專利名稱：一種用于腫瘤輔助治療的多糖組合物及其制劑和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種腫瘤輔助治療的中藥多糖組合物及其制劑和應用，具體涉及一種從中藥材黨參、黃芪和枸杞子中提取的有效部位黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖的組合物及其適宜的制劑，以及該組合物在制備腫瘤化療或放療或手術后的輔助治療藥物或保健食品中的應用。
背景技術：
據世界衛生組織1997年度報道，1996年全球58億人口中因癌癥死亡約有630萬人，約占總死亡人數的12％，是僅次于心血管疾病的第二大死因。從1996年以來全球每年新確診的腫瘤患者均在1030萬人以上，到1999年底全球腫瘤患者總數已逾4000萬人。世界衛生組織2001年報道，世界癌癥發病率和死亡率比1990年上升了22％，今后20年還將上升大約50％。因此，治療和預防腫瘤疾病的藥物成為整個醫藥行業的研發熱點。隨著腫瘤發病率的上升和新藥的不斷涌現，抗癌藥市場將發生巨大變化，研究開發和生產新型抗癌藥特別是天然抗癌藥物成為醫藥市場上增長的新熱點。在我國，中草藥及其活性成分的抗腫瘤藥物研究已是國家重點基礎研究發展規劃項目之一。我國20世紀90年代上市的抗腫瘤藥物中除米托蒽醌、烴基脲和順鉑等少數幾種抗腫瘤藥物為化學合成藥外，已上市(或仍在研制階段)的一系列抗腫瘤藥物(含人體免疫調節劑)均為從天然草藥中提取的成分。中草藥提取物抗癌的主要機制是(1)抑殺腫瘤細胞；(2)調整機體免疫等抗癌潛能，以改善患者生命質量，延長生命期；(3)提高放化療效果的增敏作用；(4)降低放化療毒副作用的減毒作用。其中，多糖類提取成分為主要藥用成分的抗腫瘤藥物在治療過程中不僅不良反應較小，而且具有扶正固本的功能，是調節人體免疫功能以利于消滅體內腫瘤細胞(組織)的新型藥物。多糖聯合化療治療腫瘤試驗表明，多糖不僅能產生明顯的協同作用，明顯的改善機體的細胞免疫、體液免疫功能，而且可以有效地對抗化療的毒副反應，而這主要與多糖可促進造血細胞分化、發育有關。總體來說多糖用于抗腫瘤具有以下幾個方面的優勢(1)改善腫瘤患者的生存質量；(2)延長腫瘤患者的存活期；(3)提高腫瘤患者的免疫功能，增強抗病能力；(4)促進新生細胞的活力。多年來，我們對中藥材黨參、黃芪和枸杞子三種藥材進行了系統的研究，發現和單味藥材中多糖類成分效果相比，三種藥材多糖類成份的組合物具有更為顯著的藥理作用可顯著促進淋巴細胞轉化率，可明顯的增強荷瘤鼠的非特異性免疫功能和體液免疫功能，增強吞噬細胞的吞噬功能，通過增強荷瘤鼠免疫力殺死腫瘤細胞；能顯著降低荷瘤鼠免疫細胞的脂質過氧化，明顯抑制腫瘤體積和重量的增長速度，減少癌細胞轉移和擴散，延長荷瘤鼠的存活時間，提高其生存質量。我們利用現代中藥的提取工藝對上述三味藥材進行精制，以獲得的有效成分富集的有效部位多糖類成分組成總多糖作為主要的有效組分，可以制作成適宜的藥用制劑用于腫瘤疾病的輔助治療，也可廣泛的應用于保健食品領域。
發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供一種從中藥材黨參、黃芪和枸杞子中提取的黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖的組合物，將其作為腫瘤疾病放療或化療或手術治療后的輔助治療以及延長患者生命、增強免疫功能、改善癌癥患者生活質量的藥物制劑或制備成各種適宜(或適宜劑型)的保健食品。
首先，本發明提供的具有抑制腫瘤、調節免疫的功能的活性成分是來源于中藥材黨參、黃芪和枸杞子中提取的有效部位多糖類物質的組合物總多糖，其中總多糖的實際含量之和不低于總提取物的50％。
