專利名稱：9－硝基喜樹堿脂質納米粒組合物及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物及其制備方法。
背景技術：
喜樹堿具有良好的抗腫瘤活性，但由于毒副作用大，上世紀70年代開發不久就被廢棄使用。80年代以來，喜樹堿由于其獨特的拓撲異構酶I抑制作用，再次受到國內外關注。國外已開發了多種喜樹堿衍生物。9-硝基喜樹堿(英文名9-nitro-camptothecin，以下簡稱9-NC)是喜樹堿的半合成衍生物，是新一代的抗癌藥物，具有廣泛的抗癌活性，尤其對胰腺癌、卵巢癌療效顯著，有研究證明其比現已投入臨床使用的喜樹堿類藥物毒性低，預示9-硝基喜樹堿具有廣泛的臨床應用前景(DanceyJ，Eisenhauer EA.Br J Cancer[J]，1996；74327-338)。
目前歐美地區正在對乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、慢性白血病等十余種癌癥進行9-硝基喜樹堿口服制劑的II期臨床試驗，其中胰腺癌的臨床試驗已進入III期，表明其具有成為目前晚期胰腺癌最好的治療藥物的深厚潛力。有報道，9-NC靜脈給藥后，消除快，血藥濃度維持時間短，個體差異大，療效差(李柯，鐘大放.藥學學報，2003，38(2)124-128；Sands H，Mishra A，Stoeckler JD，et al.[J].Anti-cancer Drugs，2002，13965-975)。此外，9-NC難溶于水，也難溶于多種礦物油，穩定性較差，不適合制備成溶液型注射劑，因此目前國內外研究的重點主要集中于其口服制劑的研制。但是，其口服生物利用度低(＜15％)，胃腸刺激性也較大；因此，要充分發揮9-NC的抗癌活性，必須尋找一種更好的制劑。
脂質納米粒(lipid nanoparticles，LN)是近年來實驗研究的一種新型納米級給藥系統，以天然或合成的類脂，如卵磷脂、三酰甘油等為載體，將疏水性藥物包裹于類脂核中制成粒徑約10～1000nm的膠粒給藥體系。由于其納米級的特性，因此LN不同于普通的混懸型注射劑，可以用于靜脈注射，其兼具了下述脂質體、乳劑以及高分子聚合物納米粒的優點①LN使用的脂質毒性低、生物相容性高，在體內可降解，不會產生積蓄毒性；②固態或半固態的類脂核使LN具有可以控釋給藥、避免藥物的降解或泄漏以及良好的靶向性等優點；另外，LN可采用高壓乳勻法、高壓勻質法或微乳法進行工業化生產；LN的水分散系統可以進行高壓滅菌或γ輻射滅菌，具有長期的物理化學穩定性，也可通過凍干或噴霧干燥制成固體粉末。目前，已有喜樹堿、齊多夫定脂化物、阿霉素脂化物等藥物作為模型藥物被研制成LN，研究表明，這些模型藥物的LN制劑具有控釋、長效和靶向的特性(楊時成，朱家壁，梁秉文，等.藥學學報，1999，34(2)146-150)，但迄今沒有LN成品制劑投放市場。因此，將9-NC制備成SLN制劑能提高其生物利用度，降低毒副作用，達到高效、長效、安全的目的，該劑型的研發將為癌癥患者帶來福音。
發明內容
本發明的目的是提供一種9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物及其制備方法。
本發明采用原料藥9-硝基喜樹堿(市售)與類脂加表面活性劑制備成脂質納米粒，該脂質納米粒體系可供靜脈注射，并可提高藥物的生物利用度、延長其在體循環時間、降低其毒副作用。
本發明所述類脂與9-硝基喜樹堿的質量比為1∶1-3000∶1，類脂與表面活性劑的質量比為1∶100-100∶1。
所述脂質納米粒的類脂，可以是磷脂、硬脂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、山榆酸、甘油、單硬脂酸甘油酯、單豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單山榆酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、二豆蔻酸甘油酯、二棕櫚酸甘油酯、二山榆酸甘油酯、硬脂酸三甘油酯、豆蔻酸三甘油酯、棕櫚酸三甘油酯、三山榆酸甘油酯、辛酸/癸酸三甘油酯，或其中任意兩種或兩種以上的混合物。優選磷脂、硬脂酸三甘油酯、豆蔻酸三甘油酯、棕櫚酸三甘油酯或辛酸/癸酸三甘油酯。
所述脂質納米粒的類脂其中的磷脂，可以是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂；或氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰膽堿。優選大豆卵磷脂。
本發明采用表面活性劑修飾或吸附于脂質納米粒表面，以使脂質納米粒達到在體長循環的目的。所述表面活性劑包括，泊洛沙姆(Poloxamer，Pluronic)、聚氧乙烯脂肪酸酯(賣澤、Myrj)、聚氧乙烯脂肪醇醚(卞澤、Brij)、聚山梨酯(Polysorbate、吐溫、Tweens)、脂肪酸山梨坦(司盤、Spans)。
本發明針對人體內最細的毛細血管內徑為4μm的條件，考慮從靜脈注射用藥的安全性，本發明制備的脂質納米粒的粒徑分布為10-1000nm。
本發明脂質納米粒組合物通過已知方法，包括薄膜法、逆相蒸發法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、復乳法、高壓乳勻法、高壓勻質法、微乳法或溶劑擴散法制備。
本發明脂質納米粒組合物可以制成注射劑。注射劑包括注射液和無菌粉針。
