治療細胞增殖性疾病、視網膜病和關節炎的化合物和方法
                            
            
                            
            文檔序號：1090540閱讀：1102來源：國知局
            
                            
                        
            
                        
            
                        
            
                            專利名稱：治療細胞增殖性疾病、視網膜病和關節炎的化合物和方法
            
技術領域：
            本發明涉及化合物和它們的用途，尤其在藥物工業中。本發明公開了具有抗增殖和抗血管生成活性的化合物，以及通過施用所述化合物來治療各種與異常細胞增殖有關的疾病包括癌癥、或與失控血管生成的疾病包括實體瘤生長和轉移有關、眼病尤其是視網膜病、或關節炎的方法。本發明還涉及包含所述化合物的藥物組合物，其更具體地用于治療癌癥、眼病和關節炎。
            
在發達國家，癌癥仍然是死亡的主因之一，因為癌癥影響所有的年齡、性別、人種和種族的群體。根據美國癌癥研究協會(AmericanAssociation for Cancer Research)，美國五分之一的死亡由癌癥引起。在世界范圍內，最主要的癌癥部位是肺(14％)、前列腺(13％)、乳腺(1l％)和結腸直腸(11％)(數據獲自the Cancer Statistic Branch，NC1)。
            
在發達國家，盡管幾種癌癥如男子的前列腺癌(歸因于檢測程序)或肺癌(歸因于預防計劃)的發病率下降，但患癌率在增加。在美國，其中患癌率增長最快的是非霍奇金淋巴瘤癌和黑素瘤(每年增長3％)(The Annual Report to the Nation on the Status of Cancer，1973-1997)。
            
與癌癥發病率不同，發達國家中癌癥死亡率已下降。這一定程度上歸因于較好的治療方案，還有預防計劃和某些癌癥在早期的更好檢測。
            
但是，盡管在治療和預防癌癥中有較高的成就，仍期待若干改進-減少復發的早期癌癥有效療法，-治療標準療法難治療腫瘤的替代療法，
            
-治療轉移性癌癥的替代療法，-毒性小的藥物，和-更好的遞藥系統。
            
細胞信號通道抑制劑通過單獨使用或與標準化學毒性藥物(chemotoxic drug)聯合使用以解決前面的三個問題，從而可以代表這種新的替代療法。但是，由于細胞信號通道是普遍存在的，因此這些抑制劑的毒性比得上標準化學毒性藥物的毒性。為降低它們的毒性并增強它們的組織特異性，可將這些抑制劑結合到適當的遞藥系統。
            
美國專利4,590,201公開了化合物CAI，一種細胞信號抑制劑。這種化合物通過影響細胞中信號處理必需的生物化學通道來抑制增殖和發炎。它是效應酶的間接阻斷劑，效應酶產生誘導生長必需的第二信使。
            
血管生成是一種基本過程，通過它形成新血管，并且這種過程是各種正常身體活動(如生殖、發育和傷口愈合)必不可少的。盡管該過程沒有被完全認識，但據信它涉及到復雜的分子相互作用，其既刺激又抑制內皮細胞(毛細血管的初生細胞)的生長。在正常條件下，這些分子似乎長期以靜止狀態保持微血管供應，這可能持續長至數周，或在某些情況下，長至數十年。但是當需要時(如在傷口愈合期間)，這些相同的細胞可經歷快速的增殖并在5天時間內更新。
            
盡管血管生成在正常條件下是高度調控的過程，但許多疾病受持久的失控血管生成驅動。另外說明，失控的血管生成可直接引起特定疾病或惡化已有的病理狀況。例如，眼新血管形成已被表明是失明的最常見原因，并控制大約20種眼疾病。在某些已有病癥如關節炎中，新形成的毛細血管侵入關節并破壞軟骨。在糖尿病中，視網膜中形成的新毛細管侵入玻璃體、出血并導致失明。實體瘤的生長和轉移也與血管生成有關。已表明，例如，增大至大于2mm的腫瘤必須得到它們自身的血液供應，并通過誘導新毛細血管的生長來這樣做。一旦這些新血管包埋在腫瘤中，它們就為腫瘤細胞提供進入循環的方式，并轉移到遠點，如肝臟、肺或骨。盡管幾種血管生成抑制劑正在被研究用于治療血管生成疾病，但存在與這些化合物中的幾種有關的缺陷。例如，蘇拉明是一種有效的血管生成抑制劑，但在人中造成嚴重的系統毒性。其它化合物如類視色素、干擾素和抗雌激素藥對人類使用是安全的，但只有弱的抗血管生成效果。還有其它化合物難于制造或制造昂貴。
            
本發明現在涉及能提供抗細胞增殖效果，尤其是對腫瘤細胞提供抗細胞增殖效果、和還提供抗血管生成效果的一類新化合物的鑒定和表征。有利地，這些化合物將抑制或逆轉各種人組織中惡性細胞表型，對正常細胞生理學有很少或沒有影響，且高度有效，從而對每個患者只需要有限次數的治療，并具有優異的生物利用度和藥代動力學特性。
            
因此，本發明的一個方面是提供具有通式(I)的化合物，它的互變異構體、旋光異構體和幾何異構體、外消旋物、鹽、水合物和它們的混合物 其中R1選自 和  
            
R2表示氫原子、包含3至6個碳原子的烷基或烯基；B表示鹵原子，優選氯或氟，羥基、-O-CH2-O-CH3(MOM)基團、-O-CH2-O-CH2-CH2-O-CH3(MEM)基團、-OSO2-烷基基團或-OSi(CH3)2tBu；D表示氧原子、NR3、CR’R”或硫原子；X表示氧原子、硫原子或基團-NR4-；Y表示氧原子、硫原子或基團-NR4-；R3表示氫、烷基、羧酸酯基、酰基、甲酰胺基或SO2-烷基；R’和R”可相同或不同，表示氫原子或烷基；R4可相同或不同，選自氫原子、具有1至10個碳原子的烷基、芳基和芳烷基；“連接基團”表示(CH2)n，其中n表示包括1至10的整數，任選地被雜原子(優選N、O、S和P)或羰基、或芳基二烷基(優選二甲苯基)斷開；A表示選自以下的基團 和 任選地，A被取代。
            
本發明的化合物可具有一個或多個不對稱中心，分離的立體異構體(旋光異構體)、純的或部分純化的立體異構體或它們的外消旋混合物都打算包括在本發明的范圍內。
            
本發明還涉及在藥物可接受載體中包含至少一種如上所定義的化合物的藥物組合物，任選地，其與另一種活性藥劑聯合。
            
藥物組合物更具體地用于治療各種與異常細胞增殖有關的疾病如癌癥、或與失控血管生成有關的疾病包括實體瘤生長和轉移、眼病尤其是視網膜病(包括糖尿病性視網膜病、視網膜變性疾病、年齡相關性黃斑變性(ARMD))、或關節炎。
            
本發明還涉及如上所定義的化合物在制造藥物方面的用途，其中該藥物用于治療各種與異常細胞增殖有關的疾病如癌癥、或與失控血管生成有關的疾病包括實體瘤生長和轉移、眼病尤其是視網膜病(包括糖尿病性視網膜病、視網膜變性疾病、年齡相關性黃斑變性(ARMD))、或關節炎。
            
本發明還包括治療與失控血管生成有關的疾病包括實體瘤的生長和轉移、眼病尤其是視網膜病、關節炎、和與異常細胞增殖有關的疾病如癌癥的方法，包括給需要的患者施用有效量的如上所定義的化合物。
            
本發明的化合物具有強的細胞增殖抑制活性，能有效減少或阻止增殖性細胞如腫瘤細胞的生長，這將在本申請中進一步描述。
            
優選實施方案在本申請的范圍內，術語“烷基”和“烷氧基”表示包含1至10個碳原子的直鏈或支鏈飽和基團。烷氧基表示-O-烷基。
            
烷基可為直鏈或支鏈。具有包括1至10個碳原子的烷基的例子為甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、正丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、2-乙基己基、2-甲基丁基、2-甲基戊基、1-甲基己基、3-甲基庚基和它們的其它異構形式。優選地，烷基具有1至6個碳原子。
            
烯基可為直鏈或支鏈。包含3至6個碳原子的烯基的例子有1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基和它們的異構形式。
            
術語“芳基”包括含優選5至14個碳原子、優選6至14個碳原子的任何芳族基團，所述碳原子任選地被一個或幾個選自N、O、S或P中的雜原子斷開。最優選的芳基為單環或雙環，并包含6至14個碳原子，如苯基、α-萘基、β-萘基、蒽基或芴基。
            
術語“芳烷基”一般表示連接到如上所定義的烷基上的芳基，如芐基或苯乙基。
            
術語“羧酸酯基”一般表示提供-COO-R基的基團，其中R表示氫原子、芳基、或優選烷基。在這點上，R3優選表示叔丁基羧酸酯基。
            
術語“酰基”一般表示-COR基團，其中R表示芳基、或優選烷基。在這點上，R3優選表示乙酰基、新戊酰基或苯甲酰基。
            
術語“甲酰胺基”一般表示-CONR’R”基團，其中R’和R”可相同或不同，如上所定義。在這點上，R3優選表示N，N-二乙基-或N，N-二異丙基-甲酰胺基團，或N-叔丁基-或N-甲基甲酰胺基團。
            
根據具體實施方案，A被至少一個取代基取代，取代基可選自氫原子、鹵原子(優選F、Cl或Br)、羥基、(C1-C10)烷基、烯基、(C1-C10)烷酰基、(C1-C10)烷氧基、(C1-C10)烷氧基羰基(或羧酸酯基)、芳基、芳烷基、芳基羰基、單環或多環烴基、-NHCO(C1-C6)烷基、-NO2、-CN、-NR5R6或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6彼此獨立地選自氫原子、具有1至10個碳原子的烷基、芳基和芳烷基。
            
烷酰基為-CO-烷基，烷基如上面所定義。
            
術語“芳基羰基”一般表示與羰基連接的芳基，芳基如上面所定義。
            
術語“烷氧基羰基”一般表示與羰基連接的烷氧基，烷氧基如上面所定義。
            
術語“單環烴基”或“多環烴基”被理解為指具有1至20個碳原子的烴環基，所述碳原子任選地被選自N、O、S和P中的一個或多個雜原子斷開。在這些單環烴基或多環烴基中，可舉出環戊基、環己基、環庚基、1-或2-金剛烷基、吡喃、哌啶、吡咯烷、嗎啉、二惡烷、四氫噻吩和四氫呋喃。單環烴基或多環烴基可與它連接的苯基形成芳基，如α-萘基、β-萘基或蒽基。
            
當連接基團表示被雜原子斷開的(CH2)n時，雜原子更優選為氧原子。在這種情況下，連接基團有利地為-CH2CH2OCH2CH2-基團。當連接基團表示被羰基斷開的(CH2)n時，所述連接基團可表示-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-(優選當X為-NR4-時)。
            
上述基團可任選地被取代。具體地，烷基、烯基、芳基、芳烷基和單環烴基或多環烴基可任選地被一個或多個選自以下的基團取代羥基、鹵原子、氰基、硝基、酯(-COO(C1-C6)烷基)、-OCO(C1-C6)烷基、酰胺(-NHCO(C1-C6)烷基或-CONH(C1-C6)烷基)、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、單環烴基或多環烴基、C＝O基、-NR5R6基或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6如上面所定義。
            
三氟(C1-C6)烷基優選為三氟甲基。
            
根據優選的實施方案，本發明的化合物對應于通式(I)，其中-X為硫、-NH-或優選氧；和/或-Y為氧；和/或-“連接基團”表示(CH2)n，其中n為2至9，優選4至7，或間、鄰或對-二甲苯基、-CH2CH2OCH2CH2-和-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-；和/或-R1為 -CH2N(Et2)和-CH2吡咯烷、 其中D為氧、硫、-CH2-或NR3，其中R3優選表示H或烷基(所述烷基更尤其為甲基)、和-CH2-B，其中B為-O-CH2-O-CH3基或-OSO2-烷基(其中烷基優選為甲基)或鹵(優選氯或氟)；和/或-R2為氫原子；和/或-A為如上所定義的取代基。
            
在具體實施方案中，當A為如上所定義的取代基時，至少一個取代基為鹵原子，更優選氯或氟。
            
本發明的尤其優選的一組化合物是式(I)化合物，其中A的至少一個取代基、更優選全部取代基表示氫原子、甲基、丙基、乙氧基、鹵原子、優選氯或氟、或CF3基。
            
當本發明的化合物為鹽形式時，它們優選為藥物可接受的鹽。這種鹽包括藥物可接受的酸加成鹽、藥物可接受的堿加成鹽、藥物可接受的金屬鹽、銨鹽和烷基化銨鹽。酸加成鹽包括無機酸以及有機酸的鹽。合適無機酸的代表性例子包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等。合適有機酸的代表性例子包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、富馬酸、羥基乙酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗壞血酸、撲酸(Pamoic acid)、雙亞甲基水楊酸、乙二磺酸、葡糖酸、檸康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、EDTA、羥基乙酸、對氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、高氯酸鹽、硼酸鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、羥基萘甲酸鹽、甘油磷酸鹽、酮戊二酸鹽等。藥物可接受的無機或有機酸加成鹽的其他例子包括在J.Pharm.Sci.1977，66，2中列出的藥物可接受鹽，該文獻引入本文作為參考。金屬鹽的例子包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽等。銨鹽和烷基化銨鹽包括銨鹽、甲銨鹽、二甲銨鹽、三甲銨鹽、乙銨鹽、羥基乙銨鹽、二乙銨鹽、丁銨鹽、四甲基銨鹽等。有機堿的例子包括賴氨酸、精氨酸、胍、二乙醇胺、膽堿等。
            
通過使式I的化合物與1至4當量的堿在溶劑中反應而制備藥物可接受鹽，所述堿為例如氫氧化鈉、甲醇鈉、氫化鈉、叔丁醇鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂等，溶劑為例如醚、THF、甲醇、叔丁醇、二惡烷、異丙醇、乙醇等。可使用溶劑的混合物。也可使用有機堿，如賴氨酸、精氨酸、二乙醇胺、膽堿、胍和它們的衍生物等。或者，通過用酸在溶劑中處理來制備在任何情況下都可應用的酸加成鹽，所述酸為例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、fonic酸、乙酸、檸檬酸、馬來酸、水楊酸、羥基萘甲酸、抗壞血酸、棕櫚酸、琥珀酸、苯甲酸、苯磺酸、酒石酸等，溶劑為例如乙酸乙酯、醚、醇、丙酮、THF、二惡烷等。也可使用溶劑的混合物。
            
落在本發明范圍內的式(I)化合物的具體例子包括下面的化合物2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)
            
2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮鹽酸鹽(EHT1302)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)2-嗎啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代嗎啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)
            
4-[5-(6-嗎啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT2725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二異丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)
            
5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)5-(6-(嗎啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)
            
5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)尤其優選的化合物是EHT9241，它的游離堿EHT7365、EHT8560、EHT1864，它的游離堿EHT7168和EHT5743。
            
可通過本領域技術人員已知的各種方法來制備本發明的化合物。更優選地，進行了幾種化學路線。
            
第一種(流程
            

            
圖1)涉及結構C中包括的化合物，其可從化合物A開始以兩個步驟得到(如Miyano，M.；Deason，J.R.；Nakao，A.；Stealey，M.A.；Villamil，C.I.；等人在J.Med.Chem.1988；31，1052-1061中所述)。
            
  流程圖1可在烷基化條件下處理化合物A，優選在溶劑如DMF或THF中使用堿如碳酸銫(Cs2CO3)或NaH、和二鹵代烷烴或二鹵代芳烷烴，在5℃和100℃之間的溫度、典型地在約80℃下進行(步驟a)(表1)。
            
得到的式B的烷基化產物(1-5)可被取代以在反應(步驟b)中得到式C的化合物，反應(步驟b)涉及到堿如NaH或碳酸銫、和親核試劑，親核試劑如表2中所描述的4-喹啉醇、4-喹啉-硫醇、7-苯并[b]噻吩醇、7-丙基-喹啉-8-醇的非取代或取代衍生物。優選的溶劑為DMF、THF或DMSO，反應在25℃和100℃之間的溫度下進行。
            
表1   表2
            
第二化學路線(流程圖2)使用EHT9376化合物，其可在甲醇中用酸源(MeOH，HCl)如Dowex樹脂50WX8-200在5℃和30℃之間的溫度、典型地約25℃下被去保護至相應的醇EHT1302(鹽酸鹽)。
            
  流程圖2在第三化學路線(流程圖3)中，可用堿如碳酸銫和1，5-二溴戊烷的二甲基甲酰胺溶液在50℃下由甲硅烷化醚6(6由Sefkow，M.；Kaatz，H.在Tetrahedron Lett，1999，40，6561-6562中描述)制備中間體7(流程圖3)。
            
可使用氫化鈉、7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇的二甲基甲酰胺溶液在室溫下由中間體7制備衍生物8。隨后使用正四丁基氟化銨(TBAF)的四氫呋喃溶液在室溫下去保護甲硅烷化醚8，得到醇EHT5909(流程圖3)。
            
可利用氫化鈉和甲基氯甲基醚的四氫呋喃溶液在室溫下由醇EHT5909得到MOM衍生物EHT2168。可分別使用甲磺酰氯和三乙胺的二氯甲烷溶液在室溫下或二乙基氨基三氟化硫(DAST)的二氯甲烷溶液，由醇EHT5909制備氯代、甲磺酸酯和氟代衍生物(EHT1494、9和EHT8817)(流程圖3)。
            
  流程圖3a)TBDMSCl、CH2Cl2、TEA、室溫。
            
b)Cs2CO3、DMF、二溴戊烷、50℃。
            
c)7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇、NaH、DMF、室溫。
            
d)TBAF、THF、室溫。
            
e)MOMCl、NaH、THF、室溫。
            
f)CH3SO2Cl、TEA、CH2Cl2、室溫。
            
g)DAST、CH2Cl2。
            
對于上述系列，產率通常在55-90wt％之間，更尤其在55-75wt％之間。制備式(I)化合物的這些方法代表了本申請的更多目的。
            
在另外的化學路線中，使用堿如碳酸銫(Cs2CO3)在5℃和100℃之間的溫度、一般在大約80℃下在DMF中由5-(5-溴代戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮10制備醇11-15。通過使用1，5-二溴戊烷的DMF溶液、和使用堿Cs2CO3在110℃下烷基化曲酸制備中間體10，產率為46％(表3)。
            
表3醇11-15和EHT5909分別與甲磺酰氯在堿如三乙胺存在的情況下、在二氯甲烷中、在包括0℃和室溫之間的溫度下反應1小時到18小時，產生甲磺酸鹽衍生物16-20和9(表4)。
            
表4
            
甲磺酸鹽衍生物9與親核試劑、伯胺和仲胺，分別如哌啶、硫代嗎啉、二乙胺、嗎啉和N-甲基哌嗪在回流下、在二氯甲烷中反應1小時到4小時，產生EHT9317、EHT5430、EHT7370、EHT7168和EHT7365(表5)。
            
