專利名稱：小檗胺衍生物ebb在抑制人體腫瘤細胞侵襲轉移的藥物應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及小檗胺衍生物EBB在抑制人體腫瘤細胞侵襲轉移的藥物應用，這類物質通過保護基底膜不受破壞而抑制腫瘤細胞的轉移。
背景技術：
腫瘤轉移是抗癌治療失敗和患者死亡的主要原因。據臨床統計，約有80％以上的腫瘤患者死于腫瘤的侵襲與轉移，故此方面的研究一直受到人們特別的的關注。腫瘤侵襲和轉移是一個主動過程，Litta曾經把這一過程概括為三個步驟(1)腫瘤細胞與細胞外基質成分粘附；(2)腫瘤細胞釋放或誘導釋放蛋白水解酶，降解細胞外基質；(3)降解區域腫瘤細胞在趨化因子引導下遷移。完善的細胞外基質和基底膜可以限制腫瘤細胞的侵襲和轉移(Liotta LA.Tumor invasion andmetastases-role of the extracellular-matrixRhoads Memorial Awardlecture.Cancer Res，1986，46(1)1-7.)。
在組織學上，基底膜完整性的破壞被認為是惡性腫瘤侵襲開始的一個標志。腫瘤細胞的生物學性狀有別于正常細胞，研究這些細胞及其所依賴的細胞外環境中各種不同類型分子與腫瘤間質之間的相互關系，發現了許多新的細胞粘附分子和細胞移動分子及各種類型的降解酶。
細胞外基質和基底膜重塑是癌細胞侵襲轉移過程中的關鍵環節，需借助于蛋白降解酶的表達和激活。腫瘤細胞合成及分泌大量基質降解酶，降解細胞外基質是腫瘤細胞侵襲、轉移的重要步驟。腫瘤細胞侵襲與轉移的成功在很大程度上，正是依賴于這些酶降解了一系列的組織屏障(屏障的主要成分各型膠原、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈力蛋白及蛋白多糖等)，可依據這些酶底物成分的理化、生物學特點將降解酶分類為金屬蛋白酶類、絲氨酸蛋白類、巰基蛋白酶類、酸性蛋白酶類等。也可以分為蛋白酶類和糖苷酶類。前者主要降解細胞外基質中的蛋白成分，如IV型膠原，層粘連蛋白及蛋白聚糖中的核心蛋白部分，后者主要降解其中的糖蛋白及蛋白聚糖中的多糖鏈。現已識別的蛋白酶類有四種絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)。它們能夠降解基質成分，并具有不同程度的特異性。基質金屬蛋白酶是一組重要的細胞外基質降解酶，它通過對細胞外基質中不同成分的降解，在腫瘤侵襲轉移中起關鍵性作用。
人們發現MMPs在對胞外基質有效成分降解的過程中起著關鍵的作用，對金屬蛋白酶類(matrix metalloproteinases，MMPs)及其組織抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)的研究最多，目前已發現的MMPs有25種，分為膜型和分泌型。TIMPs的功能主要是天然地抑制MMPs，在調節細胞外基質的代謝中起重要的作用。兩者表達水平的動態平衡關系決定了細胞外基質的降解程度，繼而也決定了腫瘤的侵襲與轉移。其作用方式較為復雜，大多數情形下以1∶1的比例二者結合成復合物，使MMPs活性喪失(Nelson AR，FingletonB，Rothenberg ML，et al.Matrix metalloproteinasebiologic activity andclinical implication[J].J Clin Oncol，2000，18(5)1135～11491)。越來越多的研究表明，惡性表型和侵襲轉移表型的細胞均高表達MMPs水平。在形成細胞外基質的兩大部分，即基底膜和間質中，基底膜構成一道阻滯屏障，該屏障以基膜膠原即IV型膠原為主要成分，故對其降解是細胞侵襲與轉移的關鍵步驟，因此IV型膠原酶(MMP-2，MMP-9)被研究得最多。不同種類的腫瘤如乳腺癌其惡性程度與MMP-2，MMP-9過多表達呈正相關(Hanemaaier R，Verheijen J H，Mayuire TM，et al.Increasedgelatinase-A and gelatinase-B activities in mallignant vs benignbreast tumors[J].Int J Cancer，2000，86204～207)。許多研究發現，MMP-2、MMP-9與TIMPs特別是TIMP-1、-2相互作用的結果與腫瘤細胞侵襲與轉移有相關性，MMP-2/TIMP-2比值甚至作為一些腫瘤惡性程度及預后判斷的一項指標。