所述無菌粉針是在注射劑中加入支持劑或賦形劑，通過噴霧干燥或冷凍干燥制得。所述注射液中加入等滲調節劑制成可直接靜脈注射的制劑。所說的等滲調節劑是葡萄糖、氯化鈉、甘油、山梨醇或木糖醇，或其中任意兩種或兩種以上混合物。所說的支持劑或賦形劑為下述一種或其中任意兩種或兩種以上混合的多元醇，包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇、果糖或甘露糖。
具體實施例方式
通過下列實施例進一步說明本發明的技術方案，但本發明的保護范圍，不局限于此。
實施例1溶劑擴散法制備9-硝基喜樹堿脂質納米粒組分9-NC2mgDynasan 118(硬脂酸三甘油酯) 100mgMiglyol 812 N(辛酸/癸酸三甘油酯)400μL大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgMyrj 59 200mg乙醇2mL丙酮8mL注射用水15mL2％海藻糖溶液 20mL分別稱取上述組分量的9-NC、Dynasan 118、Miglyol 812 N加入丙酮，于70℃加熱溶解；稱取處方量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取處方量的Myrj 59溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃20ml 2％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為248.0±86.3nm，包封率為83.46％。
實施例2溶劑擴散法制備9-硝基喜樹堿脂質納米粒組分9-NC2mgDynasan 116(棕櫚酸三甘油酯) 100mg大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgMyrj 59 200mg乙醇2mL丙酮8mL注射用水15mL4％海藻糖溶液 20mL制備工藝稱取組分量的9-NC、Dynasan 116加入丙酮，于70℃加熱溶解；稱取組分量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取組分量的Myrj 59溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃20ml 4％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為212.8±85.1nm，包封率為81.03％。
實施例3 9-硝基喜樹堿脂質納米粒的制備組分9-NC 2mgDynasan 118(硬脂酸三甘油酯)100mg大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgMyrj 59200mg乙醇 2mL丙酮 8mL注射用水 15mL4％海藻糖溶液 20mL制備工藝稱取組分量的9-NC、Dynasan 118加入丙酮，于70℃加熱溶解；稱取處方量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取組分量的Myrj 59溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃ 20ml 4％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為296.0±125.2nm，包封率為66.9％。
實施例4制備9-硝基喜樹堿脂質納米粒組分9-NC 2mgDynasan 116(棕櫚酸三甘油酯)100mgDynasan 118(硬脂酸三甘油酯)50mg大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgMyrj 59200mg乙醇 2mL丙酮 8mL注射用水 15mL4％海藻糖溶液 20mL制備工藝稱取組分量的9-NC、Dynasan 116、Dynasan 118加入丙酮于70℃溶解；稱取處方量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取組分量的Myrj 59溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃ 20ml 4％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為239.5±110.9nm，包封率為67.09％。
實施例5制備9-硝基喜樹堿脂質納米粒組分9-NC 3mgDynasan 118(棕櫚酸三甘油酯)100mgMiglyol 812N(辛酸/癸酸三甘油酯)400μL大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgSpan 60200mg
乙醇 2mL丙酮 8mL注射用水 15mL2％海藻糖溶液20mL制備工藝稱取組分量的9-NC、Dynasan 118、Miglyol 812N加入丙酮，于70℃加熱溶解；稱取組分量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取組分量的Span 60溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃20ml 2％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為232.7±123.3nm，包封率為8.4％。