表5類似地，甲磺酸鹽衍生物16-20被親核試劑如伯胺和仲胺(嗎啉、N-甲基哌嗪、硫代嗎啉、二乙胺、哌啶)取代得到EHT1426、EHT0079、EHT3411、EHT8791、EHT8935、EHT5847、EHT4867、EHT5317、EHT3726和EHT4063(表6)。
            
表6得到本發明化合物的最后一個優選化學路線是匯集合成在鹵代烷基喹啉(表8)和合適的取代曲酸(它們的制備見表7)之間的反應得到本發明的化合物，有更好的總產率，其過程也較短。
            
在表7中，第一個反應是使用體系H2SO4/HBr/H2O在70℃下溴化曲酸18小時，得到如專利FR2751331所述的相應溴代衍生物21。溴代衍生物21與不同的胺(嗎啉、N-甲基哌嗪或N-叔丁氧羰基-哌嗪)反應，產生相應的取代曲酸22-24。
            
表7在表8中，使用不同的條件得到各種取代的喹啉中間體25-33。烷基化試劑與7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇在NaH存在下、在DMF中反應，得到27和29，產率很低(12％和15％)。使用堿K2CO3/KOH、Cs2CO3或完全沒有堿，利用相轉移條件(CHCl3/TBAB/H2O)優化7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇的烷基化，得到25、26、28和30，產率很高(61-72％)。可在相轉移條件下由7-三氟甲基-4-喹啉醇和1，2-二氯乙烷制備中間體31，觀察到很少的消去產物。通過用1，5-二溴戊烷在Li2CO3存在下、在NMP中烷基化7-氯-4-喹啉醇以得到衍生物33，觀察到主要為N-烷基化產物。在三乙胺和5-溴戊酰氯存在下、在CHCl3中酰化4-氨基-7-三氟甲基喹啉，以高產率(90％)得到32。
            
表8使用表8的鹵代烷基喹啉系列和表7的取代曲酸21-24實現匯集步驟(表9)，得到本發明的相應化合物。
            
   
            
  表9按照烷基化條件，優選在DMF中、在90℃下使用堿Cs2CO3進行，得到大多數這些最終化合物(EHT6892、EHT1864、EHT0371、EHT6037、EHT9358、EHT2580和EHT9241)，產率一般在35％-75％之間。
            
帶有芳族間隔基的一些產物反應至較低的溫度(EHT9069、EHT2725和EHT2218)。使用相轉移條件(CHCl3/TBAB/H2O/Cs2CO3)，由氯代衍生物30以低產率(5％)得到EHT5575，觀察到主要為消去產物。
            
可使用HCl氣體在乙醇中的溶液在50℃下對N-叔丁氧羰基-哌嗪衍生物(EHT9358和EHT2580)去保護(表10)，得到相應的哌嗪并化合物(EHT8560和EHT0872)。
            
表10通過在三乙胺存在下、在CHCl3中、在20℃下，由EHT8560的游離堿開始與各種酰基氯或氨基甲酰氯、甲磺酰氯和異氰酸酯的反應，制備(表11)本發明的一系列化合物(EHT3980、EHT5743、EHT0785、EHT0566、EHT8366、EHT3664和EHT4495)，產率高(71-98％)(表11)。 
            
  表11應認識到，技術人員可根據通用知識和本申請中包含的以下指導來設計產生這些化合物的其它方法。
            
如上所述，本發明的又一目的涉及包含至少一種如上所定義的式(I)化合物和藥物可接受載體或載體的藥物組合物。
            
化合物可被配制成各種形式，包括固體和液體形式，如膠囊、片劑、凝膠、溶液、糖漿、混懸液、粉劑、氣霧劑、軟膏等。
            
本發明的組合物可包含生理學上可接受的稀釋劑、填料、潤滑劑、賦形劑、溶劑、粘合劑、穩定劑等。可在組合物中使用的稀釋劑包括但不限于磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、纖維素、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、干淀粉、糖粉和用于延長稀釋片劑的羥丙基甲基纖維素(HPMC)。可在組合物中使用的粘合劑包括但不限于淀粉、明膠和填料如蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖。
            
可在組合物中使用的天然和合成膠包括但不限于藻酸鈉、茄替膠、羧甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮和維格姆凝膠(veegum)。可在組合物中使用的賦形劑包括但不限于微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂、乳糖和蔗糖。可使用的穩定劑包括但不限于多糖如阿拉伯膠、瓊脂、藻酸、瓜爾膠和黃蓍膠，兩性物質如明膠、和合成和半合成聚合物如卡波姆樹脂、纖維素醚和羧甲基殼多糖。
            
可使用的溶劑包括但不限于林格氏溶液、水、蒸餾水、50％二甲亞砜的水溶液、丙二醇(無水或有水)、磷酸鹽緩沖的鹽水、平衡鹽溶液、乙二醇和其它常規流體。
            
施用式(I)化合物的劑量和給藥方案將隨劑型、給藥方式、正治療的癥狀和被治療患者的詳細資料變化。因此，最好通過常規試驗實時實地確定最佳治療濃度。
            
本發明的化合物還可在腸內使用。口服時，本發明的化合物適合以10μg-300mg/天/kg體重的比率給藥。可按一份或多份來施用所需的劑量。對于口服給藥，合適的形式為例如膠囊、片劑、凝膠、氣霧劑、藥丸、糖衣丸、糖漿、混懸液、乳劑、溶液、粉劑和顆粒劑；優選的給藥方法在于使用包含1mg至約500mg活性物質的合適形式。
            
本發明的化合物還可以以靜脈內、皮下或肌內灌注或注射用的溶液或混懸液的形式在腸胃外給藥。在這種情況下，本發明的化合物通常以約10μg-10mg/天/kg體重的比率給藥；優選的給藥方法在于使用每ml包含約0.01mg-1mg活性物質的溶液或混懸液。
            
本發明的化合物還可以以玻璃體內或眼眶后注射用的溶液或混懸液的形式在眼中給藥。在這種情況下，本發明的化合物通常以約10μg-10mg/天/kg體重的比率給藥；優選的給藥方法在于使用每ml包含約0.01mg-1mg活性物質的溶液、混懸液或凝膠。
            
可按照與治療(化學預防和治療)各種腫瘤的其它已知抗腫瘤藥或治療眼疾病的其它已知藥劑尤其是抗視網膜病藥或抗關節炎藥基本類似的方式使用式(I)的化合物。對于本發明的化合物，給藥劑量，不管是單劑量、多劑量還是日劑量，都當然隨使用的具體化合物(因為化學物效力不同)、選擇的給藥途徑、受體大小、疾病類型(癌癥，在這種情況下為腫瘤類型，關節炎，眼疾病尤其是視網膜病，在這種情況下為視網膜病類型，尤其是糖尿病性視網膜病，視網膜推行性疾病、年齡相關性黃斑變性(ARMD))和患者癥狀的性質而變化。對給藥的劑量沒有限制界限，但通常為有效量，或以活性藥物的新陳代謝釋放以獲得其藥理學和生理學效果時劑型產生的藥理學活性游離形式的摩爾當量。熟悉癌癥治療領域的腫瘤學家或熟悉眼疾病、糖尿病或關節炎治療領域的醫生將不用過度試驗就能確定有效施用本發明化合物的合適方案，如通過參考早期出版的關于發現具有抗腫瘤、抗血管生成和尤其是抗視網膜病或抗關節炎性質的化合物的論文。
            
根據另一方面，本發明涉及治療與異常細胞增殖有關的疾病的方法，包括為需要這種治療的患者施用有效量的至少一種如上所述具有通式(I)的化合物。
            
根據本發明使用的優選化合物包括如上所定義的任何小組，作為具體的例子，有下面的化合物2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮鹽酸鹽(EHT1302)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)2-嗎啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代嗎啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3276)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)4-[5-(6-嗎啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT2725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二異丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)5-(6-(嗎啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)本發明的又一個目的是使用有效量的至少一種如上所定義的式(I)化合物來制備用于治療與異常細胞增殖有關的疾病和與失控血管生成有關的疾病的藥物組合物。
            
由于它們的細胞增殖抑制活性，本發明的化合物適于治療各種癥狀中的各種疾病。在這點上，“治療”既包括治療性治療又包括預防性治療。因此，可在疾病的非常早階段、或早期發作前、或顯著發展包括轉移后使用化合物。術語“治療”尤其指患者負擔的減輕，如細胞增殖速度降低、患病增殖性細胞的破壞、血管或血管樣結構形成的抑制、腫瘤質量或腫瘤大小的減少、腫瘤發展的延遲以及完全的腫瘤抑制。
            
與異常細胞增殖和/或與失控血管生成有關的疾病的典型例子包括癌癥、再狹窄、關節炎、糖尿病、眼疾病，例如尤其是視網膜病。本發明的化合物尤其適合于治療癌癥，如實體瘤或淋巴腫瘤。具體例子包括前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、頭頸癌、結腸癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤癌、白血病(急性成淋巴細胞白血病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病)和黑素瘤。
            
可按照各種途徑施用化合物，典型地通過口服途徑或通過注射，如局部或全身注射。對于治療現有的癌癥，優選腫瘤內注射。但是，也可使用其它給藥途徑，如肌內、靜脈內、皮內、皮下等。另外，如果需要，可進行重復注射，盡管考慮化合物的效力，據信將需要有限次數的注射。
            
本發明的又一目的是通過在患有癌癥的患者中施用有效量的如上所定義的式(I)化合物來減少癌癥細胞增殖的組合物。
            
本發明的又一目的是通過在需要這種治療的患者中施用有效量的如上所定義的式(I)化合物來治療轉移性癌癥的組合物。
            
本發明的又一目的是通過在需要這種治療的患者中施用有效量的如上所定義的式(I)化合物來治療眼疾病的組合物。
            
本發明的又一目的是通過在需要這種治療的患者中施用有效量的如上所定義的式(I)化合物來治療關節炎的組合物。
            
本發明的又一目的是使用如上所定義的化合物來制備用于治療轉移性癌癥或減少癌癥細胞增殖的藥物組合物。
            
本發明的又一目的是使用如上所定義的化合物來制備用于治療眼疾病尤其是視網膜病(包括糖尿病性視網膜病，視網膜變性疾病和年齡相關性黃斑變性(ARMD))的藥物組合物。
            
本發明的又一目的是使用如上所定義的化合物來制備用于治療關節炎的藥物組合物。
            
本發明的更多方面和優點將在下面的實施例中公開，這些實施例應被認為是說明性的，不限制本申請的范圍。
            
表和圖的說明表12在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HMEC1、HCT116、MDA-MB-231、MCF7和NIH3T3細胞系中的6天細胞存活率分析(MTT)。將3×103至15×103個細胞接種在48孔板中的含10％FBS的生長培養基中，有或沒有各種濃度的試驗化合物。每3天用合適的培養基供養細胞培養物。在第6天測定細胞存活率。分析數據，并使用GraphPad Prism由劑量-響應曲線計算IC50。匯總在表中的結果為1至8個獨立實驗的平均值±SEM。
            
表13在0.5％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HCT116和MDA-MB-231細胞系中的6天細胞存活率分析(MTT)。將7.5×104至15×104個細胞接種在48孔板中的含10％FBS的生長培養基中，有或沒有各種濃度的試驗化合物。每3天用合適的培養基供養細胞培養物。在第6天測定細胞存活率。分析數據，并使用GraphPad Prism由劑量-響應曲線計算IC50。匯總在表中的結果為1至2個獨立實驗的平均值±SEM。
            
表14在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在DLD1、HCT116、MDA-MB-231、MCF7和HeLa細胞中的3天細胞存活率分析(MTT)。將7.5×103至1.5×104個細胞接種在48孔板中的含10％FBS的生長培養基中，有或沒有各種濃度的試驗化合物。分析數據，并使用GraphPadPrism由劑量-響應曲線計算IC50。匯總在表中的結果為1至7個獨立實驗的平均值±SEM。
            
表15在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HCT116、MDA-MB-231、NIH3T3、HepG2和初生肝細胞中的16小時細胞存活率分析(MTT)。將5×104至10×104個細胞接種在48孔板中的含10％FBS的生長培養基中，有或沒有各種濃度的試驗化合物。分析數據，并使用GraphPad Prism由劑量-響應曲線計算IC50。匯總在表中的結果為1至2個獨立試驗的平均值±SEM。
            
圖1化合物對肌動蛋白細胞骨架影響的研究。用各種濃度的化合物處理靜止Swiss 3T3細胞30分鐘，然后通過在含50％H2O的培養基中培育10分鐘進行滲透休克。隨后固定細胞，滲透并用PhalloidinTRITC標記。在顯微鏡下計數100-200個細胞，評估表現出片狀偽足和皺褶的細胞百分率。
            
圖2最佳化合物在6-(A)和3-(B)天處理后的MTT分析。將細胞接種在48孔板中的含10％FBS的生長培養基中，有或沒有各種濃度的試驗化合物。每3天用合適的培養基供養細胞培養物。在第3或6天測定細胞存活率。分析數據，并使用GraphPad Prism由劑量-響應曲線計算IC50。數據為1至8個獨立試驗的平均值±SEM。
            
圖3在軟瓊脂中的不錨定依賴生長分析。將5×103個細胞接種在24孔板中的含0.3％瓊脂的培養基中，培養基補充有指定量的化合物。在37℃下培育7天后，拍攝每個孔的照片，并使用ImageJ圖象分析軟件分析。尤其是計算克隆大小和數量。使用GraphPad Prism分析數據，并計算IC50。圖上顯示的結果為1至3個實驗的平均值±SEM。(A)對于克隆大小和數量得到的典型劑量-響應曲線。(B)顯示計算的每種化合物的IC50的柱狀圖。
            
圖4遷移分析。(A)REF細胞中的傷口愈合分析。在實驗前48小時將7.6×104個細胞接種在蓋玻片上。用化合物預處理細胞30分鐘，然后使用吸管端部進行刮擦。將在處理培養基中的刮擦過的蓋玻片放在與攝像機連接的恒溫顯微鏡下。按材料和方法中所述分析影片，評估速度和細胞覆蓋的總距離。柱狀圖代表2至4次試驗的平均值±SEM。(B)在HMEC1、NIH3T3和MDA-MB-231細胞中的Boyden室遷移分析。將5×104至7.5×104個重懸浮在培養基中的細胞接種在8μm孔尺寸過濾器上面的上部Boyden盲孔(blind well)中，培養基有或沒有FBS，并具有不同的化合物濃度。在下面的Boyden室中分析有或沒有FBS時細胞遷移通過過濾器的能力。在16小時培育后，移去培養基并用含鈣黃綠素-AM的培養基代替。標記后，用HBSS洗滌細胞，并在熒光板讀出器中讀取熒光。將熒光值以1％DMSO對照物得到的熒光進行歸一化。作圖的數據為2至4個獨立實驗的平均值±SEM。
            
圖5小管生成分析(接點數)。按材料和方法中所述將2×104個細胞接種在涂有Matrigel的孔上。在7小時培育后取每個孔的照片。使用AngioSys軟件定量“接點數”參數，使用GraphPad Prism分析數據用于IT50計算。值代表2至30個獨立試驗的平均值±SEM。
            
圖6體內斑馬魚血管生成分析。受精20小時后(hpf)，用化合物和1％DMSO培育胚胎28小時。用NBT/BCIP給血管染色，使用Adobe Photoshop軟件進行形態測量分析。對于每種條件，分析10個胚胎，結果表示為平均值±SEM。(A)劑量-響應曲線。(B)表示節間血管形成的50％抑制和最大抑制連同死亡胚胎百分率的表(見材料和方法)。
            
實施例實施例1至50公開了本發明化合物的合成和物理化學性質。
            
實施例51公開了化合物的生物活性。
            
總則用Avance 300(Bruker)分光計在環境溫度下記錄1HNMR光譜。使用裝備有Waters 2525泵、Waters 2696光電二極管陣列檢測器和XTerra柱(零件編號186000482，5μm，C18，4.5×50mm)的Waters自動純化系統，通過反相高效液相色譜法(HPLC)分析化合物。使用的HPLC方法為7分鐘內5％溶劑B到100％的梯度。溶劑A為具有0.05％TFA的H2O，溶劑B為具有0.05％TFA的CH3CN(方法A)。用BüchiB-545熔點測定儀測量熔點，未校正。為了分離反應產物，使用真空旋轉蒸發器通過蒸發除去溶劑，水浴溫度不超過40℃。
            
EHT3788、1593、EHT1074、EHT5810、EHT0470、EHT6060和EHT9376的制備一般過程方法A(在THF中)在裝備有磁力攪拌器的25ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下連續裝入1當量的NaH(在礦物油中，60％)、無水THF(10mL)、和要被去質子化的單體(250mg)。擱置反應混合物，直至看不見氣體逸出(在3-5小時之間)。加入1M5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮1的THF(1當量)溶液，反應混合物在室溫下攪拌12小時。反應混合物在真空中蒸發，用2N NaOH水溶液洗滌和/或通過二氧化硅上的閃蒸色譜法純化粗產物。
            
方法B(在DMSO中)在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下連續裝入1當量的NaH(在礦物油中，60％)、DMSO(5mL)和要被去質子化的單體(250mg)。在60℃下加熱反應混合物3小時。在冷卻至室溫后，加入(一次性)5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮1(1當量)，并在60℃下加熱反應混合物12小時。冷卻后，加入50mL二氯甲烷，用H2O(4×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾和真空蒸發。通過用2N NaOH水溶液洗滌和/或通過二氧化硅上的閃蒸色譜法純化粗產物。
            
5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氫甲基)-4H-吡喃-4-酮 1使用在20mL DMF中的5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(3.5g，15.5mmol)、Cs2CO3(5.04g，15.5mmol)和1，5-二溴戊烷(8.8g，36.7mmol)按照實施例11制備化合物。在90-95℃下加熱密封管1小時40分鐘。得到白色固體1(5.30g，91％產率)。
            
化合物1的結構列在下面
            
  MW375.25；產率91％；黃色固體；Mp140.3℃。
            
Rf0.36(CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2).
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.53-1.84(m，12H，6xCH2)，3.52-3.57(m，1H，OCH2)，3.77-3.84(m，1H，O-CH2)，4.30(d，JBA＝14.5Hz，1H，OCH2)，4.48(s，2H，OCH2)，4.50(d，JAB＝14.5Hz，1H，OCH2)，4.70(t，J＝3.1Hz，1H，OCHO)，5.07(s，2H，BrCH2)，6.51(s，1H，-C＝CH-)，7.36-7.42(m，4H，Ar-H)，7.53(s，1H，-C＝CH-).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)374.9-376.9([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，RT＝5.73min。
            
實施例12-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)用7-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.25g，0.12mmol)按照方法A制備化合物。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通過色譜法純化后，得到米色(beige)固體EHT3788(0.11g，18％產率)。
            
化合物實施例1的結構如下 MW507.50；產率18％；米色固體。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.12(m，12H，6xCH2)，3.50-3.58(m，1H，CH2CH2O)，3.75-3.85(m，1H，CH2CH2O)，3.96(t，J＝7.0Hz，2H，OCH2)，4.27(t，J＝7.0Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.73(m，1H，OCHO)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，6.83(d，J＝5.7Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.68(d，J＝9.6Hz，1H，Ar-H)，8.34(m，1H，Ar-H)，8.83(dd，J＝6.3Hz，J＝5.6Hz，1H，Ar-H).
            
