專利名稱：丹酚酸b在制備預防腫瘤發生的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，更具體地涉及丹酚酸B及其藥物組合物在制備預防腫瘤發生的藥物中的應用。
背景技術：
前列腺癌為美國男性最常發生的腫瘤之一，并且是美國男性的第二大癌癥死亡原因。約有1/5的美國男性在一生中被診斷出患有前列腺癌。在2004年，估計約有230,000多例的新發前列腺癌病例，約有29,900的前列腺癌死亡病例。另一方面，美國男性中病理上顯現的前列腺癌的比例更高，在50歲的男性中約34％，在80歲以上的男性中則高達70％。約有60％以上的新診斷病例在病理上不斷進展，其預后不佳。隨著社會經濟的發展，我國的腫瘤發生譜已愈來愈接近發達國家，前列腺癌發病率亦逐年升高。由于前列腺癌的發病率高、死亡數多，因此尋找預防前列腺癌的有效措施至關重要。在前列腺癌發生的過程中(包括癌前病變、癌變開始和進展)，采取適當的干預預防和中斷癌癥發生的措施，將有效地降低前列腺癌前病變的發生率和前列腺癌的發病率。目前有關前列腺癌預防的研究主要集中在化學預防和飲食預防。實踐中發現，通過藥物干預使腫瘤的生成發展延遲，可以使臨床可檢測到的前列腺癌的發生率大大降低。目前已發現多種對前列腺癌可能有預防作用的物質，其中毒副作用小的天然物質尤其受到關注，如綠茶、維生素E等。(American Cancer Society[Online].CancerFacts & Figures(2004)http//www.cancer.org/docroot/STT/stt_0.asp[accessedJuly 28，2004].)(Thompson I，et al.Chemoprevention of prostate cancer withfinasteride.Important Adv Oncol 1995；57-76.)(Nelson PS，et al.Chemoprevention for prostatic intraepithelial neoplasia.Eur Urol1996；30(2)269-278.)(Thompson IM，et al.The influence of finasteride on thedevelopment of prostate cancer.N Engl J Med 2003；349215-224.)(Nelson WG，et al.Prostate cancer.N Engl J Med 2003；349366-381.)(Adhami VM，et al.Molecular targets for green tea in prostate cancer prevention.J Nutr2003；1332417S-2424S.)(Thompson TA，et al.Androgen antagonist activity by theantioxidant moiety of vitamin E，2，2，5，7，8-pentamethyl-6-chromanol in humanprostate carcinoma cells.Molecular Cancer Therapeutics.2003；2797-803.)。
丹參(Radix Salviae Miltiorrhizae)為唇形科植物丹參的干燥根，是我國的傳統中藥，具有活血調經、祛瘀止痛、養心安神的功效。丹酚酸B是丹參的水溶性有效成分之一，其化學結構如下 其中，F為金屬陽離子。近年研究發現，水溶性成分是丹參中的重要有效成分，由于丹參酚酸難于獲得純品，而丹參素和原兒茶醛較易分離和合成，所以大多數制藥廠把丹參素和原兒茶醛作為丹參注射劑的質量控制指標。也有部分制藥廠將丹酚酸B鹽用于預防心腦血管疾病、預防老年性癡呆、治療腎衰竭、改善尿毒癥狀、抗氧化、抗血栓、抗心腦缺血、保護肝臟及調節血脂等藥物中。
在中國專利申請02136970.4“丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用”中公開了丹酚酸B在體外研究中對多種腫瘤細胞的殺傷作用和在小鼠肝癌模型中對腫瘤的治療作用。