其次，本發明提供的具有抑制腫瘤、調節免疫的功能的活性成分是黨參、黃芪和枸杞子三種藥材的多糖類成分組合而成。這三種多糖組合物，不論是植物提取物還是來源于化學合成，都可以用于本發明組合物的有效活性成分之中；此外，總多糖還包括上述多糖加入從上述三味原藥材中提取分離出來的同類型純品或化學合成的純品按照后文描述的比例范圍組成的組合物，其中總的多糖的實際含量不低于總提取物的50％。
本發明所述的腫瘤輔助治療的藥物即是由上述的總多糖以及生理學上可以接受的藥用賦形劑組成。本發明的劑型主要為口服制劑，包括片劑如普通片、緩釋片、控釋片、口腔崩解片等，以及硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服液等。鑒于本發明所用的有效部位均為多糖化合物，所以還可以制作成適宜的胃腸外給藥用劑型，如凍干粉針劑、粉針劑、注射劑、輸液劑等液體制劑。另外，該組合物具有很強的調節機體免疫功能、改善體質的功能，還可以廣泛的應用于各種病后的康復治療藥物和各種保健食品的制備，包括直接以該組合物為主要成分制備的膠囊劑、片劑、口服液等適宜的制劑，也可以作為食品添加劑，應用于食物(如面包、面條等)、保健茶、保健飲料等。
下面的詳細描述將有助于進一步理解本發明。
除另有說明外，本說明書的部分術語的定義如下黨參或其原藥材，是指桔梗科植物黨參(Codonopsis pilosula)，其根藥用，味甘性平。《本草正義》中記載“黨參力能補脾養胃，潤肺生津，健運中氣，本與人參不甚相遠。其尤可貴者，則健脾運而不燥，滋胃陰而不濕，潤肺而不犯寒涼，養血而不偏滋膩，鼓舞清陽，振動中氣，而無剛燥之弊。”歷代中醫學家認為黨參有補中益氣，生津止渴、健脾補肺等功效。在本發明中使用黨參的根，可將其粉碎或切片用于提取有效部位。
黃芪或其原藥材，是指豆科植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus BungeVar.mongholicus[Bunge]P.K.Hsiao)或膜莢黃芪(Astragalus membranaceus[Fisch.]Bunge.)的根或者制作的中藥材飲片。黃芪，原名黃耆，始載于《神農本草經》，列為上品。其味甘，性溫，具有補氣升陽，益衛固表，斂瘡生肌、利水消腫之功效。受到歷代醫家的重視，臨床應用極為廣泛。在本發明中可以將黃芪的根粗粉或切片以利于有效部位的提取。
枸杞子或其原藥材，為茄科植物(Lycium barbarum L.[L.halimifolium Mill.])的果實，味甘性平，是我國傳統的滋補中藥，始載于《神農本草經》，被列為上品。明朝李時珍在《本草綱目》中記載枸杞有“堅筋骨，......補精氣諸不足，明目安神，令人長壽”等功效。在傳統醫學中常用于虛勞精虧、腰膝酸軟、眩暈耳鳴、內熱消渴、血虛萎黃等。在本發明中使用的是枸杞的果實(鮮果或干果均可)。
黨參多糖是指按本說明書所述方法從黨參原藥材中提取獲得的多糖類物質，并且其中多糖含量不低于總提取物的50％(w/w)；黃芪多糖是指按本說明書所述方法從黃芪原藥材中提取獲得的多糖類物質組成的總多糖，并且其中多糖含量不低于總提物的50％(w/w)；枸杞多糖是指按本說明書所述方法從枸杞子原藥材中提取獲得的多糖類物質，并且其中枸杞多糖含量不低于總提取物的50％(w/w)。