實施例25-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)用6-氟-2-甲基-喹啉-4-醇(0.25g，1.41mmol)按照實施例11制備化合物。使用洗脫液庚烷∶EtOAc＝9∶1在硅石上通過色譜法純化后，得到棕色油EHT1593(0.13g，19.5％產率)。
            
化合物實施例2的結構如下 MW471.52；產率19.5％；棕色油。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.02(m，12H，6xCH2)，2.69(s，3H，CH3)，3.50-3.58(m，1H，CH2CH2O)，3.75-3.85(m，1H，CH2CH2O)，3.68(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.21(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.53(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，5.32(m，1H，OCHO)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，6.63(s，1H，Ar-H)，7.38-7.46(m，1H，Ar-H)，7.60(s，1H，-C＝CH-)，7.74(dd，J＝6.3Hz，J＝2.7Hz，1H，Ar-H)，7.93(dd，J＝6.3Hz，J＝5.1Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)472.1([MH]+，90)，388.0(15)，295.1(100)，227.0(15)，211.1(10)，178.0(45).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT1593RT＝4.62min，峰面積95.7％。
            
實施例35-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)用6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.25g，1.08mmol)按照方法B制備化合物。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通過色譜法純化后，得到灰色固體EHT1074(0.07g，12％產率)。
            
化合物實施例3的結構如下 MW525.49；產率12％；灰色固體。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.50-1.92(m，8H，4xCH2)，1.92-2.12(m，4H，2xCH2)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.83-3.90(m，1H，CH2O)，3.97(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2O)，4.32(t，J＝5.7Hz，2H，OCH2O)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.53(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，OCH2O)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-CH＝)，7.06(s，1H，Ar-H)，7.56(m，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，-CH＝)，7.85(dd，J＝9.3Hz，J＝3.0Hz，1H，Ar-H)，8.16(dd，J＝9.3Hz，J＝5.1Hz，1H，Ar-H).
            
實施例45-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)用7-丙基-喹啉-8-醇(0.25g，1.33mmol)按照方法B制備化合物。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通過色譜法純化后，得到綠色油EHT5810(0.16g，25％產率)。
            
化合物實施例4的結構如下 MW481.58；產率25％；綠色油。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.00(t，J＝7.2Hz，3H，Me)，1.50-1.92(m，10H，5xCH2)，1.92-2.10(m，4H，2xCH2)，2.84(t，J  ＝7.2Hz，2H，＝C-CH2CH2CH3)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.83-3.90(m，1H，CH2O)，3.94(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2O)，4.32(m，J＝6.6Hz，2H，OCH2O)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.73(t，J＝3.0Hz，1H，OCH2O)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，7.33(dd，J＝8.1Hz，J＝4.2Hz，1H，Ar-H)，7.33(d，JBA＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.50(d，JBA＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，8.09(d，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.16(dd，J＝4.2Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H).
            
實施例55-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)用苯并[b]噻吩-7-醇(0.25g，1.66mmol)按照方法A制備化合物。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通過色譜法純化后，得到黃色油EHT6060(0.02g，3％產率)。
            
化合物實施例5的結構如下
            
  MW444.54；產率3％；黃色油。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.00(m，12H，5xCH2)，3.52-3.60(m，1H，CH2CH2O)，3.82-3.90(m，1H，CH2CH2O)，3.94(t，2H，J＝6.6Hz，OCH2)，4.27(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.64(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.72-4.77(m，1H，OCHO)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，6.70(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，7.53(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.68(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，8.57(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H).
            
實施例62-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)用7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(0.25g，1.09mmol)按照方法A制備化合物。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝99∶1在硅石上通過色譜法純化后，得到黃色固體EHT9376(0.27g，47％產率)。
            
化合物實施例6的結構如下 MW523.57；產率47％；黃色固體；熔點＝86.4℃。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.49-1.90(m，12H，6xCH2)，3.16(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.50-3.58(m，1H，CH2O)，3.83-3.91(m，1H，CH2O)，3.91(t，J＝6.3Hz，2H，CH2O)，4.33(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.52(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.73(m，1H，OCHO)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.28(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，-C＝CH-)，7.72(dd，J＝8.7Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.25(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.37(s，1H，Ar-H)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
EHT4745、EHT6271、EHT1302的合成5-(4-溴-丁氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮  2使用5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，4-二溴丁烷(2.00mL，16.7mmol)按照實施例11制備化合物。在80℃下加熱密封管2小時30分鐘。得到白色固體2(1.14g，71％產率)。
            
化合物2的結構列在下面 MW361.23；產率71％；白色固體；熔點＝71.5℃。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.49-1.91(m，6H，3xCH2)，1.91-2.10(m，4H，2xCH2)，3.48(t，J＝6.5Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.76-3.88(m，1H，OCH2)，3.92(t，J＝6.1Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.58(s，1H，-C＝CH-).
            
實施例72-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)在裝備有磁力攪拌器的25mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.19g，0.87mmol)。連續加入無水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(35mg，0.87mmol)。30分鐘后在室溫下加入5-(4-溴-丁氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮2(0.30g，0.83mmol)的溶液。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應混合物倒入200mL H2O中，用EtOAc(3×75mL)萃取。用鹽水(4×250mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。在二乙醚中重結晶粗化合物，過濾后得到黃色固體EHT4745(271mg，64％產率)。
            
化合物實施例7的結構如下 MW508.55；產率64％；淺黃色固體；熔點＝97.3℃(分解)。
            
Rf0.12(AcOEt).
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.45-1.92(m，6H，3xCH2)，1.98-2.12(m，4H，2xCH2)，3.19-3.28(t，J＝6.8Hz，2H，CH2S)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.92-4.01(m，1H，CH2O)，4.32(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.5Hz，1H，＝CCH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.5Hz，1H，＝CCH2O)，4.72(t，J＝3.1Hz，2H，OCH2O)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.32(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)510([MH]+，30)，426(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT4745RT＝5.33min，峰面積99.9％。
            
5-(5-溴-己氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮  3在裝備有磁力攪拌器的30mL密封管中，在惰性氣氛下裝入5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.50g，6.60mmol)。連續加入無水DMF(10mL)、Cs2CO3(2.30g，7.00mmol)和1，6-二溴己烷(3.20g，13.30mmol)。在60℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發DMF后，通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2)純化粗化合物，蒸發后得到5-(6-溴-己氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮3，為油(190mg，52％產率)。
            
化合物3的結構如下 MW389.28；產率52％；油。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.40-1.95(m，14H，7xCH2)，3.45(t，J＝6.7Hz，2H，BrCH2)，3.52-3.64(m，1H，OCH2)，3.82-3.92(m，1H，OCH2)，3.90(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，4.36(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.56(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.74-4.79(m，1H，OCHO)，6.54(s，1H，-C＝CH-).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)389-391([MH]+，97-100).
            
實施例82-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)在裝備有磁力攪拌器的50mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.62g，2.70mmol)。連續加入無水DMF(20mL)和60％NaH在油中的分散液(110mg，2.70mmol)。30分鐘后，在室溫下加入5-(6-溴-己氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮3(1.00g，2.57mmol)的溶液。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應混合物倒入200mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝98∶2至9∶1)純化粗化合物，在二乙醚中重結晶后得到白色固體EHT6271(370mg，33％產率)。
            
化合物實施例8的結構如下 MW537.59；產率33％；白色固體；熔點＝67.8℃。
            
Rf0.20(EtOAc).
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.56-1.90(m，14H，7xCH2)，3.13(t，J＝7.3Hz，2H，CH2S)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3，94(m，1H，O-CH2)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，CH2O)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.37(s，2H，CH2O)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)；8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)538.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT6271，RT＝5.80min，峰面積99.8％。
            
實施例92-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮鹽酸鹽(EHT1302)將EHT9376(40.6mg，0.0077mmol)裝入裝備有磁力攪拌器的5mL小瓶中。加入2mL MeOH和活性DOWEX(50W×8)(50mg)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。過濾懸浮液，用MeOH∶HCl 1M＝9∶1的溶液洗滌沉淀物。蒸發后得到粘稠淺黃色油2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮鹽酸鹽EHT1302(7mg，19％產率)。
            
化合物實施例9的結構如下 MW475.91(HCl鹽)；產率19％；淺黃色油。
            
1H-NMR(CD3OD，δ)δ1.60-2.00(m，6H，3xCH2)，3.42(t，J＝7.1Hz，2H，CH2S)，3.83(t，J＝5.8Hz，2H，CH2O)，4.31(s，2H，CH2OH)，6.38(s，1H，-C＝CH-)，7.92(s，2H，-C＝CH-和Ar-H)，8.05(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(s，1H，Ar-H)，8.57(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.88(d，J＝6.0Hz，1H，Ar-H).
            
13C-NMR(CD3OD)176.79，170.72，166.95，148.95，144.63，144.54，136.75，136.68，136.30，128.86，127.64，126.15，122.52，120.24，120.18，118.24，111.70，70.40，61.06，32.84，29.44，28.34，26.42.
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)439.95[(MH)+，100]，306.08(10).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT1302，RT＝4.63min，峰面積99.0％。
            
EHT5909、EHT2168、EHT1494、EHT7365和EHT7168的制備5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7在裝備有磁力攪拌器的100mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮6(1.50g，5.85mmol)。連續加入無水DMF(25mL)和Cs2CO3(2.10g，6.44mmol)。5分鐘后，在室溫下通過注射器加入1，5-二溴戊烷(2.39mL，17.55mmol)。在50℃下加熱反應混合物3小時。冷卻和過濾后，在真空中除去DMF。使用洗脫液EtOAC∶環己烷＝20∶80然后30∶70，在硅石上通過色譜法純化粗油。蒸發后，得到白色固體5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7(1.25g，53％產率)。
            
化合物7的結構如下 MW405.40；產率53％；白色固體；熔點＝65.3℃。
            
Rf0.65(AcOEt∶環己烷＝50∶50)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)0.11(s，6H，2xCH3)，0.93(s，9H，3xCH3)，1.52-1.68(m，2H，CH2)，1.79-1.97(m，4H，2xCH2)，3.43(t，J＝6.7Hz，2H，CH2Br)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，CH2O)，4.46(s，2H，CH2OSi)，6.50(d，J＝0.5Hz，1H，-C＝CH-)，7.54(s，1H，-C＝CH).
            
13C-NMR(CD3Cl)174.58，166.84，147.81，139.00，111.71，69.38，62.21，33.53，32.36，28.21，25.73，24.58，18.26，-5.48.
            
2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8在裝備有磁力攪拌器的100mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.77g，3.37mmol)。連續加入無水DMF(20mL)和60％NaH在油中的分散液(135mg，3.37mmol)。40分鐘后，在室溫下通過注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7(1.24g，3.06mmol)在10mL DMF中的溶液。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應混合物倒入500mL H2O中，用EtOAc(3×150mL)萃取。用鹽水(4×250mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在真空中蒸發。使用洗脫液EtOAC∶環己烷＝50∶50然后60∶40，在硅石上通過色譜法純化粗黃色固體。蒸發后，得到黃色固體2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8(1.27g，75％產率)。
            
化合物8的結構如下 MW553.71；產率75％；黃色固體。
            
Rf0.31(AcOEt∶環己烷＝60∶40)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)0.11(s，6H，2xCH3)，0.93(s，9H，3xCH3)，1.60-1.78(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.46(s，2H，CH2OSi)，6.51(d，J＝0.8Hz，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.53(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.4Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)554.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，RT＝6.57min。
            
實施例102-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)在50mL圓底燒瓶中，在25mL THF中溶解2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8(1.20g，2.17mmol)。通過注射器加入正四丁基氟化銨在THF中的溶液(2.38mL，2.38mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時。在真空中蒸發反應混合物，使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通過色譜法純化粗產物。蒸發后得到淡黃色固體EHT5909(0.73g，77％產率)。
            
化合物實施例10的結構如下
            
  MW439.11；產率77％；淺黃色固體；熔點＝133.2℃(分解，EtOAc)。
            
Rf0.23(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.65-1.76(m，2H，CH2)，1.77-1.95(m，4H，2xCH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.86＝8.2Hz，2H，CH2O)，4.12(sbroad，1H，OH)，4.49(s，2H，CH2OH)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.54(s，1H，-C＝CH-)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(s，1H，Ar-H)，8.74(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
13C-NMR(CD3Cl)174.70，167.23，150.42，148.56，147.79，146.39，139.29，128.14，127.50，125.00，121.89，117.26，111.98，69.29，60.81，30.99，28.55，27.76，25.40.
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)439.9(([MH]+，100)，298.08(5)，211(10)，142.9(5).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT5909 RT＝4.60min，峰面積99.9％。
            
實施例112-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)在裝備有磁力攪拌器的25mL三頸圓底燒瓶中，在氮氣氣氛下裝入2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮EHT5909(0.10g，0.227mmol)。在室溫下加入THF(6mL)和NaH(60％在油中的分散液，10mg，0.25mmol)。攪拌反應混合物5分鐘后，通過注射器加入甲基氯甲基醚(18.1μl，0.24mmol，1.05當量)，并在室溫下攪拌反應混合物2小時30分鐘。將反應混合物倒入H2O(60mL)中，用EtOAc(3×20mL)萃取。用MgSO4干燥有機層，過濾并在真空中蒸發。使用洗脫液MeOH∶CH2Cl2＝2∶98在硅石上通過色譜法純化粗產物。用真空泵蒸發并干燥后，得到白淺黃色固體EHT2168(74mg，67％產率)。
            
化合物實施例11的結構如下 MW483.50；產率67％；淺黃色固體；熔點＝88.1℃。
            
Rf0.42(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.73-1.80(m，2H，CH2-CH2-CH2)，1.82-1.98(m，4H，CH2-CH2-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.40(s，3H，MeO)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.37(s，2H，CH2O)，4.70(s，2H，CH2O)，6.48(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)484.1([MH]+，100)，255(5).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT2168 RT＝5.19min，峰面積99.9％。
            
甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9在5℃下，向2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮EHT5909(0.10g，0.23mmol)在4mL二氯甲烷的懸浮液中加入三乙胺(35μl，0.25mmol)和甲磺酰氯(19.4μl，0.25mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。加入二氯甲烷(20mL)，并用10％NaHCO3水溶液(2×30mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并在真空中蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通過色譜法純化粗產物。蒸發后得到白色固體甲磺酸4-氧代-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(83mg，69％產率)。
            
化合物9的結構如下 MW517.54；產率69％；白色固體；熔點＝122.1℃(分解)。
            
Rf0.44(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.63-1.78(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.11(s，3H，MeS)；3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.98(s，2H，CH2OH)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.60(s，1H，C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)517.81([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝5.04min，峰面積97.0％。
            
實施例122-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)按照EHT5909的上述過程制備化合物，除了在反應后，蒸發混合物至干并在室溫下保持18小時(發生甲磺酸鹽和鹽酸三乙胺之間的自發反應)-通過制備性HPLC(CH3CH∶H2OTFA 1/1000梯度)純化得到黃色固體EHT1494(43％)。
            
化合物實施例12的結構如下 MW457.89；產率43％；黃色固體；熔點38.2℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.70-2.00(m，6H，CH2)，3.26(t，J＝6.9Hz，2H，CH2S)，3.92(t，J＝5.8Hz，2H，CH2O)，4.33(s，2H，Cl-CH2)，6.50(s，1H，-C＝CH)，7.50(m，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，-C＝CH)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.59(s，1H，Ar-H)，8.92(m，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)457.9-459.8([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT1494 RT＝5.39min，純度94.7％。
            
實施例132-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)在裝備有磁力攪拌器的10mL圓底燒瓶中，在N2氣氛下裝入在1.5mL二氯甲烷中的甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(82mg，0.16mmol)。通過注射器加入1-甲基哌嗪(35.1μl，0.32mmol)，并在45℃下加熱反應混合物2小時40分鐘。蒸發反應混合物至干，在EtOAc中重結晶，用Et2O洗滌。加入40mL二氯甲烷，并依次用5％的NaHCO3(40mL)和鹽水(40mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥溶液，過濾并蒸發，得到淺黃色固體EHT7365(59mg，72％產率)。
            
化合物實施例13的結構如下
            
  MW521.59；產率72％；淺黃色固體；熔點112.6℃(分解)。
            
Rf0.26(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.61-1.79(m，2H，CH2-CH2-CH2)，1.82-1.98(m，4H，CH2-CH2)，2.31(s，3H，CH3N)，2.20-2.75(m，8H，CH2-N-CH2和CH2-N(CH3)-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.37(s，2H，＝CCH2N)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)521.9([MH]+，100)；297.9(20)，282.1(20)，229.9(30).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT7365RT＝4.12min，峰面積98.1％，雜質RT＝5.24，1.6％。
            
實施例142-嗎啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)在裝備有磁力攪拌器的10mL圓底燒瓶中，在N2氣氛下裝入在1.8mL二氯甲烷中的甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(96mg，0.184mmol)。通過注射器加入嗎啉(41μl，0.46mmol)，并在45℃下加熱反應混合物3小時30分鐘。蒸發反應混合物至干，在EtOAc中重結晶，用Et2O洗滌。加入40mL二氯甲烷，并依次用5％的NaHCO3(40mL)和鹽水(40mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥溶液，過濾并蒸發，得到淺黃色固體EHT7168(60mg，64％產率)。
            
化合物實施例14的結構如下
            
  MW508.55；產率64％；淡黃色固體；熔點＝93.3℃。
            
Rf0.33(EtOAc)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.72-1.74(m，2H，CH2)，1.88-1.92(m，4H，2xCH2)，2.51-2.52(m，4H，CH2-N-CH2)，3.13-3.18(t，J＝7.0Hz，2H，-SCH2)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.72-3.73(m，4H，4H，CH2-O-CH2)，3.87-3.91(t，J＝6.0Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，-CH＝C)，7.26(m，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-CH＝C)，7.69-7.72(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.23-8.25(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78-8.80(d，J＝4.7Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)509.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT 7168RT＝4.37min，峰面積99.9％。
            
EHT8883和EHT1006的制備5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮  4使用5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，7-二溴庚烷(2.5mL，14.6mmol)按照實施例11制備化合物。在80℃下加熱密封管2小時30公鐘。得到白色固體5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮4(1.40g，78％產率)。
            
化合物4的結構列在下面
            
  MW403.31；產率78％；白色固體。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.25-1.92(m，16H，8xCH2)，3.40(t，J＝6.8Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.78-3.88(m，1H，OCH2)，3.85(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.55(s，1H，-C＝CH-).
            
