專利名稱：多烯紫杉醇脂質體及其制備方法
技術領域：
本發明屬于藥品制劑領域，具體講涉及含有抗腫瘤活性成分多烯紫杉醇的脂質體，以及該脂質體的制備方法。
背景技術：
多烯紫杉醇(DOCETAXEL)商品名為泰素帝是一種半合成紫杉醇衍生物，其抗腫瘤機制與紫杉醇相同，為有絲分裂抑制劑。通過促進微管蛋白聚集并延緩微管的解聚使細胞發生G2/M期阻滯，導致形成穩定的非功能性的微管束，從而破壞有絲分裂和細胞增殖。其細胞毒作用是紫杉醇的1.3～12倍。另外該藥還有促進細胞凋亡的作用。臨床上已批準用于卵巢癌、乳腺癌以及非小細胞肺癌的一線或二線治療。
由于多西紫杉醇水溶性差，目前市售的多烯紫杉醇注射劑(40g·L-1)是采用吐溫-80(tween-80)作溶劑，同時配有含13％乙醇的稀釋液。由于吐溫-80具有溶血性，用于靜脈內注射，會引起過敏反應，包括休克，呼吸困難，低血壓，血管性水腫，風疹等過敏樣反應癥狀，這些不良反應在人的臨床實驗可以十分嚴重，且有死亡報道。故臨床用藥常規實施預處理從多烯紫杉醇治療前1天開始口服地塞米松8mg，每天2次，連服3～5天，使用多烯紫杉醇前30～60分鐘肌肉注射苯海拉明40mg、靜脈注射西咪替丁300mg。一些病人(2.2％)盡管在藥物預防之后，仍然會過敏。5％的病人會因為過敏而不得不停止使用泰素帝，6.5％的病人會產生過敏水腫，為了提醒醫生和病人對該藥毒副反應的嚴重性，在美國的泰素帝的藥物產品說明書中有對該產品的過敏休克副反應加有嚴重警告術語；吐溫-80黏性大，給臨床用藥帶來不便；另外，多烯紫杉醇自身有骨髓抑制、白血球減少、血小板減少等毒性，因此，迫切需要改變多烯紫杉醇的劑型，以增加多烯紫杉醇的水溶性，避免由于溶媒吐溫-80引起的過敏反應和多烯紫杉醇自身的毒副作用。
為避免因吐溫-80及多烯紫杉醇自身帶來的不良反應，提高多烯紫杉醇的抗腫瘤效果，國內外學者現已對之做了多種嘗試，其中包括對多烯紫杉醇的衍生物及制劑進行廣泛研究。據報道，以橄欖油作載體攜帶的多烯紫杉醇微滴經纖維蛋白原包裹后，提高了多烯紫杉醇的抗腫瘤活性(Canser Research.2003.63(21).7314-7320)。Le Garrec D等利用兩親性聚合物如PVP-PLA在水中可自發行成聚合物膠束的原理，制備了多烯紫杉醇-聚合物膠束，此膠束對多烯紫杉醇具有極好的增溶效果，體外抗腫瘤效果與市售制劑均等，但不良反應少于市售制劑(J.Control.Release.2004.99(1)83-101)。盡管對多烯紫杉醇的衍生物及制劑的研究取得了明顯的進展，但大都尚不符合用藥的安全性和工業化生產的要求，至今未見上臨床、上市的報道。
發明內容
本發明的目的在于研制了一種性質穩定且可采用現有技術工業化生產的多烯紫杉醇脂質體及其固體制劑。
本發明的另一目的是提供了多烯紫杉醇脂質體及其固體制劑的制備方法。
本發明所述的多烯紫杉醇脂質體的組成成分(以重量份計)為多烯紫杉醇0.5-10份，磷脂類物質5-100份，附加劑5-100份為進一步延長多烯紫杉醇脂質體的血液循環時間，提高多烯紫杉醇脂質體的靶向性和生物利用度，降低毒副作用，可對多烯紫杉醇脂質體進行表面修飾制成特殊性能脂質體，如經聚乙二醇、甲基聚唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇-磷脂衍生物等材料修飾制成隱形脂質體A；同活化的單克隆抗體偶聯制得免疫脂質體B；經磁性材料修飾制得磁性脂質體C等。其中單克隆抗體可以選用人體大腸癌細胞表面抗原LEA的單克隆抗體ND-1，磁性修飾材料為超細磁粉。
本發明所述的磷脂類物質選自磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺及其混合物，卵磷脂、豆磷脂、天然或合成的心磷脂、腦磷脂，其中優選卵磷脂、豆磷脂、天然或合成心磷脂、腦磷脂。
