治療高血脂癥的組合物的制作方法

專利名稱：治療高血脂癥的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及治療高血脂癥的新的組合物，特別是含有阿昔莫司和匹伐他汀鈣及藥用輔料的組合物。
背景技術：
隨著醫藥科學的不斷發展，人們認識到膽固醇、脂肪等含量過高是發生心血管疾病的基本病因，高血脂是發生冠心病及高血壓的主要危險因素。因此，人們開始把血脂調節藥的開發作為防治心血管疾病的重點。自20世紀80年代末起，降血脂藥物大量推出，其中他汀類藥物受到人們好評，其臨床療效之佳是其它各類調節血脂藥物所不能相比的。十多年來，幾個國際大規模冠心病防治試驗的完成，證實他汀類藥物可以降低冠心病的發病率和死亡率，而且能使已經形成的動脈粥樣硬化斑塊發展減緩，甚至減退，從而打破了冠心病不可逆轉的傳統觀念，由“他汀”引發的一場血脂革命正在全球興起。目前，醫藥界對調脂藥在防治心血管疾病方面的作用充滿信心，調脂療法將成為21世紀預防心血管疾病的主要方法。
匹伐他汀(Pitavastatin)是第一個全合成的羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑類調血脂新藥，無需代謝轉化而直接具有藥理活性。本品在體內競爭性地抑制膽固醇合成過程中的限速酶羥甲戊二酰輔酶A還原酶，使膽固醇的合成減少，繼而使低密度脂蛋白受體合成增加，從而加強了由受體介導的低密度脂蛋白膽固醇的分解和清除，本品還抑制極低密度脂蛋白膽固醇的合成從而減少低密度脂蛋白膽固醇的生成。以上主要作用部位在肝臟，結果使血膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平降低，由此對動脈粥樣硬化和冠心病的防治產生作用。最近的研究顯顯示，匹伐他汀可以通過誘導內皮細胞中NO合酶的活性，增加NO的生成，對由炎癥誘導的內皮細胞損傷產生顯著的保護作用[1]。本品還可中度降低血甘油三酯水平和輕度升高血高密度脂蛋白膽固醇水平。臨床主要用于治療高膽固醇血癥和混合型高脂血癥，最大降脂作用在4周內達到。經大量臨床研究證實，本品具有優良的效益/風險比率，毒性低，副作用少而輕微，患者耐受性良好，是安全有效的降脂藥物。上市的是其鈉鹽。
阿昔莫司(Acipimox)是一種人工合成的煙酸衍生物，能抑制脂肪組織的分解，減少游離脂肪酸自脂肪組織釋放，從而降低甘油三酯(TG)在肝臟中的合成，并通過抑制極低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的合成，使血清中甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)的濃度下降。本品還可抑制肝臟脂肪酶的活性，減少高密度脂蛋白(HDL)的分解。該藥口服吸收迅速，藥后2小時內血藥濃度即達峰值，半衰期為2小時。該藥不與血漿蛋白結合，不被代謝，主要以原形經尿排出。在臨床上，阿昔莫司可有效治療高甘油三酯癥(Ⅳ型)、高膽固醇血癥(IIa型)及高甘油三酯合并高膽固醇血癥(IIb型)，是一種安全、有效、耐受性好的調血脂藥。
目前，該領域的研究趨勢是將兩種不同作用機制的調血脂藥制成復方制劑，從而使降脂作用更加全面，同時還可發揮協同作用，增強療效，減少毒副作用。
美國專利US5260305A公開了HMG-CoA還原酶抑制劑普伐他汀和煙酸及其衍生物的組合物，具體公開了規格為普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿昔莫司750mg的組合物的制備，但沒有公開其有益效果及最佳配比的藥理實驗數據，更沒有涉及到匹伐他汀和阿昔莫司的聯合用藥問題。
中國專利申請CN1425374A公開了阿昔莫司和洛伐他汀組合物，公開的比例是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比為25～50∶1，優選的比例是25∶1或37.5∶1，但沒有涉及阿昔莫司和匹伐他汀復方的最佳配比及相應藥理實驗數據。
發明目的本發明的目的是通過一系列科學的篩選實驗，提供一種新的治療高脂血癥的藥物組合物，其優點是作用全面和增強、毒副作用低和使用方便。本藥物含有特定比例的阿昔莫司和匹伐他汀鹽，由于兩藥作用機制不同，組成組合物后降脂作用將更加全面，并且兩藥合用有協同作用，其降脂作用明顯優于相同劑量的單方；此外，通過合理選擇組合物中匹伐他汀鹽的用量，使組合物在有效降低血脂水平的同時又無明顯的毒副作用，同時本組合物一日只需用藥一次，用藥方便，這將大大提高患者的順應性。

發明內容
本發明的組合物由阿昔莫司和匹伐他汀鈣以及藥用輔料組成，其中阿昔莫司和以游離酸計的匹伐他汀鈣的重量比為50～800∶1，優選的比例的是100～400∶1，進一步優選的比例的是200∶1。該組合物的藥物制劑的劑型，包括片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、滴丸等固體制劑，可以按照本領域公知的一般制劑方法制備，阿昔莫司含量相當于在將組合物給藥時約200～750mg的日劑量，匹伐他汀鹽含量以游離酸計相當于0.25～2mg的日劑量。匹伐他汀鹽包括鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽或鎂、鈣等堿土金屬鹽，優選鈉鹽。
本發明的組合物在制成固體制劑，如片劑或膠囊時，為達到持久的治療效果，優選地將有效量的阿昔莫司制成緩釋部分，再與有效量的匹伐他汀鹽共同制成緩釋制劑，如緩釋片、緩釋膠囊等。相應地，可藥用的輔料包括稀釋劑，如淀粉、乳糖、甘露醇、預膠化淀粉、糊精、微晶纖維素；崩解劑，如羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉；緩釋劑，如乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素-4M、羥丙基甲基纖維素-15M；優特奇RS-100、RL100、RS30D、RL30D、NE30D，以及蘇麗絲(Surelease，乙基纖維素的水分散體)粘合劑，如聚乙烯吡咯烷酮，交聯聚乙烯吡咯烷酮，潤滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠等。