實施例155-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)在裝備有磁力攪拌器的50mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(320mg，1.4mmol)。在4℃下連續加入無水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(55mg，1.4mmol)。30分鐘后，在室溫下加入5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮4(520mg，1.3mmol)在DMF(6mL)中的溶液。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應混合物倒入150mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝95∶5至98∶2)純化粗化合物，得到5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT8883(310mg，43％產率)，為油。
            
化合物實施例15的結構如下  
            
MW551.62；產率43％；油。
            
Rf0.23(CH2Cl2∶MeOH＝97∶3)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.40-1.88(m，16H，CH2)，3.12(t，J＝7.3Hz，2H，S-CH2)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3.88(m，1H，O-CH2)，3.86(t，J＝6.5Hz，2H，O-CH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.27(d，J＝5.8Hz，1H，Ar-H)，7.55(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)；8，36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，AHr-).
            
MS-ESI m/z(rel.int.)552.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT8883 RT＝5.90min，峰面積99.2％。
            
5-(8-溴-辛氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮  5使用5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，8-二溴辛烷(4.12mL，22.1mmol)按照實施例11制備化合物。在80℃下加熱密封管2小時30分鐘。得到白色固體5(1.40g，78％產率)。
            
化合物5的結構列在下面 MW417.33；產率62％；黃色油。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.25-1.92(m，18H，9xCH2)，3.40(t，J＝6.8Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.78-3.88(m，1H，OCH2)，3.85(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.55(s，1H，-C＝CH-).
            
實施例165-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)在裝備有磁力攪拌器的50mL圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(300mg，1.3mmol)。在4℃下連續加入無水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(53mg，1.3mmol)。30分鐘后，在室溫下加入5-(8-溴-辛氧基)-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮5(500mg，1.2mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應混合物倒入150mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝95∶5至98∶2)純化粗化合物，得到白色固體5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT1006(320mg，47％產率)。
            
化合物實施例16的結構如下 MW565.64；產率47％；白色固體；熔點66.1℃。
            
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝97∶3)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.39-1.85(m，18H，CH2)，3.12(t，J＝7.3Hz，2H，S-CH2)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3.87(m，1H，O-CH2)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.27(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，7.55(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.7Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)；8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.int.)566.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT1006 RT＝6.10min，峰面積99.5％。
            
中間體化合物10-15的制備5-(5-溴戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4酮 10在裝備有磁力攪拌器的100ml圓底燒瓶中裝入曲酸(2g，14.1mmol)、Cs2CO3(4.6g，14.1mmol)和DMF(12mL)。加入1，5-二溴戊烷(8.1g，35.2mmol)，并在110℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(2×100mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)純化粗化合物，蒸發后得到棕色油5-(5-溴戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4酮10(1.9g，46％產率)。
            
化合物10的結構如下 MW291.14；產率46％；棕色油。
            
Rf0.60(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.57-1.63(m，2H，CH2)，1.81-1.94(m，4H，CH2)，3.43(t，J＝6.7Hz，2H，Br-CH2)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，4.48(s，2H，O-CH2)，6.52(s，1H，-C＝CH)，7.61(s，1H，-C＝CH).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)22.28，24.50，28.10，32.29，33.61，60.56，69.27，111.44，139.24，147.58，168.28，175.03.
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)291.0/293.0([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝4.5min，峰面積98.0％。
            
5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮  11將6-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.23g，1.08mmol)溶解在DMF(3mL)中。在室溫下加入Cs2CO3(0.35g，1.08mmol)，并攪拌混合物10分鐘。通過注射器加入5-(5-溴戊氧基)-2-羥基甲基-吡喃-4酮10(0.30g，1.03mmol)在DMF(2mL)中的溶液。在50℃下攪拌混合物1小時。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、鹽水(3×50mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液(CH2Cl2∶MeOH)＝90∶10在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到黃色油5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮11(93mg，21％產率)。
            
化合物11的結構如下 MW423.38；產率21％；黃色油。
            
Rf0.2(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.70-1.81(m，2H，CH2)，1.88-2.10(m，4H，2xCH2)，3.90(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.20(t，2H，J＝6.4Hz，-O-CH2)，4.52(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz，ArH)，7.58(s，1H，-CH＝C)，7.87(dd，1H，＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.14(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.51(s，1H，ArH)，)，8.80(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)423.83([MH]+，30)，210.97(100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，RT＝4.30min，峰面積88.0％。
            
5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮  12在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中，在70℃下攪拌7-三氟甲基-4-喹啉醇(320mg，1.5mmol)、Cs2CO3(500mg，1.5mmol)和無水DMF(3mL)。20分鐘后，加入在DMF(2mL)中的5-(5-溴戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4酮10(420mg，1.4mmol)，并在75℃下攪拌反應混合物15小時。在60℃下蒸發DMF，將反應混合物倒入20mLH2O中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。用鹽水(10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝98∶2至90∶10)純化粗化合物，蒸發后得到白色固體5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮12(300mg，47％產率)。
            
化合物12的結構如下 MW423.38；產率47％；白色固體；熔點116.1℃。
            
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.68-1.73(m，2H，C-CH2)，1.86-2.01(m，4H，C-CH2)，3.88(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.21(t，J＝6.3Hz，2H，O-CH2)，4.50(s，2H，O-CH2)，6.57(s，1H，C＝CH)，6.81(d，J＝5.3Hz，ArH)，7.57(s，1H，C＝CH)，7.65(dd，1H J＝8.7Hz，J＝1.5Hz，ArH)，8.27-8.32(m，2H，ArH)，8.76(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)22.61，28.44，28.67，60.69，68.56，69.36，102.20，111.82，119.55，121.23，122.11，123.18，123.46，126.27，131.82，139.17，147.76，152.70，161.55，167.69，174.84.
            
MS-ESI m/z(rei.Int.)424.0([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，RT＝4.30min，峰面積99.5％。
            
4-[5-(6-羥基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13
            
將4-羥基-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(0.86g，3.02mmol)溶解在DMF(10mL)中。在室溫下加入Cs2CO3(0.98g，3.02mmol)，并攪拌混合物10分鐘。通過注射器加入5-(5-溴戊氧基)-2-羥基甲基-吡喃-4酮10(0.86g，3.02mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在50℃下攪拌混合物22小時。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、鹽水(3×50mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到淺黃色泡沫4-[5-(6-羥基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13(0.43g，31％產率)。
            
化合物13的結構如下 MW495.45；產率31％；淺黃色泡沫。
            
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)495.86([MH]+，100)。
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝4.91min，峰面積98.1％。
            
5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮  14將8-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.84g，2.88mmol)溶解在DMF(5mL)中。在室溫下加入Cs2CO3(0.98g，3.02mmol)，并攪拌混合物10分鐘。通過注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-羥基甲基-吡喃-4酮10(0.86g，3.02mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在50℃下攪拌該混合物18小時。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、鹽水(3×50mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到淺黃色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮14(0.53g，35％產率)。
            
化合物14的結構如下 MW423.38；產率35％；淺黃色泡沫。
            
Rf0.2(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)423.89([MH]+，55)，211(100)。
            
HPLC方法A，檢測UV254mm，RT＝4.60min，峰面積87.9％。
            
5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮  15將喹唑啉-4-醇(1.0g，6.84mmol)溶解在DMF(7mL)中。在室溫下加入Cs2CO3(2.23g，6.84mmol)，并攪拌混合物10分鐘。通過注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-羥基甲基-吡喃-4酮10(1.90g，6.52mmol)在DMF(7mL)中的溶液。在50℃下攪拌該混合物2小時。加入水(150mL)，并用EtOAc(2×100mL)萃取混合物，用水(3×100mL)、鹽水(3×100mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到淺黃色固體5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮15(0.61g，26％產率)。
            
化合物15的結構如下  
            
MW356.37；產率26％；淺黃色固體；熔點117.7℃。
            
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.50-1.65(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.78(s，1H，OH)，3.86(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-OCH2)，4.49(d，J＝6.2Hz，2H，CH2-OH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-CH＝C)，7.70-7.80(m，2H，ArH)，8.07(s，1H，N＝CH＝N)，8.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.0Hz，ArH).
            
中間體化合物16-20的制備(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯16在0℃下，向5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮11(93mg，0.22mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入三乙胺(37μL，0.26mmol)、甲磺酰氯(20.5μL，0.26mmol)。在室溫下攪拌溶液1.5小時。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗滌溶液，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。得到淺黃色油(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯16(100mg，90.5％產率)。
            
化合物16的結構如下 MW501.47；產率90.5％(粗)；淺黃色油。
            
Rf0.6(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.70-1.81(m，2H，CH2)，1.88-2.10(m，4H，2xCH2)，3.12(s，3H，CH3)，3.95(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.25(t，2H，J＝6.4Hz，-O-CH2)，4.99(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，6.84(d，1H，J＝5.4Hz，ArH)，7.62(s，1H，-CH＝C)，7.87(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.14(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.51(s，1H，ArH)，8.85(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.83([MH]+，80)，288.94(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝4.65min，峰面積81.2％。
            
(5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯  17在0℃下，向5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮12(240mg，0.57mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(96μL，0.68mmol)、甲磺酰氯(53μL，0.68mmol)。在室溫下攪拌溶液1.5小時。加入二氯甲烷(50mL)，用水(3×100mL)洗滌溶液，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。得到粗黃色油(5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯17(260mg，91％產率)。
            
化合物17的結構如下 MW501.47；產率91％；黃色油(粗產物)。
            
Rf0.6(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.70([MH]+，100)，288.84(80)。
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝4.57min，峰面積94.0％。
            
4-[5-(6-甲磺酰基氧甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯  18在0℃下，向4-[5-(6-羥基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13(330mg，0.67mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(37μL，0.26mmol)、甲磺酰氯(62μL，0.80mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗滌溶液，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶15在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到淺黃色油(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯18(246mg，65％產率)。
            
化合物18的結構如下 MW573.54；產率65％；淺黃色泡沫。
            
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)573.79([MH]+，100)，527.70(30)。
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，RT＝5.38min，峰面積60.1％。
            
(5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯  19在0℃下，向5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮14(430mg，1.02mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(173μL，1.21mmol)、甲磺酰氯(95μL，1.21mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗滌溶液，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液(CH2Cl2∶MeOH)＝95∶5在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到淺黃色油(5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯19(188mg，37％產率)。
            
化合物19的結構如下 MW501.47；產率37％；淺黃色油。
            
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.77([MH]+，95)，288.91(100)。
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝5.06min，峰面積63.1％。
            
(5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯20在0℃下，向5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮15(0.53g，1.49mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入三乙胺(252μL，1.78mmol)、甲磺酰氯(138μL，1.78mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗滌溶液，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。得到淺黃色油(5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯20(0.64g，99％產率)。
            
化合物20的結構如下 MW434.46；產率99％(粗)；黃色油。
            
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶05)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.70(m，2H，CH2)，1.80-1.88(m，4H，2xCH2)，3.11(s，3H，CH3)，3.88(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.04(t，2H，J＝7.3Hz，-O-CH2)，4.99(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，7.51(t，1H，J＝8.0Hz，ArH)，7.61(s，1H，-CH＝C)，7.70-7.83(m，2H，ArH)，8.09(s，1H，ArH)，8.31(d，1H，J＝8.0Hz，ArH).
            
EHT9317、EHT5430和EHT7370的制備實施例175-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100mg，0.193mmol)。通過注射器加入哌啶(48μL，0.483mmol)。在45℃下攪拌混合物1.25小時。蒸發溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和鹽水(2×20mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到米色固體5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT9317(86mg，88％產率)。
            
化合物實施例17的結構如下 MW506.59；產率88％；米色固體；熔點108.9℃。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.21-1.46(m，2H，CH2)，1.57-1.62(m，4H，3xCH2)，1.69-1.76(m，2H，CH2)，1.86-1.92(m，4H，2xCH2)，2.43(t，4H，J＝4.6Hz，-CH2N)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.32(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，O-CH2)，6.44(s，1H，-C＝CH)，7.58(s，1H，-CH＝C)，7.71(dd，1H，J＝1.6Hz，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.8Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)507.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT9317 RT＝4.36min，峰面積93.7％。
            
實施例185-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代嗎啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100.0mg，0.193mmol)。通過注射器加入硫代嗎啉(46μL，0.483mmol)。在45℃下攪拌混合物2.5小時。蒸發溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和鹽水(2×20mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到米色固體5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代嗎啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 5430(65mg，64％產率)。
            
化合物實施例18的結構如下 MW524.63；產率64％；米色固體；熔點105.7℃。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.63-1.74(m，2H，CH2)，1.88-1.92(m，4H，CH2)，2.69-2.78(m，8H，CH2-N & CH2-S)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.38(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-CH＝C)，7.56(s，1H，-CH＝C)，7.71(dd，1H，J＝1.4Hz，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.5Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)525([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT5430RT＝4.39min，峰面積92.5％。
            
實施例192-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100mg，0.193mmol)。通過注射器加入二乙胺(50μL，0.483mmol)。在45℃下攪拌混合物3.5小時。蒸發溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和鹽水(2×20mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮EHT7370(46mg，48％產率)。
            
化合物實施例19的結構如下 MW494.58；產率48％；白色固體；熔點71.2℃。
            
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.05(t，6H，J＝7.2Hz，2xCH3)，1.65-1.75(m，2H，2xCH2)，1.88-1.93(m，4H，2xCH2)，2.58(q，J＝7.2Hz，2xCH2)，3.16(t，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.43(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.71(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH 8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.5Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)495([MH]+，100)HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT7370 RT＝4.29min，峰面積89.0％。
            
EHT1426、EHT0079、EHT3411、EHT8791、EHT8935、EHT5847、EHT4867、EHT5317、EHT3726和EHT4063的制備實施例205-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯16(100mg，0.20mmol)。通過注射器加入嗎啉(44μL，0.50mmol)。在45℃下攪拌混合物18小時。冷卻至室溫后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌混合物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到橙色油5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT1426(37mg，35％產率)。
            
化合物實施例20的結構如下 MW492.50；產率35％；橙色油。
            
Rf0.8(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.65-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.40-2.60(m，4H，2xCH2N-)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.55-3.80(m，4H，2xCH2O-)，3.94(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.60(s，1H，-C＝CH)，7.86(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.12(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.50(s，1H，ArH)，8.84(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
MS-ES m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，35)，279.97(65)，213.88(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT1426RT＝3.94min，峰面積86.0％。
            
實施例215-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯17(130mg，0.26mmol)。通過注射器加入1-甲基-哌嗪(75μL，0.67mmol)。在45℃下攪拌混合物3小時。冷卻至室溫后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌混合物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到黃色油5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 0079(30mg，23％產率)。
            
化合物實施例21的結構如下 MW505.53；產率23％；黃色油。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.31(s，3H，Me)，2.30-2.75(m，8H，4x-NCH2)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.93(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-CH2O)，6.46(s，1H，-C＝CH)，6，82(d，1H，J＝5.3Hz，ArH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.67(d，1H，J＝88Hz，ArH)，8.32(s，1H，ArH)，8.33(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.82(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)505.85([MH]+，55)，293(25)，213.86(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT0079RT＝3.94min，峰面積95.0％。
            
實施例225-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯17(130mg，0.259mmol)。通過注射器加入嗎啉(58μL，0.66mmol)。在45℃下攪拌混合物5小時。冷卻至室溫后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌混合物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到無色油5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT3411(24mg，19％產率)。
            
化合物實施例22的結構如下 MW492.4；產率19％；無色油。
            
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.7Hz，2x-NCH2)，3.37(s，2H，-NCH2)，3.73(t，2H，J＝4.7Hz，2x-NCH2)，3.93(t，2H，J＝6.3，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.66(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.5Hz，ArH)，8.32(s，1H，ArH)，8.34(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，70)，280(85)，213.87(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT3411 RT＝3.93min，峰面積99.9％。
            
實施例234-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯18(123mg，0.215mmol)。通過注射器加入1-甲基-哌嗪(60μL，0.54mmol)。在45℃下攪拌混合物2小時。冷卻至室溫后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌混合物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到黃色油4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯EHT8791(38mg，31％產率)。
            
化合物實施例23的結構如下 MW577.61；產率31％；黃色油。
            
Rf0.30(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.43(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)，1.57-1.71(m，2H，CH2)，1.84-2.08(m，4H，2xCH2)，2.32(s，3H，-NCH3)，2.40-2.68(m，8H，4xCH2N-)，3.39(s，2H，-NCH2)，3.89(t，2H，J＝5.9Hz，-OCH2)，4.27(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，4.42(q，2H，J＝7.1Hz，-OCH2)，6.46(s，1H，-C＝CH)，7.58(s，1H，-C＝CH)，7.66(d，1H，J＝8.3Hz，ArH)，7.70(m，1H，ArH)，8.55(s，1H，ArH)，8.67(d，1H，J＝8.3Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)577.88([MH]+，100)，287.07(25)，266.55(35).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT8791RT＝4.46min，峰面積97.6％。
            
實施例244-[5-(6-嗎啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)在二氯甲烷(3mL)中溶解4-[5-(6-甲磺酰基氧甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯18(123mg，0.214mmol)。通過注射器加入嗎啉(47.3μL，0.537mmol)。在45℃下攪拌混合物3小時。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶05在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到無色油4-[5-(6-嗎啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯EHT 8935(66mg，55％產率)。
            
化合物實施例24的結構如下 MW564.56；產率55％；無色油。
            
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝95∶05)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.43(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)1.57-1.71(m，2H，CH2)1.84-2.08(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.5Hz，CH2-N-CH2)，3.37(s，2H，-NCH2)3.73(t，4H，J＝4.7Hz，CH2-O-CH2)，3.89(t，2H，J＝5.9Hz，-OCH2)，4.27(t，2H，J＝7.6Hz，-CH2O)，4.42(q，2H，J＝7.1Hz，-OCH2)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.63-7.72(m，2H，ArH)，8.55(s，1H，ArH)，8.67(d，1H，J＝8.3Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)565([MH]+，100)，260(30).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT8935 RT＝4.46min，峰面積98.0％。
            
實施例255-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(8-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯19(94mg，0.187mmol)。通過注射器加入1-甲基-哌嗪(52μL，0.47mmol)。在45℃下攪拌混合物1小時。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT5847(13.6mg，15％產率)。
            
化合物實施例25的結構如下 MW505.44；產率15％；白色泡沫。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.58-1.81(m，2H，CH2)，1.90-2.05(m，4H，2xCH2)，2.31(s，3H，-NCH3)，2.30-2.75(m，8H，4xCH2N-)，3.37(s，2H，-NCH2)，3.92(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.24(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.50-7.60(m，2H，ArH和-C＝CH)，8.06(d，1H，J＝7.3Hz，ArH)，8.44(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)505.86([MH]+，95)，293(70)，213.86(100)，193.85(80).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT5847RT＝4.05min，峰面積94.7％。
            
實施例265-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)在二氯甲烷(4mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(8-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯19(94mg，0.187mmol)。通過注射器加入嗎啉(41μL，0.47mmol)。在45℃下攪拌混合物3小時。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT4687(46mg，50％產率)。
            