本發明所說的附加劑選自膽固醇、維生素E、十八胺、磷酸二鯨蠟酯、表面活性劑，其中表面活性劑選自脫氧膽酸鹽、膽酸鹽、脫氧膽酸、膽酸、吐溫-80、牛磺膽酸鹽。
本發明所述的多烯紫杉醇脂質體，可以通過下述任何適宜的不同方法制備方法一將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按上述比例溶解于適量有機溶劑中，減壓蒸發或通氮氣除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入適量洗膜介質溶解膜，超聲處理15-30min，即得多烯紫杉醇脂質體。洗膜介質選自Hepes緩沖液(20Mm)，磷酸鹽緩沖液，Tris-HCl緩沖液(pH7.5，含0.15M NaCl)，含甘露醇的水溶液。
方法二將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑溶于適量有機溶劑中制成脂質溶液，吸取該溶液緩緩注入加熱的磷酸鹽緩沖溶液中，通氮氣或減壓蒸發去除殘存的溶媒，磷酸鹽緩沖液的溫度為40-60℃。
方法三將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例溶于有機溶劑，于室溫攪拌下滴入水溶液，使形成穩定的O/W型乳劑，減壓蒸去有機溶劑，滴加緩沖液，旋轉幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續蒸發，制得水性混懸液，即可。
方法四將磷脂類物質、附加劑加少量水相溶解，再由膽固醇、多烯紫杉醇熔融后與之混合，然后滴入65℃左右的水相溶液中保溫制得。
方法五可用冷凍干燥法制備，即將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例溶于有機溶劑中，通氮氣除去溶劑，然后懸浮在磷酸鹽緩沖液中超聲處理，真空冷凍干燥，最后加入介質重新水化即得。
方法六可用硫酸銨梯度法制備，即將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例混和，用有機溶劑溶解，過濾除去不溶物，減壓蒸發過濾溶液，制備磷脂膜后，加入一定量硫酸銨溶液水化，即可制得。
方法七可用超聲分散法制備，將磷脂類物質、附加劑和多烯紫杉醇一起溶解于有機溶劑中，混和均勻后旋轉蒸發，待有機溶劑蒸發完畢，將剩下的溶液再經超聲波處理，分離即可制得。
方法八可用多相制備法制備，將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑共溶于有機溶劑中，將該溶液恒溫攪拌下滴加到磷酸鹽緩沖液，再繼續攪拌一定時間，加緩沖液至全量，高壓乳勻機乳化即得。在攪拌時可以加入高效分散劑聚乙烯吡咯烷酮。
上述制備方法中所述的有機溶劑選自乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、氯仿及其混合物。
為延長多烯紫杉醇脂質體的存放時間，便于運輸，可將本發明的多烯紫杉醇脂質體通過噴霧干燥或冷凍干燥工藝制成固體成品；為防止干燥工藝中脂質體的聚集需加入支架劑，可以選擇的支架劑為氨基酸、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖及其混合物。
本發明的多烯紫杉醇脂質體提供了藥物輸送系統，能使得高濃度多烯紫杉醇以相對穩定的形式輸注到靶部位，提供持續的治療效果，實驗證明該脂質體能改變多烯紫杉醇的藥代動力學性質，以在更長時間內維持有效血藥濃度。
本發明的多烯紫杉醇脂質體能夠以注射或口服方式給藥，其中注射方式可以為靜脈輸注、靜脈滴注、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射，優選靜脈輸注方式給予患者。
