作為鈣敏感受體拮抗劑的嘧啶酮化合物的制作方法

專利名稱：作為鈣敏感受體拮抗劑的嘧啶酮化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠抑制鈣受體活性的取代的3H-嘧啶-4-酮，制備這種化合物的方法及其用途。優(yōu)選地，將所述的化合物給予至患者以實(shí)現(xiàn)治療效果。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及新型的鈣敏感受體拮抗劑(calcilytic)化合物，制備這些化合物的方法，含有這些化合物的藥物組合物，含有這些化合物的藥物組合物，及它們作為鈣受體拮抗劑的用途。
在哺乳動(dòng)物中，細(xì)胞外Ca2+可以嚴(yán)格控制體內(nèi)平衡，調(diào)節(jié)各種過程，如血凝塊、神經(jīng)和肌肉興奮性、及固有骨形成。細(xì)胞外Ca2+抑制從甲狀旁腺細(xì)胞分泌的甲狀旁腺激素(″PTH″)分泌物，抑制破骨細(xì)胞的骨吸附，刺激從C-細(xì)胞分泌的降血鈣素分泌物。鈣受體蛋白可以使某些專用細(xì)胞響應(yīng)細(xì)胞外的Ca2+濃度變化。
PTH是調(diào)節(jié)血液和細(xì)胞外體液中Ca2+體內(nèi)平衡的基本內(nèi)分泌因子。通過作用于骨和腎細(xì)胞，PTH可以提高血液中Ca2+水平。這種提高的細(xì)胞外Ca2+用作副反饋信號(hào)，抑制PTH分泌物。細(xì)胞外Ca2+和PTH分泌物的相互關(guān)系形成保持身體Ca2+體內(nèi)平衡的重要機(jī)理。
細(xì)胞外Ca2+直接作用于甲狀旁腺細(xì)胞來調(diào)節(jié)PTH分泌物。已證實(shí)甲狀旁腺細(xì)胞表面蛋白的存在可以檢測(cè)細(xì)胞外Ca2+變化[參見Brown等人，Nature，366，574，(1993)]。在甲狀旁腺細(xì)胞中，這種蛋白(鈣受體)作為細(xì)胞外Ca2+的受體，檢測(cè)細(xì)胞外Ca2+的離子濃度的變化，并引發(fā)功能性細(xì)胞反應(yīng)，PTH分泌物。
細(xì)胞外Ca2+影響各種細(xì)胞功能，參見Nemeth等人，Cell Calcium，11，319(1990)。例如，細(xì)胞外Ca2+在濾泡旁細(xì)胞(C-細(xì)胞)和甲狀旁腺細(xì)胞中起作用[參見Nemeth，Cell Calcium，11，323(1990)]。已經(jīng)研究了細(xì)胞外Ca2+對(duì)破骨細(xì)胞的作用[參見Zaidi，Bioscience Reports，10，493(1990)]。
已知各種化合物可以模擬細(xì)胞外Ca2+對(duì)鈣受體分子的作用。鈣敏感受體拮抗劑是能夠抑制鈣受體活性從而使由細(xì)胞外Ca2+所引起的一種或多種鈣受體活性降低的化合物。鈣敏感受體拮抗劑可作為導(dǎo)向分子，用于發(fā)現(xiàn)、發(fā)展、設(shè)計(jì)和改變和/或構(gòu)造有用的鈣調(diào)節(jié)劑，它們對(duì)Ca2+受體是活性的。這種鈣敏感受體拮抗劑可用于治療特征為一種或多種成分(例如，多肽，如激素、酶或生長(zhǎng)因子)異常水平的各種疾病態(tài)，而通過一種或多種Ca2+受體的活動(dòng)可以調(diào)節(jié)或影響成分的表達(dá)和/或分泌。鈣敏感受體拮抗劑化合物針對(duì)的目標(biāo)疾病和紊亂包括涉及到異常骨和礦物體內(nèi)平衡的疾病。
異常鈣體內(nèi)平衡以一種或多種下面的活動(dòng)為特征血清中鈣的異常增加或降低；尿分泌物中鈣的異常增加或降低；骨加鈣的異常增加或降低(例如，根據(jù)骨礦物密度測(cè)量來分析)；飲食鈣的異常吸收；會(huì)影響血清中的鈣的信使(如PTH和降血鈣素)的制備和/或釋放的異常增加或降低；及對(duì)會(huì)影響血清中的鈣的信使反應(yīng)的異常變化。
因此，鈣受體拮抗劑對(duì)與異常骨或礦物體內(nèi)平衡相關(guān)的疾病提供一種獨(dú)特的藥物療法，如甲狀旁腺功能減退，骨肉瘤，牙周病，骨折愈合，骨關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Paget病，與惡性相關(guān)的體液血鈣過多和骨折愈合，及骨質(zhì)疏松癥。
附圖簡(jiǎn)要說明

圖1是曲線圖，表明bolus i.v.注射實(shí)施例9的化合物對(duì)正常大鼠PTH水平的作用。
優(yōu)選實(shí)施方案詳細(xì)說明本發(fā)明的特征在于鈣敏感受體拮抗劑化合物。″鈣敏感受體拮抗劑化合物″指能夠抑制鈣受體活性的化合物。化合物具有″抑制鈣受體活性″的能力指該化合物使由細(xì)胞外Ca2+所引起的一種或多種鈣受體活性降低。
下面說明使用鈣敏感受體拮抗劑化合物抑制鈣受體活性和/或?qū)颊咂鸬接幸孀饔?。具體而言，本申請(qǐng)證實(shí)鈣敏感受體拮抗劑化合物具有提高PTH分泌物的能力，因此確實(shí)甲狀旁腺鈣受體是這些化合物的靶點(diǎn)。下面也說明了可用于得到其他鈣敏感受體拮抗劑化合物的方法。
特征鈣敏感受體拮抗劑化合物的實(shí)例由2，3，5，6-取代的3H-嘧啶-4-酮代表，并由結(jié)構(gòu)I中所示的化學(xué)式及下面的說明來提供。
結(jié)構(gòu)I 其中R1和R2獨(dú)立地是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，低級(jí)烷基，環(huán)alk，及芳基；或R1和R2一起是-(CH2)n-，n是5，4，或3；R3是芳基，在芳環(huán)上可以有1～4個(gè)取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，OCF3，低級(jí)烷基，N(低級(jí)烷基)2，低級(jí)烷氧基，OH，OC(O)-低級(jí)alk，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)alk)2；R4是下述基團(tuán)之一H，低級(jí)烷基，及式-(CH2)n-R5，其中n是0，1，或2，及R5是芳基，在芳環(huán)上可以有1～3取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，OCF3，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，NH-低級(jí)烷基，NH-烷芳基，N(低級(jí)烷基)2，OH，OC(O)-低級(jí)烷基，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)烷基)2；及其藥物可接受的鹽和配合物。
在R1和R2獨(dú)立被選擇的實(shí)施方案中，R1和R2可以是下述基團(tuán)之一低級(jí)烷基，環(huán)烷基和芳基，或低級(jí)烷基和環(huán)烷基之一。在R1和R2一起是-(CH2)n-的實(shí)施方案中，n可以是4或3。
在R3是苯基的實(shí)施方案中，苯環(huán)可以具有是下述基團(tuán)之一的1～3個(gè)取代基H，鹵素，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基和OH。此外，在R3是苯基的其他實(shí)施方案其中，苯環(huán)可以具有是下述基團(tuán)之一的1～3個(gè)取代基H，鹵素和OH。
在R4是式-(CH2)n-R5基團(tuán)的實(shí)施方案中，n是1或2，R5是芳基，在芳環(huán)上的1～3個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基。此外，在R4是式-(CH2)n-R5基團(tuán)的實(shí)施方案中，n是2，R5是芳基，在芳環(huán)上的1～3個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，低級(jí)烷基和低級(jí)烷氧基。
″alk″指烷基或鏈烯基。″低級(jí)烷基″指低級(jí)烷基或低級(jí)鏈烯基，優(yōu)選低級(jí)烷基?！彐溝┗逯敢环N任選取代的烴基，其在碳原子間含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵并含有連在一起的2-6個(gè)碳原子。鏈烯烴基可以是直鏈的。直鏈的鏈烯基優(yōu)選具有2～4個(gè)碳原子。
″烷基″指任選取代的烴基，其通過碳-碳單鍵連接并含有連接在一起的1～6個(gè)碳原子。烷烴基可以是直鏈的，或含有一個(gè)或多個(gè)支鏈。在某些實(shí)施方案中，支鏈和直鏈的烷基具有1～4個(gè)碳原子，每個(gè)可以任選被取代。烷基取代基獨(dú)立地是下述基團(tuán)之一低級(jí)烷基，未取代的芳基，OH，NH2，NH-低級(jí)烷基，和N(低級(jí)烷基)2。在某些實(shí)施方案中，存在不超過兩個(gè)取代基。例如，烷基可以是低級(jí)烷基，如具有1～4個(gè)碳原子的未取代的支鏈或直鏈烷基。
″環(huán)alk″指任選取代的環(huán)烷基或任選取代的非芳香環(huán)鏈烯基，包括單環(huán)和多環(huán)結(jié)構(gòu)，如雙環(huán)和三環(huán)。環(huán)烷基具有3～15個(gè)碳原子。在一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)烷基具有3～5個(gè)碳原子。環(huán)alk的可選擇的取代基獨(dú)立地選自上面針對(duì)鏈烯基所述的基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，存在不超過三個(gè)取代基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)alk是未取代的。例如，環(huán)alk可以是未取代的環(huán)烷基。適合的環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基和環(huán)丁基。
″芳基″指任選取代的芳香基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)包括共軛或稠合的環(huán)系。芳基包括碳環(huán)芳基，雜環(huán)芳基和聯(lián)芳基，所有這些都可以任選被取代。芳基可以是任選取代的苯基或任選取代的吡啶基。
″烷氧基″指與長(zhǎng)度為1～4個(gè)碳原子的未取代的烷基連接的氧。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧與長(zhǎng)度為1～2個(gè)碳原子的未取代的烷基連接。例如，烷氧基可以是甲氧基。
特別有用的實(shí)施方案中的化合物包括5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮和3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-異丙基-3H-吡啶-4-酮。
特別有用的實(shí)施方案中的化合物外延包括2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；
3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
特別有用的實(shí)施方案中的化合物更外延包括2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
有用化合物的進(jìn)一步外延包括2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-吡啶基-3)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-異丙基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(3，5-二溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
有用化合物的更外延包括2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；