Still等在比較前列腺良性和惡性腫瘤的研究中發現，正常或良性前列腺疾病MMP-2/TIMP-2比值約在1左右，惡性腫瘤或預后不良疾病MMP-2/TIMP-2比值多大于1(StillK，Robson CN，Autzen P，et al.Localization and quantification of mRNAfor matrix metalloproteinase-2(MMP-2)and tisue inhibitor of matrixmetalloproteinase22(TIMP-2)in human benign and malignant protatictissue[J].Prostate，2000，42(1)18～25)。Gong等研究了MMP-2，MMP-9與TIMP-1表達在腫瘤過程和惡性預后中的關系，發現MMP-2，MMP-9/TIMP-1可能成為腫瘤臨床研判的一項新的指標(Gong YI，Xu GM，Huang WD，et al.Expression of natrix metalloproteinases and thetissue inhibitors of metalloproteinases and their local invasiveness andmetastasis in Chinese human pancreatic cancer[J].J SurgOncol，2000，73(2)95～99)。目前，在IV型膠原酶特別是MMP-2的研究中，除發現與TIMP-2關系密切外，還發現膜型基質金屬蛋白酶(MT1-MMP)參與活化MMP-2，使基底膜成分降解增加，繼而引發細胞侵襲與轉移(Dalberg K，Eriksson E，Enberg U，et al.Gelatinase A，membranetype 1 matrix metalloproteinase，and extracellular matrixmetalloproteinase inducer mRNA expressioncorrelationwith invasivegrowth of breast cancer[J].World J Surg，2000，24(3)334～340)。MMPs的抑制可能在兩個層次上，一是在基質中不能被轉化為活性狀態，二是其活性被體內天然的組織金屬蛋白酶抑制因子(tissueinhibitor of metalloproteinase，TIMPs)通過與活性形式結合的方式而抑制(Yoshimoto M，Itoh F，Yamamoto H，et al.Expression ofMMP-7(PUMP-1)mRNA inhuman colorectal cancers.Int JCancer，1993，19；54(4)614-618.)。Koshiba等利用明膠酶圖(Gelatinzymograph)檢測了13例正常胰腺組織、14例慢性胰腺炎組織和33例胰腺癌組織中MMP-2的潛伏和激活的形式，并用Western blot分析進一步證實了這種結果。結果顯示在所有的胰腺癌、慢性胰腺炎和正常組織中都檢測到了MMP-2的潛伏形式，胰腺癌中MMP-2活性形式在所有組織中全部表達(33/33)，其激活率明顯高于慢性胰腺炎和正常組織中的激活率。pT3期腫瘤中的激活率顯著高于pT1期腫瘤。在胰腺癌組織中那些有局部淋巴結轉移和遠處轉移的組織中MMP-2的激活率也顯著高于沒有轉移的組織。在6個月內復發的病人MMP-2的激活率也顯著高于沒有轉移的組織。在6個月內復發的病人MMP-2的活化率顯著高于6個月內沒有復發的病人。結果提示MMP-2的激活在胰腺癌侵襲和轉移中起了重要作用(Koshiba T，Hosotani R，Wada M，et al.Involvement of matrix metallo-proteinase-2activity in vasion andmetastasis of pancreatic carcino-ma.Cancer，1998，15；82(4)642-650.)。
TIMP-2過度表達，能抑制轉移性ras轉化小鼠胚胎成纖維細胞裸鼠靜脈注射后肺轉移灶的形成，以及體內腫瘤的生長速度和癌細胞的浸潤特性(Delercd YA，Perez N，Shimada H，et al.Inhibition of invasionand metastasis in cells tansfected with a inhibitor ofmetalloproteinases.Can-cer Res，1992，52701-708.)。
體外實驗結果顯示，ras基因誘導的惡性腫瘤細胞株的MMP-2表達增加，激活MMP-2的單克隆抗體能促進A2085細胞株的侵襲能力，而抑制MMP-2的單抗則使A2085細胞株穿透重組基底膜的能力明顯減弱。