化合物實施例26的結構如下 MW495.20；產率50％；白色泡沫。
            
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.82(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.50(m，4H，2xCH2N-)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.73(m，4H，-CH2O)，3.93(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.50-7.60(m，2H，ArH和-C＝CH)，8.06(d，1H，J＝7.3Hz，ArH)，8.44(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，50)，279.97(100)，213.86(35)，193.88(50)HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT4687 RT＝4.13min，峰面積94.4％。
            
實施例275-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通過注射器加入吡咯烷(48μL，0.575mmol)。在45℃下攪拌混合物1.5小時。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝90∶10在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到無色油5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT5317(30mg，35％產率)。
            
化合物實施例27的結構如下 MW409.44；產率32％；無色油。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.63(m，2H，CH2)，1.82-1.93(m，4H，2xCH2)，2.54(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.74(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2N-)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.07(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(d，1H，J＝8.0Hz，ArH)..
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)409.97([MH]+，100)，147(55).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT5317RT＝3.86min，峰面積90.0％。
            
實施例285-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通過注射器加入嗎啉(51μL，0.575mmol)。在45℃下攪拌混合物1小時。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用CH2Cl2(5×50mL)萃取產物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT3726(8.2mg，8.5％產率)。
            
化合物實施例28的結構如下 MW425.48；產率8.5％；白色固體。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝99∶01)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.63(m，2H，CH2)，1.82-1.93(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2N-)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.73(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2O-)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.04(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.46(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.06(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(dd，1H，J＝7.8Hz J＝0.8Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)425.9([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT3726RT＝3.86min，峰面積97.6％。
            
實施例295-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通過注射器加入1-甲基-哌嗪(64μL，0.575mmol)。在45℃下攪拌混合物1小時。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和鹽水(3×50mL)洗滌溶液。用CH2Cl2(5×50mL)萃取產物。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 4063(35mg，35％產率)。
            
化合物實施例29的結構如下 MW438.53；產率35％；白色固體；熔點78.2℃。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝99∶01)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.62(m，2H，CH2)，1.82-1.91(m，4H，2xCH2)，2.32(s，3H，-CH3)，2.30-2.80(m，8H，4xCH2N-)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.56(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.06(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(dd，1H，J＝7.8Hz，J＝0.8Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)439([MH]+，100)，147(45).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT4063RT＝3.86min，峰面積93.1％。
            
EHT8817的制備實施例305-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)在二氯甲烷(5mL)中溶解2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-吡喃-4-酮EHT5909(100mg，0.23mmol)。在0℃下攪拌混合物15分鐘。通過注射器加入二乙基氨基三氟化硫(DAST，33μL，0.25mmol)。在室溫下攪拌混合物10分鐘。蒸發溶液。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通過閃蒸色譜法純化粗產物。得到白色固體5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT8817(48mg，35％產率)。
            
化合物實施例30的結構如下 MW441.45；產率35％；白色固體；熔點107.0℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝97∶03)。
            
1H-NMR(CDCl3，d)1.65-1.80(m，2H，CH2)，1.70-1.95(m，4H，2xCH2)，3.16(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.91(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，5.12(d，2H，J＝46.5Hz，-CH2F)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz J＝1.7Hz，ArH)，8.24(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(S，1H，ArH)，8.80(d，1H，J＝4.8Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)442([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT8817RT＝5.08min，峰面積99.9％。
            
中間體21-24的制備2-(溴甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮21在250mL圓底燒瓶中，向濃H2SO4(30mL)中加入5-羥基-2-(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮(10.0g，70.36mmol)。冷卻溶液至4℃，并滴加氫溴酸(40mL)1.5小時。使用0.5N NaOH溶液捕集HBr蒸汽。在70℃下攪拌反應物18.5小時。冷卻后，在連續攪拌1.5小時下加入冰(220g)，得到白色沉淀物。濾去固體，并溶解到乙酸乙酯中，用MgSO4干燥溶液，過濾并蒸發。得到淺黃色固體2-(溴甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮21(9.1g，63％產率)。
            
化合物21的結構如下 MW205.00；產率63％；淺黃色固體；熔點182.5℃。
            
Rf0.70(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)4.51(s，2H，S-CH2)，4.-8(s，2H，Br-CH2)，7.32-7.45(m，5H，ArH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.39(s，1H，ArH)，8.82(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22在裝備有磁力攪拌器的250mL圓底燒瓶中裝入2-(溴甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮21(5.0g，24.4mmol)、嗎啉(4.3mL，48.8mmol)和乙腈(120mL)。在80C下攪拌反應混合物3小時。蒸發乙腈，用EtOAc(400mL)萃取殘余物。有機層用水(20ml)、鹽水(2×20ml)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。加入二乙醚(25mL)，沉淀出產物并過濾，干燥后得到白色固體5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(4.8g，72％產率)。
            
化合物實施例22的結構如下 MW211.21；產率72％；白色固體；熔點144.2℃。
            
Rf0.37(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)2.53(t，J＝4.5Hz，4H，N-CH2)，3.41(s，2H，N-CH2)，3.74(t，4H，J＝4.5Hz，O-CH2)，6.54(s，1H，-C＝CH)，6.65(s，1H，OH)，7.86(s，1H，-C＝CH).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)53.4，59.7，66.6，112.2，138.6，145.8，165.2，174.3.
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，22RT＝1.0min，峰面積99.5％。
            
5-羥基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氫溴酸鹽23在裝備有磁力攪拌器的250mL圓底燒瓶中裝入2-(溴甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮21(0.5g，2.4mmol)、1-甲基哌嗪(0.3mL，2.4mmol)和四氫呋喃(12mL)。在75℃下攪拌反應混合物2小時。冷卻反應混合物，并過濾沉淀物，干燥后得到米色固體5-羥基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氫溴酸鹽23(0.6g，83％產率)。通過在水(20mL)中加入Cs2CO3(7.3g，22.4mmol)制備銫鹽。用CH2Cl2(200mL)洗滌水相，然后在40℃下蒸發水，并在真空下干燥銫鹽得到白色粉末。
            
化合物23的結構如下  
            
MW305.17；產率83％；米色固體；熔點208-210℃。
            
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
銫鹽的1H-NMR(D2O，δ)2.21(s，3H，N-CH3)，2.50(大信號，8H，N-CH2)，3.44(s，2H，N-CH2)，6.39(s，1H，-C＝CH)，7.72(s，1H，-C＝CH)。
            
HCl鹽的13C-NMR(D2O，δ)42.7，49.2，53.0，57.5，114.2，142.4，144.9，164.2，176.4。
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)225.0([MH]+)。
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，23RT＝0.7min，峰面積98％。
            
4-((5-羥基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯24在裝備有磁力攪拌器的500mL圓底燒瓶中裝入2-(溴甲基)-5-羥基-4H-吡喃4-酮(8.9g，43.4mmol)、叔丁氧基羰基哌嗪(8.5g，45.6mmol)、三乙胺(7mL，49.9mmol)和乙腈(200mL)。在90℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發乙腈，加入EtOAc(50mL)。濾出(C2H5)3N，HCl的沉淀物，并在40℃下蒸發乙酸乙酯至干。通過柱色譜法(去活化SiO2∶CH2Cl2∶三乙胺98∶2至CH2Cl2∶MeOH 95∶5，純化∶CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至96∶4)純化粗化合物，蒸發后得到白色粉末4-((5-羥基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯24(10.5g，78％產率)。
            
化合物24的結構如下 MW310.35；產率78％；白色固體；熔點146.7℃。
            
Rf0.55(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.46(s，9H，CH3)，2.48(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.43(s，2H，N-CH2)，3.46(t，4H，J＝5.1Hz，N-CH2)，6.53(s，1h，-C＝CH)，7.85(s，1H，-C＝CH).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)28.4，43.6，52.9，59.5，79.9，112.0，138.2，145.8，154.6，165.5，174.2.
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，24RT＝3.8min，峰面積97.0％。
            
中間體25-33的制備4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(5g，21.8mmol)、1，5-二溴戊烷(23.7g，98.1mmol)和CHCl3(60mL)。加入TBABr(0.7g，2.2mmol)和水(40mL)，并在20℃下攪拌反應混合物48小時。將反應混合物倒入有K2CO3(3.0g，21.8mmol)的100mL H2O中，用CH2Cl2(400mL)萃取。用水(30mL)、鹽水(2×30mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至98∶2)純化粗化合物，蒸發后得到白色固體4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.9g，72％產率)。
            
化合物25的結構如下 MW378.25；產率72％；白色固體；熔點60.3℃。
            
Rf0.75(CH2Cl2∶EtOAc＝9∶1)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.67-1.75(m，2H，CH2)，1.81-199(m，4H，CH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.44(t，J＝6.6Hz，N-CH2)，7.25(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)378.0/379.8([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，25，RT＝6.0min，峰面積99.5％。
            
4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(2g，8.7mmol)和2-氯乙醚(6.2g，43.7mmol)。然后加入Cs2CO3(2.8g，8.7mmol)、NaI(1.3g，8.7mmol)、TBABr(1.1g，3.5mmol)和水(15mL)，并在90℃下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物倒入100mL H2O中，用CH2Cl2(2×100mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至98∶2)純化粗化合物，蒸發后得到無色油4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26(1.9g，65％產率)。
            
化合物26的結構如下 MW335.04；產率65％；無色油。
            
Rf0.85(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)3.37(t，J＝6.4Hz，2H，S-CH2)，3.64(t，J＝5.7Hz，2H，Cl-CH2)，3.79(t，J＝5.9Hz，2H，O-CH2)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，7.36(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.72(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，ArH)，8.26(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)335.9/338.0([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，26，RT＝5.3min，峰面積98.5％。
            
4-(2-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉27在25mL圓底燒瓶中，在10mL無水DMF中溶解7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(1.0g，4.37mmol)，并緩慢加入NaH(60％在油中的分散液，184mg)。在室溫下攪拌反應物10分鐘。在50mL圓底燒瓶中，在無水DMF(10mL)中溶解1，4-雙溴甲基-苯(1.27g，4.80mmol)，并在0℃下攪拌溶液10分鐘。通過注射器向該溶液中加入第一溶液，并在0℃下攪拌反應物15分鐘。溶液橙色變成淺黃色，在室溫下攪拌混合物1.25小時。加入水(50mL)，用二乙醚((5×100mL))萃取產物。用水(3×50mL)、鹽水(3×50mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液環己烷∶二乙醚＝7∶3在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體4-(2-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉27(205mg，12％產率)。
            
化合物27的結構如下 MW412.26；產率12％；白色固體；熔點177.4℃。
            
Rf0.40(環己烷∶二乙醚＝70∶30)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)4.51(s，2H，S-CH2)，4.68(s，2H，Br-CH2)，7.32-7.45(m，5H，ArH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.39(s，1H，ArH)，8.82(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)411.8/413.8([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，27，RT＝6.32min，峰面積96.8％。
            
4-(3-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(3.0g，13.1mmol)、1，3-雙溴甲基-苯(10.4g，39.3mmol)和CHCl3(150mL)。加入TBABr(0.5g，1.5mmol)和水(12mL)，并在20℃下攪拌反應混合物15小時。將反應混合物倒入有K2CO3(1.8g，13.1mmol)的10mL H2O中，用CH2Cl2(400mL)萃取。用水(30mL)、鹽水(2×30mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。加入二乙醚(150mL)，沉淀雙烷基化產物并濾出。蒸發濾液，通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至96∶4)純化粗化合物，蒸發后得到白色固體4-(3-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28(3.3g，61％產率)。
            
化合物28的結構如下 MW412.27；產率61％；白色固體；熔點211.1℃。
            
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)4.32(s，2H，S-CH2)，4.47(s，2H，Br-CH2)，7.27(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.32-7.39(m，1H，Ar-H)，7.47(s，1H，Ar-H)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，H，Ar-H)，8.75(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI(rel.Int.)411.8/412.9([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，28，RT＝6.2min，峰面積99.7％。
            
4-(4-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉29在25mL圓底燒瓶中，在8mL無水DMF中溶解7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(1.0g，4.37mmol)，并緩慢加入NaH(60％在油中的分散液，184mg)。在室溫下攪拌反應物10分鐘。在50mL圓底燒瓶中，在無水DMF(10mL)中溶解1，4-雙溴甲基-苯(1.27g，4.80mmol)，并在0℃下攪拌溶液10分鐘。通過注射器向該溶液中加入第一溶液，并在0℃下攪拌反應物15分鐘。溶液橙色變成淺黃色，在室溫下攪拌混合物2小時。加入水(50mL)，用二乙醚(5×100mL)萃取產物。用水(3×50mL)、鹽水(3×50mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發。使用洗脫液環己烷∶二乙醚＝7∶3在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體4-(4-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉29(265mg，15％產率)。
            
化合物29的結構如下
            
  MW412.26；產率15％；白色固體；熔點196.7℃。
            
Rf0.40(環己烷∶二乙醚＝70∶30)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)4.34(s，2H，S-CH2)，4.48(s，2H，Br-CH2)，7.28(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.32-7.45(m，4H，ArH)，7.71(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.76(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)411.8/413.8([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，29，RT＝6.22min，峰面積95.0％。
            
4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中裝入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(800mg，3.5mmol)和1，2-二氯乙烷(10.4g，10.5mmol)。然后加入TBABr(600mg，1.7mmol)、K2CO3(500mg，3.5mmol)、KOH(500mg，0.7mmol)和水(2mL)，并在20℃下攪拌反應混合物5小時。將反應混合物倒入100mL H2O中，用CH2Cl2(150mL)萃取。用水(30mL)、鹽水(2×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2至55)純化粗化合物，蒸發后得到米色固體4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30(680mg，67％產率)。
            
化合物30的結構如下 MW291.72；產率67％；米色固體；熔點96.2℃。
            
Rf0.60(CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)3.49-3.54(m，2H，S-CH2)，3.76-3.91(m，2H，Cl-CH2)，7.33(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.75(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.25(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.39(s，1H，Ar-H)，8.85(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)291.9/293.9([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，30，RT＝5.6min，峰面積99.5％。
            
4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中裝入7-三氟甲基-4-喹啉醇(500mg，2.3mmol)和1，2-二氯乙烷(11.6g，11.7mmol)。加入TBABr(370mg，1.2mmol)、K2CO3(950mg，6.9mmol)、KOH(760mg，11.5mmol)和水(6mL)，并在70-80℃下攪拌反應混合物5小時。將反應混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(150mL)萃取。用水(30mL)、鹽水(2×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝5∶5)純化粗化合物，蒸發后得到米色固體4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31(150mg，25％產率)。
            
化合物31的結構如下 MW275.65；產率25％；米色固體；熔點56.2℃。
            
Rf0.25(CH2Cl2∶EtOAc＝5∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)4.00(t，J＝5.6Hz，2H，Cl-CH2)，4.49(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，6.82(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.35-8.39(m，2H，Ar-H)，8.85(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)275.9/277.8([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，31，RT＝4.5min，峰面積99.0％。
            
5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32在裝備有磁力攪拌器的10ml圓底燒瓶中裝入4-氨基-7-三氟甲基喹啉(120mg，0.56mmol)、三乙胺(170mg，1.7mmol)和CHCl3(4mL)。加入5-溴戊酰氯(140mg，0.7mmol，在CHCl3(2mL)中)，并在20℃下攪拌反應混合物15小時。將反應混合物倒入10mL H2O中，用CH2Cl2(100mL)萃取。用鹽水(2×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至98∶2)純化粗化合物，蒸發后得到米色固體5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32(190mg，90％產率)。
            
化合物32的結構如下 MW375.18；產率90％；米色固體；熔點135.3℃。
            
Rf0.65(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.83-1.99(m，4H，CH2)，2.48-2.64(m，2H，COCH2)，3.40-3.58(m，2H，Br-CH2)，7.53(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，Ar-H)，7.98(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.13(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.22(s，1H，Ar-H)，8.76(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.93(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)23.8，31.8，33.0，36.4，113.7，121.7，121.8，122.2，125.3，127.4，131.2，140.9，147.5，152.0，172.1.
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，32，RT＝5.1min，峰面積95％。
            
4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33在裝備有磁力攪拌器的100ml圓底燒瓶中裝入7-氯-4-喹啉醇(2g，11.1mmol)、Li2CO3(1.7g，22.3mmol)和NMP(16mL)。加入1，5-二溴戊烷(13.5g，55.7mmol)，并在90℃下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物倒入100mL H2O中，用EtOAc(300mL)萃取。用水(30mL)、鹽水(2×30mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。加入1M HCl的二乙醚溶液(15mL，15mmol)，沉淀雙烷基化產物并濾出。將沉淀物溶解在有K2CO3(1.5g，11.1mmol)的H2O中，用EtOAc(300mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并在30℃下蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至95∶5)純化粗化合物，蒸發后得到白色固體4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33(0.45g，12％產率)。
            
化合物33的結構如下 MW328.63；產率12％；白色固體；熔點63.3℃。
            
Rf0.80(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)；1.63-1.71(m，2H，CH2)，1.85-1.99(m，4H，CH2)，3.44(t，J＝6.7Hz，2H，Br-CH2)，4.08(t，J＝6.3Hz，2H，O-CH2)，6.59(d，J＝5.3Hz，1H，Ar-H)，7.37(dd，J＝8.9Hz，J＝2.0Hz，1H，Ar-H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H，Ar-H)，8.04(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.65(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)24.7，27.9，32，3，33.5，68.2，100.8，119.7，123.4，126.2，127.7，135.4，149.5，152.4，161.3.
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)328.0/329.9([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，33，RT＝5.0min，峰面積99.5％。
            
EHT5575、EHT6892、EHT1864、EHT0371、EHT6037、EHT9069、EHT2725、EHT0434、EHT2218、EHT9358、EHT2580和EHT9241的制備實施例315-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中裝入5-羥基-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-吡喃-4-酮(360mg，1.6mmol)、Cs2CO3(520mg，1.6mmol)、TBABr(90mg，0.3mmol)、水(2mL)和CHCl3(5mL)。加入4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30(230mg，0.8mmol)，在20℃下攪拌反應混合物15小時。將反應混合物倒入20mL H2O中，用CH2Cl2(2×25mL)萃取。用鹽水(10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；EtOAc)純化粗化合物，蒸發后得到糊狀產物EHT5575(20mg，5％產率)。
            
化合物實施例31的結構如下 MW481.48；產率5％；糊狀產物。
            
Rf0.25(EtOAc)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.74-1.83(m，6H，CH2)，3.52-3.60(m，2H，S-CH2和1H，O-CH2)3.78-3.86(m，1H，O-CH2)，4.28-4.35(m，2H，O-CH2和1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.5Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.54(s，1H，C＝CH)，7.44(d，J＝4.8Hz，ArH)，7.68(s，1H，C＝CH)，7.73(dd，1H J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，ArH)，7.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.38(d，1H，ArH)，8.83(d，.1H，J＝4.8Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)481.9([MH]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT5575，RT＝5.20min，峰面積98.5％。
            
實施例325-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中，在40℃下攪拌5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(130mg，0.6mmol)、Cs2CO3(200mg，0.6mmol)和無水DMF(5mL)。30分鐘后，加入4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31(140mg，0.5mmol)和NaI(80mg，0.5mmol)，在90℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發DMF，將反應混合物倒入20mLH2O中，用EtOAc(3×40mL)萃取。用鹽水(10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)純化粗化合物，蒸發后得到白色固體EHT6892(100mg，35％產率)。
            