總多糖是指從中藥材黨參、黃芪和枸杞子中提取黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖組合而成的組合物，該組合物中多糖類化合物的實際含量不低于提取物總量的50％(w/w)。此外，總多糖還可以包括上述多糖加入從上述三味原藥材中提取分離出來的同類型純品或化學合成的純品按照后文描述的比例范圍組成的組合物。所有這些有效部位組合物中總多糖的實際含量也都不低于組合物總量的50％(w/w)。
本發明組合物包括上述總多糖和生理學上可以接受的藥用賦形劑。其中總多糖的組成和制備方法如下從中藥材黨參、黃芪和枸杞子中進行提取、分離純化得到有效部位黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖，再將上述有效部位按照一定比例組合成總多糖。其中三種組分的用量范圍是30％～60％黨參多糖、20％～40％黃芪多糖和10％～40％枸杞多糖，優選用量為40％～60％黨參多糖、30％～40％黃芪多糖和10％～30％枸杞多糖，最優用量為黨參多糖40％、黃芪多糖40％和枸杞多糖20％。
該總多糖中各有效部位的制備方法和步驟如下所述(1)黨參多糖的提取工藝①首先將黨參根曬干，然后切成2～3cm小段或者切片；②取上述黨參根塊加入5～12倍量的水在溫度70～100℃加熱提取，提取2～3次，每次提取時間1～3小時，合并水提液；③將所得的水提液濃縮，加入90％以上乙醇攪拌混勻，使乙醇的濃度達到65～80％，然后將其靜置過夜；④將所得的靜置液進行過濾得沉淀物，將沉淀物溶于水，再分別加入80％、75％乙醇進行醇沉，過濾所得沉淀物，除蛋白(Savage法、蛋白酶法等)，在60～80℃下真空干燥即得。
(2)黃芪多糖的提取工藝①將原藥材清洗、烘干后粉碎，加入6～12倍量水在60～100℃溫度下提取2～3次，每次提取時間1～3小時，過濾，合并水提液；②將水提液濃縮后，加90％以上乙醇使其醇濃度達到65～80％，充分混勻后，靜置12～24小時，傾出上清夜，過濾；③將所得沉淀用90％乙醇、95％乙醇、無水乙醇等有機溶劑洗滌除去可溶性雜質，再用除蛋白方法如Savage法、蛋白酶法等精制，在60～80℃減壓真空干燥即得。
(3)枸杞多糖的提取工藝①將枸杞置鼓風干燥箱中30～50℃下烘12～24h至干，用3～8倍石油醚回流脫脂2～3次，每次回流時間1～2小時，過濾。藥渣加入5～12倍量水在60～100℃的溫度下提取2～3次，每次提取時間1～3小時，過濾，將提取液合并，濃縮；②在濃縮液中加入90％以上的乙醇使其醇濃度達到65～80％，充分混勻后靜置24～48小時，過濾；③所得沉淀以90％乙醇、95％乙醇、無水乙醇等有機溶劑洗滌除去可溶性雜質，再用Savage法、蛋白酶法以及透析等方法進一步除去雜質反復精制，在60～80℃減壓真空干燥即得。
另外，在有效部位的提取過程中用來提取或萃取的溶劑可以是水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚以及其他的有機溶劑；上述有效部位可以分別提取，也可以混合提取，精制后得到總多糖。此外，上述的總多糖既可以是來源于植物(中藥材)提取，也可以來源于化學合成或半合成。
本發明還提出由上述“總多糖”和生理學上可以接受的藥用賦形劑組成的藥用組合物。這些藥用組合物的劑型包括口服制劑，如各種片劑、膠囊劑、丸劑、口服液等，也可以是胃腸外給藥用劑型，如輸液劑、注射劑、注射用凍干粉針劑或注射用粉針劑等。
