專利名稱：野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于藥物化學技術領域，具體涉及野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用。
背景技術：
野木瓜(Stauntonia chinensis DC)又名假荔枝，繞繞藤，為木通科野木瓜屬植物。藥理實驗證明野木瓜全植物及其提取物都有鎮痛、鎮靜和解痙作用，用于治療風濕性關節炎、跌打損傷，各種神經性疼痛，可長期使用及連續用藥，劑量與效用成正相關關系，而鎮痛作用不影響人的意識和感覺，無耐藥性，不成癮，是一種有效的中藥鎮痛藥。公開號CN1562275A公開的中國發明專利申請就公開了一種野木瓜皂甙及其注射劑。該注射劑具有鎮痛作用。目前未見有野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的公開報道。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于研究野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用。
本發明用MTT法證明野木瓜皂甙對腫瘤細胞有細胞毒效應，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關。
具體實施例方式
下面通過實施例進一步闡述本發明。
一、準備實驗藥物和試劑1、野木瓜皂甙(Stauntoniae Saponin，SS)的提取取野木瓜注射液(廣東和平制藥廠產品)于錐形瓶中，加入2倍體積的無水乙醇，搖勻，再加入5倍體積的丙酮與乙醚混合液(丙酮∶乙醚＝9∶1)。攪拌，在室溫下靜止20hrs.。經抽濾，濾渣用丙酮洗三次，得皂甙固體。提取方法參照徐任生、陳仲良編著的《中草藥有效成分提取與分離》(第二版).上海上海科學技術出版社，1989，313。
2、實驗前用RPMI-1640培養液(美國GiBCo公司產品)配制野木瓜皂甙溶液。溶液于4℃冷藏。
3、新生小牛血清(FCS)華美生物工程公司產品，56℃，30分鐘滅活，分裝，-20℃冷凍保存。
4、四甲基偶氮唑藍(MTT)試劑(Sigma公司生產)。
二、使用的儀器和設備1、超凈工作臺安泰技術有限公司產品，潔凈度＜3.5粒/L(＞0.5μm塵埃)。
2、CO2細胞培養箱Thermo公司Forma Scientific，Inc。
3、倒置光顯微鏡日本尼康公司(NIKON)型號810818型。
4、96孔平板美國Costar公司。
5、酶聯免疫檢測儀Bio-RAD Model 680，單波長為550nm。
三、藥物效果鑒定的方法1、細胞培養在K562懸浮細胞液中加入等容積的10％新生小牛血清的RPMI-1640營養液，吹打均勻，置飽和濕度，37℃，5％CO2的細胞培養箱中培養。
2、藥效測定a、設置5個藥物實驗組和1個對照組。每個組中在含有105個處于對數生長期的K562細胞的懸浮細胞液中加入200μl的FCS、100μl的SS(濃度分別為0.0361mg/ml、0.1802mg/ml、0.9012mg/ml、4.506mg/ml、22.53mg/ml)，然后加入RPMI-1640培養液至總容積1ml。對照組不加SS。各組的溶液被充分混勻后接種于96孔板。每個組接種8個小孔，每孔100μl。然后，置于37℃、飽和濕度的CO2培養箱中靜止培養。終止培養前4小時，每孔加入5mg/ml的MTT10μl，繼續培養。終止培養時，每孔加入10％SDS100μl，室溫靜止過夜。用酶聯免疫檢測儀(550nm單波長)測OD值。
b、相對抑制率(IR)的計算 c、統計學處理利用STATISTICA 6.0軟件進行方差分析和多重比較(LSD法)；以直線回歸法求藥物濃度與其對細胞增殖的抑制率的回歸方程，并通過相關系數分析回歸方程能否正確反映濃度與抑制率之間的關系。根據回歸方程推算出半數致死濃度LD50。
四、實驗結果1、SS影響K562細胞增殖的量效關系(均值±標準差)，見下表。
五、方差分析和多重比較方差分析F＝224.7377 P＝0.000000多重比較(LSD法)結果(1)對照組-實驗組1×對照組-實驗組2×對照組-實驗組3√ 照組-實驗組4√ 對照組-實驗組5√(2)實驗組1-實驗組2√ 實驗組1-實驗組3×實驗組1-實驗組4√ 實驗組1-實驗組5√(3)實驗組2-實驗組3√ 實驗組2-實驗組4√ 實驗組2-實驗組5√(4)實驗組3-實驗組4√ 實驗組3-實驗組5√(5)實驗組4-實驗組5√(×P＞0.05，無顯著性差異；√P＜0.01，差異極顯著)六、SS影響K562細胞增殖的量效關系的線性回歸和相關系數分析將SS濃度為0.02253mg/ml、0.0912mg/ml、0.2253mg/ml、0.4506mg/ml、2.253mg/ml的抑制率進行一元線性回歸，得到的回歸直線y＝34.40715x+3.034355。通過測定相關系數r表明，抑制率與SS濃度成正相關(r＝0.972119，r＞r0.05)，回歸直線可以表示濃度(x)與抑制率(y)的關系。
七、半數抑制濃度LD50的計算根據回歸直線y＝34.40715x+3.034355得到LD50＝1.365mg/ml。
結論上述實驗結果和統計學分析表明，野木瓜皂甙對腫瘤細胞有毒效應，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關。
權利要求
1.一種野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用。
2.根據權利要求1所述的野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用，其特征在于其中所述的野木瓜皂甙在0.02253mg/ml低濃度情況下對腫瘤細胞有細胞毒效應，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關。
全文摘要
本發明屬于藥物化學技術領域。其公開了一種野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應用。通過實驗表明野木瓜皂甙對腫瘤細胞有細胞毒效應，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關。
文檔編號A61P35/00GK1762371SQ20051002998
公開日2006年4月26日 申請日期2005年9月23日 優先權日2005年9月23日
發明者葉文博, 李興玉 申請人:上海師范大學