗜酸乳桿菌；乳酸菌培養(yǎng)基為酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸餾水1升；第一步，擴大種子菌，取斜面上菌種一鉑金耳接種入裝有乳酸菌培養(yǎng)基的試管內(nèi)，37℃恒溫靜置培養(yǎng)20h，得到一級種子菌，取出冰箱保存，待用；第二步，將一級種子菌按乳酸菌培養(yǎng)基的4-6％的比例，接種到乳酸菌培養(yǎng)基內(nèi)，得到二級種子菌；第三步，制備生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基，按乳酸菌培養(yǎng)基的成份比例稱取各成分加水溶解，倒入30L的微生物發(fā)酵罐內(nèi)，加水至1.8萬ml，于115℃蒸氣滅菌30分鐘；第四步，接種待生產(chǎn)用的乳酸菌種培養(yǎng)基冷至37℃左右，在火焰控制下按培養(yǎng)基體積的6-8％的比例加入二級種子菌，攪拌均勻；
第五步，培養(yǎng)乳酸菌，關(guān)閉所有通氣閥，37℃恒溫培養(yǎng)22h；第六步，離心脫水從生物發(fā)酵罐內(nèi)取出培養(yǎng)液，冰箱暫存，待培養(yǎng)液冷卻后于3000r/min離心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁將菌泥洗出，1萬ml培養(yǎng)液加入300ml左右20％的牛乳汁作為保護劑，將其與含有明膠的包被液混合均勻，均質(zhì)包被，凍干，研磨或低溫粉碎，測定活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處保存?zhèn)溆?；②臘樣芽孢桿菌的制備菌種于鹽水或凍干保存在4℃的冰箱內(nèi)；臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸餾水1升；第一步，擴大種子菌，吸取0.05ml種菌液接種到40ml的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)20h，鏡檢無雜菌，得到一級種子茵，備用；第二步，取一級種子菌培養(yǎng)物按臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基體積的4％的比例接種入臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基內(nèi)，37℃搖床培養(yǎng)20h，備用；第三步，制備生產(chǎn)用的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基，按臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基的成分比例配制1.8萬ml的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基，倒入30L的發(fā)酵罐內(nèi)，115℃蒸氣滅菌30分鐘，冷卻至37℃左右，在火焰控制下接入二級種子菌1000ml；37℃通氣供氧培養(yǎng)，觀察PH值和DO值的變化，取樣鏡檢芽孢形成情況，當(dāng)芽孢形成達到95％(27小時左右)即可收獲；第四步，取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝劑沉淀過夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均勻，裝入磁盤，置于40℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干，粉碎，計活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處避光保存；
③酵母菌的制備以釀酒酵母為菌種，凍干，置冰箱冷藏保存；YEPD培養(yǎng)基酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸餾水1升。(固體加20g瓊脂)；第一步，擴大種子菌，取菌種一支，用YEPD液體培養(yǎng)基1-2ml稀釋，接種于50mlYEPD液體培養(yǎng)基內(nèi)，置于30℃～37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h。再將此50ml種子菌接種于1000mlYEPD培養(yǎng)基30℃～37°靜置培養(yǎng)24h，待用；第二步，按YEPD培養(yǎng)基的成分比例制備1.8萬ml的YEPD培養(yǎng)基，加入到30L發(fā)酵罐內(nèi)，115℃蒸氣30min高壓蒸汽滅菌，待培養(yǎng)基冷卻到30℃在火焰保護加入1000ml種子菌。30℃恒溫培養(yǎng)30h。