3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-5-異丙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-吡啶基-3)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-異丙基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(3，5-二溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氯-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-甲基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；
2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-4-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
其中R1是氫的結(jié)構(gòu)I的鈣敏感受體拮抗劑化合物可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法來制備[例如，參見Eason等人，J.Chem Soc.2991-3000(1931)；Gardner等人，J.Org.Chem.59，6245-6250(1994)，Tice等人，Tetrahedron，57，2689-2700(2001)]。
方案I 其中R1和R2是除氫以外的取代基的結(jié)構(gòu)I的鈣敏感受體拮抗劑化合物可通過方案II制備，其中包括環(huán)化適合的乙酸2-(1-烷基-2-R4-氨基甲?；?鏈烯基-1-氨基甲?；?-苯基酯。通過方案II和實(shí)施例13的方法B來化學(xué)合成這種化合物是合成2，3，5，6-取代的3H-吡啶-4-酮的新方法，這是對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的改進(jìn)。于2004年4月7日申請(qǐng)的共同未決的美國專利申請(qǐng)?zhí)栔泄_了這種改進(jìn)并要求保護(hù)，其標(biāo)題為Mehods for Preparing 2，3，5，6-Substituted 3H-pyrimidin-4-ones，在此作為參考。方案II如下。
方案II 這種化學(xué)合成包括通過標(biāo)準(zhǔn)方法制備結(jié)構(gòu)II的乙酸2-(1-烷基-2-R4-氨基甲?；?鏈烯基-1-氨基甲?；?-苯基酯，包括?；m合的結(jié)構(gòu)III的3-氨基-2-烷基-鏈烯-2-酸R4-酰胺。
結(jié)構(gòu)II 結(jié)構(gòu)III 其中R1和R2獨(dú)立地是下述基團(tuán)之一低級(jí)烷基，環(huán)烷基；或R1和R2一起是-(CH2)n-，n是5，4，或3；R3是芳基，在芳環(huán)上可以有1～4個(gè)取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，NH(低級(jí)烷基)，低級(jí)烷氧基，OH，OC(O)-低級(jí)烷基，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)烷基)2；R4是下述基團(tuán)之一H，低級(jí)烷基，或式-(CH2)n-R5，其中n是0，1，或2，及R5是芳基，在芳環(huán)上可以有1～3取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，OCF3，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，NH-低級(jí)烷基，NH-烷芳基，N(低級(jí)烷基)2，OH，OC(O)-低級(jí)alk，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)alk)2。
在R1和R2獨(dú)立被選擇的實(shí)施方案中，R1和R2可以是下述基團(tuán)之一低級(jí)烷基和環(huán)烷基。在R1和R2一起是-(CH2)n-的實(shí)施方案中，n可以是4或3。
在R3是苯基的實(shí)施方案中，苯環(huán)可以具有是下述基團(tuán)之一的1～3個(gè)取代基H，鹵素，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基和OH。此外，在R3是苯基的其他實(shí)施方案其中，苯環(huán)可以具有是下述基團(tuán)之一的1～3個(gè)取代基H，鹵素和OH。
在R4是式-(CH2)n-R5基團(tuán)的實(shí)施方案中，n是1或2，R5是芳基，在芳環(huán)上的1～3個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基。此外，在R4是式-(CH2)n-R5基團(tuán)的實(shí)施方案中，n是2，R5是芳基，在芳環(huán)上的1～3個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，低級(jí)烷基和低級(jí)烷氧基。
為使用式(I)化合物或其藥物可接受的鹽或配合物來治療人和其他哺乳動(dòng)物，通常根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐制成藥物組合物。
鈣敏感受體拮抗劑化合物可通過各種途徑給藥到病除，包括靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，皮下，肌肉內(nèi)，口服，局部(透皮)，或經(jīng)粘膜。對(duì)全身性給藥而言，口服給藥是優(yōu)選的。對(duì)于口服給藥而言，例如，化合物可以配制成常規(guī)口服劑量形式，如膠囊，片劑，及液體制劑，如糖漿，酊劑，及濃縮液滴。
任選，可以使用注射(腸胃外給藥)，例如，肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，及皮下。為進(jìn)行注射，本發(fā)明的化合物配制成液體溶液，優(yōu)選是生理可相容緩沖液或溶液，如鹽溶液，Hank溶液，或Ringer溶液。此外，化合物可以配制成固體形式，并在使用前立即再溶解或懸浮。也可以制成凍干形式。
全身性給藥也可以通過經(jīng)粘膜或透皮方式。對(duì)于經(jīng)粘膜或透皮給藥而言，在制劑中使用適于穿透阻擋層的滲透劑。這種滲透劑通常在本領(lǐng)域中是公知的，對(duì)經(jīng)粘膜給藥而言，包括例如膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物。此外，洗滌劑可用于加速滲透。經(jīng)粘膜給藥例如可以通過鼻噴霧，直腸栓劑，或陰道栓劑。
對(duì)于局部給藥而言，本發(fā)明化合物可以配制成藥膏、油膏、凝膠或霜?jiǎng)@在本領(lǐng)域中是公知的。
各種待給藥的鈣敏感受體拮抗劑化合物的量可通過結(jié)合各種因素來確定，如化合物IC50，EC50，化合物的生物半衰期，患者的年齡、大小和體重，與患者相關(guān)的疾病或紊亂。需考慮的這些和其他因素的重要性對(duì)于本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員是公知的。
給藥量也取決于給藥路線和口服生物藥效率的程度。例如，對(duì)于低口服生物藥效率的化合物而言，必須給予相對(duì)較高的劑量。
優(yōu)選組合物是單位劑量形式。對(duì)于口服使用而言，例如可以給予片劑或膠囊，對(duì)于鼻子使用而言，可以使用定量氣霧劑，對(duì)于透皮使用而言，可以給予局部制劑或皮貼，對(duì)于經(jīng)粘膜輸送而言，可以給予口腔皮貼。在每種情況下，劑量需使得患者以單次劑量給予。
口服給藥的每個(gè)劑量單元適宜地按自由基質(zhì)計(jì)算含有0.01～500mg/Kg、優(yōu)選0.1～50mg/Kg的式(I)化合物或其藥物可接受的鹽或配合物。腸胃外，鼻子，口服吸入，經(jīng)粘膜或透皮路線的日劑量適宜地含有0.01mg～100mg/Kg的式(I)化合物。局部制劑適宜地含有0.01～5.0％的式(I)化合物。活性成分可以給予例如1～6次/天，優(yōu)選1次，以足夠表現(xiàn)出所需的活性，這對(duì)本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員是容易理解的。
本文中，疾病的″治療″包括但不限于防止、抑制和預(yù)防疾病。
基于影響細(xì)胞，可以被治療或預(yù)防的疾病和紊亂包括骨和礦物相關(guān)的疾病或紊亂；甲狀旁腺功能減退；涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的那些，如疾病發(fā)作，中風(fēng)，外傷頭痛，脊髓傷害，組織缺氧引起的神經(jīng)細(xì)胞損害，如心搏動(dòng)停止或新生兒窘迫中發(fā)生的，癲癇癥，神經(jīng)退行性疾病，如Alzheimer疾病，Huntington疾病和Parkinson疾病，癡呆，肌肉緊張，沮喪，焦慮，驚慌紊亂，強(qiáng)迫性紊亂，創(chuàng)傷后壓力紊亂，精神分裂癥，安定藥惡性綜合癥，及Tourette綜合癥；涉及腎吸收過量水的疾病，如適合的ADH分泌物(SIADH)中的綜合癥，硬化，心充血失敗，及腎?。桓哐獕?；用陽離子抗生素預(yù)防和/或降低腎毒性(例如，氨基醣苷類抗生素)；內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)紊亂，如痢疾和痙攣性結(jié)腸；GI潰瘍疾病；與過量鈣吸收相關(guān)的GI疾病，如肉狀瘤??；自體免疫疾病和器官移植排斥；鱗狀細(xì)胞癌；及胰腺炎。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物用于提高血清甲狀旁腺激素(″PTH″)水平。提高血清PTH水平可有助于治療疾病，如甲狀旁腺功能減退，骨肉瘤，牙周疾病，骨折，骨關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Paget疾病，惡性體液血鈣過多，及骨質(zhì)疏松癥。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物與抗吸收劑一起給予。這種試劑包括但不限于雌激素，1，25-(OH)2-維生素D3，降血鈣素，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，玻璃粘連蛋白受體拮抗劑，V-H+-ATPase抑制劑，src SH2拮抗劑，雙膦酸脂和組織蛋白酶K抑制劑。
本發(fā)明另一方面公開了一種治療患者的方法，包括給予該患者本發(fā)明化合物，其量足以提高血清PTH水平。優(yōu)選地，通過給予有效引起血清PTH水平的持續(xù)時(shí)間和/或數(shù)量提高而足以具有治療效果的該化合物來進(jìn)行該方法。
在各種實(shí)施方案中，給予至患者的化合物使血清PTH的持續(xù)時(shí)間提高到1小時(shí)，到約1～24小時(shí)，約至12小時(shí)，約1～6小時(shí)，約1～5小時(shí)，約1～4小時(shí)，約2～5小時(shí)，約2～4小時(shí)，或約3～6小時(shí)。
在本發(fā)明可選擇的實(shí)施方案中，如果與抗吸收劑一起給予，給予至患者的化合物使血清PTH的持續(xù)時(shí)間提高超過約24小時(shí)。
在其他不同的實(shí)施方案中，給予至患者的化合物使血清PTH提高2倍，2～5倍，5～10倍，至少10倍，大于患者中的最高血清PTH。相對(duì)于未受治療的患者測(cè)量最高血清水平。
在口服給予時(shí)具有活性的式(I)組合物及其藥物可接受的鹽和/或配合物可以配制成糖漿，片劑，膠囊，及止咳糖。糖漿制劑通常由化合物的懸浮液或溶液組成或在液體載體中的鹽組成，如含有調(diào)味劑和著色劑的乙醇，花生油，橄欖油，甘油或水。如果組合物是片劑形式，可以使用常規(guī)用于制備固體制劑的藥物載體。這種載體的實(shí)例包括硬脂酸鎂，石膏粉，滑石，凝膠，阿拉伯樹膠，硬脂酸，淀粉，乳糖和蔗糖。如果組合物是膠囊形式，可以適用任何包裝，例如使用硬凝膠膠囊外殼的上述載體。如果組合物是軟凝膠外殼膠囊形式，可以考慮用于制備分散體或懸浮液的常規(guī)任何藥物載體，例如水性樹脂，纖維素，硅酸鹽或油，并使用軟凝膠膠囊外殼。
通常腸胃外組合物由消毒水性或非水性載體中的化合物或鹽的溶液或懸浮液組成，任選含有腸胃外可接受的油，例如聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，卵磷脂，落花生油或麻油。
