專利名稱：一種藥物組合物及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由丹參酚酸提取物和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物，及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人口老齡化進(jìn)程的加速以及生活方式的改變，心腦血管病已成為一個全球性的健康問題，冠心病、卒中的死亡率在世界范圍分別居第1、3位。新型有效的防治心腦血管病藥物的開發(fā)已刻不容緩。
丹參酚酸提取物是從丹參中提取獲得的，其主要成分為丹參酚酸B、迷迭香酸、丹參素、原兒茶醛等。盡管丹參酚酸和鹽酸川芎嗪在心腦血管疾病方面均具有一定的保護(hù)作用任德成，杜冠華，張均田.總丹酚酸對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.中國藥理學(xué)通報，2002，18(3)275～277.；徐江平，孫莉莎，吳航宇，等.丹酚酸B對大鼠心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用.中國藥學(xué)雜志，2003，38(8)595～597.；王萬鐵，陳壽權(quán)，徐正，等.川芎嗪注射液抗腦缺血-再灌流損傷作用機(jī)制的實驗研究.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2001，10(3)182～189.；梁日欣，廖福龍，韓東.川芎嗪預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究.中藥藥理與臨床，2001，17(3)8～10.。但是，由丹參酚酸和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物及其在預(yù)防或治療心腦血管疾病中中的應(yīng)用卻未見報道。本發(fā)明人通過大量的實驗研究，發(fā)明了一種由丹參酚酸和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物及其在預(yù)防或治療心腦血管疾病中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種由丹參酚酸提取物和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物，其中丹參酚酸提取物中100％＞丹參酚酸≥50％，優(yōu)選為100％＞丹參酚酸≥80％。
本發(fā)明提供了一種由丹參酚酸B和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物。
本發(fā)明提供了上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的藥物組合物，丹參酚酸(或丹參酚酸B)和鹽酸川芎嗪的比例為1∶(0.01～10)，優(yōu)選為1∶(0.1～9)，更優(yōu)選為2∶1。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸或口服液的形式存在，優(yōu)選為凍干粉針。本發(fā)明提供的各種劑型均可以采用藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明提供的藥物組合物在用于心腦血管疾病時，其注射使用劑量范圍是90mg～2500mg，優(yōu)選為500mg～1500mg。其口服使用劑量范圍是300mg～6000mg，優(yōu)選為300mg～3000mg。
本發(fā)明所述的丹參酚酸提取物中，主要成分為丹參酚酸，包括丹參酚酸B、迭香酸、丹參素、兒茶醛等，其中100％＞丹參酚酸B+迭香酸+丹參素+兒茶醛含量之和≥50％。本發(fā)明所述的鹽酸川芎嗪是從川芎等植物藥中提取分離或經(jīng)化學(xué)合成獲得。
本發(fā)明人進(jìn)行了下列試驗來證實由丹參酚酸提取物和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，并證實具有協(xié)同作用。
具體實施例方式制備實施例1丹參酚酸提取物的制備取丹參干燥根，粉碎至可過三號篩，加15倍去離子水，室溫下攪拌3小時，濾過；濾液加鹽酸調(diào)pH至2，靜置過夜，濾過；濾液上樣于處理好的聚酰胺柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與聚酰胺用量的比例為0.1∶1(w/v)，用水洗3個柱體積后以25％乙醇洗15個柱體積；上樣流出液、水洗液及25％乙醇洗脫時的流出液均棄去。最后用60％乙醇洗脫6個柱體積，收集這部分洗脫液，減壓濃縮至適當(dāng)體積；噴霧干燥，得丹參酚酸提取物(丹參酚酸含量為65％)。
制備實施例2丹參酚酸提取物的制備丹參藥材粉碎成最粗粉，加8倍量0.01mol/L鹽酸浸泡過夜后，以12倍量0.01mol/L鹽酸滲漉；合并滲漉液上AB-8型大孔樹脂柱，先用0.01mol/L鹽酸淋洗6個柱體積，再用經(jīng)酸化的25％乙醇(pH＝2)洗5個柱體積，棄去洗脫液，最后用40％的乙醇洗脫4個柱體積，合并這部分洗脫液，減壓濃縮至適當(dāng)體積，噴霧干燥，即得(丹參酚酸含量為92％)。
制備實施例3丹參酚酸B的制備丹參藥材粉碎成最粗粉，加8倍量0.01mol/L鹽酸浸泡過夜后，以12倍量0.01mol/L鹽酸滲漉；合并滲漉液上AB-8型大孔樹脂柱，先用0.01mol/L鹽酸淋洗6個柱體積，再用經(jīng)酸化的25％乙醇(pH＝2)洗8個柱體積，棄去洗脫液，最后用40％的乙醇洗脫4個柱體積，合并這部分洗脫液，70℃減壓脫醇濃縮至適當(dāng)體積，冷凍干燥，即得丹參酚酸B(含量91.5％)。
制備實施例4制備注射液在潔凈條件下，取制備例2中丹參酚酸提取物5g、鹽酸川芎嗪50g，溶于3000ml注射用水，加入甘油20ml，攪拌溶解并稀釋至5000ml，超濾，得到無熱源的澄清液，按注射液制備工藝，制成5ml一支，含丹參酚酸5mg、鹽酸川芎嗪50mg的注射液。
制備實施例5制備凍干粉針在潔凈條件下，取制備例2中丹參酚酸200g溶于1000ml注射用水，用2％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至4～5之間得溶液A，另取鹽酸川芎嗪40g溶于500ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌使溶解得溶液B，將B溶液緩慢加入A溶液中并用2％的氫氧化鈉維持溶液PH值至4～5之間，將混合后溶液稀釋至2000ml后超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含丹參酚酸200mg、鹽酸川芎嗪40mg的凍干粉針。
制備實施例6制備含有丹參酚酸和鹽酸川芎嗪的凍干粉針在潔凈條件下，取制備例2丹參酚酸80g溶于1000ml注射用水，用2％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至4～5之間得溶液A，另取鹽酸川芎嗪40g溶于500ml注射用水，加入80g甘露醇，攪拌使溶解得溶液B，將B溶液緩慢加入A溶液中并用2％的氫氧化鈉維持溶液PH值至4～5之間，將混合后溶液稀釋至2000ml后超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含丹參酚酸40mg、鹽酸川芎嗪20mg的凍干粉針。