通過靜脈輸注方式給予本發明的多烯紫杉醇脂質體時，此過程能在少于3小時的時間內完成，優選在少于1小時內，以80-115mg/m2的劑量給藥，不引起大的毒性反應；而且給藥前不需通過類固醇、抗組胺藥物或其他的治療藥物預先治療，不僅方便了給藥，也增加了病人的順應性，降低了成本。
脂質體屬于超微粒藥物載體，具有淋巴系統定向性，屬于靶向給藥系統的一種新劑型。它具有類細胞結構，或是通過內吞作用進入溶酶體，然后被酶消化釋放藥物，或是通過細胞融合作用，即脂質膜材與細胞膜構成物相似而融合進入細胞內，繼而被消化釋放藥物，使藥物在靶區組織中維持較高濃度，并改變被包封藥物的體內分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中蓄積，從而提高藥物的治療指數、減小藥物的給藥劑量和降低藥物的毒性；經脂質體攜帶后，可保護藥物活性基團在內環境中不被降解，還可延長藥物血中循環時間。
實驗證明，將多烯紫杉醇包封在脂質體中增加了藥物的水溶性，明顯降低了藥物的毒性及因吐溫-80帶來的過敏反應，且保持了與市售多烯紫杉醇注射液相同的抗腫瘤活性；藥物因受到脂質體雙層膜保護，在很大程度上提高了藥物的穩定性；脂質體也增加了藥物在體內的穩定性及靶向性。
鑒于以上原因，本發明用磷脂類物質、附加劑制成多烯紫杉醇脂質體及其固體制劑，增加了多烯紫杉醇的水溶性，使水不溶性紫杉醇易溶于生理鹽水或5％葡萄糖注射液，不但便于臨床用藥，更重要的是避免了因使用吐溫-80所引起的過敏反應，提高了機體耐受性；提高了多烯紫杉醇的穩定性，延長了產品的有效期，提高了藥品的質量。
采用本發明方法所制備的多烯紫杉醇脂質體不含致敏性溶劑，能消除過敏反應；經激光粒度儀測定，其平均粒徑在1000nm以下，包封率大于80％；且將脂質體冷凍干燥后的固體粉末，能保證制品儲存過程中的穩定性；該制備工藝成熟，產品質量穩定，便于工業化生產。
有益效果該項發明增加了多烯紫杉醇的水溶性，阻止藥物析出聚集，既能消除因吐溫-80引起的過敏反應，減少多烯紫杉醇自身的毒性反應，又能提高多烯紫杉醇的生物利用度及其治療指數。
且制備方法靈活多樣，均采用常規的工藝設備，可工業化規模、高效率生產，產品質量保持穩定，可直接或二次加工制備注射或口服制劑。
具體實施例方式
實施例1取多烯紫杉醇30mg、卵磷脂200mg、膽固醇100mg、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺20mg于50ml圓底燒瓶中，加入20ml氯仿溶解，旋轉蒸發儀上減壓蒸發除去有機溶劑，在瓶內壁上形成一層脂質薄膜，緩慢加入20mmol/L Hepes緩沖液，室溫超聲分散30min，制得小單室脂質體，其平均粒徑為57nm，占80％，全部粒子均在100nm以下，粒徑分布狹窄，表明脂質體大小較為均一；該脂質體可在室溫下穩定數天并在-20℃下穩定至少3個月，貯存期間觀察不到沉淀和多烯紫杉醇的降解。
實施例2精密稱取20mg多烯紫杉醇、20mg卵磷脂、200mg膽固醇，用10ml乙醚將之溶解(可適當加熱)。然后將此溶液用注射器緩慢注入加熱至50～60℃的磷酸鹽緩沖液，用電子恒速攪拌器以600r/rain的轉速攪拌至乙醚除盡為止，再用磷酸鹽緩沖液稀釋至100mL，即得多烯紫杉醇脂質體，置4℃冰箱中保存備用。
實施例3取實施例2中的脂質體進行形態觀察、粒徑及其分布測定。
取脂質體適量，加入注射用水適量稀釋，用1％的磷鎢酸染色，透射電鏡下觀察粒子形態。
取脂質體懸液適量，加入適量水稀釋，以Zetamaster光子相關光譜儀測定脂質體的粒徑大小和分布以及Zeta電位。
電鏡下觀察多烯紫杉醇脂質體呈均勻規則的球形粒子，無聚集粘聯。
實驗測得的多烯紫杉醇脂質體粒徑分布均勻，平均粒徑為120nm，多分散指數為0.158，zeta電位為-26.4mv。