實施例6制備9-硝基喜樹堿脂質納米粒組分9-NC 3mgMiglyol 812N(辛酸/癸酸三甘油酯)500μL大豆磷脂(PC含量＞80％) 100mgMyrj 59200mg乙醇 2mL丙酮 8mL注射用水 15mL2％海藻糖溶液 20mL制備工藝稱取組分量的9-NC、Miglyol 812N加入丙酮，于70℃加熱溶解；稱取組分量大豆磷脂加入乙醇超聲10min，待溶解后，將以上兩種液體混合形成有機相；另取組分量的Myrj 59溶于15ml注射用水中形成水相。將有機相用6號針頭注入70±2℃不斷攪拌(1000rpm)的水相中，于70±2℃攪拌(1000rpm)4小時，待有機溶劑揮發殆盡。將該乳液快速分散至0～2℃ 20ml 2％的海藻糖溶液中，低溫固化2小時。將所得體系過0.8μm的微孔濾膜，即得9-NC脂質納米粒。所得納米粒平均粒徑為274.9±73.4nm，包封率為66.81％。
權利要求
1.一種9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是含9-硝基喜樹堿，類脂和表面活性劑，其中，類脂與9-硝基喜樹堿的質量比為1∶1-3000∶1，類脂與表面活性劑的質量比為1∶100-100∶1。
2.根據權利要求1所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述類脂是磷脂、硬脂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、山榆酸、甘油、單硬脂酸甘油酯、單豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單山榆酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、二豆蔻酸甘油酯、二棕櫚酸甘油酯、二山榆酸甘油酯、硬脂酸三甘油酯、豆蔻酸三甘油酯、棕櫚酸三甘油酯、三山榆酸甘油酯、辛酸/癸酸三甘油酯，或任何兩種或兩種以上的混合物。
3.根據權利要求1所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的類脂其中的磷脂，是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂；或氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰膽堿。的磷脂是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂，雙肉豆蔻磷脂酰膽堿，雙肉豆蔻磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酸，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰膽堿。
4.根據權利要求3所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的表面活性劑是，泊洛沙姆、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚山梨酯或脂肪酸山梨坦。
5.根據權利要求1所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物的粒徑分布為10-1000nm。
6.根據權利要求1-5所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是制成注射液或無菌粉針。
7.根據權利要求1-5所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物中加入等滲調節劑制成注射液。
8.根據權利要求7所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的等滲調節劑是葡萄糖、氯化鈉、甘油、山梨醇或木糖醇，或其中任意兩種或兩種以上混合物。
9.根據權利要求1-5所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物中加入支持劑或賦形劑制成無菌粉針。
10.根據權利要求9所述的9-硝基喜樹堿脂質納米粒組合物，其特征是所述的支持劑或賦形劑是蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇、果糖或甘露糖，或其中任意兩種或兩種以上混合物。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種9－硝基喜樹堿脂質納米粒組合物及其制備方法。本發明脂質納米粒組合物可通過溶劑擴散法等，采用原料藥9－硝基喜樹堿與類脂加表面活性劑制備成脂質納米粒，粒徑分布為10－1000nm。本發明采用表面活性劑修飾或吸附于脂質納米粒表面，使脂質納米粒達到在體長循環的目的。本發明脂質納米粒組合物制成注射液和無菌粉針，可供靜脈注射，并可提高藥物的生物利用度、延長其在體循環時間、降低其毒副作用。
文檔編號A61K9/127GK1582933SQ20041002484
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月1日 優先權日2004年6月1日
發明者方曉玲, 李珺嬋, 沙先誼, 韓麗妹, 吳云娟, 張麗珺, 白志華, 韓旻, 王青松 申請人:復旦大學