專利名稱：納米sod與黃芪或其提取物的組合物及其制備方法
所屬領域本發明涉及超氧化物歧化酶SOD與中草藥黃芪，特別是納米SOD與黃芪或其提取物的組合物及其制備方法。將SOD與黃芪或其提取物的組合物納米化，是利用兩者相輔相成的功用，消除體內多余的超氧化物陰離子自由基和羥自由基，穩定細胞膜及抗酶活性，用于防治感冒、治療小兒支氣管哮喘、治療慢性乙型肝炎、治療慢性腎炎、治療病毒性心肌炎、治療消化性潰瘍、用于視網膜脫離術后視力恢復、治療鼻炎、治療流行性出血熱、治療晚期血吸蟲病、治療軟組織性腰腿痛，還可用于神經系統，能滿足人類健康長壽之需要。
背景技術：
中草藥黃芪為豆科植物蒙古黃芪和膜莢黃芪的根。多年生草本，高50-150cm。根直而長，圓柱形，稍帶木質，長20-50cm，根頭部徑1.5-3cm，表面淡棕黃色至深棕色。莖直立，上部有分枝，被長柔毛；藥理1.對免疫系統的影響(1)對非特異性免疫功能的影響。(2)對體液免疫的作用。(3)對細胞免疫的作用。(4)對自然殺傷(NK)細胞的影響。(5)對誘生干擾素的影響。(6)對紅細胞免疫功能和影響；2.對機體代謝的影響(1)延緩衰老作用。(2)抗氧化作用。(3)對核酸代謝的影響。(4)對環核苷酸的影響。(5)對蛋白質及其他代謝的影響；3.對造血功能的影響；4.對心血管系統的作用；5.抗病毒作用；6.抗癌作用；7.其他作用；藥性味甘，性溫。歸肺、脾經；功能與主治益氣升陽，固表止汗，利水消腫，托毒生肌。主治內傷勞倦，脾虛咳嗽，脫肛，子宮下垂，吐血，便血崩漏，自汗，水腫，血痹、癰疽難潰或久潰不斂，及一切氣虛血虧之證；用于脾肺氣虛，中氣下陷之證、用于氣虛而致自汗、用于水腫、用于氣血不足之瘡癰、肢體麻木、疼痛、半身不遂。此外，黃芪還可與茯神、栝樓、甘草、麥門冬、干地黃配用，以益氣生津止渴，治療消渴，與火麻仁、白密等潤腸通便藥同用，治療血氣不足，腸燥便秘，與糯米、川芎同用，以益氣安胎，治療胎動不安；與茯苓同用以益氣健脾，利濕泄濁，治療白濁；現代臨床研究防治感冒、治療小兒支氣管哮喘、治療慢性乙型肝炎、治療慢性腎炎、治療病毒性心肌炎、治療消化性潰瘍、用于視網膜脫離術后視力恢復、治療鼻炎、治療流行性出血熱、治療晚期血吸蟲病、治療軟組織性腰腿痛。
作為一種功效成分，納米SOD的生理功效可概括為清除機體代謝過程中產生過量的超氧陰離子自由基，延緩由于自由基侵害而出現的衰老現象，如延緩皮膚衰老和脂褐素沉淀的出現；提高人體對由于自由基侵害而誘發疾病的抵抗力，包括腫瘤、炎癥、肺氣腫、白內障和自身免疫疾病等；提高人體對自由基外界誘發因子的抵抗力，如煙霧、輻射、有毒化學品和有毒醫藥品等，增強機體對外界環境的適應力；減輕腫瘤患者在進行化療、放療時的疼痛及嚴重的副作用，如骨髓損傷及白細胞減少等；消除機體疲勞，增強對超負荷大運動量的適應力。在生物體內，納米SOD可影響某些非酶的有機分配位體的結構，參與體內各種物質與能量的代謝，從而顯示出它所具有的生理功效為體內多種金屬酶的組成成分；保護穩定生物膜；促進機體的生長發育和組織再生；調節免疫功能；影響內分泌系統；改善味覺并促進食欲；促進維生素A的正常代謝和視覺功能；保護皮膚和骨骼的正常功能；促進智力發育。
影響SOD臨床應用的主要因素有生物半衰期；異體蛋白免疫原性；細胞膜的通透性和穩定性。這表明修飾SOD進入體循環后，消除速率變慢，但分布速率仍較快；與游離SOD相比，修飾SOD在肝和腎中含量高，在腦中含量也較高；游離SOD在組織中的分布順序趨勢是胃、腸、肌肉、肺、腦、肝、腦、腎、脾、心和睪丸，結果證明修飾酶的代謝途徑發生了變化，這與酶對細胞膜的通透性有關，修飾酶在腦里組織中的含量較高，說明修飾酶能夠通過血腦屏障，這對于治療腦外傷是有意義的。目前國內外主要集中在抗輻射，抗腫瘤，抗衰老及自身免疫性疾病上，治療的病種有缺血再灌流綜合征、氧中毒、輻射損傷、皮膚病、骨關節炎、類風濕關節炎、燒傷、老年性白內障、家族性肌肉萎縮病等，由于目前使用的SOD均為異源蛋白，且分子量都大于30000，因此人體對其耐受性是應用中極為關注的問題，說明SOD無副作用，人對其有較強的耐受力；重組SOD是毒性和副作用很小的生物大分子，但作為抗原，多次注入體內仍可誘發免疫反應，故最理想的方法是將SOD基因克隆和表達人的SOD；或者納米化使大分子肽變為小肽，利于人體吸收，這都是我們已解決的課題。
傳統的中草藥醫用少為單味，多為復方，講究君臣佐使，往往以一、二味君藥為主治療疾病，但由于中草藥成份復雜，除有效成份外，還有大量雜質，甚至對人體有害的物質，產生副作用，以致毒害，需要其他臣藥佐使來消除影響，幫助吸收，因而方劑容積過大，不利使用，還存在消此復彼的毒副作用，以及相互抵消，降低藥效，難以發揮主藥的真正作用，特別是吸收慢、藥效低，亟待改進。