實施例4取實施例2中的多烯紫杉醇脂質體進行包封率的測定。
包封率依據RP-HPLC方法測定，多烯紫杉醇脂質體溶液經透析法分離未包裹的多烯紫杉醇，用RP-HPI C測定游離多烯紫杉醇含量。色譜條件乙腈-水(60∶40，v/v)為流動相，流速2.0ml/min，進樣量15μl，229nm檢測，按下列公式計算包封率。
包封率(％)＝(脂質體中多烯紫杉醇加入量-游離紫杉醇量)/多烯紫杉醇加入量依次公式測得包封率為97.45％。
實施例5按比例稱取卵磷脂160mg、膽固醇40mg溶于氯仿與異丙醇(14∶1)30ml混合溶液中。再將10ml磷酸鹽緩沖液PBS與有機相混合，水浴式超聲處理(8min)，直至形成穩定的W/O型乳劑(水浴溫度控制在20℃)，然后于旋轉蒸發儀中減壓蒸發除去有機溶劑，達到膠態后滴加1～2ml PBS，水化，繼續短時減壓蒸發，即得淡乳黃色脂質體混懸液。
實施例6取多烯紫杉醇30mg、卵磷脂120mg、膽固醇30mg于梨形瓶中，用10ml乙醚溶解后，旋轉蒸發，減壓除去有機溶劑。真空干燥2-3天得恒重薄膜。加入20mmol/Ltris-HCl緩沖液(pH7.0，含0.15mol/L NaCl)，旋轉搖動梨形瓶，得到脂質體懸液。用氮氣沖洗后，封口室溫下平衡1天，探針超聲處理15min，然后在500kpa操作壓力下通過微流態化器混合室，經60-80沖程的微流態化處理，使脂質體粒徑減小，最后對5.4％葡萄糖溶液透析除鹽，制得多烯紫杉醇脂質體懸液，再經冷凍干燥制得凍干品。平均粒徑136±31nm，全部粒子均在300nm以下。
實施例7取實施例6中的凍干品適量，密封，于冰箱4℃放置180天，于0、1、2、3、6月重新對粒徑、包封率、滲漏率、含量等指標進行測定，評價多烯紫杉醇脂質體凍干品的穩定性。結果見表1。
表1
表1說明，多烯紫杉醇脂質體凍干品在冰箱4℃放置6個月，其粒徑、包封率、含量等質量指標基本不變，表明多烯紫杉醇脂質體凍干品穩定性好。
實施例8對實施例6中的多烯紫杉醇脂質體進行藥效學研究。
配制小鼠乳腺癌細胞EMT-6懸液，使每毫升懸液有5×107個癌細胞。取BALB/C小鼠，每組6只，每鼠皮下接種0.2ml，接種腫瘤后24小時皮下或腹腔給予多烯紫杉醇脂質體，每天一次，連續5天。陰性對照組給予等體積的滅菌生理鹽水，各組動物于接種腫瘤后第12天活殺，取腫瘤稱重后計算多烯紫杉醇脂質體對腫瘤的抑制率，抑制率％＝[(對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％。
皮下給藥和腹腔給藥多烯紫杉醇脂質體、多烯紫杉醇注射劑對小鼠乳腺癌EMT-6的作用見表2。相同給藥方式相同劑量的多烯紫杉醇脂質體與多烯紫杉醇注射液比較有更明顯的抑瘤作用，表明多烯紫杉醇脂質體具有更好的抗腫瘤效果。
表2
實施例9取實施例6中的多烯紫杉醇脂質體進行刺激性或溶血性實驗。
家兔股四頭肌注射多烯紫杉醇脂質體、多烯紫杉醇注射液，放血處死后，觀察注射部位肌肉組織變化情況。配制2％的兔紅細胞懸液，加入供試品，觀察其對紅細胞的影響。
結果表明，多烯紫杉醇脂質體的家兔肌肉刺激性反應在2級以下。多烯紫杉醇脂質體在觀察時間內無溶血凝聚現象，說明多烯紫杉醇脂質體適宜靜脈、皮下注射給藥。
實施例10取多烯紫杉醇30mg溶于10ml甲醇，卵磷脂120mg、去氧膽酸鈉40mg溶于10ml乙醇，混合溶液在旋轉蒸發器內40℃減壓除去溶媒，形成薄膜。然后加入20mmol/LTris-HCl緩沖液(pH7.5，含0.15mol/L NaCl)，超聲處理30min，制得多烯紫杉醇脂質體懸液。加入8％乳糖作支架劑，經冷凍干燥得多烯紫杉醇脂質體的凍干制劑。
多烯紫杉醇脂質體的凍干制劑臨用前只需充分水化短時振蕩，就能重新形成脂質體，無變色及沉淀。