試驗例1丹參酚酸和鹽酸川芎嗪組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響(1)材料丹參酚酸提取物按制備例2制備，以下簡稱為丹參酚酸；丹參酚酸B按制備實施例3制備；鹽酸川芎嗪北京市燕京制藥廠，批號031101；氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實驗中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)、模型對照組(生理鹽水)、硝苯地平組、丹參酚酸組(9mg/kg)、丹參酚酸B組(9mg/kg)、鹽酸川芎嗪組(9mg/kg)、丹參酚酸(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)組、丹參酚酸B(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)組、丹參酚酸(6mg/kg)+鹽酸川芎嗪(3mg/kg)、丹參酚酸(8.1mg/kg)+鹽酸川芎嗪(0.9mg/kg)、丹參酚酸(0.9mg/kg)+鹽酸川芎嗪(8.1mg/kg)、丹參酚酸B(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)組、丹參酚酸(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)組、丹參酚酸B(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)組、丹參酚酸B(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)、丹參酚酸(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)、丹參酚酸(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸B(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸(10mg/kg)+鹽酸川芎嗪(20mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(100mg/kg)+鹽酸川芎嗪(200mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(200mg/kg)+鹽酸川芎嗪(400mg/kg)灌胃給藥組，每組10只。禁食12小時后，ip烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。除硝苯地平組、丹參酚酸+鹽酸川芎嗪灌胃給藥組在麻醉前灌胃給藥，其余各組術(shù)后隨既靜脈注射相應(yīng)藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，測量心電圖J點的升高值，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.25％N-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表1所示，心肌缺血6小時后，模型組大鼠心肌出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到26％左右。丹參酚酸組(9mg/kg)，丹參酚酸B組(9mg/kg)，鹽酸川芎嗪組(9mg/kg)能改善大鼠心電、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05)；丹參酚酸(6mg/kg)+鹽酸川芎嗪(3mg/kg)小劑量組、丹參酚酸(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)、丹參酚酸(8.1mg/kg)+鹽酸川芎嗪(0.9mg/kg)、丹參酚酸(0.9mg/kg)+鹽酸川芎嗪(8.1mg/kg)、丹參酚酸B(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)組顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05；與丹參酚酸9mg/kg、丹參酚酸B 9mg/kg、鹽酸川芎嗪9mg/kg比較，p＜0.05)，丹參酚酸(10mg/kg)+鹽酸川芎嗪(20mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(100mg/kg)+鹽酸川芎嗪(200mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(200mg/kg)+鹽酸川芎嗪(400mg/kg)灌胃給藥組顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05)，丹參酚酸(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)大劑量組、丹參酚酸B(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)大劑量組、丹參酚酸B(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)、丹參酚酸(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)、丹參酚酸(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸B(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.001)。
表1丹參酚酸、丹參酚酸B和鹽酸川芎嗪及其組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響
與模型對照組比較△，P＞0.05；*，P＜0.05。與單用川芎嗪組、丹參酚酸組或丹參酚酸B比較▲，P＜0.05。
試驗例2丹參酚酸和鹽酸川芎嗪組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料丹參酚酸提取物按制備例2制備，以下簡稱丹參酚酸；丹參酚酸B按制備例3制備，鹽酸川芎嗪(杭州偉華香料化學(xué)有限公司，含量＞90％)紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實驗中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，尼莫地平組(Nim，1.0mg/kg)，丹參酚酸組(9mg/kg)、丹參酚酸B組(9mg/kg)、鹽酸川芎嗪組(9mg/kg)、丹參酚酸(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)小劑量組、丹參酚酸(6mg/kg)+鹽酸川芎嗪(3mg/kg)小劑量組、丹參酚酸B(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)小劑量組、丹參酚酸(0.9mg/kg)+鹽酸川芎嗪(8.1mg/kg)、丹參酚酸(8.1mg/kg)+鹽酸川芎嗪(0.9mg/kg)、丹參酚酸(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)、丹參酚酸(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)、丹參酚酸(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸B(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸(10mg/kg)+鹽酸川芎嗪(20mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(100mg/kg)+鹽酸川芎嗪(200mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(200mg/kg)+鹽酸川芎嗪(400mg/kg)灌胃給藥組每組10只。