在研究某種藥物對腫瘤的治療和預防作用中，其研究方法和評判標準是不同的。研究藥物對腫瘤治療作用的動物實驗，是通過對正常動物使用化學誘導劑或直接接種腫瘤進行腫瘤造模，造模成功后，對患有腫瘤的動物給藥，經過一定的給藥期后，觀察藥物對腫瘤的治療效果，觀察指標為腫瘤生長的抑制(包括生長的減緩、停止或消退)和動物患病體征的改善。研究藥物對腫瘤預防作用的動物實驗，是對正常的動物給藥，在長期給藥的同時使用化學誘導劑誘導腫瘤的發生，未給藥的對照組造模成功后，停止化學誘導，觀察藥物對腫瘤的預防效果，觀察指標為動物的腫瘤發生率和癌前病變發生率。通常，在腫瘤預防研究中的給藥期較腫瘤治療研究中的時間要長。
由于通常對腫瘤細胞具有較強殺傷作用的藥物同時對正常組織細胞也會產生損傷，因此不能長期用藥，而且目前還沒有藥物能夠徹底有效地治愈腫瘤，僅能在一定程度上抑制腫瘤的生長和改善患者的癥狀，故多數可用于治療腫瘤的藥物并不能夠預防腫瘤。
人類有史以來有三次龐大的科研計劃，分別是阿波羅登月計劃、攻克癌癥計劃及人類基因組計劃，其中第1、3項計劃都順利完成，唯有針對癌癥的計劃可以說是久攻不克，投入的大量金錢卻見不到明確的回報。因此，近年來人們在對抗癌癥的觀念上有了根本的改變，從以前的重治療改為現在的重預防。
現代的對抗癌癥的觀念是“目標和控制”(Target and control)，其策略是用遺傳學和流行病學的知識和技術跟蹤易感人群，用化學預防(Chemoprevention)的方法調整和逆轉癌癥的病變行為，從而降低癌癥的發病率和死亡率。2002年，美國國立腫瘤研究所發布了腫瘤研究方向和2005年度預算提案，提案將癌癥的預防、癌癥的早期診斷，以及延緩甚至逆轉致癌進程等方面，列為今后腫瘤研究的首要方向(顧心彬，等.美國抗癌新策略化學預防.科學2004；56(3)8-11)。
癌細胞與正常細胞相比有兩大特點失去控制的細胞增值能力；浸潤臨近組織和轉移到其它器官的能力。從細胞遺傳學上分析，絕大多數的癌癥起源于一個單獨的變異細胞。這個有遺傳能力的變異癌細胞經歷多階段和長時間的增值過程后，才演變成能夠致命的癌癥。以上皮細胞癌(Epithelial malignancy)為例，人體80％以上的惡性腫瘤，包括肺、腸、乳腺、前列腺、胰腺和卵巢等器官的惡性腫瘤，都發生于上皮細胞。50％以上的癌癥病人死于上皮細胞癌。一般情況下，臨床中在X射線下觀察到的上皮細胞癌實體，至少由一億個上皮細胞聚集而成。在人體內，從一個變異的上皮細胞增值到一億個上皮癌細胞，需要十年甚至更長的時間。然而，從一億個上皮癌細胞繼續增值到一百億個上皮癌細胞，可能只需要幾個月的時間。而一百億個上皮癌細胞足以造成患者全身衰竭而死亡。
斯波恩(M.Sporn)博士是一位公認的現代化學防癌的開創人，他在1976年就提出，控制癌癥的目標不應該是在癌癥形成后的階段，而應該是在致癌的前期和癌變的過程中，預防變異的細胞轉化為有浸潤和轉移能力的癌細胞。化學防癌的概念是采用藥理學的方法來控制和逆轉癌細胞的演變過程，從而達到控制癌癥的目的。大量的體內和體外實驗證明，50-80％的癌癥是可以預防的，化學預防是一種行之有效的控制癌癥的方法。這種控制癌癥的效果可能不是表現在真正消滅或者根除癌細胞，而更多的是表現在延緩癌癥的發生。根據流行病學統計的結果，癌癥多發于55歲以上的人群。這種延緩癌癥發生的效果對年長者來說尤為重要。它可以為年長者在其它能夠危及生命的疾病(如心血管疾病)到來之前，提供較好的生活質量。化學防癌的目標是發展天然的和合成的化學物質用于預防癌癥，而不是用傳統概念中的化療藥物去治療已經存在的癌癥。這樣一類的化學防癌劑，必須可長期給藥，具備安全和有效的特點，并具備簡便的給藥途徑。本發明旨在滿足這一需求。
此外，前列腺癌的癌前病變是指可能發展成為前列腺癌的增生性病變。目前較為公認的前列腺癌前病變有兩類前列腺上皮內瘤(PIN)，是指前列腺腺泡和導管上皮的異常增生，也稱為前列腺上皮原位癌。另一個是非典型性腺瘤樣增生(AAH)，是指有新的腺體形成，是腺體異常增生的結果。