和現有技術相比，本發明具有以下特點第一，我們結合大量文獻報道，對大量中醫處方進行了有目的篩選，又經過現代中藥的抗腫瘤動物藥理實驗，從藥效、藥理實驗結果等方面進行實效論證和療效對比，最后確定了以上述三味中藥材的有效部位多糖類物質進行合理的配伍。我們認為患腫瘤、癌癥的病人，他們都有不同程度的氣血不和、肝腎虧損、脾胃虛弱、陰陽失衡等征候群，方中選用三藥具有明目安神、補氣升陽、益衛固表、生津止渴、和脾健胃、滋肝補腎、斂瘡生肌、利水消腫、令人長壽等功效，是歷代醫家常用的補益之藥。因此用三種藥材的多糖提取物配伍，能夠充分發揮它們較強的補益功效，互補互促，比單味藥效果更好，而且也避免了大復方入藥味數繁多的弊端。其次，除了考慮中醫的補益調理的治療理論之外，我們同時也考慮到了現代藥理學的研究結果，如前所述，選用的三種藥材多糖提取物的現代藥理研究結果表明它們具有很好的抗腫瘤作用，能夠刺激免疫細胞，增強吞噬細胞的吞噬能力，從細胞免疫、體液免疫兩個方面調節機體免疫功能，增強病人體質，從而發達到抑制腫瘤的功效。第三，我們采用現代中藥的提取工藝將三味中藥材分別提取其中的有效部位多糖并進行精制，使得其中的有效成分充分富集，達到含量較高的有效部位，再優化組合成總多糖。本組合物中，每個單一有效部位黨參多糖含量≥50％；黃芪多糖含量≥50％；枸杞多糖含量≥50％。提取物中總多糖含量≥50％，多糖及總多糖均可以通過紫外分析法等現代分析方法，進行可靠的定性定量分析檢測，控制其含量，彌補了目前中藥復方制劑科技含量較低，有效成分含量低或不明確，質量難以控制等不足。最后，本品既保留了中藥材治療疾病的特點，治療疾病和滋補調理同步，在抗腫瘤的同時，能增強病人體質，提高病人的生活質量，延長病人的生命，可以作為腫瘤患者放療、化療和手術治療后的輔助治療藥物，還可以作為腫瘤疾病乃至其他病癥的康復治療藥物，充分體現了現代中藥的發展特色。另外，由于本發明所選用的黨參和黃芪是可用于保健食品的中藥材，中藥材枸杞是既可食用也可藥用，因此，所提取的多糖也可廣泛的應用于保健食品領域，也可作為食品添加劑應用于食品中。
圖1是實施例4的工藝流程圖；圖2是實施例5的工藝流程圖；圖3是對小鼠移植性S180肉瘤的抑制作用的實驗結果；圖4是對小鼠移植性H22實體瘤的抑制作用的實驗結果；圖5是對EAC腹水瘤小鼠生命延長率的影響的實驗結果；圖6是對荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響的實驗結果；圖7是對荷瘤小鼠網狀內皮系統(RES)的碳粒廓清能力的影響的實驗結果；圖8是對荷瘤小鼠遲發型超敏反應(DTH)的影響的實驗結果。
以下通過實施例對本發明作進一步說明，但并不僅限于此。
具體實施例方式實施例1黨參多糖的提取工藝取黨參原藥材40kg，曬干后切成2～3cm小段，加入10倍量的水，置加熱鍋中用水煎煮，提取時間2小時，過濾，濾后藥渣可再次重復上述工藝過程2次，提取時間1.5小時，將三次水提液合并，濃縮至相對密度1.05～1.35，加入95％乙醇攪拌混勻，使乙醇的濃度達到75％，然后將其靜置過夜；將所得的靜置液進行抽濾得沉淀物，將沉淀物溶于水，再分別加入80％、75％乙醇進行醇沉，過濾，沉淀物用蛋白酶法除雜，在70℃下減壓真空干燥，即得。
實施例2黃芪多糖的提取工藝將20kg黃芪原藥材清洗、烘干后粉碎，加入10倍量水在100℃溫度下煎煮3次，每次時間2小時，過濾，合并三次水提液；將水提液濃縮至相對密度1.05～1.35，加入95％乙醇使醇含量達到70％，充分混勻后靜置12小時，傾出上清夜，過濾出沉淀；將所得沉淀依次用90％乙醇、95％乙醇、無水乙醇洗滌，除去可溶性的雜質，用蛋白酶法進一步除雜精制，在70℃減壓真空干燥，即得。
實施例3枸杞多糖的提取工藝取10kg枸杞置鼓風干燥箱中40℃下烘24h至干，粉碎后用5倍石油醚回流脫脂三次，2h/次，過濾。藥渣風干后加入10倍量水100℃的溫度下提取3次，每次提取時間2小時，過濾，將三次提取液合并濃縮至相對密度1.05～1.35；在濃縮液中加入95％的乙醇使醇濃度達到70％，充分混勻后靜置24小時，過濾；所得沉淀先后以95％乙醇、80％乙醇、75％乙醇等有機溶劑洗滌除去可溶性雜質，揮盡有機溶劑；將所得提取物用蛋白酶法進一步除去雜質，在70℃下減壓真空干燥，即得。