第三步，取出菌液，于離心機內(nèi)3500r/min離心20min，或者加入10％的絮凝劑沉淀；收集菌泥，冷凍干燥或添加菌泥重量的1-2倍糠粉于50℃左右烘干。研磨或低溫粉碎，計活菌數(shù)，包裝密封，陰涼干燥處避光保存?zhèn)溆?；④制備混合益生菌劑，?0％重量的臘樣芽孢桿菌+30％重量的酵母菌+30％重量的乳酸菌，混合勻即得到混合益生菌(含活菌數(shù)50億/g)，密閉包裝，陰涼干燥處避光保存，待用；(2)中藥協(xié)同劑的制備①稱重配料，按上述重量比例稱取黃芪、山楂、杜仲葉中草藥飲片；②粉碎混合，將稱取的中草藥飲片粉碎成粗粉并混合均勻；③水煎提取，將混合均勻的中草藥粗粉裝入“中草藥多功能提取罐”中，加入中草藥粗粉重量5倍的自來水，通入蒸氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，再向中藥提取罐內(nèi)加5倍自來水，通氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，如此再重復(fù)提取1次，棄藥渣；④濃縮煎煮提取液，合并三次煎煮提取液，通入蒸氣，常壓濃縮煎煮提取液，至原藥量(即未提取中藥原藥)的1-1.5倍時，倒出濃縮液；⑤沉淀，當(dāng)濃縮液溫度降至60℃-70℃時，徐徐在濃縮液里按10％-15％的比例加入含1％的殼聚糖溶液，攪拌均勻后靜置24小時，去沉淀，得到濃縮的煎煮提取液，存貯備用；⑥噴霧干燥濃縮的煎煮提取液，將去沉淀后的煎煮提取液加熱，再加入濃縮液重量的10％的糊精，攪拌溶解，進行噴霧干燥，“噴霧干燥器”的進口溫度控制在180℃-185℃、出口溫度控制在70℃-80℃。噴霧干燥后，將回收的干燥藥粉密封包裝，即得中藥協(xié)同劑；(3)豬用中益合生素飼料添加劑的制備①按重量25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑配料；②混合均勻；③密閉包裝，避光保存。
也可將上述制成的益生菌與中藥益生協(xié)同劑粉按比例混合均勻，制成中益合生素飼料添加劑的顆粒劑，以便于質(zhì)量控制、保存、運輸和使用。
選擇體重相近的45日齡長白×榮昌斷奶仔豬50頭，公母各半，隨機分為5個組，每組兩個重復(fù)。試驗期為兩個階段，共60d。各組日糧組合見表1。
表1 試驗分組及日糧組合
各組不同日糧組合對豬生長性能的影響見表2。
表2 不同組合及用量對豬生長性能的影響
注橫行間各數(shù)據(jù)標(biāo)不同字母表示差異顯著(P＜0.05)或(P＜0.01)從表2可以看出，7～20kg階段，日增重益生素1、2組分別比對照組提高8.6％和17.92％(P＜0.05)；中藥協(xié)同劑組與協(xié)同劑+益生素組分別比對照組提高6.81％和22.22％(P＜0.01)；協(xié)同劑+益生素組又比益生素1、2組提高12.54％(P＜0.05)和3.64％。飼料報酬益生素1、2組分別比對照組提高6.67％和5.29％；中藥協(xié)同劑組與協(xié)同劑+益生素組分別比對照組提高9.05％和12.38％；而協(xié)同劑+益生素組比益生素1、2組分別提高6.12％和8.46％。
20～40kg階段，日增重益生素1、2組分別比對照組提高0.91％和7.46％；中藥協(xié)同劑組與協(xié)同劑+益生素組分別比對照組提高4.55％和11.47％(P＜0.05)；協(xié)同劑+益生素組又比益生素1、2組提高10.56％和3.73％。飼料報酬益生素1、2組分別比對照組提高1.72％和3.44％；中藥協(xié)同劑組與協(xié)同劑+益生素組分別比對照組提高2.06％和5.50％；而協(xié)同劑+益生素組比益生素1、2組分別提高3.85％和2.14％。
益生素與中益合生素(益生素+中藥協(xié)同劑)對試驗豬腸道大腸桿菌、乳酸菌和雙歧桿菌的影響測定，結(jié)果見表3。
表3 益生素與益生素+協(xié)同劑對大腸桿菌、乳酸菌和雙歧桿菌的影響
注橫行間各數(shù)據(jù)標(biāo)不同字母表示差異顯著(P＜0.05)從上表可以看出，益生素組與中益合生素組直腸糞便中的大腸桿菌數(shù)低于對照組，而雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)試驗組均高于對照組，尤以中+益組最為顯著。表明投喂益生素尤其是當(dāng)益生素與協(xié)同劑配合使用后，可以明顯促進雙歧桿菌和乳酸桿菌等有益菌的增殖從而提高有益菌在腸道中的數(shù)量，并使有害菌大腸桿菌受到抑制而數(shù)量明顯降低。腸道益生菌數(shù)量的增加，可激活腸道消化與免疫功能，促進豬只的消化與吸收，并抑制有害菌的繁殖，減少腸道疾病的發(fā)生，從而起到保健促長的作用。
本發(fā)明和現(xiàn)有單用益生素添加劑相比具有以下優(yōu)點能提高養(yǎng)豬生產(chǎn)效率，降低飼養(yǎng)成本；能增強生豬的免疫力和抗應(yīng)激能力，降低發(fā)病率，用藥少或不用藥，有利于人身健康和環(huán)境保護；適合現(xiàn)代化工業(yè)生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
具體實施例方式
實施例一一、中藥協(xié)同劑的制備(1)稱重配料，稱取中草藥飲片黃芪30Kg、杜仲葉30Kg、山楂40Kg為原料；