本發明的組合物通過藥理方面的研究工作，表明當采用本發明的組合物，尤其是采用優選的配比時，與單獨應用有效量的阿昔莫司或匹伐他汀鹽相比，本發明的組合物給出令人吃驚的更好效果，同時毒性沒有增加，因而安全劑量范圍大，療效持續時間長，綜合效果好，使用方便。本發明的組合物可以每日1～2次給藥，優選為每日1次。
本發明中匹伐他汀可以為任何一種可以藥用的鹽，即合適的匹伐他汀生理可接受的鹽，包括衍生自無機的和有機的堿所形成的鹽，為鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋅鹽、鐵鹽；也可以為任何一種匹伐他汀可以藥用的酯，即合適的匹伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、雜環醇所形成的酯，為甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。
具體實施例方式
現通過如下實例進一步說明本發明的內容，但本發明的應用范圍不限于下列實例。
實例1a、阿昔莫司200g空白丸芯250g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，噴槍壓力(CYL)3bar，霧化壓力(CAP1)0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、匹伐他汀鈣 0.5g(以匹伐他汀游離酸計)空白丸芯30g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 30g制備工藝將匹伐他汀鈣過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，轉盤轉速160rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，45℃烘干，出料。
c、將a和b制得的小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為200mg和0.5mg進行填充，即可。
實例2a、阿昔莫司 200g乳糖 30g羧甲基淀粉鈉 30g微晶纖維素18g
6％PVP的無水乙醇溶液100g硬脂酸鎂2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、匹伐他汀鈣 1g(以匹伐他汀游離酸計)羥丙基纖維素 30g預膠化淀粉 20g6％PVP的無水乙醇溶液 30g山榆酸甘油酯 1g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，羥丙基纖維素、預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和羥丙基纖維素、預膠化淀粉混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓片即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為200mg和1mg。
實例3a、阿昔莫司 200g乳糖 30g羧甲基淀粉鈉 30g微晶纖維素 18g6％PVP的無水乙醇溶液 100g硬脂酸鎂 2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、匹伐他汀鈣 1.5g(以匹伐他汀游離酸計)羥丙基纖維素 50g預膠化淀粉 40g6％PVP的無水乙醇溶液 50g山榆酸甘油酯 2g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，羥丙基纖維素、預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和羥丙基纖維素、預膠化淀粉混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓片即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為200mg和1.5mg。
實例4a、阿昔莫司 200g乳糖 30g羧甲基淀粉鈉 30g微晶纖維素18g6％PVP的無水乙醇溶液 100g硬脂酸鎂 2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、匹伐他汀鈣2g(以匹伐他汀游離酸計)羥丙基纖維素 75g預膠化淀粉60g6％PVP的無水乙醇溶液 50g山榆酸甘油酯 2g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，羥丙基纖維素、預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和羥丙基纖維素、預膠化淀粉混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓片即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為200mg和2mg。
實例5a、阿昔莫司 300g羥丙基甲基纖維素-4M40g微晶纖維素 30g8％PVP的無水乙醇溶液 150g硬酯酸鎂 2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，羥丙基纖維素-4M、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和羥丙基纖維素-4M、微晶纖維素混合均勻，加入8％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、匹伐他汀鈣 1g(以匹伐他汀游離酸計)羧甲基纖維素鈉 30g乳糖 20g6％PVP的95％乙醇溶液 50g硬酯酸鎂 2g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，羧甲基纖維素鈉、乳糖過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和羧甲基纖維素鈉、乳糖混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為300mg和1mg。
