專利名稱：一種以擬人參皂苷元(Ocotillol)為有效成分的戒毒、促智藥物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷，有效戒斷嗎啡樣作用的藥物，其制備方法及其在促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷，有效戒斷嗎啡樣作用的藥物中的應用。
背景技術：
阿片類藥物的依耐性和耐受性極易造成吸毒者不斷復吸，從而惡性循環，給當今社會帶來巨大危害，然而目前對阿片類藥物的依耐性和耐受性還沒有非常理想的預防和治療方法。研究能夠有效戒斷阿片類依耐性和耐受性的藥物也成為當前新藥開發熱點之一。目前，臨床應用替代療法或綜合療法的戒毒藥物，雖能部分解除對阿片類藥物的依耐性，但多數藥物仍不能解除心理依耐性問題。
近年來國內外報道人參的皂苷成分能夠對抗阿片類的成癮和耐受作用。國內專利申請(公開號CN 1300593A)報道了擬人參皂苷F11有拮抗嗎啡樣作用和促智作用。國外還有報道越南人參中的Ocotillol型皂苷具有抗嗎啡樣作用。但對擬人參皂苷元具有拮抗嗎啡樣作用和促智作用未見相關研究。
本發明所述的擬人參皂苷元在人參屬植物中含量極低，顯然沒有實際應用價值。雖目前國內已有制備擬人參皂苷F11方法的專利申請(公開號CN 1251369A)。但對擬人參皂苷元大規模制備方法尚未見相關文獻報道。
根據本發明提供的大規模高效制備擬人參皂苷元的方法，獲得擬人參皂苷元，我們又對擬人參皂苷元在戒毒和促智方面進行了深入研究，結果發現，擬人參皂苷元具有促智和拮抗嗎啡樣作用，從而完成本發明。
發明內容
本發明提供了一種以擬人參皂苷元(Ocotillol)為有效成分的能夠促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷，有效戒斷嗎啡樣作用的藥物。
本發明提供了擬人參皂苷元(Ocotillol)在制備促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷，有效戒斷嗎啡樣作用的藥物中的應用。
本發明還提供了大規模制備擬人參皂苷元(Ocotillol)的方法。其包括如下步驟用來制備擬人參皂苷元的起始原料人參皂苷(II)的結構通式如下
R＝糖基首先從西洋參、西洋參莖葉、越南人參、越南人參莖葉等人參屬植物中獲得的富含擬人參皂苷元為母核的結構通式如(II)所示人參皂苷，如含有擬人參皂苷F11、擬人參皂苷-RT4、珠子參苷(majonoside)-R1、珠子參苷(majonoside)-R2或它們的混和物。加入由堿金屬氫氧化物與低級醇類組成的溶液中，堿濃度一般為0.2％～60％，優選濃度為5～20％，在高壓或常壓下加熱進行堿降解，徹底水解掉人參皂苷(II)6位上的糖鏈，從而獲得富含擬人參皂苷元的降解產物，反應液傾入冷水，攪拌，析出固體，用水洗至中性，過濾。得到擬人參皂苷元粗品，經硅膠柱色譜分離。洗脫劑由底劑和極性調節劑組成。底劑可以是石油醚、氯仿、正己烷、環己烷、正戊烷中的一種或幾中，極性調節劑可以是乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、丙酮、乙醚、含有1-4個碳原子的一元醇中的一種或幾種。
由擬人參皂苷元粗品經重結晶得精制擬人參皂苷元。重結晶溶劑可以是乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮以及它們組成的混合劑。
經硅膠柱層析或純結晶，從而獲得擬人參皂苷元單體。
當反應介質低級醇為1-4個碳原子的一元醇時，優選為乙醇，正丁醇，甲醇。反應狀態優選在0.05～5Mpa壓力和100～320℃溫度下進行。當反應介質低級醇為1-4個碳原子的多元醇時，優選為丙三醇、丙二醇、乙二醇、1.3-丁二醇、1.4-丁二醇、甘二醇，反應狀態在0-4Mpa壓力和150～230℃溫度下進行，優選為在常壓和150～230℃溫度下進行。反應時間取決于降解原料，反應溫度和堿的濃度，反應時間在5分鐘至3小時。
本發明制備方法的優點是提供了一種大規模高效制備擬人參皂苷元的方法。堿降解反應簡單，適合工業化生產，能夠制備出高純度的擬人參皂苷元，為其應用提供了方便。
本發明提供的藥物，可以以片劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、膠囊、糖漿、注劑、口嚼劑、貼劑、凍干粉針或注射用乳劑形式存在。均可以采用藥學上常規方法制備而成。