(2)粉碎混合，將稱取的中草藥飲片粉碎成粗粉并混合均勻；(3)水煎提取，將混合均勻的中草藥粗粉裝入“中草藥多功能提取罐”中，加入中草藥粗粉重量5倍的自來水，通入蒸氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，再向中藥提取罐內(nèi)加5倍自來水，通氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，如此再重復(fù)提取1次，棄藥渣；(4)濃縮煎煮提取液，合并三次煎煮液，通入蒸汽，常壓濃縮提取液量至原藥量的1-1.5倍時，倒出濃縮液；(5)沉淀，當(dāng)濃縮液溫度降至60℃-70℃時，徐徐在濃縮液里按10％-15％的比例加入含1％的殼聚糖溶液，攪拌均勻后靜置24小時，去沉淀，得到濃縮的煎煮提取液，存貯備用；(6)噴霧干燥煎煮提取液，將去沉淀后的煎煮提取液加熱，再加入濃縮液重量的5％-15％的糊精，攪拌溶解，進行噴霧干燥，“噴霧干燥器”的進口溫度控制在180℃-185℃、出口溫度控制在70℃-80℃。噴霧干燥后，將回收的干燥藥粉密封包裝，即得中藥益生協(xié)同劑備用。
二、混合益生菌劑的制備1、乳酸菌的制備菌種為凍干保存的嗜酸乳桿菌；乳酸菌培養(yǎng)基酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸餾水1升。
①、擴大種子菌取斜面上菌種一鉑金耳接種入裝有培養(yǎng)基的試管。37℃恒溫靜置培養(yǎng)20h，得到一級種子菌，取出待用，冰箱保存；②二級種子菌將一級種子菌按乳酸菌培養(yǎng)基體積4-6％的比例接種到乳酸菌培養(yǎng)基內(nèi)；③生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基的制備按上述乳酸菌培養(yǎng)基的成分比例稱取各成分加水溶解。倒入30L微生物發(fā)酵罐內(nèi)，加水至1.8萬ml。于115℃蒸氣滅菌30分鐘；④接種待培養(yǎng)基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二級種子菌菌種，按生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基6-8％的比例接種，攪拌均勻；⑤培養(yǎng)關(guān)閉所有通氣閥，37℃恒溫培養(yǎng)22h。
⑥離心從生物發(fā)酵罐內(nèi)取出培養(yǎng)液，冰箱暫存；待培養(yǎng)液冷卻后于3000r/min離心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁將菌泥洗出。在1萬ml培養(yǎng)液加入300ml左右20％的牛乳汁作為保護劑。將其與包被液混合均勻，均質(zhì)包被，凍干，研磨或低溫粉碎，測定活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處保存；2、臘樣芽孢桿菌的制備菌種于鹽水或凍干保存4℃冰箱；臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸餾水1升。
①擴大種子菌，吸取0.05ml菌液接種40ml臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基，37℃搖床培養(yǎng)20h，鏡檢無雜菌，得到一級種子菌，備用；②二級種子菌取一級種子菌，按臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基的4％比例接種入培養(yǎng)基內(nèi)，37℃搖床培養(yǎng)20h，得到二級種子菌，備用；③按以上所述比例制備生產(chǎn)用的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基1.8萬ml，置于30L發(fā)酵罐內(nèi)，115℃蒸氣滅菌30分鐘，冷卻至37℃左右，在火焰控制下接入二級種子菌1000ml。37℃通氣供氧培養(yǎng)，觀察PH值和DO值的變化，取樣鏡檢芽孢形成情況，當(dāng)芽孢形成達到95％(27小時左右)即可收獲；④取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝劑沉淀過夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均勻，裝入磁盤，置于40℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干，粉碎，計活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處避光保存；3、酵母菌的制備菌種釀酒酵母，凍干，置冰箱冷藏保存；YEPD培養(yǎng)基酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸餾水1升。(固體加20g瓊脂)；①、擴大種子菌取斜面上菌種一鉑金耳接種入裝有培養(yǎng)基的試管。37℃恒溫靜置培養(yǎng)20h，得到一級種子菌，取出待用，冰箱保存；②二級種子菌將一級種子菌按乳酸菌培養(yǎng)基體積4-6％的比例接種到乳酸菌培養(yǎng)基內(nèi)；③生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基的制備按上述乳酸菌培養(yǎng)基的成分比例稱取各成分加水溶解。倒入30L微生物發(fā)酵罐內(nèi)，加水至1.8萬ml。于115℃蒸氣滅菌30分鐘；④接種待培養(yǎng)基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二級種子菌菌種，按生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基6-8％的比例接種，攪拌均勻；⑤培養(yǎng)關(guān)閉所有通氣閥，37℃恒溫培養(yǎng)22h。