實例6a、阿昔莫司 300g空白丸芯 250g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸Surelease 90g滑石粉1g純水 50g制備工藝將a中制得的含阿昔莫司小丸倒入轉盤，開造粒包衣機，入風壓力1.0bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP11.5bar，蠕泵5％，轉盤轉速180rpm，噴入Surelease的純水溶液。包衣結束，50℃烘干，出料。
c、按照實例1中b的要求制得匹伐他汀鈣小丸，與本例b中制得的阿昔莫司小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為300mg和0.5mg進行填充，即可。
實例7a、阿昔莫司 300g空白丸芯 300g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸乙基纖維素 40g
硬脂酸70g聚乙二醇-6000 6g滑石粉12g95％乙醇 1000g制備工藝將a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風溫度30℃，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP11.0bar，蠕泵6％，轉盤轉速175rpm，噴入乙基纖維素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣結束，50℃烘干，出料。
c、匹伐他汀鈣 1.5g(以匹伐他汀游離酸計)空白丸芯 90g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 30g制備工藝將匹伐他汀鈣過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中，開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速120rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，45℃烘干，出料。
d、將b與c制得的小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為300mg和1.5mg進行填充，即可。
實例8a、阿昔莫司 400g甘露醇 10g乳糖 40g微晶纖維素 20g6％PVP的95％乙醇溶液 120g硬酯酸鎂 2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，甘露醇、乳糖、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、匹伐他汀鈣 0.5g(以匹伐他汀游離酸計)預膠化淀粉 50g甘露醇 50g乳糖40g6％PVP的95％乙醇溶液100g微粉硅膠5g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，預膠化淀粉、甘露醇、乳糖過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和預膠化淀粉、甘露醇、乳糖混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為400mg和0.5mg。
實例9a、阿昔莫司400g乳糖30g羥丙基甲基纖維素-15M20g8％PVP的95％乙醇溶液150g山榆酸甘油酯2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羥丙基甲基纖維素-15M過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羥丙基甲基纖維素-15M混合均勻，加入8％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
b、匹伐他汀鈣 1g(以匹伐他汀游離酸計)羥丙基纖維素75g糊精70g6％PVP的95％乙醇溶液50g滑石粉 2g制備工藝匹伐他汀鈣過100目篩，羥丙基纖維素、糊精過80目篩，稱取處方量的匹伐他汀鈣和羥丙基纖維素、糊精混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的滑石粉。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片，每片含阿昔莫司與匹伐他汀鈣(以游離酸計)的量分別為400mg和1mg。
實例10阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方治療大鼠高血脂癥的復方篩選摘要本試驗的目的在于通過篩選確定毒性低、作用強、使用方便的阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方制劑的組成。采用高脂飼料誘發大鼠高脂血癥模型，給模型大鼠連續灌服阿昔莫司(100～400mg/kg)和(或)匹伐他汀鈣(0.25～2mg/kg，以游離酸計，下述匹伐他汀鈣的劑量均以匹伐他汀游離酸計)14天。結果發現，阿昔莫司和匹伐他汀鈣伍用對高脂飼料所致的大鼠高脂血癥有明顯的治療作用，降脂效果與兩種藥物的劑量相關，阿昔莫司200～400mg/kg與匹伐他汀鈣0.5～2mg/kg組成的復方可不同程度地降低大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇水平(LDL-C)，升高高密度脂蛋白膽固醇水平(HDL-C)。其中阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯合用藥組效果最顯著，對TC和LDL-C水平均表現出協同作用，并且對高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的水平影響較小，優選阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組成的復方。在本實驗劑量范圍內，聯合用藥組對與肝臟和肌肉毒性相關的血清酶活性無明顯影響。
