專利名稱：一種抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法，特別是一種以存在于十字花科大青葉和海洋生物龍蝦中的天然活性物質2，3-吲哚醌為主要成分的抗癌防癌藥物的制備方法，屬于中藥制備技術領域。
背景技術：
惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康的常見病，占我國因病死亡的首位。目前常用的抗癌藥物多為化學合成的細胞毒類藥物，對正常細胞和癌細胞選擇性差，毒副作用大，而毒副作用較低的多數中藥制劑因其混合成分原因而不能列入國家I類新藥。吲哚類化合物是較重要的一類雜環衍生物生物堿，多數具有顯著生理活性。近年來，隨著長春堿、長春新堿等在癌癥治療上的應用，這類化合物的抗腫瘤作用已普遍得到人們關注。國內外大量研究表明，吲哚或類吲哚結構化合物有抗癌作用。著名十字花科中藥大青葉、板蘭根、青黛和甘蘭、卷心菜抗氧自由基和防癌作用已有許多報告，這與其含有吲哚類物質的抗癌活性有關。2，3-吲哚醌(2，3-indolinedione，以下簡稱ISA)不僅存在于十字花科植物如大青葉中也是來自于龍蝦并維持其生存所必需的一種天然活性物質，是成分單一的紫紅色有機天然物質，化學結構明確，其單體已可合成。結構式為 2，3-吲哚醌 靛玉紅現已證明ISA是存在于海洋生物、人體及經典抗癌中藥大青葉的內源性活性物質，又是我國獨創I類抗癌新藥靛玉紅化學二聚體結構的前體，抗癌藥的先導化合物。ISA天然的化學結構特征使其具備抗癌和防癌的作用條件。且ISA的結構較靛玉紅更簡單，克服了空間位阻，并存在1和2位的化學變構基團，增加了對黏膜上皮的穿透能力，因而更易人體吸收。ISA只選擇性作用于異倍體的腫瘤細胞，而對正常的二倍體細胞無作用或作用很弱，這將降低腫瘤治療中的毒副作用。本發明的目的在于克服現有化學合成抗癌防癌藥物毒副作用大，而中藥制劑因其混合成分原因而不能列入國家I類新藥的缺憾，旨在發明一種成分單一、兼具抗癌和防癌作用、療效顯著的天然抗腫瘤藥物。
發明內容
為了實現上述發明目的，本發明藥物的主要原料采用人工合成的海洋活性物質ISA，經重結晶提純后備用；即在避光條件下稱取人工合成的ISA溶于超純水和無水乙醇按比例配合的溶劑中，緩慢加熱至溶解，然后逐漸冷卻，即得針形橘紅色結晶，濾去上清液，按上述方法再反復進行，揮去乙醇，干燥備用；濾出的上清液可收集，蒸餾揮去乙醇，濃縮濾液除水，干燥殘渣部分，可作為ISA再次按上述方法重結晶，提取純品；按上述方法反復操作可提高結晶純度達99％；將提純后的ISA結晶研磨成粉末后過篩備用。
本發明藥物的制備方法分為片劑和膠囊劑兩種劑型的制備一、片劑的制備分別按ISA10-20％、乳糖30-40％、微晶纖維素25-35％、羧甲基纖維素鈣1-5％、無水硅酸1-5％、羧基丙酰纖維素3-8％、硬脂酸鎂1-3％的質量百分比稱量出各種成分，將ISA、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣和無水硅酸均一混合，加入到用異丙醇溶解的羧基丙酰纖維素中，用濕式制粒法制備，得到的顆粒和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片，制成50mg，100mg兩種規格的片劑。
二、膠囊的制備以質量比1∶1-10倍的藥用淀粉與ISA混勻，再添加ISA和藥用淀粉二者總質量1％的硬脂酸鎂混合均勻，填充膠囊，制成50mg，100mg兩種規格的膠囊。
本發明藥物采用三種小鼠移植性腫瘤模型做藥效實驗，以抗癌藥環磷酰胺作陽性對照，觀察了該藥物的體內抗腫瘤作用，結果如下1、該藥物對小鼠的半數致死量(LD50)為1091±359mg·kg-1(95％可信區間751-1374mg·kg-1)。慢性毒性實驗證明，大鼠服用該藥6個月后，經血液生化檢驗和22種臟器和組織的病理切片分析，無明顯毒副作用。