實施例4膠囊劑取一定比例的黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖組成的總多糖，干燥、粉碎、過80目篩，與微晶纖維素過80目篩混合均勻，以95％的乙醇制顆粒，鼓風干燥，以20目篩整粒，灌裝膠囊，打光包裝即可。
(1)處方組成(1000粒)黨參多糖 60g黃芪多糖 40g枸杞多糖 40g微晶纖維素 80g(2)處方組成(1000粒)黨參多糖 30g黃芪多糖 20g枸杞多糖 10g微晶纖維素 60g(3)處方組成(1000粒)黨參多糖 40g黃芪多糖 30g枸杞多糖 10g微晶纖維素 70g
(4)處方組成(1000粒)黨參多糖 60g黃芪多糖 40g枸杞多糖 30g微晶纖維素 80g(5)處方組成(1000粒)黨參多糖 40g黃芪多糖 40g枸杞多糖 20g微晶纖維素 75g其工藝流程見附圖1。
實施例5片劑取一定比例的黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖組成的總多糖，干燥、粉碎、過80目篩，與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉過80目篩混合均勻，以5％PVP制顆粒，鼓風干燥，以20目篩整粒，加入硬脂酸鎂，壓片。
(1)處方組成(1000片)黨參多糖 60g黃芪多糖 40g枸杞多糖 40g羧甲基淀粉鈉 7g微晶纖維素 80g硬脂酸鎂 3g(2)處方組成(1000片)黨參多糖 30g黃芪多糖 20g枸杞多糖 10g羧甲基淀粉鈉 4g微晶纖維素 55g硬脂酸鎂 1g
(3)處方組成(1000片)黨參多糖 40g黃芪多糖 30g枸杞多糖 10g羧甲基淀粉鈉 5g微晶纖維素 75g硬脂酸鎂 2g(4)處方組成(1000片)黨參多糖 60g黃芪多糖 40g枸杞多糖 30g羧甲基淀粉鈉 5g微晶纖維素 85g硬脂酸鎂 2g(5)處方組成(1000片)黨參多糖 40g黃芪多糖 40g枸杞多糖 20g羧甲基淀粉鈉 5g微晶纖維素 68g硬脂酸鎂 2g其工藝流程見附圖2。
下面用藥理實驗結果闡明其藥效作用一、對S180、H22實體瘤生長抑制的影響實驗方法選用體重為18～22g的雄性昆明種小鼠，將S180、H22瘤細胞懸液(1×105/ml)接種于動物前肢腋窩皮下，0.2ml/只，每個瘤種各接種70只。24小時后稱重隨機分成7組陰性對照組(給以等量生理鹽水)、模型組(給以等量生理鹽水)、受試藥組(本品500mg/kg、250mg/kg)、本品(500mg/kg、250mg/kg)加環磷酰胺(CY，30mg/kg)組和陽性對照(CY，30mg/kg)組，每組10只，分組后給藥，受試藥灌胃，陽性藥腹腔注射。每日一次，連續10天，每日觀察各組小鼠一般狀態。停藥后次日各組動物稱重，處死小鼠并分離瘤塊，稱重并計算抑瘤率。同時摘取胸腺和脾臟稱重，以胸腺或脾臟重量(mg)與體重(g)之比作為胸腺或脾臟指數。
實驗結果接種腫瘤后，模型組、陽性對照組小鼠活動次數明顯減少，皮毛蓬松，狀態較差。單純給本品組以及合用環磷酰胺組小鼠活動如常，皮毛光滑，體重增加。陽性對照組能明顯抑制腫瘤的生長，但也抑制了動物的生長，體重增加緩慢，狀態較差。而本品單獨使用就有抑制S180、H22腫瘤小鼠的腫瘤生長作用，腫瘤抑制率分別為35.1％和33.7％；與化療藥環磷酰胺合用后作用加強，腫瘤抑制率為72.8％和63.3％；環磷酰胺對S180、H22腫瘤的抑制率為62.8％和59.5％。同時，本品還能增加荷瘤小鼠的胸腺和脾臟指數，促進小鼠體重增長，與腫瘤對照組和環磷酰胺組比較均有顯著性差異。提示本品對化療荷瘤小鼠的免疫器官有保護作用，與化療藥合用有增效減毒的作用。對S180肉瘤的抑制作用結果詳見圖3；對H22的抑制作用結果詳見圖4(注*P＜0.05，**P＜0.01與腫瘤對照組比較；△P＜0.01，△△P＜0.01與環磷酰胺組比較)。