1試驗目的通過篩選確定阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方制劑的組成，以達到復方制劑毒副作用低、作用全面和增強、使用方便之目的。
2受試藥物2.1煙酸衍生物藥品名稱阿昔莫司(Acipimox)
批號0308002純度大于99.7％生產單位魯南制藥股份有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期1年半。
配制方法臨用前用1％羧甲基纖維素鈉(CMC)混勻，配成試驗所需濃度。
2.2他汀類藥物藥品名稱匹伐他汀鈣(Pitavastatin calcium)批號0309002純度大于99.0％提供單位山東新時代藥業有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期2年。
配制方法臨用前用1％CMC混勻，配成試驗所需濃度。
3動物3.1品系和來源Wistar大鼠，軍事醫學科學院醫學實驗動物中心繁殖，實驗動物質量許可證號為醫動字D01-3039。
3.2體重和性別年齡9周～10周，體重180-220g，雄性。
3.3飼養條件動物實驗室空氣定時排風、光照良好，常溫。每籠飼養5只動物，飼以本院實驗動物中心專門為大鼠配制的膨化飼料，自由飲水。動物實驗條件合格證號為醫動字D01-2051。試驗開始前，觀察動物進食、活動及糞便等1周，選擇健康動物進入試驗。
4大鼠高脂血癥模型制備[2]大鼠高脂血癥模型采用高脂飼料致高脂血癥法。高脂飼料配方如下基礎飼料86.3％、膽固醇3％、豬油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、豬膽鹽0.5％，保證l成分混合均勻。連續2周。給藥期間隔天給予高脂飼料。
5阿昔莫司和匹伐他汀鈣對正常大鼠血脂水平的影響5.1劑量設置依據臨床上阿昔莫司的劑量為250mg/次(按人體重60kg計算，上述劑量為4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超過1200mg[3]。按體表面積為單位的劑量等效原則推算，上述人常用劑量換算成大鼠劑量約為50mg/kg/day。結合文獻報道[4]，將本試驗中阿昔莫司的劑量設定為100、200、300、400mg/kg。
臨床上匹伐他汀鈣的劑量為1～2mg/次，按人體重60kg計算，上述劑量為0.165～0.33mg/kg，1次/日，每日量最大不超過4mg。按體表面積為單位的劑量等效原則推算，上述人常用劑量換算成大鼠劑量約為0.0425mg/kg。參考文獻報道，將本試驗中匹伐他汀鈣的劑量設定為0.25、0.5、1、1.5、2mg/kg。
5.2組別設置依據上述劑量設置，按血清總膽固醇水平均衡原則，將正常動物隨機分為(1)正常對照組；(2)阿昔莫司100mg/kg組；(3)阿昔莫司200mg/kg組；(4)阿昔莫司300mg/kg組；(5)阿昔莫司400mg/kg組；(6)匹伐他汀鈣0.25mg/kg組；(7)匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(8)匹伐他汀鈣1mg/kg組；(9)匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(10)匹伐他汀鈣2mg/kg組；(11)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(12)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組；(13)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(14)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣2mg/kg組；(15)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(16)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組；(17)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(18)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(19)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組。每組10只。
5.3給藥臨床擬用的給藥途徑為口服，故本試驗采用灌胃法給藥，連續灌胃4天。灌胃均在動物進食后進行。每天1次。給藥體積為0.3ml/100g體重。
5.4檢測指標血清化學指標包括總膽固醇(TC)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)檢測試劑采用北京中生生物工程高技術公司產品，用SABA/18全自動生化分析儀測定；其余試劑采用曰本羅氏試劑公司產品，用日立7020自動生化分析儀測定。測定方法參照試劑說明書取血樣前禁食16小時。
6阿昔莫司和匹伐他汀鈣對高脂血癥大鼠血脂水平的影響6.1劑量設置依據同5.1正常大鼠實驗。