禁食12小時后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側(cè)大腦中動脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實驗均在23℃～25℃進(jìn)行)。除丹參酚酸(10mg/kg)+鹽酸川芎嗪(20mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(100mg/kg)+鹽酸川芎嗪(200mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(200mg/kg)+鹽酸川芎嗪(400mg/kg)灌胃給藥組罐胃給藥外，其余術(shù)后各組動物靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納.一種能評價溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學(xué)學(xué)報，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內(nèi)旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計為0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2和3分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計為1，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為11分，分值越高，表示動物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表2所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的24％左右。丹參酚酸組(9mg/kg)，丹參酚酸B組(9mg/kg)，鹽酸川芎嗪組(9mg/kg)組能改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05)；丹參酚酸(6mg/kg)+鹽酸川芎嗪(3mg/kg)組、丹參酚酸(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)小劑量組、丹參酚酸B(3mg/kg)+鹽酸川芎嗪(6mg/kg)組、丹參酚酸(0.9mg/kg)+鹽酸川芎嗪(8.1mg/kg)組、丹參酚酸(8.1mg/kg)+鹽酸川芎嗪(0.9mg/kg)組改善了大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05；與丹參酚酸9mg/kg、丹參酚酸B 9mg/kg、鹽酸川芎嗪9mg/kg比較，p＜0.05)；丹參酚酸(10mg/kg)+鹽酸川芎嗪(20mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(100mg/kg)+鹽酸川芎嗪(200mg/kg)灌胃給藥組、丹參酚酸(200mg/kg)+鹽酸川芎嗪(400mg/kg)灌胃給藥組改善了大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.05)；丹參酚酸(5mg/kg)+鹽酸川芎嗪(45mg/kg)組、丹參酚酸(15mg/kg)+鹽酸川芎嗪(135mg/kg)組、丹參酚酸(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)、丹參酚酸B(25mg/kg)+鹽酸川芎嗪(225mg/kg)組明顯改善了大鼠行為障礙，減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.01)。
表2丹參酚酸、丹參酚酸B和鹽酸川芎嗪及其組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響
與模型對照組比較，△，P＞0.05；*，P＜0.05。
與單用鹽酸川芎嗪組、丹參酚酸組或丹參酚酸B比較，▲，P＜0.05。
權(quán)利要求
1.一種由丹參酚酸提取物和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物，其中丹參酚酸提取物中100％＞丹參酚酸≥50％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，丹參酚酸提取物中優(yōu)選為100％＞丹參酚酸≥80％。
3.一種由丹參酚酸B和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物。
4.權(quán)利要求1-3任一所述的藥物組合物，丹參酚酸(或丹參酚酸B)和鹽酸川芎嗪的比例為1∶(0.01～10)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，丹參酚酸(或丹參酚酸B)和鹽酸川芎嗪的比例為優(yōu)選為1∶(0.01～10)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其比例更優(yōu)選為2∶1。
7.權(quán)利要求1-6任一所述的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-6任一所述的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1-6任一所述的藥物組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種由丹參酚酸提取物和鹽酸川芎嗪組成的藥物組合物，其中丹參酚酸提取物中丹參酚酸的含量大于等于50％而小于100％。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/10GK1660103SQ20051000663
公開日2005年8月31日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月8日
發(fā)明者傅風(fēng)華, 蔣王林, 曲桂武, 徐本明 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司