(1)前列腺上皮內瘤(PIN)PIN發生的高峰年齡較前列腺癌為早，若以前列腺的分區來評定PIN的發生，則移行區PIN發生率最少為2.6％，外周區則高達68.80％，這與前列腺癌的發生相似，我國前列腺PIN的發生率雖低于西方國家，但亦有逐年遞增的趨勢。
(2)非典型性腺瘤樣增生(AAH)AAH的發生率比PIN低，因良性前列腺增生(BPH)而行經尿道電切的標本中，3.7-19.60％的病例可檢出AAH，而在20-40歲年齡組的尸檢前列腺中，AAH的檢出率為15-24％，其中有前列腺癌的尸檢前列腺中，AAH的檢出率高達31％。
前列腺癌前病變的存在增加了患前列腺癌的危險，其唯一的診斷途徑為前列腺活組織病理檢查。由于診斷措施的限制，要做到“早發現”十分困難，因此“早預防”是控制和延緩前列腺癌發生的最有效的措施。
本領域迫切需要一種可長期使用、無毒副作用且安全有效的預防腫瘤發生的藥物。
發明內容
本發明的目的就是提供一種可長期使用、無毒副作用且安全有效的預防腫瘤發生的藥物，所述的藥物含有丹酚酸B及其鹽類作為預防腫瘤發生的主要活性成分。
在本發明的第一方面，提供了丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，它用于制備預防腫瘤發生的藥物。
在另一優選例中，所述的丹酚酸B的鹽中，其陽離子為鎂離子、鈣離子、鈉離子、鉀離子或鐵離子。
在另一優選例中，所述的丹酚酸B的鹽中，其陽離子為鎂離子。
在另一優選例中，所述的腫瘤為前列腺癌、肝癌。
在另一優選例中，所述藥物的劑型是片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒劑、懸浮液、糖漿、酏劑、注射劑、噴霧劑或栓劑。
在另一優選例中，所述藥物中含有0.1-99.9wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的第二方面，提供了丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，它用于制備預防前列腺癌前病變發生的藥物，其中所述的癌前病變是前列腺上皮內瘤和非典型性腺瘤樣增生。
在另一優選例中，所述藥物中含有0.1-99.9wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的第三方面，提供了丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，它用于制備預防腫瘤發生的保健食品。
在另一優選例中，所述保健食品中含有0.01-99wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
具體實施例方式
本發明人經過廣泛而深入的研究，發現丹參的水溶性成分丹酚酸B可有效地預防腫瘤的發生，具有極其優異的綜合性能，即可長期使用、無毒副作用且安全有效。在此基礎上完成了本發明。
活性成分如本文所用，術語“本發明化合物”或“活性成分”指丹酚酸B及其鹽類。丹酚酸B的鹽類中，其陽離子可以為鎂離子、鐵離子、鈉離子和鉀離子，優選的為鎂離子。丹酚酸B可以是從中藥丹參中提取的水溶性單體化合物，也可以是含丹酚酸B的提取物。丹酚酸B可以是從天然植物中提取的丹酚酸B，也可以是用化學合成的丹酚酸B。
本發明中所用丹酚酸B是由中藥丹參中提取，具體提取方法如下丹參藥材5kg，粉碎至20目，用總量為20L的80％乙醇于20℃浸泡12個小時后，放出浸泡液。減壓蒸去溶劑至無醇味，4000rpm離心去除沉淀，采用AB-8型大孔吸附樹脂層析，以水洗脫去除雜質，再用30％乙醇洗脫，回收乙醇，冷凍干燥。所得產物用水溶解后，用聚酰胺層析，以水洗脫去雜質，再用10％乙醇洗脫得到含丹酚酸B鎂鹽的組分，減壓濃縮，冷凍干燥。高效液相色譜儀測定丹酚酸B鎂鹽的含量為90.8％。經脫鹽處理后得到丹酚酸B。