6.2組別設置依據上述劑量設置，按血清總膽固醇水平均衡原則，將模型大鼠隨機分為(1)正常對照組；(2)模型對照組；(3)阿昔莫司100mg/kg組；(4)阿昔莫司200mg/kg組；(5)阿昔莫司300mg/kg組；(6)阿昔莫司400mg/kg組；(7)匹伐他汀鈣0.25mg/kg組；(8)匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(9)匹伐他汀鈣1mg/kg組；(10)匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(11)匹伐他汀鈣2mg/kg組；(12)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(13)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組；(14)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(15)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀鈣2mg/kg組；(16)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣10mg/kg組；(17)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組；(18)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組；(19)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀鈣0.5mg/kg組；(20)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀鈣1mg/kg組。每組10只。
6.3給藥臨床擬用的給藥途徑為口服，故本試驗采用灌胃法給藥，連續灌胃14天。灌胃均在動物進食后進行。每天1次。給藥體積為0.3ml/100g體重。
6.4檢測指標同5.4正常大鼠實驗。
7阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方不同組分相互影響試驗7.1組別設置從療效較顯著的阿昔莫司和匹伐他汀鈣劑量組中，確定阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方的劑量(1)正常對照組；(2)模型對照組；(3)阿昔莫司300mg/kg；(4)匹伐他汀鈣1.5mg/kg；(5)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組復方組。每組10只。分組前測定血清總膽固醇水平，按均衡原則隨機分組。每組10只。
7.2給藥和檢測指標同前述6.3和5.4。
8試驗結果8.1阿昔莫司和匹伐他汀鈣對正常大鼠血脂水平的影響正常大鼠給藥4天后，阿昔莫司、匹伐他汀鈣和聯合用藥組的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇均有所降低，高密度脂蛋白膽固醇水平有所升高，給藥后血清甘油三酯略有下降。其中，阿昔莫司200mg/kg與匹伐他汀鈣2mg/kg、阿昔莫司300mg/kg與匹伐他汀鈣1mg/kg和阿昔莫司300mg/kg與匹伐他汀鈣1.5mg/kg三個聯用組總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇與正常對照組比較有顯著下降，見表1。
表1 阿昔莫司和匹伐他汀鈣及復方對正常大鼠血脂的影響


注1、與正常對照組比較，*P＜0.05 2、阿代表阿昔莫司，匹代表匹伐他汀鈣，下同。
8.2阿昔莫司和匹伐他汀鈣對模型大鼠血脂水平的影響大鼠飼以高脂飼料14天后分組給藥。阿昔莫司的劑量范圍為100～400mg/kg，匹伐他汀鈣的劑量范圍為0.25～2mg/kg，組成聯合用藥組。給藥14天后，與模型對照組比較，阿昔莫司和匹伐他汀鈣各劑量組血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇均有不同程度的下降，高密度脂蛋白膽固醇水平均有所升高。其中阿昔莫司300mg/kg與匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯用組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇水平顯著升高。與相同劑量的單方比較，阿昔莫司和匹伐他汀鈣各聯合用藥組上述指標均有相應的變化，其中阿昔莫司300mg/kg與匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯用組大鼠血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平下降程度十分顯著，表現出協同作用。
表2 阿昔莫司和匹伐他汀鈣及復方對模型大鼠血脂的影響


注與正常對照組比較，###P＜0.001；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0018.3阿昔莫司和匹伐他汀鈣對模型大鼠血清酶活性的影響本實驗通過測定用藥14天后高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的水平，來評價阿昔莫司和匹伐他汀鈣及復方對模型大鼠肝臟功能和骨骼肌組織的影響。結果表明，與模型對照組相比，阿昔莫司各劑量(100～400mg/kg)組模型大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶水平均無顯著差異(P＞0.05)；匹伐他汀鈣各劑量(0.25～2mg/kg)組模型大鼠血清中上述指標亦未見顯著差異(P＞0.05)，匹伐他汀鈣和阿昔莫司各聯合用藥組大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和血清肌酸激酶均無明顯變化(P＞0.05)，見表3。
表3 阿昔莫司和匹伐他汀鈣及復方對模型大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的影響