具體實施例方式
制備例1擬人參皂苷元(Ocotillol)的制備取200ml95％乙醇加入高壓反應釜內，加入30g固體氫氧化鉀，攪拌溶解，再加入富含式(II)所示結構通式的五環三萜皂苷的西洋參莖葉皂苷10g，繼續攪拌并持續升溫，升溫至160℃。于大約1.15Mpa的壓力下，保溫下反應2.5小時，反應完畢，將反應液傾入冷水中，稀釋至3倍，約600ml，再用等體積的乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，回收溶劑，得到4.3g黃褐色固體，再將此固體經硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(1∶1)洗脫，以乙酸乙酯重結晶得到0.3g無色結晶擬人參皂苷元，收率3％。
制備例2擬人參皂苷元(Ocotillol)的制備將10升甘油加入小型具油浴加熱和攪拌的反應罐中，再分別加入1kg的氫氧化鈉和1kg西洋參莖葉皂苷，攪拌，常壓下持續加熱升溫，升溫至210℃下保溫反應40分鐘，反應完畢，將反應液傾入60倍冷水中并攪拌，析出沉淀。靜置，過濾，水洗至中性，即得擬人參皂苷元粗品。再將此粗品經硅膠柱層析，以正己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫，回收溶劑，以甲醇-乙酸乙酯混合溶劑重結晶得到40g擬人參皂苷元，收率4％。
無色方晶，1H-NMR(400MHz C5D5N)δ0.89(3H，s，CH3-30)，0.94(3H，s，CH3-19)，1.08(3H，s，CH3-18)，1.19(1H，d，J＝10.4Hz，H-5)，1.23(3H，s，CH3-21)，1.24(3H，s，CH3-26)，1.40(3H，s，CH3-29)，1.44(3H，s，CH3-27)，1.95(3H，s，CH3-28)，3.49(1H，dd，J＝11.3Hz，5.2Hz，H-3)，3.69(1H，dt，J＝10.4Hz，4.6Hz，H-12)，3.92(1H，dd，J＝8.4Hz，6.7Hz，H-24)，4.38(1H，m，H-6)制備例3注射用擬人參皂苷元(Ocotillol)凍干粉針的制備稱取由制備例2得到擬人參皂苷元1.00g，加入20ml乙醇使苷元完全融解，再加入40ml甘油混合均勻。將0.20g鹽酸丁卡因、0.02g的EDTA-2Na加入到40ml注射用水中，使輔料完全溶解。并將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻。以0.01mol/L的氫氧化鈉和稀鹽酸調節pH值為5.5±1.0。加入0.1％的針用活性炭85度保溫15分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過濾，0.22μm的微孔濾膜過濾。濾液分裝于7ml西林瓶中，每支裝量2ml。分裝好的注射劑半壓塞，于凍干機凍干。凍干后壓塞，壓鋁蓋制成凍干粉針劑，20mg/支。
制備例4擬人參皂苷元(Ocotillol)片劑的制備稱取由制備例1得到擬人參皂苷元10.00g，將其與60g淀粉混勻，加入15％淀粉漿適量，混合制成軟材，14目篩制粒，70℃干燥，14目篩整粒后，加入0.5g硬脂酸鎂和1g羧甲基淀粉鈉，混勻，壓制200片，100mg/片制備例5擬人參皂苷元(Ocotillol)軟膠囊劑的制備稱取明膠100g，甘油30g和水130g。取明膠加入適量的水使其吸水膨脹。另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70~80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，熔融。保溫1~2小時，靜置，使泡沫上浮，刮去上浮的泡沫，以洗凈白布過濾，加入0.0075mgr Fe2O3粉末，混勻，保溫待用。配成的膠液粘度一般為2.8~3.2度。
稱取擬人參皂苷元5g溶于90g聚乙二醇中，加熱使其充分溶解，放至室溫。
壓制軟膠囊將已制好的明膠甘油和擬人參皂苷元聚乙二醇藥液裝入自動旋轉軋囊機中，溫度控制在40~50℃，壓制出每囊含50mg擬人參皂苷元的軟膠囊。