本發明中所用的丹酚酸B可以由藥學上或生理學可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鐵、鈣或鎂)形成的鹽，優選的為與鎂離子形成的鹽；與如下無機酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸和磷酸；與有機酸形成的鹽如乙酸、草酸、丁二酸和馬來酸。
藥物組合物本發明還包括含有丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。本發明的丹酚酸B及其藥物組合物可用于預防腫瘤，即給哺乳動物施用安全有效量的丹酚酸B。
當丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽用于預防腫瘤時，它可與一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，從而形成藥物組合物。
固態載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、2，6-二叔丁基對甲酚(BHT)和叔丁基羥基茴香醚(BHA)。
通常，本發明的藥物組合物包括以下劑型口服給藥的片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒或懸浮液(混懸劑)(含有如約0.05-5％懸浮劑(助溶劑))、糖漿(含有如約10-50％糖)和酏劑(含有約20-50％乙醇)，直腸或陰道給藥的栓劑，或者以無菌可注射溶液或混懸劑形式(在等滲介質中含有約0.05-5％助溶劑)進行非腸胃給藥。這些藥物制劑通常可含有與載體混合的約0.1-99.9wt％，較佳地2.5-90wt％，更佳地5％-60wt％(重量)的活性成分(丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽)，按組合物的總重量計。
本發明所用的丹酚酸B可通過口服、靜脈內、肌內或皮下途徑給藥。優選口服給藥方式。
本發明所用的丹酚酸B可腸胃外或腹腔內給藥。也可在甘油、液體、聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散液。在常規儲存和使用條件下，這些制劑中含有防腐劑以防止微生物生長。
適應于注射的藥物形式包括無菌水溶液或分散液和無菌粉(用于臨時制備無菌注射溶液或分散液)。在所有情況中，這些形式必須是無菌的且必須是流體以易于注射器排出流體。在制造和儲存條件下必須是穩定的，且必須能防止微生物(如細菌和真菌)的污染影響。載體可以是溶劑或分散介質，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液態聚乙二醇)、它們的適當混合物和植物油。
在使用本發明所述的丹酚酸B時，還可與其它預防腫瘤的手段或其它藥物(如托瑞米芬)聯用。
所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待預防的疾病的嚴重程度而變化。然而，通常當本發明化合物每天以約0.05-600mg/kg動物體重(較佳地0.1-500mg/kg體重，更佳地0.5-300mg/kg體重給藥)的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以1-4次的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為l-1000mg或更高，較佳地5-600mg。適用于內服的劑量形式，包含與固態或液態藥學上可接受的載體混合的約0.5-600mg的活性化合物。可調節此劑量方案以提供最佳治療應答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或將劑量按比例地減少。
從易于制備和給藥的立場看，優選的藥物組合物是固態或液態組合物。丹酚酸B的口服給藥是優選的。
保健食品或食品補充劑除了制備藥物組合物用于預防腫瘤之外，在本發明中，還可將丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽或提取物用于制備保健食品或飲食補充劑(或食品添加劑)。