通常吸入用組合物是可以以干粉末形式的溶液、懸浮液或乳液形式，或使用常規(guī)推進(jìn)劑如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷以氣霧劑形式給予。
常用栓劑制劑包括以這種方式與粘合劑和/或潤(rùn)滑劑一起給予時(shí)是活性的式(I)化合物或其藥物可接受鹽或配合物，例如聚合二醇，凝膠，可可油或其他低熔融植物蠟，或脂肪或其合成類似物。
通常真皮和透皮制劑包括常規(guī)水性或非水性載體，例如霜?jiǎng)?，藥膏，洗劑或糊狀物，或是藥膏、皮貼或膜的形式。
優(yōu)選地，組合物是單位劑量形式，例如片劑，膠囊或定量氣霧劑形式，從而可給患者單次劑量。
當(dāng)本發(fā)明的化合物根據(jù)本發(fā)明給予時(shí)，預(yù)期到不可接受的毒性作用。
實(shí)施例下面的具體實(shí)施例僅用于說明目的，不用于限制本發(fā)明。下面實(shí)施例中所用的試劑和中間體或者從商業(yè)上購得，或可根據(jù)有機(jī)合成領(lǐng)域中技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)來制備。
使用Shimadzu RID-10A Series HPLC進(jìn)行HPLC(高壓液相色譜)分析確實(shí)98+％純度，其安裝有SPD-M10A VP二極管陣列檢測(cè)器，兩個(gè)LC-AT泵，及SIL-10A自動(dòng)注射器，使用Altima C18(5μ，4.6×259mm)或Intersil ODS2(5μ，4.6×259mm)柱。
使用Varian Gemini 300光譜儀進(jìn)行NMR(核磁共振)測(cè)試。分別在300MHz和75MHz在氘代氯仿(CDCl3)，甲醇-d4(CH3OH-d4)，或二甲基亞砜-d6(DMSO-d6)溶液中記錄質(zhì)子和碳譜。使用相對(duì)于作為內(nèi)標(biāo)的四甲基硅烷(TMS)以δ(ppm)記錄NMR共振，觀察到的各種形態(tài)使用下列標(biāo)識(shí)符s(單峰)，d(雙重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，dd(二組雙重峰)，及m(多重峰)。JAB耦合常數(shù)記錄為Hz。
應(yīng)注意，實(shí)施例1-12和14-33與2003年6月18日申請(qǐng)的美國臨時(shí)申請(qǐng)60/479,323中的實(shí)施例1-12和14-33相應(yīng)，其標(biāo)題為Pyrimidinone Compounds as Calcilytics。實(shí)施例13中公開的方法A相應(yīng)于60/479,323的實(shí)施例13。該實(shí)施例也與2003年4月7日申請(qǐng)的美國專利申請(qǐng)60/460,859中的那些相應(yīng)，其標(biāo)題為PyrimidinoneCompounds as Calcilytics。具體而言，實(shí)施例1-12相應(yīng)于60/460,859的實(shí)施例1-12，實(shí)施例15-17相應(yīng)于60/460,859的實(shí)施例14-16，及實(shí)施例21-33相應(yīng)于60/460,859的實(shí)施例17-29。實(shí)施例13中公開的方法A相應(yīng)于60/460,859的實(shí)施例13。實(shí)施例4-20相應(yīng)于國際專利申請(qǐng)＿＿_(dá)__中的實(shí)施例1-17，其標(biāo)題為Methods for Preparing 2，3，5，6-substituted 3H-pyrimidin-4-ones，其于2004年4月7日申請(qǐng)。這些申請(qǐng)?jiān)诖艘胱鳛閰⒖肌?br> 實(shí)施例1制備2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮a.)2-羥基苯甲酰胺酸甲酯將乙酰氯(6.0g，76.4mmol)于30min內(nèi)滴加到甲醇(10mL)中。通過在水浴中冷卻混合物使溫度保持在20℃。加入乙酰氯后，溶液在室溫下攪拌2h。加入o-羥基苯基氰(4.0g，33.61mmol)，然后加入甲苯(20mL)。混合物在室溫下于氬氣中攪拌4天。過濾沉淀物，用甲苯洗滌。高真空下干燥后，分離2-羥基-苯甲酰亞胺酸甲酯鹽酸鹽(2.2g，35％)，白色固體。
b.)2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮將步驟1a的2-羥基-苯甲酰亞胺酸甲酯(250mg，1.33mmol)溶解在含有碳酸氫鈉(110mg，1.33mmol)的甲醇(6mL)中。室溫下攪拌30min分鐘后，加入苯基乙基胺(165μl，1.33mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?h，然后加入乙酰乙酸甲酯(1.5mL)和二甲苯(10mL)。使用Dean-Stark分水器通過蒸餾除去甲醇，反應(yīng)混合物回流3h。溶液冷卻至室溫，加到二氯甲烷中(100mL)。用水(100mL)萃取混合物，用含有脫色碳的硫酸鈉干燥有機(jī)層。過濾并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，將甲苯(10mL)加到殘?jiān)校旌衔锓诺嚼洳仄髦羞^夜。過濾沉淀物，用冷甲苯(5mL)洗滌。用乙酸乙酯-己烷(7∶3)作為洗脫液在硅膠(25g)上經(jīng)快速色譜進(jìn)一步純化產(chǎn)物，得到2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-吡啶-4-酮(120mg，22％)，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ7.27-7.15(m，4H)，7.10(dd，1H，J＝8.0，1.5)，6.89-6.84(m，4H)，6.30(s，1H)，4.16(t，2H，J＝7.5)，2.84(t，2H，J＝7.5)，2.24(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.97，162.25，159.06，155.09，137.70，132.27，129.09，128.91，128.83，126.86，120.19，119.93，117.68，111.59，47.81，34.53，23.37。
實(shí)施例2制備3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例1中所述的方法，從2-羥基-苯甲酰亞胺酸甲酯(750mg，4.0mmol)，2-(2-氟-苯基)-乙基胺(520μl，4.0mmol)和乙酰乙酸甲酯(4.0mL)制備標(biāo)題化合物，得到140mg(10％)的3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮，在ODS硅膠上用甲醇-水(4∶7)快速洗脫，然后用大量甲苯(100mL)重結(jié)晶，得到白色固體。
1H NMR(CH3OH-d4)δ7.38-7.29(m，1H)，7.20-7.17(m，1H)，7.01(m，6H)，6.37(s，1H)，4.13(t，2H，J＝7.2)，2.92(t，2H，J＝7.2)，2.28(s，3H)。
13C NMR(CH3OH-d4)δ164.93，164.48，160.98，155.53，136.93，133.05，132.48，130.77，130.05，129.94，126.15，125.93，125.57，123.07，120.93，118.18，116.67，116.33，112.08，47.16，28.49，23.21。
實(shí)施例3制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例1中所述的方法，從2-羥基-苯甲酰亞胺酸甲酯(500mg，2.67mmol)，2-(3-氟-苯基)-乙基胺(330μl，2.6mmol)和乙酰乙酸甲酯(3.0mL)制備標(biāo)題化合物，得到160mg(10％)3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮，在ODS硅膠上用甲醇-水(4.5∶6.5)快速洗脫，然后用大量甲苯(100mL)重結(jié)晶，得到白色固體。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.20(寬s，1H)，7.36(dd，1H，J＝7.5)，7.21(m，1H)，7.01-6.96(m，3H)，6.87(dd，1H，J＝7.5)，6.60(d，1H，J＝7.5)，6.52(d，1H，J＝9.0)，6.30(s，1H)，3.93(t，2H，J＝7.5)，2.75(t，2H，J＝7.5)，2.19(s，3H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ163.80，162.65，161.17，158.17，153.71，140.84，140.73，131.21，130.45，130.34，129.50，124.53，122.26，119.07，115.61，115.26，114.98，113.48，113.21，110.45，45.78，33.29，23.09。
實(shí)施例4制備2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮a.)2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸乙酯 將2-甲基-3-氧-丁酸乙酯(50g，0.347mol)，乙二醇(65g，1.05mol)和p-甲苯磺酸一水合物(0.2g)在無水甲苯(200mL)中的混合物使用Dean-Stark分水器進(jìn)行回流，直到收集到理論量的水(6.3mL)。冷卻后，用飽和碳酸氫鹽溶液(100mL)，水(100mL×5)，及鹽水(100mL×2)萃取混合物。用硫酸鈉干燥后，過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，產(chǎn)物通過蒸餾純化(餾份b.p.74-76℃/2mm Hg)，得到47.12g(72％)2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸乙酯。
1H NMR(CDCl3)δ4.16(q，2H，J＝7.2)，3.97(m，4H)，2.76(q，1H，J＝7.2)，1.41(s，3H)，1.27(t，3H，J＝7.2)，1.23(d，3H，J＝7.2)。
13C NMR(CDCl3)δ173.24，109.76，64.81，60.38，47.88，21.29，14.14，12.83。
b.)2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸 將實(shí)施例1a的2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸乙酯(31g，0.1647mol)溶解在含有氫氧化鉀(35.63g，0.63mol)的二噁烷-水(1∶1,350mL)混合物中。反應(yīng)混合物在35℃下攪拌過夜，在高真空下濃縮，溶解在水(200mL)中并用二氯甲烷(100mL×2)萃取后得到白色固體。用2N鹽酸水溶液將水性部分酸化至pH＝2，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水(300mL)洗滌，用硫酸鈉干燥和真空濃縮。分離2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸，透明油狀物(20.34g，77％)，不需進(jìn)一步純化。
1H NMR(CDCl3)δ11.29(s，1H)，4.01(m，4H)，2.80(q，1H，J＝7.2)，1.43(s，3H)，1.26(d，3H，J＝7.2)。
13C NMR(CDCl3)δ178.61，109.57，64.84，64.81，47.80，21.15，12.61。