實驗例1對納洛酮催促所引起的嗎啡依賴大鼠戒斷反應的影響用嗎啡對大鼠進行預處理(d1＝10、d2＝20、d3＝30、d4＝40、d5＝50mg/kg，每日2次，sc)能誘發大鼠發生身體依賴。于每次給嗎啡前30min ig F11苷元，完成末次給嗎啡6h，ip納洛酮5mg/kg，觀察給納洛酮后15min內戒斷綜合征發生情況。在納洛酮催促下出現典型的戒斷綜合征，表現為跳躍、濕狗樣搖體、扭體、搖頭、打哈欠、齒顫、咀嚼、流涎、流淚、毛發直立、眼下垂和腹瀉等一系列戒斷癥狀。稱量用納洛酮后1h后體重的改變。根據Rasmussen K.(J Neurosci，1990，102308-2317)的評分標準判定戒斷癥狀的輕重。(實驗結果見表1)表1 F11苷元對用納洛酮后15min內嗎啡依賴大鼠戒斷綜合征分數的抑制作用(n＝10)藥物 劑量(mg/kg) 戒斷分數 體重減輕(g)鹽水 -3.4±4.1 1.1±1.3嗎啡420 27.2±9.4 18.5±4.4F11苷元+嗎啡4+420 19.3±5.9*14.1±5.8*8+420 16.9±6.1° 11.3±4.0#*p＜0.05，#p＜0.01，與嗎啡比較。
實驗例2F11苷元對嗎啡誘導的條件性位置偏愛的影響位置偏愛箱(穿梭箱)由兩個大小完全相等的盒子組成，中間由可以抽拉的隔板隔開，其中一個盒子為白色，底板鋪一有紋理的壁紙；另一盒子為黑色，底板光滑。對照組皮下注射生理鹽水后，立即放入黑盒子，給藥組口服F11苷元60min后，皮下注射嗎啡，放入白盒子。實驗前3天，讓小鼠在兩盒之間自由活動，觀察小鼠的天然嗜好。此后5天用隔板封閉兩盒間通道，每只小鼠每天上、下午各注射一次，兩次間隔時間為6h，其中一次為嗎啡(給藥組F11苷元+嗎啡)，另一次為生理鹽水。給嗎啡后，將小鼠放入白盒，給生理鹽水后，將小鼠放入黑盒，每次在盒中停留60min。第9天打開洞口，讓小鼠自由跑動，記錄15min內小鼠在白盒子中的時間。(實驗結果見表2)。
表2 F11苷元對嗎啡誘導的條件性位置偏愛的影響組別 劑量(mg/g)動物數時間(min)空白 -- 12 6.01±2.2嗎啡 815 9.26±2.9#苷元+嗎啡4+8 15 7.81±3.4*8+8 13 7.20±3.6**p＜0.05與嗎啡組比較，#p＜0.01，與空白組比較。
條件性位置偏愛實驗是評價藥物精神依賴性的方法，偏愛效應能夠較好地反映藥物的獎賞效應。本實驗表明，嗎啡可引起明顯的位置偏愛行為，而F11苷元能夠部分拮抗這種作用。
實驗例3對嗎啡致小鼠自主活動增加的影響采用小動物自主活動測定儀測定，給藥7天，每天皮下注射嗎啡一次，注射前60min口服F11苷元。注射嗎啡后將小鼠放入測定儀中，適應5min，在第1、7天測定小鼠2min的自主活動數。(實驗結果見表3)表3 F11苷元對嗎啡致小鼠自主活動增加的影響組別 劑量 第1天 第7天(mg/kg)空白 -- 57.1±49.2 54.5±50.8嗎啡 10 71.3±60.8 70.9±69.2苷元+嗎啡4+1027.3±20.9*33.4±32.78+1024.6±25.2*30.8±28.1**p＜0.05與嗎啡組比較F11苷元能夠拮抗嗎啡誘發的自主活動增加。
實驗例4對東莨菪堿所致記憶障礙的影響跳臺實驗中，東莨菪堿2mg/kg致小鼠錯誤次數顯著增加，F11苷元4mg/kg使錯誤次數顯著減少。(實驗結果見表4)。
表4 對東莨菪堿(Scop)所致記憶障礙的影響(跳臺法)組別 劑量(mg/kg)動物數錯誤次數空白 -- 15 0.41±0.54Scop 227 2.51±0.69#苷元+Scope222 1.52±0.77*424 1.66±0.54**p＜0.05與Scop組比較，#p＜0.01與空白組比較。
避暗實驗中，F11苷元能夠顯著延長錯誤潛伏期，降低錯誤百分率，提示F11苷元能夠改善東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙。(實驗結果見表5)表5 對東莨菪堿(Scop)所致記憶障礙的影響(避暗法)組別 劑量 潛伏期 錯誤次數 錯誤百分率(mg/kg)(sec)空白--340.8±51.1 0.28±0.55 25.0Scop2 70.1±72.7#1.25±0.72#83.3苷元+Scope 2 255.3±90.9*0.62±0.77*58.34 240.8±81.8*0.56±0.50*33.3*p＜0.05與Scop組比較，#p＜0.01，與空白組比較，n＝12。