2、該藥物(ISA60、180mg·kg-1劑量組)對小鼠肉瘤S180，小鼠肝癌H22，小鼠艾氏腹水瘤實體型EC和腹水型EAC的生長有抑制作用，最高抑瘤率分別為49.2％(P＜0.01)，44.6％(P＜0.01)，40.4％(P＜0.01)，最高生命延長率為45.6％(P＜0.01)。該藥物對三種瘤株的抑瘤作用均呈良好的量效關系。
3、與陰性對照組比較，該藥物各劑量組對小鼠外周血WBC無顯著性差異(P＞0.05)。環磷酰胺降低小鼠WBC水平(P＜0.01)。
4、移植瘤S180使小鼠血漿SOD活性降低，MDA含量升高，陰性對照組與正常對照組相比差異顯著(P＜0.05)。該藥物各劑量組SOD活性和MDA含量與陰性對照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。
5、該藥物對S180瘤細胞Bc1-2、PCNA蛋白表達的影響。免疫組化驗測Bc1-2以胞漿染棕褐色為陽性結果，PCNA以胞核染棕褐色為陽性結果。該藥物(ISA60、180mg·kg-1劑量組)PCNA、Bc1-2表達陽性率低于陰性對照組(P＜0.05)。
本藥物用海洋活性物質ISA作為主要成分，通過抗老化和氧自由基保護中樞神經正常細胞，可拮抗環境毒素造成的正常神經細胞的死亡，具有明顯的抗氧自由基和抗腫瘤細胞增殖的作用，它只選擇性作用于異倍體的腫瘤細胞，而對正常的二倍體細胞無作用或作用很弱，降低了腫瘤治療中的毒副作用；經使用該藥物在活體動物模型中試驗證明ISA具有保護正常細胞和抗癌兩種作用。這是目前人工合成的單一化學成分抗癌藥物所不具有的優點，因此有巨大的新藥開發價值。
具體實施方案實施例1該抗癌防癌海洋活性藥物片劑的制備方法如下第一步，人工合成ISA的純化。在避光的條件下稱取人工合成的ISA100g溶于超純水和無水乙醇按體積比為1∶1-8的比例配合的溶劑中，緩慢在磁性攪拌器上加熱50℃-80℃至溶解，然后逐漸冷卻，即得針形橘紅色結晶，濾去上清液留作他用，按上述方法再反復進行，揮去乙醇，干燥備用；濾出的上清液可收集，蒸餾揮去乙醇，濃縮濾液除水，干燥殘渣部分，可作為ISA再次按上述方法重結晶，提取純品；按上述方法反復操作；將提純后的ISA結晶研磨成粉末后過80目篩備用。
第二步，片劑的制備。提純后的ISA75g乳糖 190g微晶纖維素 170g羧甲基纖維素鈣 15g無水硅酸 15g羧基丙酰纖維素 25g硬脂酸鎂 10g共500g分別稱量出上述各種成分，將ISA、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、無水硅酸這5種成分均一混合，然后用異丙醇溶解羧基丙酰纖維素，把前述5種成分加入其中，用濕式制粒法制備，將得到的顆粒和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片，制成50mg，100mg兩種規格的片劑。
實施例2該抗癌防癌海洋活性藥物片劑的制備方法如下第一步，人工合成ISA的純化。同實施例1第一步。
第二步片劑的制備。提純后的ISA50g乳糖 200g微晶纖維素 175g羧甲基纖維素鈣 25g無水硅酸 25g羧基丙酰纖維素 20g硬脂酸鎂 5g共500g分別稱量出上述各種成分，將ISA、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、無水硅酸這5種成分均一混合，然后用異丙醇溶解羧基丙酰纖維素，把前述5種成分加入其中，用濕式制粒法制備，將得到的顆粒和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片，制成50mg，100mg兩種規格的片劑。
實施例3該抗癌防癌海洋活性藥物片劑的制備方法如下第一步，人工合成ISA的純化。同實施例1第一步。
第二步片劑的制備。提純后的ISA100g乳糖 150g微晶纖維素 150g羧甲基纖維素鈣 25g無水硅酸 25g