針對以上侵襲轉移機制，人們正致力于研究靶點新穎、作用有效的抗腫瘤侵襲和轉移的藥物，如抑制粘附的抗腫瘤侵襲和轉移藥物、抑制基質金屬蛋白酶的抗腫瘤侵襲和轉移藥物、抑制血管生成的抗腫瘤侵襲和轉移藥物、干預信號傳導的抗腫瘤侵襲和轉移藥物等。
鈣調素拮抗劑是一類以鈣調素(calmodulin，CaM)為靶點的藥物，它們的藥理作用非常廣泛。常見的有抗精神病類藥，如三氟拉嗪(TFP)，氯丙嗪；肌肉松弛類藥物，如w-7及其類似物；鈣拮抗劑，如維拉帕米。鈣調素拮抗劑的靶點鈣調素是細胞內Ca2+信號傳導途徑中的主要信號傳導分子，參與并調節細胞的增殖、分化、運動等基本代謝過程，已成為一種潛在的腫瘤化療靶點(Hait WN，Lazo Js，et al.Calmodulina potential target for cancer chemotherapeutic agents.[J].JClin Oncol，1986 Jun；4(6)994-1012)。
EBB是國內首先合成的小檗胺衍生物，為一種以鈣調素為靶點的鈣調素拮抗劑。鈣調素拮抗劑的基本結構骨架為 小檗胺和它的衍生物EBB的結構式為R＝-CH2CH2CH2CH2-OCH2CH3小檗胺 EBB先前研究表明，EBB在體內外均顯示出對腫瘤細胞增殖的抑制作用(LIU Jiewen，QI Shuling，ZHU Huifang，et al.The effect of calmodulin antagonistberbamine derivative-EBB on hepatoma in vitro and in vivo.Chinese Medical Journal2002，115(5)759-762.)及耐藥逆轉作用(齊淑玲，劉杰文，付津等，鈣調素拮抗劑EBB逆轉K562/VCR細胞系多藥耐藥性的研究，中國實驗血液學雜志，1996年03期)對常用化療抗癌藥有協同效應。目前關于鈣調素拮抗劑小檗胺衍生物EBB抑制腫瘤細胞侵襲和轉移作用的研究尚未見到報道。
發明內容
本發明的目的在于公開小檗胺及其衍生物EBB對抑制人體腫瘤細胞侵襲轉移的藥物應用。這種藥物通過保護基底膜不受破壞而抑制腫瘤細胞的侵襲轉移，具有降低MMP-2及MMP-9表達，同時增強TIMP表達，從而提高TIMP/MMP比例的顯著效果。
本發明是利用人纖維瘤細胞系HT1080、人卵巢癌細胞系ES-2和SKOV3、人黑色素瘤細胞系M21、人肺癌細胞系BE-1等人類腫瘤高轉移細胞系進行小檗胺衍生物EBB抗腫瘤侵襲和轉移研究所得出的結論，所述人類腫瘤高轉移細胞系的MMP-2和MMP-9表達高于正常細胞(Kanamori Y，Matsushima M，Minaguchi T.Cancer Res.1999，59(17)4225-4227)。
目前已知腫瘤細胞表面可以表達很多黏附分子，與腫瘤轉移密切相關的有整合素，如CD44等等，其中整合素又分很多亞族，如α2β1是一種膠原的受體，與腫瘤轉移有關。Eguchi等用一種強蛋白激酶C的激動劑TPA預先刺激黑色素瘤細胞上α2β1整合素的表達，結果發現與I型膠原黏附的細胞數增加，這種現象能夠被鈣調素拮抗劑W-7和抗α2抗體所抑制，卻不能被蛋白激酶C抑制劑如H-7，calphostin阻斷。很顯然這種黑色素瘤細胞與I型膠原黏附能力增強與α2β1整合素的表達增加及CaM激酶的激活有關，而并非由于PKC的激活。鈣調素拮抗劑則恰好能抑制CaM激酶的激活，從而削弱α2β1整合素的黏附能力，達到抑制轉移的目的(Eguchi H，Horikoshi T et al.The expression of intergin alpha 2 beta 1 and attachment to type I collagenof melanoma cells are preferentially induced by tumor promoter，TPA(12-0-tetradecanoyl phorbol-13-acetate).[J].Br J Dermatol.1996Jan；134(1)33-9)。此外，尿激酶型血纖維蛋白溶解酶原激動劑(urokinase-type plasminogen activator，uPA)、基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs)是細胞外基質(extracellular matrix，ECM)降解過程中主要涉及的兩種酶類。