化合物實施例32的結構如下 MW450.41；產率35％；白色固體；熔點125.6℃。
            
Rf0.27(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)2.52(t，J＝4.6Hz，2H，N-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.73(t，J＝4.5Hz，2H，O-CH2)，4.53-4.58(m，4H，S-CH2，O-CH2)，6.51(s，1H，C＝CH)，6.87(d，J＝5.2Hz，ArH)，7.65(dd，1H J＝8.8Hz，J＝1.5Hz，ArH)，7.79(s，1H，C＝CH)，8.29-8.32(m，2H，ArH)，8.83(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)451.0([MH]+)HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT6892，RT＝3.70min，峰面積98.5％。
            
實施例335-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT1864)在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(2.5g，12.0mmol)、Cs2CO3(3.9g，12.0mmol)和無水DMF(40mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(3.8g，10.0mmol)和NaI(0.2g，1.3mmol)，在90℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(2×200mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至94∶6)純化粗化合物，蒸發后得到純固體(4.4g，88％產率)。將化合物溶解在EtOH(150mL)中，然后加入1M HCl的EtOH溶液(22mL，21.6mmol)，并在20℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發EtOH后，在真空中干燥鹽酸鹽化合物并在乙醇(50mL)中結晶得到白色粉末EHT1864(3.35g，58％產率)。
            
化合物實施例33的結構如下 MW581.47；產率58％；白色粉末；熔點217.7℃。
            
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.62-1.64(m，2H，CH2)，1.76-1.87(m，4H，CH2)，3.10-3.38(m，4H，N-CH2)，3.42(t，J＝6.6Hz，2H，S-CH2)，3.85-3.91(m，6H，O-CH2)，4.34(s，2H，N-CH2)，6.77(s，1H，C＝CH)，7.88(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.08(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.21(s，1H，C＝CH)，8.45(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.67(s，1H，ArH)，9.06(d，J＝5.5Hz，1H，Ar-H)，11.15(s，1H，NH+)，12.25(s，1H，NH+).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)509.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT1864，RT＝4.40min，峰面積99.9％。
            
分析(C25H27F3N2O4S.2HCl)；C、H、N、S計算值，51.64、5.03、4.82、5.51，試驗值，51.18、5.06、4.83、5.31。
            
實施例345-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)在裝備有磁力攪拌器的30ml密封管中，在惰性氣氛下裝入5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(350mg，1.7mmol)、Cs2CO3(550mg，1.7mmol)和無水DMF(5mL)。加入4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26(480mg，1.4mmol)和NaI(210mg，1.4mmol)，在90℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(3×50mL)萃取。用鹽水(2×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.4∶0.6至97∶3)純化粗化合物，蒸發后得到淺黃色油EHT0371(400mg，56％產率)。
            
化合物實施例34的結構如下 MW510.53；產率60％；淺黃色油。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH∶95∶5)。
            
1H-NMR(DMSO d6，δ)2.51(t，J＝4.6Hz，2H，N-CH2)，3.33(s，2H，N-CH2)，3.38(t，J＝6.3Hz，2H，S-CH2)，3.72(t，J＝4.6Hz，2H，O-CH2)，3.86-3.94(m，4H，O-CH2)，4.11(m，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.37(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.69(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.25(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
13C-NMR(DMSO d6，δ)31.1，53.5，59.6，66.7，69.0，69.6，69.7，114.9，117.7，121.9，125.0，125.6，127.7，128.1，131.6，141.3，146.6，147.6，147.7，150.6，164.2，174.4.
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)511([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT0371，RT＝5.0min，峰面積100.0％。
            
實施例355-(6-(嗎啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)在裝備有磁力攪拌器的30ml密封管中，在惰性氣氛下裝入5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(85mg，0.4mmol)、Cs2CO3(130mg，0.4mmol)和無水DMF(5mL)。然后加入5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32(100mg，0.3mmol)，在90℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入50mL H2O中，用EtOAc(3×30mL)萃取。用鹽水(2×10mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.9∶0.1至95∶5)純化粗化合物，蒸發后得到白色粉末EHT6037(45mg，55％產率)。
            
化合物實施例35的結構如下 MW505.49；產率55％；白色固體熔點126.8℃。
            
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.90-1.96(m，2H，CH2)，2.03-2.11(m，2H，CH2)，2.54(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，2.83(t，J＝6.4Hz，2H，CO-CH2)，3.41(s，2H，N-CH2)，3.74(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，4.02(t，J＝5.0Hz，2H，O-CH2)，6.51(s，1H，C＝CH)，7.62(dd，J＝8.9Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，7.66(s，1H，C＝CH)，8.27(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.41(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.92(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，10.19(s，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)506.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT 6037，RT＝3.80min，峰面積95.8％。
            
實施例365-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)在50mL圓底燒瓶中，將5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(95mg，0.45mmol)溶解在無水DMF(5mL)中，并在室溫下加入Cs2CO3(161mg，0.50mmol)。將淺黃色反應混合物攪拌10分鐘，并冷卻至0℃保持15分鐘。在25mL圓底燒瓶中，將4-(2-(溴甲基)芐基硫烷基)-7-(三氟甲基)喹啉27(185mg，0.45mmol)溶解在無水DMF(10mL)中，溶液冷卻至0℃保持10分鐘。將該溶液通過注射器加入到在0℃下保持15分鐘的第一反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物1.75小時(橙色)。加入水(100mL)，用EtOAc(3×100mL)萃取溶液。用水(5×75mL)、鹽水(3×100mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT9069(155mg，64％產率)。
            
化合物實施例36的結構如下 MW542.58；產率64％；白色固體；熔點71.6℃。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)2.50(t，J＝4.6Hz，4H，2xCH2-N)，3.31(s，2H，CH2-N)，3.71(t，J＝4.6Hz，4H，2xCH2-O)，4.59(s，2H，-SCH2)，5.21(s，2H，O-CH2)，6.45(s，1H，-C-CH)，7.30-7.50(m，4H，ArH)，7.67(s，1H，-C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，2H，ArH)，8.20(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)543.0(100％，[MH]+)，314.1(80)，230(40).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT9069，RT＝4.65min，峰面積98.6％。
            
實施例375-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT0434)和它的游離堿(ETH2725)在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(3.1g，14.7mmol)、Cs2CO3(4.8g，14.7mmol)和無水DMF(40mL)。在4℃下加入在DMF(60mL)中的4-(3-(溴甲基)芐硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28(5.8g，14.1mmol)，在20℃下攪拌反應混合物4小時。將反應混合物倒入300mL冰水中，用EtOAc(2×500mL)萃取。用鹽水(2×50mL)洗滌有機層，用帶木炭(2g)的MgSO4(50g)干燥，并倒在Celite 545(200mL)覆蓋的SiO2(300mL)上，蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.8∶0.2至96∶4)純化粗化合物，蒸發后得到游離堿EHT2725(5.8g，76％產率)。將EHT2725溶解在EtOH(150mL)中，加入1M HCl的EtOH溶液(26mL，26.3mmol)，并在20℃下攪拌反應混合物0.5小時。蒸發EtOH后，在真空中干燥二鹽酸鹽并在異丙醇(500mL)中結晶，得到米色粉末EHT0434(4.4g，48％產率)。
            
化合物實施例37的結構如下  
            
MW615.49；產率48％；米色粉末；熔點120.3℃。
            
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(DMSO d6，δ)3.28(m，4H，N-CH2)，3.91(m，4H，O-CH2)，4.36(s，2H，N-CH2)，4.74(s，2H，S-CH2)，4.95(s，2H，O-CH2)，7.40-7.62(m，4H，Ar-H)，7.93(d，J＝5.6Hz，1H，Ar-H)，8.03(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.30(s，1H，C＝CH)，8.43(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.55(s，1H，Ar-H)，9.04(d，J＝5.5Hz，1H，Ar-H)，10.00(s，1H，NH+)，12.20(s，1H，NH+).
            
MS-ESI m/z(rel.int.)543.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT0434，RT＝4.60min，峰面積99.4％。
            
實施例385-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)在50mL圓底燒瓶中，將5-羥基-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(128mg，0.61mmol)溶解在無水DMF(10mL)中，并在室溫下加入Cs2CO3(217mg，0.67mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，并冷卻至0℃保持15分鐘。在25mL圓底燒瓶中，將4-(4-(溴甲基)芐基硫烷基)-7-(三氟甲基)喹啉29(250mg，0.61mmol)溶解在無水DMF(10mL)中，溶液冷卻至0℃保持10分鐘。將該溶液通過注射器加入到在0℃保持15分鐘的第一反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物1.75小時(橙色)。加入水(50mL)，用EtOAc(3×100mL)萃取溶液。用水(3×100mL)、鹽水(3×100mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。使用洗脫液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通過柱色譜法純化粗產物。得到白色固體5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT2218(150mg，46％產率)。
            
化合物實施例38的結構如下 MW542.58；產率46％；白色固體；熔點52.1℃。
            
Rf0.25(CH2CL2∶MeOH＝98∶2)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)2.55(m，4H，2xCH2-N)，3.38(s，2H，-CH2N)，3.74(t，J＝4.6Hz，4H，2XCH2-O)，4.37(s，2H，-SCH2)，5.05(s，2H，-OCH2)，6.49(s，2H，C＝CH)，7.30(d，J＝4.8Hz，2H，ArH)，7.44(q，4H，J＝8.2Hz，ArH)，7.58(s，1H，ArH)，7.73(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.38(s，1H，ArH)，8.78(d，1H，J＝4.8Hz，ArH)MS-ESI m/z(rel.Int.)542.9([MH]+，90)，332.0(30)，228.9(100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT2218，RT＝4.60min，峰面積95.4％。
            
實施例394-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入4-((5-羥基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯23(5.0g，16.1mmol)、Cs2CO3(5.3g，16.1mmol)和無水DMF(20mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.8g，15.3mmol)和DMF(10mL)，在90℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發DMF后，在真空中干燥化合物并在EtOAc(70mL)中沉淀。用水(3×20mL)洗滌沉淀物并過濾，干燥后得到白色粉末4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT9358(7.0g，75％產率)。
            
化合物實施例39的結構如下 MW607.68；產率77％；白色固體；熔點182.5℃。
            
1H-NMR  (CDCl3，δ)1.46(s，9H，tBu)，1.67-1.95(m，6H，CH2-CH2-CH2)，2.46(t，J＝4.8Hz，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，4H，S-CH2)，3.38(s，2H，O-CH2)，3.46(t，J＝4.8Hz，4H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(s，1H，ArH)，7.57(s，1H，ArH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，ArH)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.36(s，1H，C＝CH)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)508(100％，[MH-COOtBu]+).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT2218，RT＝4.80min，峰面積99.5％。
            
實施例404-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 2580)在裝備有磁力攪拌器的50ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入4-((5-羥基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯23b(0.95g，3.0mmol)、Cs2CO3(1.1g，3.2mmol)和無水DMF(7mL)。加入4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33(1.00g，3.0mmol)，在90℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入50mL H2O中，用EtOAc(2×100mL)萃取。用鹽水(2×20mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(去活化SiO2∶CH2Cl2∶三乙胺＝98∶2至CH2Cl2∶MeOH 95∶5，純化∶CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至97.5∶2.5)純化粗化合物，蒸發后得到白色粉末4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT2580(1.2g，72％產率)。
            
化合物實施例40的結構如下 MW558.07；產率72％；米色固體；熔點130.2℃。
            
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.46(s，9H，CCH3)，1.72-1.80(m，2H，C-CH2)，1.91-2.04(m，4H，C-CH2)，2.47(t，J＝4.2Hz，4H，N-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.46(t，J＝4.2Hz，4H，N-CH2)，3.93(t，J＝5.9Hz，4H，O-CH2)，4.21(t，J＝5.9Hz，4H，O-CH2)，6.45(s，1H，C＝CH)，6.71(dd，J＝5.2Hz，J＝1.3Hz，1H，ArH)，7.29(d，J＝1.9Hz，1H，ArH)，7.44(ddd，J＝8.9Hz，J＝1.9Hz，J＝1.9Hz，1H，ArH)，7.58(d，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.01(s，lH，C＝CH)，8.14(dd，J＝8.9Hz，J＝1.3Hz，1H，ArH)，8.72(dd，J＝1.6Hz，J＝5.2Hz，1H，ArH).
            
13C-NMR(CDCl3，δ)22.6，28.4，28.5，28.8，43.4，52.9，59.3，68.3，69.4，79.9，100.9，114.6，119.9，123.5，126.4，127.8，135.6，139.5，147.9，149.7，152.5，154.6，161.6，164.1，174.3.
            
MS/ESI m/z(rel.Int.)558/560([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT2580，RT＝4.4min，峰面積95.7％。
            
實施例415-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT9241)將5-羥基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氫溴酸鹽24(5.2g，17.0mmol)溶解在水(40mL)中，并加入在水(20mL)中的Cs2CO3(7.3g，22.4mmol)。用CH2Cl2(200mL)洗滌水相，然后在40℃下蒸發水，在真空下干燥銫鹽得到白色粉末。在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中，在惰性氣氛下裝入這種衍生物、Cs2CO3(2.5g，7.6mmol)和無水DMF(100mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.8g，15.3mmol)，在90℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發DMF后，將反應混合物倒入200mL H2O中，用CH2Cl2(2×300mL)萃取。用鹽水(2×30mL)洗滌有機層，用MgSO4干燥，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至95∶5)純化粗化合物，蒸發后得到純固體(4.3g，55％產率)。將化合物溶解在EtOH(150mL)中，加入1M HCl的EtOH溶液(33mL，33.0mmol)，并在20℃下攪拌反應混合物0.5小時。蒸發EtOH后，在真空中干燥三鹽酸鹽，并在乙醇(50mL)中沉淀，過濾后得到白色粉末5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽EHT9241(3.6g，38％產率)。
            
化合物實施例41的結構如下 MW630.98；產率38％；白色粉末；熔點206.4℃。
            
Rf0.30(CH2Cl2∶MeOH＝8∶2)。
            
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.59-1.66(m，2H，CH2)，1.73-1.90(m，4H，CH2)，2.77(s，3H，N-CH3)，3.17-3.20(m，2H，S-CH2)，3.37-3.54(m，8H，N-CH2)，3.85(t，J＝6.0Hz，2H，O-CH2)，4.06(s，2H，N-CH2)，6.62(s，1H，C＝CH)，7.91(d，J＝5.8Hz，1H，Ar-H)，8.09(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.18(s，1H，C＝CH)，8.47(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.71(s，1H，Ar-H)，9.07(d，J＝5.7HZ，1H，Ar-H)，11.83(s，3H，NH+).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)522.2([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT9241，RT＝4.30min，峰面積99.6％。
            
ETH0872和EHT8560的制備實施例425-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT0872)在裝備有磁力攪拌器的100ml圓底燒瓶中裝入4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT2580(0.8g，1.4mmol)和EtOH(10ml)。在50℃下滴加2M無水HCl的EtOH溶液(7.2ml，14mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。在真空中蒸發反應混合物。加入EtOH(10ml)，然后蒸發。進行這種操作三次。在蒸發EtOH后，在真空中干燥三鹽酸鹽并在EtOH(20mL)中結晶，5天后過濾得到白色粉末5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽EHT0872(400mg，50％產率)。
            
化合物實施例42的結構如下 MW567.33；產率50％；白色固體；熔點164.7℃。
            
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.64-1-66(m，2H，CH2)，1.79-1-81(m，2H，CH2)，1.96-1.98(m，2H，CH2)，3.20-3.40(m，8H，N-CH2)，3.87(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，4.17(s，2H，N-CH2)，4.58(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，6.67(s，1H，C＝CH)，7.59(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，7.91(d，J＝9.0Hz，1H，ArH)，8.21(s，1H，ArH)，8.36(d，J＝9.0Hz，1H，ArH)，8.45(s，1H，C＝CH)，9.22(d，J＝6.5Hz，1H，ArH)，9.91(s，2H，NH2+).
            
MS-ESI m/z(rel.int.)458.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT0872，RT＝3.80min，峰面積99.6％。
            
實施例435-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT8560)在裝備有磁力攪拌器的250ml圓底燒瓶中裝入4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT9358(7.0g，11.5mmol)和EtOH(60ml)。在50℃下滴加1M無水HCl的EtOH溶液(60ml，60mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。在真空中蒸發反應混合物。加入EtOH(30ml)，然后蒸發。進行這種操作三次。在蒸發EtOH后，在真空中干燥三鹽酸鹽，并在EtOH(200mL)中結晶，過濾后得到白色粉末5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽EHT8560(4.5g，63％產率)。
            
化合物實施例43的結構如下 MW616.95；產率63％；白色固體；熔點204℃。
            
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
            
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.61-1.66(m，2H，CH2)，1.75-1.87(m，4H，CH2)，3.35-3.45(m，10H，N-CH2，S-CH2)，3.86(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.19(s，2H，N-CH2)，6.68(s，1H，C＝CH)，7.88(d，J＝5.6Hz，1H，ArH)，8.07(dd，J＝8.9Hz，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.19(s，1H，C＝CH)，8.46(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.65(s，1H，ArH)，9.06(d，J＝5.5Hz，1H，ArH)，9.87(s，2H，NH2+)，11.52(s，2H，NH+).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)508([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT8560，RT＝4.20min，峰面積99.6％。
            
EHT3980、EHT5743、EHT0785、EHT0566、EHT8366、RHT3664和EHT4495的制備一般過程方法C(在CHCl3中)在裝備有磁力攪拌器的10ml圓底燒瓶中裝入5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8560的游離堿)(0.15g，0.3mmol)。連續加入無水CHCl3(3mL)和三乙胺(125μL，0.9mmol)。在0℃下30分鐘后，緩慢滴加在CHCl3(200μL)中的試劑(0.35mmol)。在室溫下攪拌反應混合物15小時。將反應混合物倒入10mL鹽水中，用CH2Cl2(50mL)萃取。用MgSO4干燥有機層，過濾并蒸發至干。通過柱色譜法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)純化粗化合物，蒸發溶劑后得到所需的化合物。
            
實施例445-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)使用乙酰氯(28mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物得到白色固體EHT3980(150mg，90％產率)。
            
化合物實施例44的結構如下 MW549.61；產率90％；白色固體；熔點99.5℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.85-1.95(m，4H，CH2)，2.09(s，3H，CH3)，2.48-2.54(m，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.50(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.65(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.int.)550.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT3980，RT＝4.30min，峰面積96.1％。
            
實施例454-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)使用二乙基氨甲酰氯(48mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物得到白色固體EHT5743(180mg，98％產率)。
            
化合物實施例45的結構如下 MW606.70；產率98％；白色固體；熔點393.1℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.12(t，J＝7.1Hz，6H，CH3)，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.93(m，4H，CH2)，2.53(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.12-3.24(m，6H，S-CH2，C-CH2)，3.27(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)607.2([MH]+，100).
            