所謂飲食補充劑(dietary supplement)是利用植物制成的制品，它也與化學藥物一樣經過嚴格的科學和臨床研究，一般講比較廉價、安全，治療慢性病比西藥更有效，而且在美國不需經FDA批準就能上市。
在本發明中，保健食品和飲食補充劑可互換使用，它們含有安全有效量(如0.01-99wt％)的丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽或提取物和藥學上可接受(或保健食品上可接受)的載體。
本發明的保健食品或飲食補充劑可與藥物組合物一樣含有相同含量的丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽或提取物。通常，保健食品或飲食補充劑中丹酚酸B的含量(純度)可略低一些，例如含0.01-50wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
本發明的保健食品或飲食補充劑，可以通過常規方法制成任何常規的制劑形式，優選的是片劑、口服液、顆粒劑和膠囊制劑。
本發明的主要優點在于1)可有效地預防腫瘤(如前列腺癌和肝癌)的發生，降低前列腺癌前病變、前列腺癌和肝癌的發生率；2)丹酚酸B為天然植物藥丹參的水溶性成份，為中藥中早已廣泛使用的活性成分，安全性好，可長期使用，對人體無毒副作用；3)口服給藥即可達到良好的預防腫瘤的效果，使用方便。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1丹酚酸B及其鎂鹽對大鼠前列腺癌的預防作用實驗觀察1.實驗材料(1)實驗動物F344雄性大鼠，5周齡，體重約90克；(2)前列腺癌化學誘導劑3，2’-二甲基-4-氨基苯胺(3，2’-dimethyl-4-aminobiphenyl，DMAB)(購自日本Nard研究院)；(3)實驗藥物丹酚酸B，丹酚酸B鎂鹽；2.實驗分組實驗動物共分10組。
(1)空白對照組(正常飲食，無DMAB化學誘導)1組，6只/組；(2)丹酚酸B對照組(丹酚酸B混合飼料，無DMAB化學誘導)1組(200mg/kg/day劑量組)，6只/組；
(3)丹酚酸B鎂鹽對照組(丹酚酸B鎂鹽混合飼料，無DMAB化學誘導)1組(200mg/kg/day劑量組)，6只/組；(4)DMAB模型對照組(正常飼料，有DMAB化學誘導)1組，30只/組；(5)丹酚酸B實驗組(丹酚酸B混合飼料，有DMAB化學誘導)3組(50，100，200mg/kg/day劑量組)，30只/組；(6)丹酚酸B鎂鹽實驗組(丹酚酸B鎂鹽混合飼料，有DMAB化學誘導)3組(50，100，200mg/kg/day劑量組)，30只/組。
3.給藥方法依據不同給藥劑量制備丹酚酸B或其鎂鹽的混合飼料，丹酚酸B或其鎂鹽在各劑量組的飼料中的含量如下(1)丹酚酸B混合飼料(50mg/kg/day)丹酚酸B含量為0.06％；(2)丹酚酸B混合飼料(100mg/kg/day)丹酚酸B含量為0.12％；(3)丹酚酸B混合飼料(200mg/kg/day)丹酚酸B含量為0.24％；(4)丹酚酸B鎂鹽混合飼料(50mg/kg/day)丹酚酸B鎂鹽含量為0.06％；(5)丹酚酸B鎂鹽混合飼料(100mg/kg/day)丹酚酸B鎂鹽含量為0.12％；(6)丹酚酸B鎂鹽混合飼料(200mg/kg/day)丹酚酸B鎂鹽含量為0.24％；將混合飼料于造模前一周開始給予大鼠，任其隨意進食，直至實驗結束時終止。
4.實驗周期自丹酚酸B或其鎂鹽給藥開始至實驗結束共60周。