c.)2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-N-苯乙基-丙酰胺在干二氯甲烷(15mL)中的實(shí)施例1b的2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-丙酸(1.60g，10mmol)在氬氣中冷卻至0℃。滴加草酰氯(2.92g，2.0mL，23.0mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。在0℃下5min后，混合物升至室溫。在室溫下攪拌2h后，減壓除去過量草酰氯，制得黃色油狀物，并溶解在二氯甲烷(7mL)中。在冰浴中冷卻溶液，滴加吡啶(5mL)中的苯乙基胺(1.12g，10.0mmol)。加入完成后，反應(yīng)升至室溫，攪拌過夜。溶液用二氯甲烷(100mL)稀釋，倒入冰冷的鹽酸(1N，150mL)中。分離有機(jī)層，用水(100mL)，碳酸氫鈉溶液(5％，50mL)，水(100mL)，及鹽水(100mL)洗滌。用硫酸鈉干燥后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，產(chǎn)物用硅膠快速色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(3∶2)洗脫，得到2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-N-苯乙基-丙酰胺(1.81g，69％)，無色晶體。
1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，5H)，6.42(寬s，1H)，3.93(m，2H)，3.86(m，2H)，3.51(m，2H)，2.82(t，2H，J＝7.2)，2.55(q，1H，J＝7.2)，1.26(s，3H)，1.17(d，3H，J＝7.2)。
13NMR(CDCl3)δ172.61，138.99，128.74，128.43，126.32，109.77，64.67，64.50，49.36，40.45，35.58，21.20，12.42。
d.)2-甲基-3-氧-N-苯乙基-丁酰胺 在氮?dú)庵杏谑覝叵聦?shí)施例1c的2-(2-甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基)-N-苯乙基-丙酰胺(0.40g，1.5mmol)加到水(20mmol)中的p-甲苯磺酸一水合物(0.48g，2.5mmol)中。加入丙酮(20mL)后，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在95℃下加熱3h。冷卻至室溫后，用碳酸鈉(0.5g)使溶液成為堿性。在室溫下真空除去丙酮，用二氯甲烷(50mL)萃取殘余水溶性物質(zhì)。有機(jī)層用水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥。濃縮后，通過用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶來純化產(chǎn)物，得到2-甲基-3-氧-N-苯乙基-丁酰胺(0.17g，52％)，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，5H)，6.13(寬s，1H)，3.52(m，2H)，3.34(q，1H，J＝7.2)，2.81(t，2H，J＝7.2)，2.19(s，3H)，1.34(d，3H，J＝7.2)。
13C NMR(CDCl3)δ207.27，169.17，138.54，128.69，128.61，126.56，54.98，40.72，35.55，28.49，14.58。
e.)3-氨基-2-甲基-丁烯-2-酸苯乙基-酰胺 實(shí)施例1d的2-甲基-3-氧-N-苯乙基-丁酰胺(1.10g，5.00mmol)在乙醚(300mL)中的溶液用氣態(tài)氨水飽和3h，同時(shí)在冰浴中冷卻。然后分次加入無水氯化銨(99.99％純度，0.667g，5.00mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。過濾反應(yīng)混合物，減壓濃縮，得到3-氨基-2-甲基-丁烯-2-酸苯乙基-酰胺(0.97g，NMR測(cè)得轉(zhuǎn)化85％)，白色固體，未經(jīng)純化而用于接下來的合成步驟中。
f.)乙酸2-(1-甲基-2-苯乙基氨基甲?；?丙烯基氨基甲?；?-苯基酯 實(shí)施例1e的3-氨基-2-甲基-丁烯-2-酸苯乙基-酰胺(0.97g，5mmol)溶解在四氫呋喃(20mL)和吡啶(1.0mL)中。加入乙酸2-氯羰基-苯基酯(0.993g，5.00mmol)，混合物回流4h。冷卻至室溫后，加入乙醚(50mL)，過濾除去鹽。減壓濃縮濾液。再加入醚(200mL)，殘余吡啶用2N鹽酸(3×30mL)萃取。醚用鹽水(200mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。濃縮后，產(chǎn)物在硅膠(118g)上用快速色譜純化兩次，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脫，得到乙酸2-(1-甲基-2-苯乙基氨基甲?；?丙烯基氨基甲?；?-苯基酯(0.58g，30％)，黃色油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ12.95(寬s，1H)，7.82(dd，1H，J＝7.8，1.8)，7.48(dt，1H，J＝7.5，1.8)，7.31-7.12(m，7H)，5.71(t，1H，J＝6.6)，3.54(q，2H，J＝6.6)，2.82(t，2H，J＝6.6)，2.44(s，3H)，2.31(s，3H)，1.74(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ169.83，169.47，164.15，154.31，148.80，146.12，138.71，132.00，129.50，128.69，126.58，126.22，123.50，105.73，40.56，35.49，21.06，17.57，13.25。
g.)2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮
將實(shí)施例1f的乙酸2-(1-甲基-2-苯乙基氨基甲?；?丙烯基氨基甲?；?-苯基酯(220mg，0.59mmol)溶解在含有85％氫氧化鉀(0.80g，1.2mmol)的乙醇(8mL)和水(8mL)的混合物中?；旌衔锘亓鬟^夜。冷卻后，反應(yīng)混合物用鹽酸酸化至pH＝1，用二氯甲烷(3×30mL)萃取。合并有機(jī)層，用水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。濃縮后，產(chǎn)物在硅膠(39g)上快速色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脫，得到2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮(70mg，37％)，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ7.15-7.10(m，4H)，7.01(d，1H，J＝7.8)，6.82-6.78(m，3H)，6.71(d，1H，J＝7.8)，4.07(t，1H，J＝7.8)，2.80(t，2H，J＝7.8)，2.22(s，3H)，2.08(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.60，157.02，155.81，154.24，137.59，131.70，129.06，128.64，128.42，126.47，120.82，119.77，119.22，117.44，47.77，34.26，20.89，11.69。
實(shí)施例5制備3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4c中用2-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物，用己烷-乙酸乙酯(3∶1)結(jié)晶后，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ9.88(寬s，1H)，7.11(m，2H)，6.91-6.71(m，6H)，4.09(t，2H，J＝7.5)，2.88(t，2H，J＝7.5)，2.23(s，3H)，2.08(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.69，161.07(d，J＝243)，157.22，155.90，154.23，131.53，131.02(d，J＝4.2)，129.07，128.34(d，J＝8.0)，124.52(d，J＝16)，124.00(d，J＝3.2)，120.77，119.88，119.66，119.08，116.99，115.19(d，J＝22)，46.20，27.51，20.88，11.61。
實(shí)施例6制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物，用己烷-乙酸乙酯(3∶1)結(jié)晶后，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ9.76(寬s，1H)，7.23(m，1H)，6.85(m，3H)，6.65(d，1H，J＝7.8)，6.53(m，1H)，4.20(t，2H，J＝7.5)，2.86(t，2H，J＝7.5)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.73(d，J＝244)，162.63，156.65，155.68，154.64，139.98(d，J＝7.5)，132.04，129.94(d，J＝7.4)，128.90，124.25，120.15，119.88，119.29，118.17，115.51(d，J＝21)，113.52(d，J＝21)，47.57，33.99，20.95，11.70。
實(shí)施例7制備3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4c中用4-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物，用己烷-乙酸乙酯(3∶1)結(jié)晶后，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ9.85(寬s，1H)，7.20(m，1H)，7.09(dd，1H，H，J1＝7.8，J2＝1.5)，6.81(m，6H)，4.13(t，2H，J＝7.8)，2.80(t，2H，J＝7.8)，2.23(s，3H)，2.10(s，3H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.66，161.66(d，J＝243)，156.69，155.76，154.65，133.24(d，J＝3.1)，132.02，130.09(d，J＝8.3)，128.98，120.38，119，92，119.32，118.24，115.33(d，J＝21)，47.86，33.50，20.96，11.71。
實(shí)施例8制備5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-吡啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-乙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，制得標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.08(m，5H)，6.88-6.78(m，4H)，4.15(t，2H，J＝7)，2.86(t，2H，J＝7)，2.56(q，2H，J＝7.5)，2.25(s，3H)，1.12(t，3H，J＝7.5)。
13C NMR(CDCl3)δ162.60，156.52，156.04，155.20，137.89，132.08，129.18，128.82，126.78，125.10，119.93，118.05，48.12，34.58，20.66，19.87，12.60。
實(shí)施例9制備5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮
使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-乙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用2-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(3∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率51％。