HPLC萬法A，檢測UV254nm，RT＝4.55min，EHT5743，峰面積98.7％。
            
實施例465-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)使用三甲基乙酰氯(42mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物，得到白色固體EHT0785(100mg，56％產率)。
            
化合物實施例46的結構如下 MW591.68；產率56％；白色固體；熔點116.6℃。
            
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.27(s，9H，CH3)，1.69-1.76(m，2H，CH2)，1.84-1.93(m，4H，CH2)，2.52(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.39(s，2H，N-CH2)，3.69(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.60(s，lH，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.lnt.)592.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，RT＝4.61min，EHT0785，峰面積98.3％。
            
實施例47.4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二異丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)使用二異丙基氨甲酰氯(58mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物，得到淺色油EHT0566(120mg，63％產率)。
            
化合物實施例47的結構如下 MW634.75；產率63％；淺色油。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.27(d，J＝6.7Hz，12H，CH3)，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.89(m，4H，CH2)，2.54(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，3.12-3.18(m，6H，N-CH2，S-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.61(h，J＝6.7Hz2H，CH)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)635.2([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT0566，RT＝4.78min，峰面積98.1％。
            
實施例485-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)使用甲磺酰氯(42mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥化合物，得到白色固體EHT8366(80mg，45％產率)。
            
化合物實施例48的結構如下  
            
MW585.66；產率45％；白色固體；熔點663℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.94(m，4H，CH2)，2.65(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，2.80(s，3H，CH3)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.27(t，J＝4.7Hz，2H，N-CH2)，3.43(s，2H，N-CH2)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)586.0([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV 254nm，EHT 8366，RT＝4.60min，峰面積98.5％。
            
實施例494-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔T基哌嗪-1-甲酰胺(EHT3664)使用異氰酸叔丁酯(36mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物，得到白色固體EHT3664(130mg，71％產率)。
            
化合物實施例49的結構如下 MW606.70；產率71％；白色固體；熔點154.4℃。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，8)1.35(s，9H，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.85-1.95(m，4H，CH2)，2.50(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.35-3.38(m，6H，N-CH2)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.45(s，1H，NH)，6.45(s，1H，C＝CH)，7.26(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)508.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT3664，RT＝4.60min，峰面積99.6％。
            
實施例504-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)使用甲基氨甲酰氯(35mg，0.35mmol)按照方法C制備化合物。純化后在真空中干燥標題化合物，得到淺色油EHT4495(100mg，59％產率)。
            
化合物實施例50的結構如下 MW564.62；產率59％；淺色油。
            
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
            
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.94(m，4H，CH2)，2.48(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.51(t，J＝4.4Hz，4H，N-CH2)，3.70(s，3H，CH3)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
            
MS-ESI m/z(rel.Int.)566.1([MH]+，100).
            
HPLC方法A，檢測UV254nm，EHT4495，RT＝4.40min，峰面積99.1％。
            
實施例51藥理學這個實施例公開了用于說明化合物生物活性的各種分析條件。
            
材料和方法1.參比化合物設計一系列體外試驗以篩選各種化合物，并評價它們的抗增殖、抗腫瘤和抗血管生成的效能。包括CAI(甲酰胺三唑；L651582，MerckInstitute for Therapeutic Research)、紫杉醇(Paclitaxel)(紫杉醇；BristolMyers Squibb)、2-甲氧基雌二醇(2Me，PanzemTM；EntreMed)和SU-6668(Sugen)作為陽性對照。
            
參比CAI為最初作為抗球蟲藥開發的化合物(美國專利4590201)。CAI后來已被NCI證實為非電壓和電壓門控的鈣通道兩者的合成抑制劑。它證實在濃度從1到10αM時能抑制在大量的人腫瘤細胞系中腫瘤細胞的活動性、粘連、轉移可能性和體外生長。CAI還被證實能抑制幾種人內皮細胞的增殖、遷移和粘連。此外，還表現出對人工基膜(matrigel)上HUVEC血管形成的抑制和對大鼠大動脈環中微血管生長的延緩。最后，還證實了在小雞尿囊絨膜分析中在濃度10到20μM時能體內抑制血管生成。
            
參比2ME為已被證實能抑制體內腫瘤生長和血管生成的雌二醇內源代謝物。但是，除了其抗血管生成活性外，2ME還誘導活躍增殖細胞中的凋亡并表現出對各種人癌細胞培養物的一般非特異性抗增殖效果。它在小鼠中還具有有限的口服生物利用度并在給藥后被快速清除。在I期和II期腫瘤學試驗中，口服給藥的2ME已證實在患有乳腺癌、前列腺癌和多發性骨髓瘤的患者中有抗癌活性，并有很好的耐受性。目前，2ME在I期臨床試驗中用于乳腺癌，在II期試驗中用于血癌多發性骨髓瘤。具有2ME眼移植物的臨床前模型中的結果證實，它可抑制年齡相關性黃斑變性(ARMD)的新血管形成。
            
參比SU6668為開發用于治療各種癌癥(卵巢癌、前列腺癌和腦癌)的受體酪氨酸激酶(RTKs)的選擇性抑制劑。SU6668通過結合到新血管形成中涉及的血管內皮生長因子(VEGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)和成纖維細胞生長因子(FGF)的受體來抑制腫瘤生長和轉移需要的血管生成。在臨床前腫瘤模型中，SU6668完全抑制靶受體磷酸化，并通過血管生成抑制誘導腫瘤退化。口服制劑在2000年處于II/III期臨床試驗中。其后沒有進展被報道。
            
2.體外分析a.化合物對肌動蛋白細胞骨架影響的研究Swiss 3T3細胞的休眠期在5％FCS培養基(專用稀FCS)中，在蓋玻片上高密度接種細胞。當細胞變休眠(培養6-10天后)時，移去培養基(孔中殘留幾微升)并用沒有血清的培養基代替。將細胞放在培育器中過夜。理想地，細胞將具有很少(如果有的話)肌動蛋白應力纖維和環繞周圍的皮層肌動蛋白薄帶。
            
用試驗化合物處理細胞用各種濃度的化合物處理休眠細胞30分鐘。隨后用試驗化合物+誘導劑(見下面的段落)的雞尾酒處理細胞。處理后，進行免疫熒光分析。
            
用小G蛋白的各種誘導劑處理細胞小G蛋白途徑可被特異性激活，影響細胞骨架(Takai等人，Physiol.Rev.，2001)。可通過PDGF、胰島素、鈴蟾肽(Ridley等人，Cell，1992，Nobes等人，J.Cell Sci，1995)和滲透應激(Di Ciano等人，Am J Physiol Cell Physiol，2002)激活控制膜皺褶形成的Rac途徑。可通過LPA顯著激活Rho信號途徑(Ridley and Hall，Cell，1992)。 
            
免疫熒光分析-固定和滲透從培養孔中吸出培養基，并用固定緩沖液(BRB8080mM KPipes pH6.8，2mM MgCl2，5mM EGTA，3％多聚甲醛)替換。在室溫下培育細胞2×10分鐘。移去固定緩沖液，并用滲透緩沖液(PBS，2％BSA，0.1×皂草甙)替換。在室溫下培育板1小時或在4℃下培育16小時。
            
-標記用稀釋在滲透緩沖液中的抗微管蛋白初生抗體(Yol 1/34；Abcys)培育固定和滲透的細胞1小時。然后用滲透緩沖液洗滌5次。用山羊抗大鼠FITC再生抗體(Jackson Immunoresearch)和結合絲狀肌動蛋白的鬼筆環肽-TRITC(Sigma)培育蓋玻片30分鐘到1小時。然后用滲透溶液洗滌5次。然后用Immuno-Fluore(ICN)封片液將蓋玻片固定到顯微鏡載玻片上。使封片在37℃下干燥1小時。
            
-化合物效果的量化在顯微鏡下(至少三個不同區域，例如在100和200個細胞之間)計算細胞總數。評估具有相關的形態特征的細胞數。然后計算具有相關的形態特征的細胞百分比。
            
b.細胞培養和細胞生存力分析為了確定化合物對細胞生存力的影響，按Carmichael等人(1996)所述并作改進，進行微量培養四氮唑分析(MTT)。四種人腫瘤細胞系，即HCT116結腸腺癌、H460肺癌、MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞系，DLD1結腸直腸腺癌、HeLa腺癌、HepG2肝細胞癌。3種無限增殖但不致瘤的細胞系，即NIH3T3小鼠成纖維細胞(AmericanType Culture Collection)和初生肝細胞(Biopredic international)，根據他們的建議與人微血管系統的內皮細胞系HMEC1(National Centerfor Infection Diseases)一起培養。簡單地說，在藥物加入前24小時，將細胞接種在48孔板中。用溶解在DMSO中的0-200μM的化合物(11種濃度)處理細胞，調整孔中DMSO的最終濃度為1％。處理后16小時、和3或6天，向培養基中加入0.5mg/ml的MTT(Sigma)，在甲臜(formazan)晶體溶解在100％DMSO中之前，在37℃下培育細胞1-5小時。使用分光光度計在550nm波長下測定吸收率。使用GraphPadPrism軟件(GraphPad Software，Inc.)分析數據，從劑量-響應曲線計算IC50(導致50％細胞死亡的劑量)。
            
c.軟瓊脂中不依賴錨定細胞的生長分析為了評價一種化合物對腫瘤細胞沒有錨定時生長能力的影響，將HCT116細胞接種在軟瓊脂中。與將藥物效應平均在整個細胞群體上的微板分析相反，克隆形成分析提供區分細胞毒素劑(即減少集落數)和細胞抑制劑(即減小集落大小而不減少集落數；Murphy M.J.等人，1996)的可能性。簡單地說，將5×103個HCT116細胞重懸浮在300μl包含0.3％軟瓊脂(Difco)和不同濃度化合物(從0-30μM 8種濃度)的完全培養基中。然后將細胞倒在包含0.5％軟瓊脂加相同濃度化合物作為頂層的固化培養基層上。在使用相差顯微鏡(Nikon)和數字相機(Nikon Coolpix 990)獲取每孔的照片前，在37℃下培育細胞7天。隨后使用能確定克隆大小和數量的NIH(ImageJ)的免費圖象分析軟件分析照片。
            
使用GraphPad Prism軟件分析數據，并從劑量-響應曲線計算IC50(導致克隆大小或數量降低50％的劑量)。
            
d.遷移分析傷口愈合分析Nobes & Hall(J.Cell Biol.，1999)描述了這種分析。
            
-REF細胞的制備從15-18E14胚胎中制備REF細胞。簡單地說，從胚胎中除去頭、尾和內臟。只保留軀干，切成小方塊，洗滌，用胰蛋白酶-EDTA在37℃下處理20分鐘，重懸浮在培養基中，計數并培養。24小時后，細胞在冷凍管中被胰蛋白酶化和冷凍。在傷口愈合分析前48小時，將細胞覆蓋在蓋玻片上。試驗那天，用試驗化合物或單獨的DMSO處理細胞。30分鐘后，使用小吸液管端部在蓋玻片中心進行刮擦。洗滌細胞，并加入包含化合物或DMSO的新鮮培養基。
            
-縮時顯微鏡法將包含刮擦的蓋玻片和處理培養基并用石蠟膜密封的皿放在與攝像機和計算機連接的恒溫顯微鏡(37℃)下。每5分鐘采集顯微鏡圖象，并使用OpenLab軟件記錄。當分析結束時(4-24小時后)，用Metamorphe軟件分析照片和影片。校準照片(像素轉化成μm)，在跟蹤影片上的7至10個單細胞后，計算速度和經過的總距離。為此，在一個細胞上選擇一個點，并在每個影片照片中追隨這個點。記錄每個點的位置。將數據轉移到Excel中，計算平均距離和平均速度。
            
-免疫熒光分析或者，在30分鐘的處理并刮擦后，再在培育器中進行4小時的培育，通過免疫熒光分析研究細胞形態。
            
-固定和滲透從培養孔中吸出培養基，洗滌并固定。在室溫下培育細胞2×10分鐘。移去固定緩沖液，并用滲透緩沖液替換。在室溫下培育板1小時或在4℃下培育16小時。
            
-標記用稀釋在滲透緩沖液中的抗微管蛋白初生抗體培育固定和滲透的細胞1小時。然后用滲透緩沖液洗滌5次。用山羊抗大鼠FITC再生抗體和結合絲狀肌動蛋白的鬼筆環肽-TRITC培育蓋玻片30分鐘到1小時。然后在滲透溶液中洗滌5次。然后用Immuno-Fluore封片液將蓋玻片固定到顯微鏡載玻片上。使封片在37℃下干燥1小時。
            
在Boyden室中的遷移惡性細胞的基本特征是它們遷移、侵入宿主組織并產生轉移的能力。為了評價一種化合物對腫瘤細胞遷移能力影響的能力，使用高侵入腫瘤細胞MDA-MB-231、內皮細胞HMEC1或成纖維細胞NIH3T3進行遷移分析。使用Falcon HTS Fluoroblock插入物進行這種分析。向板孔中加入包含胎牛血清(FBS；使用其作為化學引誘物)的培養基，將重懸浮在沒有FBS而有0.1％BSA的培養基中的2×104-7.5×104個細胞加入到每個插入孔中。向上室和下室中的培養基中都加入相關的化合物。在37℃下培育板16小時。培育后，從上室中移去培養基，并將整個插入板轉移到在包含0.1％BSA的培養基中包含4μg/mlCalcein-AMTM的第二個24孔板中。在37℃下培育板1小時，用Hanks緩沖鹽水(HBSS)漂洗。使用Fluoroskan Ascent FL熒光板讀數器在485nm的激發波長(Ex)和517nm的發射波長(Em)下收集熒光數據。只有通過人工基膜層和膜的那些被標記細胞可被檢測。使用GraphPadPrism軟件分析數據，并計算IM50(觀察到50％細胞遷移抑制時的劑量)。
            
e.小管形成分析內皮細胞管形成分析或小管生成分析為被廣泛接受的精確反映血管生成過程如附著、遷移和分化成管狀結構的結束期數目的體外分析。在這種模型中，在重建基底膜組分(人工基膜)的單層上培養內皮細胞，并在幾個小時內形成毛細管狀結構。因此，這種系統是通過監測細胞外基質上內皮細胞的形態發生的抑制來快速篩選抗血管生成藥的有效和強力工具。
            
在補充有15％FBS、10ng/ml重組人表皮生長因子(Invitrogen)和1μg/ml氫化可的松的MCDB-131培養基(Sigma)中培養HMEC-1細胞系。培養細胞至70-80％融合。用Matrigel_基底膜基質(BectonDickinson)涂覆96孔板。將2×104個HMEC-1細胞接種到每個孔中。將試驗化合物或對照化合物稀釋在DMSO中，并加入到被涂覆的板上。隨后在37℃下、5％CO2氣氛中培育板6-8小時以允許小管形成。然后用1.25μg/ml Calcein AM在37℃、5％CO2下培育15分鐘。使用熒光顯微鏡和數字相機(Nikon Coolpix 990)拍攝每個孔的照片。使用AngioSys軟件(TCS Cellworks)分析圖象，該軟件允許量化總的小管長度和結數，這是兩個代表小管形成/破裂的參數。使用GraphPad Prism軟件分析數據，并計算IT50(導致50％小管生成抑制的劑量)。
            
3.體內分析體內斑馬魚血管生成模型這種分析為用于篩選影響血管形成的小分子的可行和有效整體動物模型(Serbedzija等人，Angiogenesis，1999)。該研究被轉包給Phylonix Pharmaceutical，Cambridge，MA，USA。
            
-藥物處理斑馬魚中的節間血管(ISV)可很好地視為血管生成血管，可使用顯微鏡方便地觀察它們。到受精后20個小時(hpf)階段，研究了主血管生成血管(背主動脈和尾靜脈)。到受精后48個小時，通過從背主動脈和尾靜脈發芽形成ISV。因此，20hpf用作藥物處理起點，48hpf用作終點。在6孔板中用化合物溶液在28℃下培育在20hpf期的斑馬魚胚胎28小時，每個孔20個胚胎。用1％DMSO和5μMFlavopiridol處理的胚胎分別用作陰性和陽性對照。
            
-顯微鏡檢查使用裝備有數字點片照相機(Diagnostic InstrumentsInc.)的ZEISS Stemi 2000-C立體顯微鏡(Zeiss)進行所有光學顯微鏡檢查研究。使用Adobe Photoshop 7.0(Adobe)進一步處理和分析圖象。
            
-整體包埋(whole mount)EAP染色胚胎在室溫下、在4％PFA中固定2小時，按照標準程序在100％乙醇中脫水。然后再水合胚胎，封閉，并用NBT/BCIP染色。洗滌后，用顯微鏡檢查胚胎。
            
-抗血管生成效果的量化為了量化抗血管生成效果，選擇位于肛孔周圍的5個發育良好的大血管ISV，并使用Adobe Photoshop進行形態測量分析[面積(像素)×信號強度]。對于每種條件，評估10個胚胎，并使用EXCEL軟件程序(微軟公司)計算10個圖象的平均值。為了計算抑制效果，用藥物處理胚胎中5個ISV中信號(S)的平均值除以DMSO對照胚胎中S的平均值，并使用下面的公式計算為％抑制 4.毒性分析*篩選艾姆斯氏試驗該研究的目的是評價試驗項目誘導鼠傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphimurium)(TA98和TA100株)中回復突變的效能。細菌回復突變試驗能識別通過替換、增加或缺失一個或幾個DND堿基對引起點突變的物質。誘變物質可誘導組氨酸缺陷菌株中的返祖，然后該菌株能在組氨酸有限的培養基中生長并形成菌落，而未返祖的則不行。在有和沒有大鼠肝臟代謝系統(S9混合物)的情況下進行該試驗。使用三種已知的誘變劑檢查試驗系統的敏感性疊氮化鈉、2-硝基芴和2-蒽胺。
            
每板的劑量水平為10-5000μg。按本來的誘變性試驗進行初步毒性試驗。
            
*按下面的計劃根據每種化合物3只大鼠，在大鼠體內進行篩選上升和重復劑量的毒性研究a.第1天至第3天10mg/kg口服每天，b.第4天至第6天50mg/kg口服每天，c.第7天至第9天300mg/kg口服每天。
            
記下臨床征象、體重、食物消耗和血液參數。
            
結果
            
1.體外分析a.化合物對肌動蛋白細胞骨架影響的研究在使用休眠Swiss 3T3細胞的兩組實驗中，在用化合物EHT1864和EHT9241預處理后，用胰島素、鈴蟾肽或通過滲透休克誘導Rac。滲透休克后得到的結果提供在圖1中。用亞毒性劑量的EHT1864和EHT9241預處理休眠Swiss 3T3細胞，可劑量依賴性地阻止由滲透休克后Rac誘導的皺褶形成。首先，我們可以觀察到每個孔表現出較少的皺褶，并且這些皺褶沒有肌動蛋白中豐富(熒光標記減少)。其次，處理后顯現出皺褶的細胞總數減少(見左下部圖)。這些結果被皺褶形成用胰島素和鈴蟾肽誘導的類似試驗(數據未示出)證實。在另一系統(REF細胞)中，在用兩種化合物處理后，觀察到受傷后對片狀偽足/皺褶形成的劑量依賴性抑制。
            