8.4阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方中不同組分相互影響試驗高血脂模型大鼠連續給藥14天后，與模型對照組相比，阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯合用藥組均能明顯降低模型大鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平以及明顯升高高密度脂蛋白膽固醇水平。
與相同劑量的單方相比，阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯合用藥組明顯降低模型大鼠血清中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇水平，下降程度十分顯著，表現出協同作用。見表4。
綜合上述試驗結果，優選阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組成的復方。
表4 阿昔莫司和匹伐他汀鈣復方中不同組分治療大鼠高脂血癥的效果

注與正常對照組比較，###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與阿昔莫司300mg/kg組比較，!!!P＜0.001，!!P＜0.01與匹伐他汀鈣1.5mg/kg組比較，@P＜0 05，@@P＜0.01，@@@P＜0.0019結論阿昔莫司和匹伐他汀鈣伍用對高脂飼料所致的大鼠高脂血癥有明顯的治療作用，降脂效果與兩種藥物的劑量相關，阿昔莫司200～400mg/kg與匹伐他汀鈣0.5～2mg/kg組成的復方可不同程度地降低大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇水平(LDL-C)，升高高密度脂蛋白膽固醇水平(HDL-C)。其中阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg聯合用藥組效果最顯著，對TC和LDL-C水平均表現出協同作用，并且對高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的水平影響較小，優選阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀鈣1.5mg/kg組成的復方。在本實驗劑量范圍內，聯合用藥組對與肝臟和肌肉毒性相關的血清酶活性無明顯影響。此外，目前阿昔莫司單方的臨床用法為3次/日，本實驗證明，阿昔莫司1次/日仍有顯著的降血脂作用，且毒性小，這為阿昔莫司和匹伐他汀鈣組成復方后一日僅用藥1次提供了可靠的實驗依據，這必將大大方便患者服用，提高患者的順應性。
參考文獻[1]Takashi Tokoro，et al，The novel HMG-CoA reductase inhibitor，pitavastatin，induces a protective action in vascular endothelial cells through the productionof nitric oxide(NO).The pharmaceutical society of Japan，2004，124(3)121-126[2]徐叔云，卞如濂，陳修主編，藥理學實驗方法學(第三版)，人民衛生出版社出版，2002年1月，1201-1202[3]OLBETAM(acipimox)說明書(Pharmacia，New Zealand)[4]Scand.J.Clin.Lab.Invest.，1990，50(2)203-208
權利要求
1.一種治療高血脂癥的組合物，其特征在于所述的組合物包括(1)第一個活性成分，它是阿昔莫司(Acipimox)；(2)第二個活性成分，它選自匹伐他汀(Pitavastatin)、或其可藥用的鹽、酯或溶劑化物；(3)一種或多種其它可藥用的活性成分或者非活性成分；
2.按照權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的匹伐他汀可以藥用的鹽為合適的匹伐他汀生理可接受的鹽，包括衍生自無機的和有機的堿所形成的鹽，如鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋅鹽、鐵鹽。
3.按照權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的匹他汀可以藥用的酯為合適的匹伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、雜環醇所形成的酯，如甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。
4.按照權利要求1～2所述的組合物，其特征是第二個活性成分為匹伐他汀鈣。
5.按照權利要求4所述的組合物，其特征是阿昔莫司和匹伐他汀鈣(以游離酸計，下同)的重量比是(50～800)∶1。
6.按照權利要求4所述的組合物，其特征是優選阿昔莫司和匹伐他汀鈣的重量比是(100～400)∶1。
7.按照權利要求4所述的組合物，其特征是進一步優選阿昔莫司和匹伐他汀鈣的重量比是200∶1。
8.按照權利要求1～7所述的組合物制成的醫療用制劑。
9.按照權利要求1～8所述的醫療用制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴丸。
全文摘要
本發明提供一種新的治療高脂血癥的藥物組合物，其特征是含有有效量的阿昔莫司(Acipimox)和匹伐他汀(Pitavastatin)鈣，以游離酸計，其重量比為(50～800)∶1，優選重量比為(100～400)∶1，進一步優選重量比為200∶1。其降脂作用明顯優于相同劑量的單方，表明兩藥合用有協同作用，同時又無明顯的毒性作用。
文檔編號A61K31/4965GK1701794SQ20041004823
公開日2005年11月30日 申請日期2004年6月16日 優先權日2004年5月25日
發明者趙志全 申請人:魯南制藥集團股份有限公司