1H NMR(CDCl3)δ9.79(寬s，1H)，7.26-7.06(m，3H)，6.94-677(m，5H)，4.21(t，2H，J＝7.2)，2.95(t，2H，J＝7.2)，2.56(q，2H，J＝7.6)，2.25(s，3H)，1.12(t，3H，J＝7.6)。
13C NMR(CDCl3)δ162.66，161.38(d，J＝243)，156.33，156.12，155.372，132.11，131.29(d，J＝4.6)，129.13，128.7(d，J＝7.8)，125.06，124.71(d，J＝16.1)，124.33(d，J＝3.4)，119.91，118.08，115.51(d，J＝21)，46.78，27.94，20.64，19.85，12.59。
實(shí)施例10制備5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-乙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(3∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率51％。
1H NMR(300CDCl3)δ9.66(寬s，1H)，7.26(dt，1H，J1＝8.0，J2＝1.5)，7.19-7.09(m，2H)，6.94-6.83(m，3H)，6.78(d，1H，J＝7.7)，6.56(dt，1H，J1＝8.0，J2＝1.5)，4.23(t，2H，J＝7.9)，2.89(t，2H，J＝7.9)，2.57(q，2H，J＝7.4)，2.27(s，3H)，1.14(t，3H，J＝7.4)。
13C NMR(CDCl3)δ162.83(d，J＝244)，162.36，157.44，156.06，154.35，140.33(d，J＝7.3)，131.73，130.01(d，J＝7.9)，124.95，124.53，121.24，119.73，116.64，115.67(d，J＝21)，113.53(d，J＝21)，47.42，34.07，20.47，19.71，12.44。
實(shí)施例11制備5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-乙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用4-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(5∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率51％。
1H NMR(CDCl3)δ7.15(dt，1H，J1＝8.0，J2＝1.5)，7.06(dd，1H，J1＝7.8，J2＝1.5)，6.80-6.70(m，6H)，4.04(t，2H，J＝7.5)，2.78(t，2H，J＝7.5)，2.55(q，2H，J＝7.5)，2.24(s，3H)，1.10(t，3H，J＝7.5)。
13C NMR(CDCl3)δ162.44，161.81(d，J＝243)，156.99，156.08，154.67，133.52(d，J＝3)，131.96，130.31(d，J＝8)，129.25，125.07，121.04，119.94，117.58，115.45(d，J＝21)，47.81，33.65，20.56，19.81，12.54。
實(shí)施例12制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-丙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(10∶1)兩次結(jié)晶后，產(chǎn)率12％。
1H NMR(CDCl3)δ9.72(寬s，1H)，7.19-7.04(m，3H)，6.87-6.81(m，2H)，6.76(d，1H，J＝8.2)，6.63(dd，1H，J＝7.8)，6.50(dt，1H，J1＝8.2，J2＝1.8)，4.09(t，2H，J＝7.2)，2.82(t，2H，J＝7.2)，2.50(t，2H，J＝8.2)，2.25(s，3H)，1.53(m，2H)，0.98(t，3H，J＝7.2)。
13C NMR(CDCl3)δ162.95(d，J＝243)，162.67，157.25，156.04，154.85，140.28(d，J＝7.2)，132.10，130.15(d，J＝8)，129.19，124.57(d，J＝2.4)，123.82，120.65，119.95，117.73，115.77(d，J＝21)，113.72(d，J＝21)，47.69，34.16，28.55，21.60，20.85，14.48。
實(shí)施例13制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用兩種單獨(dú)方法來制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。這些兩種方法下面稱為方法A和方法B。
方法A使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-異丙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(10∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率52％。
1H NMR(CDCl3)δ7.21-7.09(m，3H)，6.85(m，2H)，6.76(d，1H，J＝8.1)，6.65(d，1H，J＝7.4)，6.52(dd，1H，J1＝8.1，J2＝1.5)，4.09(t，2H，J＝7.4)，3.10(p，1H，J＝7.0)，2.85(t，2H，J＝7.4)，2.27(s，3H)，1.35(d，6H，J＝7.0)。
13C NMR(CDCl3)δ162.95(d，J＝244)，161.70，156.05，155.19，140.30(d，J＝7)，132.15，130.16(d，J＝8)，128.98，127.84，124.57(d，J＝2)，120.24，119.85，117.91，115.78(d，J＝21)，113.73(d，J＝21)，47.47，34.118，28.24，21.41，19.68。
方法B
a).3-氨基-2-異丙基-丁烯-3-酸甲基酯2-甲基-3-氧-丁酸甲基酯(10g，0.0633mol)溶解在無水乙醇(50mL)中。加入過量液體氨水(10倍)，混合物在室溫下在密封反應(yīng)容器中攪拌48小時(shí)。減壓除去過量氨水和乙醇，粗產(chǎn)物產(chǎn)物(根據(jù)GC-MS數(shù)據(jù)產(chǎn)率73％)未經(jīng)進(jìn)一步純化而用于接下來的合成步驟中。
b).2-異丙基-3-(2-甲氧基-苯甲酰氨基)-丁烯-3-酸甲基酯本方法(實(shí)施例13的方法B)中上述步驟(a)的粗產(chǎn)物3-氨基-2-異丙基-丁烯-3-酸甲酯(5g，0.0318mol)溶解在無水THF(100mL)中，并加入無水吡啶(5.2mL，0.0637mol)。滴加對(duì)甲氧苯甲酰氯(4.28mL，0.0318mol)，混合物回流2小時(shí)。冷卻后，加入水(100mL)，有機(jī)層用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有機(jī)層，萃取物用1N HCl(3×100mL)，水(100mL)，及鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。產(chǎn)物用硅膠(200-400目)柱色譜純化，用10％EtOAc/己烷洗脫，得到2-異丙基-3-(2-甲氧基-苯甲酰氨基)-丁烯-3-酸甲酯(3g，33％)，白色粉末。
1H NMR(CDCl3)δ0.93(d，3H，J＝6.6)，0.97(d，3H，J＝6.6)，2.10-2.23(m，1H)，2.73(d，1H，J＝11.1)，3.73(s，3H)，4.07(s，3H)，4.76(d，1H，J＝1.2)，6.09(s，1H)，7.00(d，1H，J＝8.1)，7.058-7.113(m，1H)，7.44-7.49(m，1H)，8.22(dd，1H，J＝1.8，6)，9.96(brs，1H)。
13NMR(CDCl3)δ19.9，21.0，29.3，51.9，55.8，60.7，103.8，111.4，121.3，121.8，132.4，133.0，136.8，157.4，163.9，174.0。
c).3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-5-異丙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮將苯基溴化鎂(THF中的1M溶液，0.0021mol)加到3-氟-苯乙基胺(0.27mL，0.0021mol)在無水甲苯(20mL)的溶液中。在20℃下攪拌混合物10min后，加入本方法(實(shí)施例13的方法B)中上述步驟(b)的2-異丙基-3-(2-甲氧基-苯甲酰氨基)-丁烯-3-酸甲酯(0.05g，0.0017mol)。混合物回流10小時(shí)，冷卻，加入乙酸乙酯(50mL)，然后加入1N HCl(50mL)。分離有機(jī)層，水層用EtOAC(3×50mL)萃取。合并有機(jī)層，萃取物用洗滌1N HCl(3×100mL)，水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌。用硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，產(chǎn)物用硅膠(200-400目)柱色譜純化，用12％EtOAc/己烷洗脫，得到3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-5-異丙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮(0.3g，46％)，白色固體。
1H NMRδ1.30(d，1H，J＝2.7)，1.31(d，1H，J＝2.7)，2.28(s，3H)，2.64-2.82(m，2H)，3.01-3.16(m，1H)，3.45-3.55(m，1H)，3.71(s，3H)，4.16-4.25(m，1H)，6.40(td，1H，J＝2.4，9.6)，6.54(d，1H，J＝7.8)，6.87-7.08(m，4H)，7.35-7.41(m，1H)。
d).3-2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮向干厚壁Pyrex試管中加入本方法(實(shí)施例13的方法B)中上述步驟(c)的3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-5-異丙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮(50mg，0.000132mole)，DMSO(5mL)和氰化鈉(65mg，10當(dāng)量)。完全擰緊螺絲帽。反應(yīng)混合物用微波在180℃下照射1小時(shí)。反應(yīng)混合物降至室溫，用50％HCl仔細(xì)酸化，用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。小心地形成HCN。合并有機(jī)層，萃取物用水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，濃縮。通過裝填有硅膠(200-400目)的短柱使用25％EtOAc/己烷過濾粗產(chǎn)物，幾乎是純的，得到35mg(72％)3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-吡啶-4-酮。這種化合物的1H和13C NMR光譜數(shù)據(jù)與按實(shí)施例13方法A制備的產(chǎn)物相同。
實(shí)施例14制備3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮
使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-異丙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用2-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(10∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率50％。