總之，EHT1864和EHT9241影響Rac控制的細胞骨架結構的形成。
            
b.細胞生存力分析(MTT)為研究它們對細胞生存力的影響，在大量細胞系中通過MTT試驗了超過47種試驗化合物和5種參比化合物。在各種處理持續期后，在不同條件下評價細胞生存力16小時(表15)、3天(表14)和6天(表12)，在10％(表12、14和15)胎牛血清(FBS)中、或在0.5％(表13，6天處理)胎牛血清(FBS)中。化合物表現出非常類似于參比化合物CAI和2ME的活性。最好的化合物表現出低于紫杉醇大約100倍的活性。SU-6668在所有細胞中表現出弱毒性。
            
MTT，在10％FBS中6天(表12；圖2-A)在3種腫瘤細胞系(HCT116、MDA-MB-231和MCF7)和2種非腫瘤細胞系(內皮HMEC1和成纖維細胞NIH3T3)中測試化合物。
            
在HCT116細胞(大約24小時的倍增時間；0.3＜IC50＜200μM)中，24種化合物具有低于4μM的IC50(在每一類中，所有化合物按照它們的活性從最高到最低排序)-9種化合物表現出OTHP保護EHT8883、EHT5881、EHT9376、EHT1006、EHT6271、EHT9140、EHT6060、EHT3788和EHT1593，-9種化合物在曲酸部分的位R1處表現為哌嗪基EHT5743、EHT9538、EHT0566、EHT0785、EHT3980、EHT4495、EHT8560和EHT9241，-5種化合物在曲酸部分的位R1處表現為嗎啉代基EHT5430、EHT2725、EHT1864、EHT2272和EHT2218，-1種化合物在曲酸部分的位R1處表現為哌啶基EHT9317，-1種化合物在曲酸部分的位R1處表現為氯原子EHT1494。
            
在MDA-MB-231細胞(36-48小時的倍增時間；從2.3μM起的IC50)中，9種化合物具有低于9μM的IC50-哌嗪衍生物EHT9358、EHT8560、EHT7365、EHT9241、EHT3664、EHT0785和EHT5743，-嗎啉衍生物EHT2218和EHT1864。
            
在HMEC1細胞(48-72小時的倍增時間；1.8＜IC50＜200μM)中，14種化合物具有低于10μM的IC50-6種化合物在曲酸部分的位R1處表現為OTHP保護EHT3788、EHT8883、EHT9376、EHT6271、EHT1006和EHT4745，-7種化合物在曲酸部分的位R1處表現為哌嗪基EHT0566、EHT8560、EHT5743、EHT9241、EHT7365、EHT0785和EHT3664。只有化合物EHT5743和EHT0785的活性在HMEC1和HCT116細胞中顯著不同(分別有20和5倍差異)。
            
-1種化合物在曲酸部分的位R1處表現為氯原子EHT1494。
            
嗎啉化合物EHT1864、EHT2218、EHT2272、EHT2725和EHT5430在HMEC1細胞中表現出與HCT116細胞相比顯著不同的活性(5至13倍)。化合物在HCT116細胞中最有活性。相反，哌嗪衍生物EHT8560和EHT 9241在測試的各種細胞系中表現出更異質的活性。
            
這種MTT篩選還允許確定其它最佳部分-5-碳不限定的直鏈連接基團-7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇環保留兩類化合物用于進一步分析“非選擇性”哌嗪衍生物EHT8560&EHT9241和“選擇性”嗎啉衍生物EHT1864& EHT2725。
            
MTT，在0.5％FBS中6天(表13)為了消除分析的增殖組分，并只檢查化合物對細胞生存力的影響，進行這些實驗。在這些條件下通過MTT只測試了7種化合物。在10％和0.5％FBS培養條件之間沒有觀察到IC50的較大差異。只觀察到1至2倍的差異，這表明化合物可能對細胞存活而不是細胞增殖起作用。MTT，在10％FBS中3天(表14；圖2-B)在腫瘤結腸細胞系(DLD1 & HCT116)、乳腺腫瘤細胞系(MDA-MB-231 & MCF7)中，通過3天的MTT測試4種化合物。它們顯示具有非常接近參比化合物5-氟尿嘧啶的活性。對于6天MMT的觀察，哌嗪衍生物在測試的各種細胞系上表現出比嗎啉衍生物更均勻的活性。
            
MTT，在10％FBS中16小時(表15)在結腸腫瘤(HCT116)、乳腺腫瘤(MDA-MB-231)、成纖維細胞(NIH3T3)和肝細胞(腫瘤HepG2和初生肝細胞)中，通過16小時的MTT測試4種化合物。令人感興趣的是，在從腫瘤和初生肝細胞得到的響應之間沒有觀察到大的差異。
            
c.不依賴錨定的生長分析為了研究化合物對HCT116細胞沒有錨定時獨立生長能力的影響，將細胞培養在具有各種濃度化合物的軟瓊脂中。這些實驗允許1)根據化合物影響克隆大小的能力對它們分級，和2)評價它們的作用模式(細胞毒性對細胞抑制)。
            
EHT9376、EHT9014、EHT3788和EHT1593在微摩爾范圍內都影響HCT116不依賴錨定生長的能力。表現出最高效果的化合物是EHT9376。表現出最低效果的化合物是EHT1593。EHT 9376的IC50非常類似于對參比化合物CAI計算的IC50(分別是5.4±1.2μM對5.8±1.0μM)(圖3-B)。
            
在我們的實驗中，相對于克隆數目，顯示CAI優先影響克隆大小(圖3-A)。這與將CAI描述為細胞抑制化合物的文獻(Wasilenko等人，1996)一致。同樣，被試驗的本發明的最佳化合物優先影響克隆大小。
            
總之，本發明描述的化合物具有細胞抑制作用模式。
            
d.遷移分析為了直接評估化合物影響細胞遷移的能力，使用了兩種技術傷口愈合和Boyden室遷移分析。通過Boyden遷移分析來測試化合物，同時測試參比化合物CAI，其在文獻中被描述為抗遷移化合物(KohnEC等人，1990；Rust WL等人，2000)，和其它參比化合物2ME和SU-6668。結果提供在圖5中。
            
傷口愈合分析在亞毒性劑量下測試所有的實驗。進行縮時顯微鏡檢查8小時(每5分鐘1張照片)。分析產生的影片，逐張照片地追蹤細胞以便估計它們的速度和它們經過的總距離。量化提供在圖4-A的圖表中。這個實驗表明，10μMEHT 9241降低了REF細胞的遷移36％，30μMEHT 1864降低了約48％的遷移(速度和經過的總距離)。
            
Boyden室中的遷移分析使用各種細胞系用于該分析腫瘤(MDA-MB-231)、內皮(HMEC1)和成纖維細胞(NIH3T3)細胞系。圖4-B中匯總了在11種試驗化合物和2種參比化合物上使用FBS作為化學引誘物進行實驗得到的結果。這些實驗表明，被測試的大多數化合物在低微摩爾范圍內影響各種細胞系遷移。
            
在HMEC1細胞中，表現出最高活性的化合物是OTHP化合物EHT3788和EHT9376。然后是嗎啉衍生物EHT1864(IC50＝7.8±1.7μM)和哌嗪衍生物EHT9241(IC50＝9.1±1.4μM)和EHT8560(IC50＝9.5±0.3μM)。
            
在NIH3T3細胞中，最佳化合物是哌嗪衍生物EHT9241(IC50＝4.7±0.6μM)、EHT7365(IC50＝6.1±1.1μM)和EHT8560(IC50＝10±0.6μM)，然后是嗎啉衍生物EHT7168(IC50＝16.4±3.4μM)和EHT1864(IC50＝20.4±3.5μM)。
            
在MDA-MB-231細胞中，最佳化合物是EHT9241(IC50＝2.7±1.0μM)、EHT7365(IC50＝3.9±0.8μM)和EHT8560(IC50＝4.5±2.4μM)，然后是嗎啉衍生物EHT1864(IC50＝5.1±1.9μM)。
            
觀察到的影響不能單單歸因于化合物的毒性，因為16小時的MTT數據(表15)顯示了高3至25倍的IC50，這依賴于試驗的細胞系。
            
總之，哌嗪衍生物似乎比嗎啉衍生物在抑制細胞遷移方面更有效。另外，最佳化合物在比CAI低的濃度下影響遷移，CAI在文獻中被描述為有效的抗轉移化合物(Wu等人，Clin.Cancer Res.，1997；Wasilenko等人，Int.J.Cancer，1996；Kohn & Liotta，J.Natl.Cancer Instit.，1990；Rust等人，Anal.Biochem.，2000)。
            
本發明的化合物因此為有效的抗遷移化合物，這可由它們抑制Rac控制的片狀偽足和皺褶形成的能力來說明。
            
e.小管形成分析如上所述，本發明的化合物和CAI具有非常接近的抗癌特性(細胞增殖、遷移、錨定依賴性細胞生長)。有趣的是，CAI在文獻中既被描述為抗癌化合物，又被描述為抗血管生成化合物(Bauer KS等人，2000；Krüger EA & Figg WD，2001)。為了了解我們的化合物是否也與CAI一樣具有抗血管生成特性，使用33種試驗化合物在HMEC1細胞上進行小管生成分析。
            
當涂在人工基膜上時，HMEC1細胞在培養基加單獨的溶劑DMSO存在時形成血管樣結構。相反，在培養基中加入化合物導致人工基膜誘導的網絡形成的劑量依賴性抑制。使用GraphPad Prism計算所有試驗化合物的總小管長度和結數兩者(代表小管生成過程的兩個參數)的IT50。提供結數所得IT50的圖示于圖5。總小管長度得到的IT50是非常類似的(數據未示出)。
            
5種最有活性的化合物示于下面(從最有活性到活性最少)；EHT8560(IC50＝17.0±3.6μM)、EHT9140、EHT6060、EHT3788、EHT5881、EHT9241(IC50＝26.0±8.7μM)。這些化合物比參比化合物CAI具有5至8倍多的活性。活性最高的化合物為哌嗪衍生物EHT8560。最有活性的嗎啉衍生物為EHT2218(IC50＝30.8μM)，然后是EHT1864(IC50＝34.9±3.5μM)，其比CAI活性高4倍。
            
最佳化合物在與2ME相同的范圍內有活性，盡管它們似乎以不同的方式影響小管生成過程。2ME似乎在處理過程中影響細胞完整性，而試驗化合物只影響小管形成。在我們的分析中，SU-6668被顯示不太有效，這可通過在無VEGF和FGF條件下進行分析的事實來解釋。
            
小管形成的抑制不能歸因于化合物毒性，因為內皮細胞只被處理幾個小時，通過MTT可表明化合物對HMEC1細胞生存力只有中等的影響(見表12-15)。
            
f.體外藥理學結論THP化合物沒有被保留用于完整表征，因為這些化合物被認為生物利用度較差并在體內高度不穩定。表現出最令人感興趣的藥理學和生物利用度曲線的化合物是哌嗪衍生物(EHT8560&EHT9241；“非選擇性”化合物)、哌嗪衍生物EHT5743(高“選擇性”，在HCT116細胞中最有活性的化合物)和嗎啉化合物EHT1864。
            
由此，這些結果說明了本發明化合物，尤其是哌嗪衍生物EHT5743、EHT8560和EHT9241，和嗎啉衍生物EHT1864，影響腫瘤細胞生存力、遷移和抑制小管(血管樣結構)形成的能力。
            
2.體內斑馬魚分析試驗的化合物為EHT1864、EHT9241、2ME和CAI。使用5μMFlavopiridol作為陽性內對照。使用圖象分析軟件對處理和未處理的斑馬魚胚胎的形態測量分析允許量化各種化合物對節間血管形成的抑制(見圖6)。EHT1864在斑馬魚胚胎中具有劑量依賴性抗血管生成活性，并且這種活性比得上已知抗血管生成化合物2ME和Flavopiridol的活性。令人感興趣的是，EHT1864似乎比參比化合物Flavopiridol和SU-5416(未示出)具有小得多的毒性。盡管EHT9241確實顯示出抗血管生成活性(40％最大抑制)，但它比EHT1864(77％最大抑制)的有效性低得多。CAI得到的數據不是確定性的，因為化合物在營養培養基中沉淀。
            
3.毒性分析a.篩選艾姆斯氏試驗通過篩選艾姆斯氏試驗來測試四種化合物，即EHT1864、EHT2725、EHT8560和EHT9241。在這些實驗條件下，有和沒有S9混合物，在鼠傷寒沙門氏菌TA98和TA100株中，試驗項目沒有表現出任何致突變活性。
            
b.篩選毒性試驗測試三種化合物，即EHT1864、EHT8560和EHT9241。總體上，直到300mg/kg/天，三種化合物的耐受性都相當好。研究過程中沒有死亡發生。觀察三種化合物的最小臨床征象。在300mg/kg/天時，在所有組中都注意到平均體重減輕。注意到一些有限的生物學變化(血液學和血液生物化學)。
            
表表126天處理后的細胞生存力分析(MTT；10％FBS) 
            
表136天處理后的細胞生存力分析(MTT；0.5％FBS) 
            
表143天處理后的細胞生存力分析(MTT；10％FBS) 
            
表1516小時處理后的細胞生存力分析(MTT；10％FBS) 
            
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權利要求
            
1.具有通式(I)的化合物，它的互變異構體、旋光異構體和幾何異構體、外消旋物、鹽、水合物和它們的混合物 其中R1選自 和 R2表示氫原子、包含3至6個碳原子的烷基或烯基；B表示鹵原子，優選氯，羥基、-O-CH2-O-CH3(MOM)基團、-O-CH2-O-CH2-CH2-O-CH3(MEM)基團、-OSO2-烷基基團或-OSi(CH3)2tBu；D表示氧原子、NR3、CR’R”或硫原子；X表示氧原子、硫原子或基團-NR4-；Y表示氧原子、硫原子或基團-NR4-；R3表示氫、烷基、羧酸酯基、酰基、甲酰胺基或SO2-烷基；R’和R”可相同或不同，表示氫原子或烷基；R4可相同或不同，選自氫原子、具有1至10個碳原子的烷基、芳基和芳烷基；“連接基團”表示(CH2)n，其中n表示1至10的整數，任選地被雜原子(優選N、O、S和P)或羰基、或芳基二烷基(優選二甲苯基)斷開；A表示選自以下的基團 和 任選地，A被取代。
            
2.如權利要求1所述的化合物，其中-X為硫、-NH-或優選氧；和/或-Y為氧；和/或-“連接基團”表示(CH2)n，其中n為2至9，優選4至7，或間-、鄰-或對-二甲苯基、-CH2CH2OCH2CH2-和-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-；和/或-R1為 、-CH2N(Et2)和-CH2吡咯烷、 其中D為氧、硫、-CH2-或NR3，其中R3優選表示H或烷基(所述烷基更尤其為甲基)，和-CH2-B，其中B為-O-CH2-O-CH3基或-OSO2-烷基(其中烷基優選為甲基)或鹵(優選氯或氟)；和/或-R2為氫原子；和/或-A為如上所定義的取代基。
            
3.如權利要求1或2所述的化合物，其中A被至少一個取代基取代，取代基可選自氫原子、鹵原子(優選F、Cl或Br)、羥基、(C1-C10)烷基、烯基、(C1-C10)烷酰基、(C1-C10)烷氧基、(C1-C10)烷氧基羰基、芳基、芳烷基、芳基羰基、單環烴基或多環烴基、-NHCO(C1-C6)烷基、-NO2、-CN、-NR5R6或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6彼此獨立地選自氫原子、具有1至10個碳原子的烷基、芳基和芳烷基。
            
4.如權利要求3所述的化合物，其中A為取代基團，至少一個取代基為鹵原子，更優選氯或氟。
            
5.如前述權利要求中任一項所述的化合物，其中A的至少一個取代基、更優選全部取代基代表氫原子、甲基、丙基、乙氧基、鹵原子，優選氯或氟，或CF3基團。
            
6.如權利要求1所述的化合物，其選自2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT 3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 6060)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃4-酮(EHT 9376)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 4745)2-(四氫-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 6271)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮鹽酸鹽(EHT 1302)2-羥基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 7365)2-嗎啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代嗎啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 4063)4-[5-(6-嗎啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二異丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 0566)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 4495)5-(6-(嗎啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT 6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT 1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二鹽酸鹽(EHT 0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT 9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三鹽酸鹽(EHT 8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氫-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8883)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(嗎啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 6892)。
            
7.如權利要求6所述的化合物，其為EHT 9241，它的游離堿EHT7365、EHT 8560、EHT 1864，它的游離堿EHT 7168或EHT 5743。
            
8.一種藥物組合物，包括如前述權利要求中任一項的至少一種化合物和藥物可接受的賦形劑或載體。
            
9.如前述權利要求所述的組合物，用于治療與異常細胞增殖有關的疾病或與失控血管生成有關的疾病。
            
10.如前述權利要求所述的組合物，用于治療癌癥、再狹窄、關節炎、糖尿病、眼疾病或尤其是視網膜病。
            
11.如前述權利要求中任一項所述的組合物，用于治療實體瘤或淋巴腫瘤。
            
12.如權利要求10所述的組合物，其中癌癥選自前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、頭頸癌、結腸癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤癌、白血病和黑素瘤。
            
13.如權利要求8所述的組合物，用于減少癌細胞增殖。
            
14.如權利要求8所述的組合物，用于治療患者中的轉移性癌癥。
            
15.如權利要求8所述的組合物，用于治療糖尿病性視網膜病、視網膜變性疾病、或年齡相關性黃斑變性(ARMD)。
            
16.如權利要求8所述的組合物，用于治療關節炎。
            
17.如權利要求8所述的組合物，用于治療白血病，尤其是急性成淋巴細胞白血病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病。
            
全文摘要
            
本發明涉及通式(I)的化合物和它們的用途，尤其是在藥物工業中。本發明公開了具有抗增殖和抗血管生成活性的化合物，以及通過施用所述化合物來治療各種疾病的方法，所述疾病為與異常細胞增殖有關的疾病包括癌癥，或與失控血管生成有關的疾病包括實體瘤生長和轉移，眼疾病和尤其是視網膜病，或關節炎。本發明還涉及包括所述化合物的藥物組合物，更具體地用于治療癌癥(如白血病)、眼疾病和關節炎。
            
文檔編號A61K31/4709GK1747952SQ200480003820 
            
公開日2006年3月15日 申請日期2004年2月27日 優先權日2003年2月28日
            
發明者貝特朗·勒布隆, 西爾韋爾·佩蒂, 維爾日妮·皮卡德, 蒂埃里·塔韋納, 法比安·施魏格霍費爾 申請人:埃克森希特醫療股份有限公司
            
                        
            
                        
            
                        
            
                            
                        
            

                        
                            
                    
            
                    
                    


                     
                        
                        
                    

                
            

                
                
            
                    
            
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