5.實驗步驟(1)大鼠購進后飼養一周，適應環境。隨后進行分組，開始給丹酚酸B對照組和丹酚酸B實驗組大鼠喂食丹酚酸B混合飼料，給丹酚酸B鎂鹽對照組和丹酚酸B鎂鹽實驗組大鼠喂食丹酚酸B鎂鹽混合飼料，空白對照組和DMAB模型對照組大鼠喂食正常飼料，直至實驗結束，每周記錄各組大鼠的進食量；(2)喂食丹酚酸B或其鎂鹽的混合飼料一周后，丹酚酸B實驗組、丹酚酸B鎂鹽實驗組和DMAB模型對照組大鼠皮下注射DMAB(以玉米油為溶劑)，劑量為50mg/kg，每隔2周注射一次，共注射10次，空白對照組、丹酚酸B對照組和丹酚酸B鎂鹽對照組大鼠皮下注射不含DMAB的賦形劑(玉米油)，每隔2周注射一次，共注射10次；(3)實驗中每2周測定大鼠體重一次。實驗中每天觀察大鼠狀態一次，對于在實驗結束前即已瀕臨死亡的大鼠進行處死并按步驟(4)進行尸檢和組織學檢查；(4)丹酚酸B或其鎂鹽給藥喂食60周后。停止給藥，處死所有大鼠，肉眼觀察主要臟器器官，以確定有無異常變化，隨后進行尸檢和組織學檢查。尸檢時，取出大鼠前列腺及精囊，用10％的福爾馬林液進行固定，石蠟包埋，將腹側前列腺按矢狀方向、背外側前列腺按橫截面方向、前側前列腺及精囊按縱截面方向進行切片，蘇木精和曙紅染色后進行組織學檢查。
6.實驗結果(1)體重檢查對不同周記錄的各組大鼠平均體重進行統計，結果見表1。
表1.各組大鼠的體重變化
(2)組織學檢查對各組前列腺癌前病變和前列腺癌的發生率進行統計，結果見表2。
表2.丹酚酸B及其鎂鹽對化學致癌劑誘導的大鼠前列腺癌的預防作用
a)有效觀察動物總數各組排除實驗過程中因非腫瘤原因死亡的動物后的總數；b)癌前病變包括前列腺上皮內瘤(PIN)和非典型性腺瘤樣增生(AAH)；c)圓括號內表示各組中前列腺癌前病變或前列腺癌的發生率(單位％)；7.結果分析結果表明丹酚酸B和丹酚酸B鎂鹽實驗組的前列腺癌前病變和前列腺癌發病率顯著低于DMAB模型對照組，DMAB模型對照組的前列腺癌前病變和前列腺癌發病率分別為91％和61％，經丹酚酸B給藥后可分別將至46％和35％，經丹酚酸B鎂鹽給藥后可分別降至50％和37％。丹酚酸B或其鎂鹽長期給藥后的大鼠無明顯的體重減輕等不良反應。
以上說明丹酚酸B及其鎂鹽對前列腺癌有良好的預防作用，且可高劑量長期給藥。
實施例2丹酚酸B及其鎂鹽對大鼠肝癌的預防作用實驗觀察1.實驗材料(1)實驗動物Wistar雄性大鼠，體重約90g；(2)肝癌化學誘導劑二乙基亞硝胺(DENA)；(3)實驗藥物丹酚酸B，丹酚酸B鎂鹽；2.實驗分組實驗動物共分10組。
(1)空白對照組(正常飲食，無DENA化學誘導)1組，6只/組；(2)丹酚酸B對照組(丹酚酸B混合飼料，無DENA化學誘導)1組(200mg/kg/day劑量組)，6只/組；(3)丹酚酸B鎂鹽對照組(丹酚酸B鎂鹽混合飼料，無DENA化學誘導)1組(200mg/kg/day劑量組)，6只/組；(4)DENA模型對照組(正常飼料，有DENA化學誘導)1組，10只/組；(5)丹酚酸B實驗組(丹酚酸B混合飼料，有DENA化學誘導)3組(50，100，200mg/kg/day劑量組)，10只/組；(6)丹酚酸B鎂鹽實驗組(丹酚酸B鎂鹽混合飼料，有DENA化學誘導)3組(50，100，200mg/kg/day劑量組)，10只/組。
3.給藥方法丹酚酸B或其鎂鹽的混合飼料的制備方法同實施例1，將混合飼料給予大鼠，任其隨意進食，直至實驗結束時終止。
4.實驗周期自丹酚酸B或其鎂鹽給藥開始至實驗結束共16周。
5.實驗步驟(1)大鼠購進后飼養一周，適應環境。隨后進行分組，開始給丹酚酸B對照組和丹酚酸B實驗組大鼠喂以丹酚酸B混合飼料12周，給丹酚酸B鎂鹽對照組和丹酚酸B鎂鹽實驗組大鼠喂以丹酚酸B鎂鹽混合飼料12周，空白對照組和DENA模型對照組大鼠給予正常飼料，直至實驗結束，每周記錄各組大鼠的進食量；(2)開始喂食丹酚酸B或其鎂鹽的混合飼料的同時，以0.01％DENA水溶液作為飲水源給予丹酚酸B實驗組、丹酚酸B鎂鹽實驗組和DENA模型對照組大鼠，任其飲用，共12周。空白對照組、丹酚酸B對照組和丹酚酸B鎂鹽對照組大鼠給予正常飲水，直至實驗結束；(3)實驗過程中，每周測定大鼠體重一次，每天觀察大鼠狀態一次，對于在實驗結束前即已瀕臨死亡的大鼠進行處死并按步驟(4)進行尸檢和組織學檢查；(4)停止DENA飲水和給藥處理(丹酚酸B或其鎂鹽)4周后，稱量體重，斷頭采血，收集血清，用自動生化分析儀(日本島津)測定丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)、堿性磷酸酶(ALP)的含量。解剖腹腔，取出肝臟，稱肝重，記錄肝表面癌結節數，取右葉肝組織，福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片，用蘇木精和曙紅染色后進行常規組織學檢查。