1H NMR(CDCl3)δ10.10(寬s，1H)，7.20-7.10(m，2H)，7.04(dd，1H，J1＝7.7，J2＝1.6)，6.94-6.73(m，5H)，4.13(t，2H，J＝7.0)，3.10(m，1H)，2.94(t，2H，J＝7.0)，2.28(s，3H)，1.35(d，6H，J＝6.9)。
13C NMR(CDCl3)δ161.81，161.34(d，J＝244)，156.14，155.98，158.26，131.92，131.34(d，J＝4.5)，129.08，128.65(d，J＝7.8)，127.68，124.76(d，J＝16)，124.27(d，J＝3.3)，120.00，119.72，117.46，115.45(d，J＝21.6)，46.31，28.16，27.85，21.44，19.67。
實(shí)施例15制備2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-三氟甲基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(2∶1)三次結(jié)晶后，產(chǎn)率20％。
1H NMR(CDCl3)δ10.31(s，1H)，7.42(m，1H)，7.19(m，3H)，7.13(dd，1H，J1＝7.6，Jz＝1.6)，7.01(d，1H，J＝7.9)，6.93(m，1H)，6.78(m，2H)，3.98(t，2H，J＝7.8)，2.79(t，2H，J＝7.8)，2.22(q，3H，J＝2.2)。
13C NMR(CDCl3)δ162.05，156.90，153.88，144.91(q，J＝32)，137.61，131.74，129.66，128.57，128.33，126.60，122.40，121.76(q，J＝275)，121.40，119.22，115.76，47.50，33.17，10.78。
實(shí)施例16制備2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-氧-環(huán)己烷羧酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率55％。
1H NMR(CDCl3)δ10.00(寬s，1H)，7.14-7.00(m，5H)，6.80-6.69(m，4H)，4.02(t，2H，J＝7.4)，2.79(t，2H，J＝7.4)，2.5(m，4H)，1.68(m，4H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.42，158.75，156.29，154.30，137.87，131.77，129.36，128.86，128.59，126.63，121.33，120.73，119.85，117.18，47.60，34.55，30.79，22.62，21.97，21.66。
實(shí)施例17制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-氧-環(huán)己烷羧酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率56％。
1H NMR(CDCl3)δ10.10(寬s，1H)，7.15-7.02(m，3H)，6.78-6.81(m，2H)，6.70(d，1H，J＝8.1)，6.61(d，1H，J＝7.7)，6.46(d，1H，J＝8.1)，4.06(t，2H，J＝7.0)，2.79(t，2H，J＝7.0)，2.51(m，4H)，1.72(m，4H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.92(d，J＝244)，162.42，158.63，156.27，154.38，140.30(d，J＝7.3)，132.10，130.14(d，J＝8.3)，129.34，124.57(d，J＝2.2)，121.18，120.85，120.15，118.02，115.76(d，J＝20.7)，113.70(d，J＝21)，47.34，34.25，30.83，22.68，22.02，21.71。
實(shí)施例18制備5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-環(huán)丙基-3-氧-丁酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率56％。
1H NMR(CDCl3)δ9.70(寬s，1H)，7.31(m，1H)，7.15(m，2H)，6.91(m，3H)，6.70(m，1H)，6.59(m，1H)，4.25(t，2H，J＝7.6)，2.90(t，2H，J＝7.6)，2.38(s，3H)，1.61(m，1H)，0.99(m，2H)，0.87(m，2H)。
13C NMR(CDCl3)δ162.77(d，J＝245)，162.35，159.27，156.16，154.91，140.05(d，J＝7.3)，132.10，129.97(d，J＝8.1)，128.83，124.34(d，J＝2.3)，122.95，120.02，119.82，118.17，115.55(d，J＝21)，113.56(d，J＝21)，47.40，34.03，21.22，8.81，6.64。
實(shí)施例19制備2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮
使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-氧-環(huán)戊烷羧酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率52％。
1H NMR(CDCl3)δ9.12(寬s，1H)，7.17(m，5H)，6.85(m，4H)，4.18(t，2H，J＝7.8)，2.84(m，6H)，2.08(m，2H)。
13C NMR(CDCl3)δ166.59，160.72，158.96，154.47，137.61，131.87，128.98，128.70，128.51，126.58，123.61，120.88，119.86，117.75，47.58，34.57，34.33，27.83，21.32。
實(shí)施例20制備3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮 使用實(shí)施例4a-g的過程，除了在步驟4a中用2-氧-環(huán)戊烷羧酸乙酯代替2-甲基-3-氧-丁酸乙酯，在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，制得標(biāo)題化合物。用己烷-乙酸乙酯(1∶1)結(jié)晶后，產(chǎn)率51％。
1H NMR(CDCl3)δ9.41(寬s，1H)，7.23(m，1H)，7.11(m，2H)，6.86(m，3H)，6.65(d，1H，J＝7.6)，6.51(d，1H，J＝9.6)，4.18(t，2H，J＝7.7)，2.84(m，6H)，2.09(m，2H)。
13C NMR(CDCl3)δ166.95，162.74(d，J＝245)，160.64，159.01，154.20，140.07(d，J＝7.4)，131.88，129.96(d，J＝8.1)，128.99，124.36，123.61，121.10，119.86，117.40，115.56(d，J＝21)，113.53(d，J＝21)，113.53(d，J＝21)，47.14，34.29，34.19，27.78，21.29。
實(shí)施例21制備5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-吡啶-4-酮將5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮(0.19g，0.50mmol)溶解在含有碳酸鉀(0.80g)和碘甲烷(3mL)的THF(10mL)中?；旌衔镌跉鍤庵谢亓?0h。冷卻至室溫后，加入己烷(100mL)，過濾掉鹽。真空蒸發(fā)濾液，殘?jiān)诠枘z(40g)上快速色譜純化，用乙酸乙酯-己烷(2∶3)洗脫，得到5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮(110mg，56％)，最終用己烷結(jié)晶，白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ7.47(d，1H，J1＝7.3，J2＝1.8)，7.21-6.96(m，6H)，6.88-6.85(m，2H)，4.31(m，2H)，3.79(s，3H)，3.68-3.58(m，1H)，2.96-2.75(m，2H)，2.70-2.62(m，2H)，2.37(s，3H)，1.21(t，3H，J＝7.5)。
13C NMR(CDCl3)δ162.23，157.68，156.01，154.82，138.26，131.44，129.75，128.85，128.59，126.53，124.83，124.30，121.12，110.99，55.56，47.64，34.48，21.28，19.82，12.61。
實(shí)施例22制備2-(5-氯-2-羥基-吡啶基-3)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用2-乙酰氧基-5-氯煙酰氯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.45(d，J＝2.8Hz，1H)；7.20(m，1H)；6.96(m，1H)；6.82(d，J＝2.4Hz，1H)；6.68(d，J＝7.6Hz，1H)；6.62(ddd，J＝9.6，3.6，2.0Hz，1H)；4.12(br m，2H)；3.01(t，J＝6.4Hz，2H)；2.65(q，J＝7.6Hz，2H)；2.34(s，3H)；1.21(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(m/z)388.2(M+H)+。
實(shí)施例23制備5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-6-氟-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率65％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.09(m，1H)，6.95(m，1H)，6.84(m，1H)，6.78(ddd，J＝12.8，7.6，4.4，1H)，6.69(d，J＝7.7，1H)，6.57(d，J＝7.7，1H)，6.46(ddd，J＝9.6，3.6，2.0，1H)，4.03(t，J＝7.2，2H)，2.79(t，J＝7.6，2H)，2.52(q，J＝7.2，2H)，2.19(s，3H)，1.10(t，J＝7.2，3H)。MS(m/z)371(M+H)+。
實(shí)施例24制備5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-4-氟-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率77％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.11(m，1H)，6.86(m，2H)，6.73(dd，J＝9.2，4.4，1H)，6.57(m，2H)，6.49(dd，J＝9.6，1.6，1H)，4.06(t，J＝7.6，2H)，2.83(t，J＝7.2，2H)，2.55(q，J＝7.2，2H)，2.24(s，3H)，1.11(t，J＝7.2，3H)。MS(m/z)371(M+H)+。
實(shí)施例25制備5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-3-氟-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率53％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(m，2H)，6.87(m，1H)，6.68(d，J＝7.6，1H)，6.61(m，2H)，6.53(ddd，J＝9.6，3.6，2.0，1H)，4.05(br s，1H)，3.95(br s，1H)，2.90(br s，1H)，2.76(br s，1H)，2.57(q，J＝7.2，2H)，2.30(s，3H)，1.12(t，J＝7.6，3H)。MS(m/z)371(M+H)+。