二、對EAC腹水瘤小鼠生命延長率的影響實驗方法選用體重為18～22g的雄性昆明種小鼠，腹腔接種0.2ml/只EAC瘤液。24h后隨機分組，分組與給藥同實體瘤小鼠，陽性藥為氟脲嘧啶(5-Fu)，腹腔給藥30mg/kg。給藥10d后，停藥，每日觀察各組小鼠的死亡情況，計算生命延長率。
實驗結果本品和氟尿嘧啶單用都可延長荷瘤小鼠的生存時間(P＜0.05，P＜0.01)，提高生命延長率；二者合用后上述作用明顯增強(P＜0.001)。提示本品對腹水型腫瘤也有一定抑制作用，與化療藥氟脲嘧啶有增效協同作用。(實驗數據詳見附圖5)三、對免疫功能的影響1、對荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響實驗方法取昆明雄性小鼠40只，體重18～22g，隨機分為4組，每組10只正常對照組，腫瘤對照組，受試藥I組(250mg/kg)，受試藥II組(500mg/kg)。除正常對照組外，其余各組前肢腋窩皮下接種S180瘤，造成腫瘤模型，每日灌胃給藥，1次/d×10d。于末次給藥30min后，每鼠腹腔注射5％CRBC生理鹽水懸液0.2ml，24h后處死動物，用2.5mlHank’s液沖洗每鼠腹腔，滴約0.2ml沖洗液于載玻片上，37℃溫孵30min，用NS沖去玻片上未貼壁的細胞。甲醇固定，Giemsa-PBS液染色(PH6.5)，晾干，油鏡下觀察100個巨噬細胞，并計算吞噬CRBC的百分率及吞噬指數。
實驗結果造成腫瘤模型后，對照組的巨噬細胞的吞噬功能明顯降低，而本品兩個劑量組能提高腫瘤模型小鼠的吞噬功能，從而提高機體的免疫力。(實驗數據詳見附圖6)2、對荷瘤小鼠網狀內皮系統(RES)的碳粒廓清能力的影響實驗方法取昆明雄性小鼠40只，體重18～22g，隨機分為4組，每組10只正常對照組，腫瘤對照組，受試藥I組(250mg/kg)，受試藥II組(500mg/kg)。除正常對照組外，其余各組前肢腋窩皮下接種S180瘤，造成腫瘤模型，每日灌胃給藥，1次/d×10d。末次給藥后30min，各組小鼠均iv20％印度墨汁0.1ml/10g，于注射后2min及12min分別由眼眶取血20ul，溶于2ml0.1％Na2CO3溶液中，波長600nm處測定各樣本的光密度值(OD)，用0.1％Na2CO3溶液作為空白對照。末次取血后，立即脫頸椎處死小鼠，取出肝臟、脾臟，分別稱重記錄，計算清除速度(k)和吞噬指數(a)。
實驗結果腫瘤對照組的小鼠在造模后RES功能顯著降低，表現為RES對碳粒的清除速度和吞噬指數下降；本品兩個劑量組與腫瘤對照組比較，碳粒廓清能力得到顯著增強，提示本品能提高荷瘤小鼠的RES功能。(實驗數據詳見附圖7)3、對荷瘤小鼠遲發型超敏反應(DTH)的影響實驗方法取昆明雄性小鼠40只，體重18～22g，隨機分為4組，每組10只正常對照組，腫瘤對照組，受試藥I組(250mg/kg)，受試藥II組(500mg/kg)。除正常對照組外，其余各組前肢腋窩皮下接種S180瘤，造成腫瘤模型。同時用1％DNFB丙酮液50ul，涂于各組小鼠腹部事先脫毛的皮膚致敏。次日給藥(水)，1次/d×10d。末次給藥后30min，用1％DNFB丙酮液10ul涂于各鼠左耳兩側進行攻擊，24h后處死動物，剪下左右耳片，用8mm的打孔器沖下同等大小的耳片稱重，以兩耳差值作為指標，進行組間比較，同時取脾臟和胸腺稱重，求得臟器指數。