實施例11取實施例10中的多烯紫杉醇脂質體凍干制劑溶于蒸餾水中，制成1mg/ml的溶液，在4℃，25℃和36℃放置四周，于8，12，16，20，24和28天超速離心收集沉淀，用HPLC法測定多烯紫杉醇含量，結果見表3。
表3
結果表明，多烯紫杉醇脂質體在4℃放置一個月，基本無滲漏；在室溫條件下存放兩周基本無滲漏；在35℃放置8天，濃度僅下降3％左右，放置12天，濃度變化10％，在環境溫度不高于35℃的情況下，該脂質體能保持8天以上的穩定性，表明多烯紫杉醇脂質體穩定性好。
實施例12使用實施例10中所述的制劑評價多烯紫杉醇脂質體的抑瘤效果。
給藥溶液的配制將多烯紫杉醇脂質體凍干份溶于生理鹽水中，使其終濃度為8mg/ml；泰索帝濃縮注射液用生理鹽水稀釋，使多烯紫杉醇濃度為8mg/ml；空白脂質體凍于粉溶于生理鹽水，濃度為26mg/m1；生理鹽水。
抑瘤實驗Lewis肺癌接種于40只BDF1小鼠，接種后第1，3，5，7日間隔腹腔注射4次上述溶液，第12天解剖。抑瘤作用實驗結果見表4。
表4
體內抑瘤結果表明多烯紫杉醇脂質體比多烯紫杉醇注射液相比，具有更高的抑瘤活性。
實施例13利用實施例10中所述的制劑評價多烯紫杉醇脂質體的毒性試驗。
取體重18～22g性別一致的昆明小鼠60只，隨機分成6組，每組10只，一次靜脈注射多烯紫杉醇脂質體，組間劑量按等比級數排列，比值1∶0.8觀察并記錄給藥10d內各組動物的反應和死亡率，用簡化機率單位法計算LD，其95％的可信限為多烯紫杉醇濃縮注射液(泰索帝)LD50＝105mg±31mg/kg，紫杉醇脂質體凍干粉LD50＝218mg±30mg/kg。
LD50的實驗結果表明，多烯紫杉醇脂質體與泰索帝注射液相比，毒性明顯降低。
實施例14多烯紫杉醇隱形脂質體A的制備將PEG-DSPE50mg、氫化大豆磷脂200mg、膽固醇100mg、a-生育酚20mg和多烯紫杉醇20mg溶于30ml氯仿，置梨形瓶內，在氮氣流下旋轉蒸發，減壓除去溶媒。真空于燥2～3d，得恒重薄膜。加0.02mol·L Tris-HCl緩沖液(pH7.0，含0.15mol/LNaCl)，旋轉搖動梨形瓶，得到脂質體懸液。用氮氣沖洗后，封口室溫下平衡1d，探針超聲處理15min，然后在500kPa操作壓力下通過微流態化器混合室，經60～80沖程的微流態化處理，使脂質體粒徑逐漸減小。最后對5.4％葡萄糖溶液透析除鹽，得紫杉醇隱形脂質體。再經冷凍干燥制成凍干制劑。
實施例15多烯紫杉醇免疫脂質體B的制備1.多烯紫杉醇脂質體的制備將100mg卵磷脂、100mg膽固醇、20mg雙棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-珀酰亞胺4(對馬來酰亞胺苯基)丁酸酯(DPPE-MPB)、40mg多烯紫杉醇混合溶于盛有40ml氯仿的圓底燒瓶中，旋轉蒸發器上40℃緩慢蒸干，于圓底燒瓶中緩慢加入20mmol/L Hepes緩沖液，超聲分散法室溫超聲30min，制成小單層脂質體2.抗體的修飾參考Duncan等方法，將人大腸癌單抗ND21與偶聯劑琥珀酰亞胺S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)以1∶14比例(摩爾比)室溫下反應2h。產物去乙酰化，得到活化的抗體Ab-A TA。
3.免疫脂質體的制備A b-A TA(2mg/ml)與載藥脂質體(6Cμmol/ml)在pH6.5條件下室溫反應8h，產物經SephadexG200層析分離，去除未反應的游離單抗，即得免疫脂質體B。
實施例16多烯紫杉醇磁性脂質體C的制備將卵磷脂100mg、膽固醇100mg、雙鯨蠟磷脂酸20mg、n-生育酚20mg和多烯紫杉醇20mg溶于20ml乙醚中，減壓蒸發除去有機溶劑至瓶內壁上形成一層脂質薄膜，加入含0.5％超細磁粉的緩沖液，在水溶型超聲儀上超聲至混合物形成單相體系，再減壓蒸發至凝膠形成，繼續減壓蒸發至形成水性懸濁液，充氮氣，冰浴超聲一定時間即得磁性脂質體，加入8％的乳糖作支架劑，經冷凍干燥法制備得到磁性脂質體凍干品。