實(shí)施例26制備2-(5-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸4-氯-2-氯羰基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率79％，白色固體。
H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.15(m，2H)，6.91(ddd，J＝10.8，8.0，1.6，1H)，6.79(d，J＝2.4，1H)，6.70(d，J＝8.8，1H)，6.62(d，J＝7.6，1H)，6.53(ddd，J＝9.6，3.6，2.0，1H)，4.07(t，J＝7.6，2H)，2.89(t，J＝7.2，2H)，2.57(q，J＝7.6，2H)，2.26(s，3H)，1.14(t，J＝7.6，3H)。MS(m/z)387(M+H)+。
實(shí)施例27制備2-(5-溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸4-溴-2-氯羰基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率68％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(m，1H)，7.16(m，1H)，6.94(m，2H)，6.64(m，2H)；6.54(d，J＝9.6，1H)，4.05(t，J＝7.2，2H)，2.89(t，J＝7.2，2H)，2.57(q，J＝7.2，2H)，2.26(s，3H)，1.13(t，J＝7.6，3H)。MS(m/z)431/433(M+H)+。
實(shí)施例28制備5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-異丙基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-6-異丙基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率56％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.26(dd，J＝7.6，1.6，1H)，7.14(ddd，J＝14，8.0，6.0，1H)，7.05(dd，J＝7.6，1.6，1H)，6.89(m，2H)，6.67(d，J＝7.6，1H)，6.54(ddd，J＝9.6，3.6，2.0，1H)，4.28(t，J＝7.6，2H)，3.23(m，1H)，2.88(t，J＝7.2，2H)，2.58(q，J＝7.6，2H)，2.26(s，3H)，1.21(d，J＝6.8，6H)，1.16(t，J＝7.2，3H)。MS(m/z)395.4(M+H)+。
實(shí)施例29制備2-(3，5-二溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2，4-二溴-6-氯羰基-6-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率62.5％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.59(d，J＝2.4，1H)，7.14(ddd，J＝14，8.0，6.0，1H)，6.91(dd，J＝8.0，2.0，1H)，6.72(d，J＝2.4，1H)，6.54(d，J＝7.6，1H)，6.49(dd，J＝9.6，2.0，1H)，4.00(t，J＝7.2，2H)，2.86(t，J＝7.2，2H)，2.53(q，J＝7.6，2H)，2.15(s，3H)，1.12(t，J＝7.6，3H)。MS(m/z)509/511/513(M+H)+。
實(shí)施例30制備5-乙基-2-(3-氯-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯-6-氯羰基-6-異丙基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率69％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)；7.10(ddd，J＝14，8.0，6.4Hz，1H)；6.83(m，3H)；6.57(d，J＝7.6Hz，1H)；6.47(dd，J＝9.6，2.0Hz，1H)；4.05(t，J＝7.6Hz，2H)；2.82(t，J＝7.6Hz，2H)；2.54(q，J＝7.6Hz，2H)；2.18(s，3H)；1.12(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(m/z)387(M+H)+。
實(shí)施例31制備5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-甲基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-6-甲基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率75.6％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.13(m，2H)；6.94(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)；6.84(m，2H)；6.65(d，J＝7.6Hz，1H)；6.52(ddd，J＝9.6，3.6，1.6Hz，1H)；4.22(t，J＝7.2Hz，2H)；2.86(t，J＝7.6Hz，2H)；2.57(q，J＝7.6Hz，2H)；2.21(s，3H)；2.14(s，3H)；1.15(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(m/z)367(M+H)+。
實(shí)施例32制備2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸5-氯-2-氯羰基-苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率61％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(m，IH)；6.97(d，J＝8.0Hz，1H)；6.90(m，2H)；6.81(d，J＝2.0Hz，1H)；6.67(d，J＝7.6Hz，1H)；6.59(d，J＝9.6Hz，1H)；4.19(t，J＝7.2Hz，2H)；2.90(t，J＝7.2Hz，2H)；2.58(q，J＝7.2Hz，2H)；2.26(s，3H)；1.15(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(m/z)387(M+H)+。
實(shí)施例33制備5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-4-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮使用實(shí)施例4a-g的一般過程制備標(biāo)題化合物，除了在步驟4c中用3-氟-苯乙基胺代替苯乙基胺，在步驟4f中用乙酸2-氯羰基-甲氧基苯基酯代替乙酸2-氯羰基苯基酯。產(chǎn)率55％，白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(m，1H)；6.88(m，2H)；6.72(d，J＝7.64Hz，1H)；6.62(d，J＝8.4Hz，1H)；6.47(ddd，J＝7.6，2.4，1.2Hz，1H)；6.41(d，J＝1.6Hz，1H)；4.25(t，J＝6Hz，2H)；3.80(s，3H)；2.82(t，J＝7.2Hz，2H)；2.56(q，J＝7.2Hz，2H)；2.26(s，3H)；1.15(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(m/z)383(M+H)+。
通過下列測(cè)試證實(shí)式(I)化合物的生物活性(I)鈣受體抑制劑分析通過檢測(cè)穩(wěn)定表達(dá)人鈣受體的HEK 293 4.0-7細(xì)胞中的測(cè)試化合物的IC50來測(cè)量鈣敏感受體拮抗劑活性，其可阻止因細(xì)胞外Ca2+所引起的細(xì)胞內(nèi)Ca2+的增加。HEK 293 4.0-7細(xì)胞由Rogers等人確立，J.BoneMiner.Res.10(Suppl.1)，S483，(1995)(在此引入作為參考)。通過細(xì)胞外Ca2+從1.0增大到1.3mM，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+增加。使用fluo-3(一種熒光鈣指示劑(Biotium))測(cè)量細(xì)胞內(nèi)Ca2+。
過程如下用10％FBS和200μg/ml潮霉素在5％CO2和37℃下，將細(xì)胞保持在DMEM中。分析前24小時(shí)，細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶化，在帶有黑邊的透明底膠原質(zhì)I涂覆的96孔板中，加入上述介質(zhì)中的細(xì)胞，120,000細(xì)胞/孔?？装逡?00rpm離心2分鐘，并在5％CO2和37℃下培養(yǎng)過夜。然后吸出介質(zhì)，將分析緩沖液中的6μM fluo-3以80μL/孔加到板中。分析緩沖液含有20mA Na-Hepes，pH 7.4，126mM NaCl，5mMKCl，1mMmgCl2，1mM CaCl2，1mg/mL D-葡萄糖和1mg/mL牛血清蛋白(BSA；fraction V，ICN)。
含有fluo-3溶液的細(xì)胞板在黑暗中在室溫下培養(yǎng)60分鐘。接下來培養(yǎng)板洗滌一次，然后再加入分析緩沖液160μL/孔。使用FLIPR系統(tǒng)(Molecular Devices)進(jìn)行熒光測(cè)量，激光設(shè)置為0.8W，0.4秒CCD照相機(jī)快門速度。使用兩種加入方案，在加入細(xì)胞外Ca2+之前95秒，加入40-μL緩沖液或測(cè)試化合物。通過加入緩沖液中的50μL 2.5mMCaCl2細(xì)胞外[Ca2+]從1.0提高到1.3mM。
通過化合物以濃度相關(guān)的方式阻止細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度因細(xì)胞外Ca2+增加而增加，來測(cè)定鈣敏感受體拮抗劑活性。在沒有測(cè)試化合物存在下，根據(jù)反應(yīng)峰高度測(cè)量熒光信號(hào)，并歸一化因細(xì)胞外Ca2+所引起的反應(yīng)。所有化合物測(cè)試8次，最高濃度是30μM。
通常，在鈣受體抑制劑分析中具有低IC50值的那些化合物是更優(yōu)選的化合物。本發(fā)明中所用的化合物其IC50值低于30μM。在鈣受體分析中所測(cè)試化合物的溶解度變化可以提供低于這些類似物真正能力的IC50值。優(yōu)選的化合物是IC50為10μM或更低的那些化合物，更優(yōu)選的化合物IC50為1μM或更低，最優(yōu)選的化合物IC50為0.1μM或更低。
(II)鈣受體結(jié)合分析用人甲狀旁腺鈣受體(″HuPCaR″)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK 293 4.0-7細(xì)胞在T180組織培養(yǎng)燒瓶中按比例增加。在含有1μM Leupeptin、0.04μMPepstatin、1mM PMSF的蛋白酶抑制劑雞尾酒存在下，通過在緩沖液中(50mM Tris-HCl，pH 7.4，1mM EDTA，3mMmgCl2)進(jìn)行勻漿得到血漿膜。一部分膜猝冷，并在-80℃下保存。用氚標(biāo)記配體標(biāo)記44Ci/mmole的活性，分出一部分保存在液氮中進(jìn)行標(biāo)記化學(xué)穩(wěn)定。