⑥離心從生物發(fā)酵罐內(nèi)取出培養(yǎng)液，冰箱暫存；待培養(yǎng)液冷卻后于3000r/min離心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁將菌泥洗出。在1萬ml培養(yǎng)液加入300ml左右20％的牛乳汁作為保護劑。將其與包被液混合均勻，均質(zhì)包被，凍干，研磨或低溫粉碎，測定活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處保存；
三、中益合生素飼料添加劑的制備(1)稱重配料，稱取中藥協(xié)同劑75％、益生菌25％為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存。
實施例二中藥協(xié)同劑和混合益生菌劑的制備方法與實施例一相同，(1)稱重配料，稱取中藥協(xié)同劑70％、混合益生菌劑30％為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存實施例三三、中益合生素的制備中藥協(xié)同劑和混合益生菌劑的制備方法與實施例一相同(1)稱重配料，稱取中藥協(xié)同劑60％、混合益生菌劑40％為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存。
權(quán)利要求
1.豬用中益合生素飼料添加劑，其組分為25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑，其特征在于混合益生菌劑為蠟樣芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中藥協(xié)同劑為杜仲葉、黃芪和山楂飲片混合的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬用中益合生素飼料添加劑，其特征在于混合益生菌劑為40％樣芽孢桿菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的豬用中益合生素飼料添加劑，其特征在于中藥協(xié)同劑為黃芪29％-40％、山楂29％-40％和杜仲葉29％-40％的飲片混合的提取物。
4.如權(quán)利要求1的豬用中益合生素飼料添加劑的制備方法，其步驟為分別制備混合蓋生菌劑和中藥協(xié)同劑，再將25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑混合均勻，制成豬用中益合生素飼料添加劑；(1)混合益生菌劑的制備；①乳酸菌的制備菌種為凍干保存的嗜酸乳桿菌；乳酸菌培養(yǎng)基為酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸餾水1升；第一步，擴大種子菌，取斜面上菌種一鉑金耳接種入裝有乳酸菌培養(yǎng)基的試管內(nèi)，37℃恒溫靜置培養(yǎng)20h，得到一級種子菌，取出冰箱保存，待用；第二步，將一級種子菌按乳酸菌培養(yǎng)基的4-6％的比例，接種到乳酸菌培養(yǎng)基內(nèi)，得到二級種子菌；第三步，制備生產(chǎn)用的乳酸菌培養(yǎng)基，按乳酸菌培養(yǎng)基的成份比例稱取各成分加水溶解，倒入30L的微生物發(fā)酵罐內(nèi)，加水至1.8萬ml，于115℃蒸氣滅菌30分鐘；第四步，接種待生產(chǎn)用的乳酸菌種培養(yǎng)基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二級種子菌，按乳酸菌種培養(yǎng)基體積的6-8％的比例接種，攪拌均勻；第五步，培養(yǎng)乳酸菌，關(guān)閉所有通氣閥，37℃恒溫培養(yǎng)22h；第六步，離心脫水從生物發(fā)酵罐內(nèi)取出培養(yǎng)液，冰箱暫存，待培養(yǎng)液冷卻后于3000r/min離心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁將菌泥洗出，1萬ml培養(yǎng)液加入300ml左右20％的牛乳汁作為保護劑，將其與含有明膠的包被液混合均勻，均質(zhì)包被，凍干，研磨或低溫粉碎，測定活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處保存?zhèn)溆?；②臘樣芽孢桿菌的制備菌種于鹽水或凍干保存在4℃的冰箱內(nèi)；臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸餾水1升；第一步，擴大種子菌，吸取0.05ml種菌液接種到40ml的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)20h，鏡檢無雜菌，得到一級種子茵，備用；第二步，取一級種子菌培養(yǎng)物按臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基體積的4％的比例接種入臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基內(nèi)，37℃搖床培養(yǎng)20h，備用；第三步，制備生產(chǎn)用的