權利要求
1.一種下述配方組成成分(以重量份計)的多烯紫杉醇脂質體，多烯紫杉醇0.5-10份磷脂類物質5-100份附加劑5-100份，經隱形材料修飾制成隱形多烯紫杉醇脂質體A，經同單克隆抗體偶聯制成免疫多烯紫杉醇脂質體B，經磁性材料修飾制得磁性多烯紫杉醇脂質體C。
2.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于磷脂類物質可以選自磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、天然或合成的腦磷脂、心磷脂及其混合物。
3.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于所述的磷脂類物質優選卵磷脂、大豆磷脂、腦磷脂或心磷脂。
4.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于所述的附加劑為膽固醇、維生素E、十八胺、磷酸二鯨蠟酯、表面活性劑。
5.根據權利要求4所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于所述的表面活性劑選自脫氧膽酸鹽、膽酸鹽、脫氧膽酸、膽酸、吐溫-80、牛磺膽酸鹽。
6.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于該脂質體粒徑小于1000nm。
7.如權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于可以采用下述不同方法制備1)薄膜超聲法制備，將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例溶于有機溶劑，混合溶液在旋轉蒸發器上減壓或通氮氣除去溶媒，形成薄膜，加入洗膜介質洗膜超聲處理后即得；2)注入法制備，將磷脂類物質、膽固醇溶于適量有機溶劑中制成脂質溶液，吸取該溶液緩緩注入加熱的磷酸鹽緩沖溶液中，通過通氮氣的方法或減壓蒸發去除殘留的溶媒即得；3)逆向蒸發法制備，即將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例溶于有機溶劑，于室溫攪拌下滴入水溶液，使形成穩定的O/W型乳劑，減壓蒸去有機溶劑，滴加磷酸鹽緩沖液，旋轉幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續蒸發，制得水性混懸液，即得；4)熔融法制備，即將磷脂類物質、附加劑加少量水相溶解，膽固醇、多烯紫杉醇熔融后與之混合，然后滴入65℃左右的水相溶液中保溫制得；5)冷凍干燥法制備，即將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例溶于有機溶劑中，通氮氣除去溶劑，然后懸浮在磷酸鹽緩沖液中超聲處理，真空冷凍干燥，最后加入介質重新水化即得；6)硫酸銨梯度法制備，即將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑按比例混和，用適量乙醇溶解，過濾除去不溶物，減壓蒸發過濾溶液，制備磷脂膜后，加入一定量硫酸銨溶液水化，即可制得；7)超聲分散法制備，將磷脂類物質、附加劑和多烯紫杉醇一起溶解于有機溶媒中，混和均勻后旋轉蒸發，至有機溶媒蒸發完畢，將剩下的溶液再經超聲波處理，分離即得；8)多相制備法制備，將多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑共溶于有機溶媒中，將該溶液恒溫攪拌下滴加到磷酸鹽緩沖液，再繼續攪拌一定時間，加緩沖液至全量，高壓乳勻機乳化即得。