常用反應(yīng)混合物含有2nM3H化合物(R，R)-N-4′-甲氧基-t-3-3′-甲基-1′-乙基苯基-1-(1-萘基)乙胺，或3H化合物(R)-N-[2-羥基-3-(3-氯-2-氰基苯氧基)丙基]-1，1-二甲基-2-(4-甲氧基苯基)乙胺，及4-10μg膜(在均勻化緩沖液中，含有0.1％凝膠和10％乙醇)，反應(yīng)體積0.5mL。培養(yǎng)在12×75聚乙烯管中在冰水浴中進(jìn)行。向每一管中加入25μL 100％乙醇中的測(cè)試樣品，然后加入400μL冷培養(yǎng)緩沖液，和25μL 100％乙醇中的40nM3H-化合物，最終濃度為2nM。通過加入在培養(yǎng)緩沖液稀釋的50μL 80-200μg/mL HEK 2934.0-7膜來啟動(dòng)結(jié)合反應(yīng)，在4℃下培養(yǎng)30min。Wash緩沖液是含有0.1％PEI的50mM Tris-HCl。通過加入100倍過量的未標(biāo)記相應(yīng)配體來測(cè)定非特定結(jié)合，通常是總結(jié)合的20％。使用Brandel Harvestor通過快速過濾到用1％PEI預(yù)處理的GF/C過濾器上，來終止結(jié)合反應(yīng)。過濾器放到閃爍流體中，通過液體閃爍計(jì)數(shù)來分析標(biāo)記活性。
通過將5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮(1或3，μmol/kg)或載體在約15秒內(nèi)經(jīng)靜脈內(nèi)注射給予至帶有慢性留置動(dòng)脈和靜脈導(dǎo)管的正常有意識(shí)雄性Sprague-Dawley大鼠中。在30min時(shí)收集動(dòng)脈血樣品，在開始注射后的1、5、10、30min立即收集動(dòng)脈血樣品，測(cè)量血漿中的甲狀旁腺激素(PTH)和離子化鈣(Ca2+)的水平。使用特效大鼠PTH(1-84)ELISA(Immutopics，SanClemente，CA)測(cè)量PTH。注射實(shí)施例9的化合物引導(dǎo)血漿PTH水平快速但瞬時(shí)劑量相關(guān)的增加，注射后1min時(shí)達(dá)到最大。注射后10min血漿PTH水平返回到前劑量水平(圖1)。在實(shí)驗(yàn)過程中，血漿Ca2+水平?jīng)]有不一致的變化(圖未示)。
在本說明書中所引述的所有出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，在此引入作為參考，就好象每一種出版物都具體全部引入一樣。
上述說明全面公開了本發(fā)明，包括其優(yōu)選實(shí)施方案。本文具體公開的實(shí)施方案的修改和改時(shí)也在下面權(quán)利要求的范圍內(nèi)。盡管沒有詳細(xì)說明，但是可以認(rèn)為，通過上述說明，本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可以使本發(fā)明更充分。因此，實(shí)施例僅是說明性的，而不以任何方式對(duì)本發(fā)明范圍作出限制。下面闡述本發(fā)明所要求保護(hù)的排外權(quán)或特權(quán)的實(shí)施方案。
很顯然，本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可以對(duì)上述實(shí)施方案作出細(xì)節(jié)變化，而不會(huì)脫離本發(fā)明的基本原理。因此，本發(fā)明的范圍應(yīng)僅有下面的權(quán)利要求來確定。
權(quán)利要求
1.一種具有如下化學(xué)式的化合物 其中R1和R2獨(dú)立地是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，低級(jí)烷基，環(huán)alk，及芳基；或R1和R2一起是-(CH2)n-，n是5，4，或3；R3是芳基，在芳環(huán)上可有1～4個(gè)取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，OCF3，低級(jí)烷基，N(低級(jí)烷基)2，低級(jí)烷氧基，OH，OC(O)-低級(jí)烷基，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)烷基)2；R4是下述基團(tuán)之一H，低級(jí)烷基，及式-(CH2)n-R5，其中n是0，1，或2，及R5是芳基，在芳環(huán)上可有1～3取代基，每個(gè)取代基是下述基團(tuán)之一H，鹵素，CN，CF3，OCF3，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，NH-低級(jí)烷基，NH-烷芳基，N(低級(jí)烷基)2，OH，OC(O)-低級(jí)alk，OC(O)-低級(jí)烷氨基，及OC(O)-低級(jí)烷基-N(低級(jí)alk)2；及其藥物可接受的鹽或配合物。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2獨(dú)立地是下述基團(tuán)之一氫和低級(jí)烷基。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2一起是-(CH2)n-，及其中n是4或3。
4.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中所述低級(jí)烷基是下述基團(tuán)之一甲基、乙基和異丙基。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1是乙基和異丙基之一。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2是甲基。
7.如權(quán)利要求3所述的化合物，其中R1和R2一起是-(CH2)4-。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是苯基，并任選用羥基或羥基和氟之一所取代。
9.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R4還包括基團(tuán)-(CH2)n-R5；其中n是1或2；及R5是苯基，并任選用1或2個(gè)鹵原子所取代。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中n是2，所述鹵素是氟和氯之一。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物是如下中的至少一種2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-吡啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-5-異丙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-吡啶基-3)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-異丙基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(3，5-二溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氯-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-甲基-苯基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-4-甲氧基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
12.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物是如下中的至少一種2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-甲氧基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-吡啶-4-酮；2-(5-氯-2-羥基-吡啶基-3)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(5-溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-3-異丙基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(3，5-二溴-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物是如下中的至少一種2-(羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及2-(4-氯-2-羥基-苯基)-5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
14.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物是如下中的至少一種2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3-苯乙基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-丙基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5-異丙基-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-5-甲基-3-苯乙基-6-三氟甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-5，6，7，8-四氫-3H-喹唑啉-4-酮；5-環(huán)丙基-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；2-(2-羥基-苯基)-3-苯乙基-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-3，5，6，7-四氫-環(huán)戊烷并嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(3-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；5-乙基-2-(5-氟-2-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及5-乙基-2-(2-氟-6-羥基-苯基)-3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮。
15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物是如下中的至少一種5-乙基-3-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；及3-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-苯基)-6-甲基-5-異丙基-3H-嘧啶-4-酮。
16.一種藥物組合物，其包括如權(quán)利要求1所述的化合物及藥物可接受的稀釋劑或賦形劑。
17.一種治療以異常骨或礦物體內(nèi)平衡為特征的疾病或紊亂的方法，所述方法包括給予需要這種治療的患者有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述骨或礦物疾病或紊亂選自骨肉瘤、牙周疾病、骨折愈合、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、培吉特氏病、惡性體液血鈣過多及骨質(zhì)疏松癥。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述骨或礦物疾病或紊亂是骨質(zhì)疏松癥。
20.一種提高哺乳動(dòng)物中血清甲狀腺旁激素水平的方法，所述方法包括給予需要這種治療的患者有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了嘧啶酮化合物。也公開了制備嘧啶酮化合物的方法。
文檔編號(hào)A61K31/517GK1835928SQ200480009255
公開日2006年9月20日 申請(qǐng)日期2004年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月7日
發(fā)明者伊里娜·V·謝爾巴科娃, 曼紐爾·F·巴蘭德林, 黃光飛, 奧托·若弗魯瓦, 約翰·福克斯, 羅伯特·馬奎斯, 丹尼斯·信二·山下, 朱昂·盧恩戈, 王文勇 申請(qǐng)人:Nps制藥公司, 史密絲克萊恩比徹姆公司