實驗結果本品兩個劑量組均能提高荷瘤小鼠的遲發型超敏反應，與腫瘤對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。(實驗數據詳見附圖8)
權利要求
1.一種中藥提取物的組合物，它是由活性成分和/或藥學上可接受的載體組成，其特征在于所述的活性成分為30％～60％黨參多糖、20％～40％黃芪多糖和10％～40％枸杞多糖組成的多糖類化合物的組合物。
2.根據權利要求1所述多糖組合物，其特征在于活性成分的優選用量為40％～60％黨參多糖、30％～40％黃芪多糖和10％～30％枸杞多糖。
3.根據權利要求1或2所述的多糖組合物，其特征在于所述的黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖的含量不低于提取物的50％。
4.根據權利要求1或2所述的多糖類組合物的制備窮法，它是采用常規提取方法的，其特征在于以中藥材黨參、黃芪和枸杞為原料，藥材分別經過前處理后加入水熱提，將提取液濃縮，加入適宜濃度的醇進行醇沉，過濾，沉淀物干燥，干燥物混合即得多糖類組合物。
5.根據權利要求4所述的多糖類組合物的制備方法，其特征還在于醇沉后過濾出的沉淀也可以經溶劑洗滌，除去可溶性雜質，和/或用Savage法或蛋白酶法除去蛋白質進行精制。
6.根據權利要求4所述的多糖類化合物的制備方法，其特征在于是按照如下方法制備而成(1)將上述中藥材黨參根曬干，然后切成2～3cm小段或者切片；黃芪原藥材清洗、烘干后粉碎；枸杞在30～50℃下烘12～24h至干，用3～8倍石油醚回流脫脂2～3次；(2)處理后的藥材中加入6～10倍量的水在溫度70～100℃加熱提取，提取2～3次，每次提取時間1～3小時，合并水提液，將所得的水提液濃縮；(3)在濃縮液中加入90％以上乙醇攪拌混勻，使乙醇的濃度達到65～80％，然后將其靜置過夜，過濾得沉淀物；(4)沉淀物再次進行醇沉或者用有機溶劑洗滌，除去可溶性雜質，用Savage法或蛋白酶法除去蛋白；(5)所得物在60～80℃下真空干燥即得。
7.據權利要求1所述的多糖組合物的應用，其特征在于在制備腫瘤輔助治療藥物或者保健食品、食品添加劑中的應用。
8.根據權利要求7所述的多糖組合物的應用，其特征在于主要用于腫瘤放療、化療以及手術治療后的輔助治療和康復治療的藥品或保健食品中的應用。
9.根據權利要求1所述的多糖組合物的制劑，其特征在于所說的劑型主要為口服制劑包括片劑如普通片、控釋片、緩釋片、口腔崩解片等以及硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、顆粒劑等，也可以是適宜的胃腸外給藥用劑型如注射劑、凍干粉針劑、輸液劑等。
全文摘要
本發明提供了一種從中藥材黨參、黃芪和枸杞子中提取的有效部位黨參多糖、黃芪多糖和枸杞多糖的組合物及其制備方法和應用。該組合物及其制劑，能夠增強腫瘤患者機體免疫功能，提高抗病能力，促進患者正常細胞的再生，有助于患者機體的康復治療，改善其生活質量，延長生命。可以制作成腫瘤疾病的輔助治療藥物，特別是腫瘤疾病放療、化療、手術治療后的輔助治療藥物和康復治療藥物，也可以廣泛應用于保健食品領域，制作成各種保健食品特別是腫瘤患者的保健食品。
文檔編號A61K31/715GK1864718SQ20051003896
公開日2006年11月22日 申請日期2005年4月20日 優先權日2005年4月20日
發明者史美耿, 阮錦滿, 姚小燕, 彭青, 石海云 申請人:南京宇道科技開發有限公司