8.根據權利要求7所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于方法1)中洗膜介質可以為Hepes緩沖液(20Mm)、磷酸鹽緩沖液、Tris-Hcl緩沖液(PH7.5，含0.15M NaCl)、含甘露醇的水溶液。
9.根據權利要求7所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于有機溶劑可以是乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、氯仿、二氯甲烷及其混合物。
10.根據權利要求7所述的多烯紫杉醇脂質體A的制備方法，其特征在于方法2)中磷酸鹽緩沖液的溫度需加熱至40-60℃。
11.根據權利要求7所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于方法8)中攪拌時可以加入高效分散劑聚乙烯吡咯烷酮。
12.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于脂質體A的制備為多烯紫杉醇、磷脂類物質、附加劑與隱形修飾材料溶于有機溶劑中，去除溶媒，形成脂質薄膜，加入洗膜介質，超聲或乳勻分散制得，其中隱形修飾材料的用量為多烯紫杉醇的0.1-100倍。
13.根據權利要求12所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于脂質體A的隱形修飾材料包括聚乙二醇、甲基聚唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇一磷脂衍生物或它們的混合物。
14.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于脂質體B用多烯紫杉醇脂質體A與活化的單克隆抗體室溫反應6-10小時偶聯制成，其中單克隆抗體為抗人體大腸癌細胞表面抗原LEA的單克隆抗體ND-1。
15.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于脂質體C用薄膜—分散法制備，即將多烯紫杉醇脂質體加入含有磁性材料的洗膜介質進行超聲或乳勻即得，其中磁性材料為超細磁粉。
16.根據權利要求7或12或14或15所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于可加入支架劑采用冷凍干燥及噴霧干燥工藝制成固體制劑。
17.根據權利要求16所述的多烯紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于支架劑選自氨基酸、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖及其混合物。
18.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體，其特征在于可進一步制備成醫用注射劑和口服制劑。
全文摘要
本發明提供了一種可用于注射或口服的多烯紫杉醇脂質體及其固體制劑。它的特點是用磷脂類物質和附加劑包合多烯紫杉醇，制得粒徑小、包封率高、穩定性好、毒副作用低的多烯紫杉醇脂質體制劑。本發明制備的多烯紫杉醇脂質體能增強對癌細胞的靶向作用，增強多烯紫杉醇對腫瘤細胞的抑殺作用，提高療效，降低其毒副作用。本發明還涉及多烯紫杉醇脂質體的多種制備方法，且工藝簡單、成本低廉，適合工業化生產。
文檔編號A61P35/00GK1931157SQ20051002963
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月14日 優先權日2005年9月14日
發明者李亞平, 陳伶俐, 顧王文 申請人:中國科學院上海藥物研究所