實驗例5對氯霉素致小鼠記憶鞏固障礙的影響跳臺實驗結果表明氯霉素(Chlo)200mg/kg顯著增加小鼠的錯誤次數，縮短潛伏期；F11苷元可以改善這些癥狀，顯示其減輕氯霉素誘導的小鼠記憶鞏固障礙的作用。(實驗結果見表6)表6 對氯霉素(Chlo)致小鼠記憶鞏固障礙的影響(跳臺法)組別劑量 潛伏期錯誤次數(mg/kg) (sec)空白 -- 159.8±35.5 0.12±0.44Chlo 20066.1±79.1#1.45±0.92#苷元+Chlo2 125.3±70.3*0.42±0.45*4 99.2±81.8 0.76±0.59*p＜0.05與Chlo組比較，#p＜0.01，與空白組比較，n＝12～14。
實驗例6對乙醇致小鼠記憶再現障礙的影響暗室實驗表明，F11苷元能夠明顯減少小鼠進入暗室的錯誤次數，并延長錯誤潛伏期，表明F11苷元能夠明顯改善乙醇致小鼠記憶再現障礙，對正常動物學習記憶也有改善作用，見表7。
表7 對乙醇致小鼠記憶再現障礙的影響組別 劑量動物數 潛伏期 錯誤次數(mg/kg) (sec)空白 --11287.8±61.8 0.26±0.51乙醇 10ml 1266.1±73.4#3.25±1.75#苷元+乙醇 2 11169.3±120.8*1.32±1.02*4 11150.2±101.7*1.56±1.40**p＜0.05與乙醇組比較，#p＜0.01，與空白組比較
權利要求
1.一種以擬人參皂苷元(Ocotillol)為有效成分，用于促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷，有效戒斷嗎啡樣作用的藥物。
2.根據權利要求1所述的藥物，其可以以片劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、膠囊、糖漿、注射劑、口嚼劑、貼劑、凍干粉針或注射用乳劑形式存在。
3.根據權利要求1或2所述的藥物，其中結構式I所示的擬人參皂苷元(Ocotillol)的制備方法，可包含如下步驟 (I)(II)R＝糖基將堿金屬氫氧化物溶于低級醇類化合物中，再將富含結構通式如(II)所示的人參皂苷溶于此堿性溶液，攪拌下繼續加熱升溫進行堿降解，反應完畢，將反應液傾入冷水中，攪拌，析出固體，水洗至中性，過濾，濾后固體即為擬人參皂苷元粗品(或將反應液傾入冷水中，用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑即得擬人參皂苷元粗品)，擬人參皂苷元粗品經硅膠柱層析(或進一步純結晶)，得擬人參皂苷元(Ocotillol)。
4.根據權利要求3所述的藥物，堿金屬氫氧化物可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀或其組合，堿濃度為0.2％～60％；低級醇可以是1-4個碳原子的一元醇、多元醇或其組合。
5.根據權利要求4所述的藥物，堿濃度優選為5％～20％；一元醇優選為乙醇、正丁醇、甲醇或其組合；多元醇優選為丙三醇、丙二醇、乙二醇、1.3-丁二醇、甘二醇或其組合。
6.根據權利要求3所述的藥物，結構通式(II)所示的人參皂苷可以是西洋參、西洋參莖葉皂苷、越南人參、越南人參莖葉皂苷或珠子參等人參屬植物的皂苷。
7.根據權利要求6所述的藥物，結構通式(II)所示的人參皂苷優選為單體擬人參皂苷F11、西洋參莖葉皂苷或其組合。
8.根據權利要求3所述的藥物，堿降解反應可以在高壓釜或常壓下進行。
9.根據權利要求8所述的藥物，堿降解反應優選在常壓下進行，反應溫度在100～320℃之間。
10.根據權利要求8或9所述的藥物，當低級醇為二元醇時，反應溫度為150～230℃。
11.擬人參皂苷元在促進學習和記憶，改善腦功能障礙所致的學習記憶損傷的促智藥物中的應用。
12.擬人參皂苷元在有效戒斷嗎啡樣作用的戒毒藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種以擬人參皂苷元(Ocotillol)為有效成分的戒毒、促智藥物，及其制備方法和用途。
文檔編號A61P25/00GK1640406SQ200410023510
公開日2005年7月20日 申請日期2004年1月8日 優先權日2004年1月8日
發明者王澤君, 馬雙剛, 彭維兵, 姜永濤, 范秀玉, 劉珂 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司