6.實驗結果(1)丹酚酸B或其鎂鹽對大鼠肝癌結節、體重、肝重、肝/體重比的影響結果見表3。
表3.丹酚酸B或其鎂鹽對大鼠肝癌結節、體重、肝重、肝/體重比的影響
(2)丹酚酸B或其鎂鹽對大鼠血清中ALT、γ-GT、ALP的影響結果見表4。
表4.丹酚酸B或其鎂鹽對大鼠血清中ALT、γ-GT、ALP的影響
7.結果分析實驗結束后處死大鼠后，經大體觀察和組織學觀察，DENA模型對照組的肝癌發病率為100％。丹酚酸B實驗組和丹酚酸B鎂鹽實驗組肝表面癌結節數明顯低于DENA模型對照組，6個實驗組大鼠體重均明顯高于DENA模型對照組，肝臟重量和肝/體重比明顯低于DENA模型對照組。6個實驗組大鼠血清中的ALT、γ-GT和ALP均明顯低于DENA模型對照組。
丹酚酸B對照組和丹酚酸B鎂鹽對照組高劑量長期給藥后的大鼠的各項觀察指標與空白對照組大鼠近似。
以上說明丹酚酸B及其鎂鹽對肝癌有良好的預防作用，且可高劑量長期給藥。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
權利要求
1.丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，其特征在于，用于制備預防腫瘤發生的藥物。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的丹酚酸B的鹽中，其陽離子為鎂離子、鈣離子、鈉離子、鉀離子或鐵離子。
3.如權利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的丹酚酸B的鹽中，其陽離子為鎂離子。
4.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤為前列腺癌、肝癌。
5.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物的劑型是片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒劑、懸浮液、糖漿、酏劑、注射劑、噴霧劑或栓劑。
6.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物中含有0.1-99.9wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
7.丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，其特征在于，用于制備預防前列腺癌前病變發生的藥物，其中所述的癌前病變是前列腺上皮內瘤和非典型性腺瘤樣增生。
8.如權利要求7所述的用途，其特征在于，所述藥物中含有0.1-99.9wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
9.丹酚酸B及其藥學上可接受的鹽的用途，其特征在于，用于制備預防腫瘤發生的保健食品。
10.如權利要求9所述的用途，其特征在于，所述保健食品中含有0.01-99wt％丹酚酸B或其藥學上可接受的鹽。
全文摘要
本發明提供了丹酚酸B的新用途，即丹酚酸B在制備預防腫瘤發生的藥物中的應用。動物體內實驗證明其具有預防腫瘤發生的作用。本發明所述的制備預防腫瘤發生的藥物的劑型可以為任何一種藥劑學上所述的劑型，可以為片劑、膠囊、口服液、注射劑、噴霧劑或栓劑。
文檔編號A61K9/00GK1872043SQ20051002645
公開日2006年12月6日 申請日期2005年6月3日 優先權日2005年6月3日
發明者謝天培, 戈萌, 季紅光, 朱洪莉 申請人:上海天甲生物醫藥有限公司