Ca2+離子是調節細胞生長和蛋白酶產生信號途徑中的主要輔助因子Farias等在體外證實了鈣拮抗劑維拉帕米可劑量依賴性地刺激uPA、MMP-9產生，并在BALB/c小鼠自發轉移模型中得到了51.3％的轉移抑制率(Farias EF，Aguirre GhisoJA，et al.Verapamil inhibits tumor protease production，local invasion andmetastasis development in murine caricinoma cells.[J].Int J Cancer.1998Dec 9；78(6)727-34)。趙環宇等用Lewis肺癌細胞種植于C57BL/6J小鼠腹股溝皮下，觀察自發性肺轉移能力，同樣也證實了不同劑量的維拉帕米均能顯著抑制Lewis肺癌細胞自發性肺轉移，隨著劑量的增加，肺轉移抑制率由43.9％上升到85.9％。已知Lewis肺癌為自發性肺內未分化上皮樣癌，常通過誘導血小板聚集發生血道轉移，研究也證實了不同濃度的維拉帕米均能抑制Lewis肺癌誘導的血小板聚集，隨著藥物濃度增加，血小板聚集抑制率由19％上升至76.2％(ZhaoHY et al.An experimental study on the inhibition of spontaneous tumormetastasis of Lewis lung carcinoma by the calcium antagonistverapamil.[J].Chinese Clinical Oncology，2002 Feb.7(1)5-7)。
總之，腫瘤細胞侵襲和轉移過程中，ECM的降解和BM的破壞是癌細胞突破正常細胞基底膜在別處形成轉移灶的關鍵步驟。MMPs及TIMPs家族是其中關鍵的因素之一；前者與ECM和BM成分的破壞和降解相關，后者是MMPs的特異性抑制因子，兩者的動態平衡維持了ECM和BM的完整性。因此，使細胞MMPs活性與TIMPs活性保持動態平衡，維持ECM和BM完整性，是抗癌侵襲轉移治療的基本機制之一。
本申請人用2、5和10μg/ml濃度的EBB處理HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1細胞系24h后，細胞外MMP-2、MMP-9酶活性呈減低趨勢；RT-PCR檢測結果表明MMP-2、MMP-9及TIMP-1在mRNA水平上的表達均有所改變，MMP-2和MMP-9的mRNA表達量均隨著藥物濃度的升高，呈明顯的下降趨勢；TIMP-1的mRNA表達則相反，隨著藥物濃度的升高，呈明顯的上升趨勢。細胞外MMP-2、MMP-9的蛋白活性與細胞內mRNA表達均一致減低，降低了HT1080細胞對ECM和BM的降解破壞能力。這種變化在侵襲實驗中得到證實，隨著藥物濃度的升高HT1080、ES-2、SKOV3細胞過膜細胞數下降。因而一定濃度的EBB能夠抑制HT1080、ES-2、SKOV3細胞的侵襲能力。實驗表明EBB的抗侵襲能力是通過與鈣調素結合而影響MMP-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA表達，即對MMP-2、MMP-9的抑制及對TIMP-1的激活有關，并由此維持基底膜的完整性，抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移。本實驗中，還研究了EBB對HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1細胞粘附能力的影響，結果表明EBB不能改變HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1細胞的粘附能力。
實驗詳細內容如下實驗一MMT法測定藥物敏感性方法選取對數生長期人類腫瘤細胞系HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1，調整細胞濃度1×105/ml，接種于96孔板，每孔細胞數為2×104，培養過夜。加入不同濃度藥物(EBB)，終體積為200μl，繼續培養72小時。實驗分為空白對照組和7個濃度梯度藥物組，每組做3個平行孔。培養結束前4h，每孔加入20μl濃度為5mg/ml的MTT，繼續培養4小時。棄上清，每孔加入100μl的DMSO，震蕩10分鐘。546nm測定吸光度值，計算IC50值。
結果EBB在0.469-30μg/ml濃度范圍內對HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1等人類腫瘤細胞系作用72h，均產生細胞毒作用；其作用存在因子量效應，隨著因子量增加，對細胞生長的抑制越明顯；IC50的范圍在2-10μg/ml。