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基，按臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基的成分比例配制1.8萬ml的臘樣芽孢桿菌培養(yǎng)基，倒入30L的發(fā)酵罐內(nèi)，115℃蒸氣滅菌30分鐘，冷卻至37℃左右，在火焰控制下接入二級種子菌1000ml；37℃通氣供氧培養(yǎng)，觀察PH值和DO值的變化，取樣鏡檢芽孢形成情況，當(dāng)芽孢形成達到95％(27小時左右)即可收獲；第四步，取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝劑沉淀過夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均勻，裝入磁盤，置于40℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干，粉碎，計活菌數(shù)，密封包裝，陰涼干燥處避光保存；③酵母菌的制備以釀酒酵母為菌種，凍干，置冰箱冷藏保存；YEPD培養(yǎng)基酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸餾水1升。(固體加20g瓊脂)；第一步，擴大種子菌，取菌種一支，用YEPD液體培養(yǎng)基1-2ml稀釋，接種于50mlYEPD液體培養(yǎng)基內(nèi)，置于30℃～37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h。再將此50ml種子菌接種于1000mlYEPD培養(yǎng)基30℃～37°靜置培養(yǎng)24h，待用；第二步，按YEPD培養(yǎng)基的成分比例制備1.8萬ml的YEPD培養(yǎng)基，加入到30L發(fā)酵罐內(nèi)，115℃蒸氣30min高壓蒸汽滅菌，待培養(yǎng)基冷卻到30℃在火焰保護加入1000ml種子菌。30℃恒溫培養(yǎng)30h。第三步，取出菌液，于離心機內(nèi)3500r/min離心20min，或者加入10％的絮凝劑沉淀；收集菌泥，冷凍干燥或添加菌泥重量的1-2倍糠粉于50℃左右烘干。研磨或低溫粉碎，計活菌數(shù)，包裝密封，陰涼干燥處避光保存?zhèn)溆?；④制備混合益生菌劑，?0％重量的臘樣芽孢桿菌+30％重量的酵母菌+30％重量的乳酸菌，混合勻即得到混合益生菌(含活菌數(shù)50億/g)，密閉包裝，陰涼干燥處避光保存，待用；(2)中藥協(xié)同劑的制備①稱重配料，按上述重量比例稱取黃芪、山楂、杜仲葉中草藥飲片；②粉碎混合，將稱取的中草藥飲片粉碎成粗粉并混合均勻；③水煎提取，將混合均勻的中草藥粗粉裝入“中草藥多功能提取罐”中，加入中草藥粗粉重量5倍的自來水，通入蒸氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，再向中藥提取罐內(nèi)加5倍自來水，通氣煎煮1小時，濾出煎煮提取液，如此再重復(fù)提取1次，棄藥渣；④濃縮煎煮提取液，合并三次煎煮提取液，通入蒸氣，常壓濃縮煎煮提取液，至原藥量(即未提取中藥原藥)的1-1.5倍時，倒出濃縮液；⑤沉淀，當(dāng)濃縮液溫度降至60℃-70℃時，徐徐在濃縮液里按10％-15％的比例加入含1％的殼聚糖溶液，攪拌均勻后靜置24小時，去沉淀，得到濃縮的煎煮提取液，存貯備用；⑥噴霧干燥濃縮的煎煮提取液，將去沉淀后的煎煮提取液加熱，再加入濃縮液重量的10％的糊精，攪拌溶解，進行噴霧干燥，“噴霧干燥器”的進口溫度控制在180℃-185℃、出口溫度控制在70℃-80℃。噴霧干燥后，將回收的干燥藥粉密封包裝，即得中藥協(xié)同劑；(3)豬用中益合生素飼料添加劑的制備①按重量25～40％的混合益生菌劑和60％-75％的中藥協(xié)同劑配料；②混合均勻；③密閉包裝，避光保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及豬用中益合生素飼料添加劑及其制備方法，其組分為25～40％的混合益生菌劑和60％－75％的中藥協(xié)同劑，其特征在于混合益生菌劑為蠟樣芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中藥協(xié)同劑為杜仲葉、黃芪和山楂飲片混合的提取物?；旌弦嫔鷦?0％臘樣芽孢桿菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物。中藥協(xié)同粉劑為黃芪29％－40％、山楂29％－40％和杜仲葉29％－40％的飲片混合的提取物。制備方法為分別制備混合蓋生菌劑和中藥協(xié)同劑，再將混合益生菌劑和中藥協(xié)同劑按比例混合均勻，制成豬用中益合生素飼料添加劑。本發(fā)明具有以下優(yōu)點能提高養(yǎng)豬生產(chǎn)效率，降低飼養(yǎng)成本；能增強生豬的免疫力和抗應(yīng)激能力，降低發(fā)病率，用藥少或不用藥，有利于環(huán)境保護。
文檔編號A61K36/46GK1969657SQ20051005740
公開日2007年5月30日 申請日期2005年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月25日
發(fā)明者曹國文, 曾代勤, 戴榮國 申請人:重慶市畜牧科學(xué)研究院