羧基丙酰纖維素35g硬脂酸鎂 15g共500g分別稱量出上述各種成分，將ISA、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、無水硅酸這5種成分均一混合，然后用異丙醇溶解羧基丙酰纖維素，把前述5種成分加入其中，用濕式制粒法制備，將得到的顆粒和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片，制成50mg，100mg兩種規格的片劑。
實施例4該抗癌防癌海洋活性藥物膠囊劑型的制備方法如下第一步，人工合成ISA的純化。同實施例1第一步。
第二步，膠囊的制備。分別稱量提純后的ISA50g，藥用淀粉450g混合均勻，再添加硬脂酸鎂5g，混合均勻，填充膠囊，制成50mg，100mg兩種規格的膠囊。
服用方法預防癌癥時可應用膠囊或片劑，每人每日50-100mg，治療癌癥時可用膠囊或片劑每人每日100-300mg，可分2-3次飯后服用。
權利要求
1.一種抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法，制成片劑和膠囊兩種劑型，其特征在于在避光條件下稱取人工合成的2，3-吲哚醌溶于超純水和無水乙醇按比例配合的溶劑中，緩慢加熱至溶解，然后逐漸冷卻，即得針形橘紅色結晶，濾去上清液，按上述方法再反復進行，揮去乙醇，干燥后將得到的2，3-吲哚醌結晶研磨成粉末后過篩備用；再分別按2，3-吲哚醌10-20％、乳糖30-40％、微晶纖維素25-35％、羧甲基纖維素鈣1-5％、無水硅酸1-5％、羧基丙酰纖維素3-8％、硬脂酸鎂1-3％的質量百分比稱量出各種成分，將2，3-吲哚醌、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣和無水硅酸均一混合，加入到用異丙醇溶解的羧基丙酰纖維素中，用濕式制粒法制備，得到的顆粒和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片制得片劑；或以質量比1∶1-10倍的藥用淀粉與2，3-吲哚醌混勻，再添加2，3-吲哚醌和藥用淀粉二者總質量1％的硬脂酸鎂混合均勻，填充膠囊，制成膠囊劑型。
2.根據權利要求1所述的一種抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法，其特征在于將人工合成的2，3-吲哚醌純化時溶于超純水和無水乙醇按體積比為1∶1-8的比例配合的溶劑中，緩慢在磁性攪拌器上加熱50℃-80℃至溶解。
3.根據權利要求1所述的一種抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法，其特征在于制成的片劑和膠囊分別分為50mg和100mg兩種規格。
全文摘要
本發明涉及一種以2，3－吲哚醌為主要成分的抗癌防癌海洋活性藥物的制備方法。先將人工合成的2，3－吲哚醌純化；再按2，3－吲哚醌10－20％、乳糖30－40％、微晶纖維素25－35％、羧甲基纖維素鈣1－5％、無水硅酸1－5％、羧基丙酰纖維素3－8％、硬脂酸鎂1－3％的質量百分比稱量各成分，將2，3－吲哚醌、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣和無水硅酸混勻，加入到用異丙醇溶解的羧基丙酰纖維素中，制得顆粒再和硬脂酸鎂混合，按濕顆粒法壓片制得片劑；或以質量比1∶1－10的藥用淀粉與2，3－吲哚醌、適量硬脂酸鎂混勻，制成膠囊。該藥成分單一、降低了腫瘤治療中的毒副作用，兼具抗癌和防癌功效。
文檔編號A61K9/20GK1676126SQ20041002387
公開日2005年10月5日 申請日期2004年4月2日 優先權日2004年4月2日
發明者岳旺, 王蕾, 劉占濤, 張芳, 周明 申請人:青島大學