實驗二細胞侵襲分析方法應用transwell小室進行細胞侵襲重建基底膜實驗。在transwell小室濾膜(8μm孔徑)的上、下表面分別鋪以10μg的ECM膠和5μg纖粘連蛋白，ECM膠用50μl培養基重建1h后備用。HT1080、ES-2、SKOV3等人類腫瘤細胞系經2、5和10μg/ml濃度EBB分別處理48h，重懸于含0.1％BSA的RPMI1640培養基中，每小室中加入2.5×105細胞，37℃培養10h。HE染色，統計侵襲細胞數目。實驗重復3次，按下式計算藥物對腫瘤細胞侵襲抑制率。
結果用2、5和10μg/ml濃度EBB處理HT1080、ES-2、SKOV3、M21、EB-1等人類腫瘤細胞系48h后，侵襲細胞數與藥物濃度呈反比，侵襲抑制率與藥物濃度呈正比(見表1)。各實驗組與對照組作t檢驗，均具有極顯著統計學意義(p＜0.001)，表明EBB可明顯降低HT1080、ES-2、SKOV3人類腫瘤細胞系的侵襲能力。
EBB對HT1080、ES-2細胞侵襲能力的抑制作用見圖1、圖2所示。
不同濃度EBB對HT1080、SKOV3、ES-2細胞的抑制率如表1所示。
表1Tab.1 Inhibitic effection of EBB on the invasive ability ofHT1080，SKOV3，ES-2cells in vitro
實驗三明膠酶活性測定方法將2×105/ml HT1080、SKOV3、EB-1等人類腫瘤細胞系接種于6孔板，含血清RPMI1640中培養24h后，再分別用含2、5和10μg/ml濃度EBB的無血清RPMI1640培養，同時設空白及培養基對照組，繼續培養24h。收集對照組和用藥組上清液，4℃低溫下電泳。電泳完畢用去離子水漂洗兩次，移入2.5％Triton-100洗脫，37℃孵育16h。用去離子水洗膠兩遍，染色1h，脫色2h，可見白色明膠酶條帶。
結果SDS-聚丙烯酰胺凝膠中加入明膠酶底物明膠，可用來檢測細胞條件培養基中明膠酶MMP-2和MMP-9的活性。HT1080(見圖3)、ES-2(見圖4)、EB-1(見圖5)人纖維肉瘤細胞同時表達MMP-2和MMP-9，經EBB作用后，MMP-2和MMP-9的活性均降低。其中用藥2μg/ml時MMP-2的活性與對照組之間未見明顯差異；增至5或10μg/ml可見明顯差異。用藥2或5μg/ml時MMP-9的活性與對照組之間未見明顯差異；增至10μg/ml可見差異。SKOV3只表達MMP-2，其活性在各用藥組與對照組之間也可見差異(見圖6)。
實驗四RT-PCR法檢測MMP-2、MMP-9及TIMP-1mRNA表達方法分別用2、5和10μg/ml濃度EBB處理HT1080、ES-2等人類腫瘤細胞系24h，各取0.5-1×107細胞，按Trizol試因子盒說明提取總RNA，按M-MuLV試因子盒說明進行逆轉錄反應，MMP-2、MMP-9及TIMP-1的PCR反應條件為94℃10min、94℃1min、55℃30s、72℃1min，72℃延伸10min。瓊脂糖電泳測定MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA表達，拍照。
結果實驗表明腫瘤細胞能否有效降解和侵襲基底膜發生轉移，取決于基質金屬蛋白酶的表達及活性。用2、5和10μg/ml濃度EBB處理HT1080、ES-2等細胞24h后，MMP-2和MMP-9的mRNA表達均有下降趨勢。其中MMP-9更明顯。對于HT1080細胞，用藥2或5μg/ml時MMP-2的mRNA表達與對照的差異較小；10μg/ml時差異較大(見圖7)。MMP-9的mRNA表達在2μg/ml與對照組之間即可見明顯差異；5μg/ml組、10μg/ml組與對照組之間可見極其明顯差異(見圖8)。對于ES-2細胞，用藥2或5μg/ml時MMP-2的mRNA表達與對照的差異較小；10μg/ml時可見差異(見圖10)。MMP-9的mRNA表達在各個加藥組與對照組之間可見極其明顯差異(見圖10)。由此可見，EBB處理可使HT1080、ES-2等細胞基質金屬蛋白酶分泌受到抑制。
EBB對基質金屬蛋白酶組織性抑制因子TIMP-1mRNA的表達有升高作用(HT1080見圖9，ES-2見圖10)。
實驗五電鏡觀察方法分別用2、5和10μg/ml濃度EBB處理HT1080、ES-2、M21等人類腫瘤細胞系24h，各取1-9×107細胞，做超薄切片觀察。結果電鏡觀察HT1080(見圖11)、ES-2(見圖12)、M21(見圖13)等細胞內線粒體均發生腫脹，甚至空泡變，嵴形態排列不規則，數量變少，有脂滴出現。
附圖1不同濃度EBB對HT1080細胞侵襲能力的抑制作用組圖。
其中圖1-A、圖1-B、圖1-C、圖1-D的EBB濃度分別為control、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml。
附圖2不同濃度EBB對ES-2細胞侵襲能力的抑制作用組圖。
其中圖2-E、圖2-F、圖2-G、圖2-H的EBB濃度分別為control、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml。
附圖3不同濃度EBB對HT-1080細胞MMP-2和MMP-9活性的影響。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖4不同濃度EBB對ES-2細胞MMP-2和MMP-9活性的影響。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖5不同濃度EBB對BE-1細胞MMP-2和MMP-9活性的影響。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖6不同濃度EBB對SKOV3細胞MMP-2和MMP-9活性的影響。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖7 RT-PCR法檢測不同濃度EBB對HT1080細胞MMP-2反應結果。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖8 RT-PCR法檢測不同濃度EBB對HT1080細胞MMP-9反應結果。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml、5、10μg/ml。
附圖9 RT-PCR法檢測不同濃度EBB對HT1080細胞TIMP-1基因反應結果。
圖中1、marker 2、control 3、2μg/ml 4、5μg/ml 5、10μg/ml。
附圖10 RT-PCR法檢測不同濃度EBB對ES-2細胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1基因反應結果。
圖中MMP-91、control 2、2μg/ml 3、5μg/ml 4、10μg/ml。
MMP-26、control 7、2μg/ml 8、5μg/ml 9、10μg/ml。
TIMP-110、control 11、2μg/ml 12、5μg/ml 13、10μg/ml。
附圖11不同濃度EBB對HT1080、ES-2、M21細胞形態結構的影響電鏡觀察組圖。
其中圖11-A、圖11-B、圖11-C的EBB濃度分別為control、5μg/ml、10μg/ml。
附圖12不同濃度EBB對ES-2細胞形態結構的影響電鏡觀察組圖。
其中圖12-D、圖12-E、圖12-F的EBB濃度分別為control、5μg/ml、10μg/ml。
附圖13不同濃度EBB對M21細胞形態結構的影響電鏡觀察組圖。
其中圖13-G、圖13-H、圖13-I的EBB濃度分別為control、5μg/ml、10μg/ml。
具體實施例方式
小檗胺衍生物EBB是溶于稀鹽酸的化合物，可以按常規方法制成相應的水劑或粉劑。也可以應用生理可以接受的載體和輔料制成膠囊和片劑。還可以與其它相輔藥物混合制成膠囊和片劑。小檗胺衍生物EBB臨床劑量為10～120mg/d，最好為10～80mg/d。
權利要求
1.通式(I)的小檗胺衍生物EBB在抑制人體腫瘤細胞侵襲轉移的藥物應用，通式 其中R＝-CH2CH2CH2CH2-OCH2CH3。
全文摘要
本發明涉及小檗胺衍生物EBB在抑制人體腫瘤細胞侵襲轉移的藥物應用，這類物質通過保護基底膜不受破壞而抑制腫瘤細胞的轉移。具有降低MMP－2及MMP－9表達，同時增強TIMP表達，從而提高TIMP/MMP比例的顯著效果。小檗胺衍生物EBB是溶于稀鹽酸的化合物，可以按常規方法制成相應的水劑或粉劑。也可以應用生理可以接受的載體和輔料制成膠囊和片劑。還可以與其它相輔藥物混合制成膠囊和片劑。小檗胺衍生物EBB臨床劑量為10～120mg/d，最好為10～80mg/d。
文檔編號A61P35/00GK1810247SQ200510013159
公開日2006年8月2日 申請日期2005年1月28日 優先權日2005年1月28日
發明者朱惠芳, 劉杰文, 齊淑玲, 潘兵, 周圓, 齊靜, 楊純正, 熊冬生, 姜文國, 程燕紅, 趙軾軒, 揚銘, 張永慈, 鄒凌琳, 劉娟妮 申請人:中國醫學科學院血液學研究所