發明內容
本發明針對現有技術不足，利用現代生化技術及中醫藥學理論，提供一種納米SOD與黃芪或其提取物的組合物及其制備方法，即納米SOD與黃芪或其提取物納米化的組合物聯合應用，提高藥物濃度及有效成份，抗氧化活性提高10倍以上，皮膚、粘膜吸收率達98％以上，半衰期延長兩個數量級以上；能進入細胞內直接清除自由基，具有更強的抗脂質過氧化的作用，綜合藥效發揮更徹底，遠非傳統復方中藥可比，用于提高抗缺氧能力，發揮抗疲勞功效，提高運動耐力，適合運動員、急癥病人、外傷創傷人員使用，吸收速度極快，藥效比SOD提高3-5倍，比黃芪提高5-10倍，是對人類醫藥事業的一大貢獻。
納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，其配比為納米SOD 1-10萬活性單位納米黃芪或其提取物1-50克，粒徑≤10-80納米。
納米SOD與黃芪或其提取物的組合物制備方法，在于SOD與黃芪或其提取物的組合物組合后納米化；或者納米SOD與納米黃芪或其提取物的組合。所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物為上述兩種組合物。納米SOD黃芪，先單體納米化再組合；或者組合后再納米化，效果相當。
SOD可為植物或動物提取的SOD成份。
黃芪可為中草藥葛根或提取物蒙古黃芪的黃芪甙I、II、IV，大豆皂甙，酸性多糖及近二十多種微量元素，其中鈣、磷、鎂、鐵等含量較高；膜莢黃芪的黃芪甙I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII，含21種游離氨基酸，其中天冬酰胺，刀豆氨酸，游離氨基酸總量約為1.26％及近二十種微量元素，其中含量較高的有鈣、磷、鎂、鐵等。
納米是一個長度單位，1納米等于1米的十億分之一。納米技術是近年發展起來的高新技術。它通常是指在0.1-100納米空間尺寸內操縱原子和分子，對物質進行研究或對材料進行加工，從而制備具有特定功能的新產品。當一種物質被不斷切割至一定程度，其粒子小至納米量級即為納米材料。納米材料往往會產生一些新的理化特性。超微粉碎是將物料粉碎至10um以下粒度的單元操作，常用氣流式粉碎。在功能性食品制造上，由于功效成分的使用量通常很小，需超微粉碎至足夠細小，才能保證它的均勻分布。將納米技術應用到醫藥技術方面，克服了某些傳統藥物和工藝上無法解決的難題，為促進藥物在體內輸送等提供了嶄新的技術。
納米化方法、微乳化方法、脂質體化方法及超音速射流方法，是當代物理化學技術在生物學、醫藥學領域中可以采納的高新技術，使納米SOD黃芪有一定的脂溶性，因此能保護生物膜脂質免受自由基損傷，具有更強的抗脂質過氧化作用；由于粒度小，克服了蛋白質的抗原性問題，解決了生物膜透過性和提高了避免蛋白酶破壞的穩定性。
納米SOD黃芪是一種球形乳狀液，根據內相與外相的性質，乳狀液分為兩種類型一類是油分散在水中，稱水包油型乳濁液，用O/W表示；另一類是水分散油中，簡稱油包水型乳濁液，用W/O表示。那么乳化劑也相應分為兩種類型，即油包水型乳化劑和水包油型乳化劑。乳化劑是否容易溶解于水，也就是親水性的大小，對于合理應用乳化劑是一個重要的指標。因為乳化劑同時含有親水基和親油基，這兩個基間又互相影響，為了比較乳化劑的親水性就用HLB值來表示，這是一個很重要的經驗方法。HLB值就是親水親油平衡值，為了得到穩定的乳濁液必須選擇適當的乳化劑。乳化劑的HLB值的含義是HLB值的乳化劑親水性百分比HLB值大約在0-20之間。如HLB值為0，則表示親水性為0，HLB值為20表示親水性為100％。HLB越大，表示親水性作用越大；其值越小表示親油性越大。納米SOD黃芪也可以是干粉。納米SOD黃芪粒徑可控制在≤10-80納米范圍內，必要時可以進一步細化或粗化。
納米SOD黃芪是自由基清道夫，清除病人的多余自由基(病人往往自由基比正常人多)，在藥物被人體吸收前進入藥效時，用納米SOD將體內自由基清除，使藥物被人體全面吸收，發揮最大的藥效，以往由于自由基對藥物的藥效直接影響，使藥效大打折扣，這就是藥物不能發揮最大作用的原因，只好增大藥量，一方面對付自由基的侵害；另一方面對疾病發揮效力，如今沒有了自由基的副作用，藥力就大大增強了。長期服用納米SOD黃芪既可清除自由基，使自由基消失或者減少，治病時用藥其量已大大減少了，藥效比復方藥更好，這是藥物發揮效力的最好途徑，是一種全新理念，必將為人類健康事業做出重大貢獻，這正是本發明的一大特點，必將引起藥物學、生物學、藥理學、藥效學的一次革命，引發治療疾病的新思維。
納米SOD與黃芪合并使用的治療方法，利用兩者相輔相成的功用，可以改變兩者分別使用療效不夠最佳的不足。
近年來在國際上傳統中藥的使用愈來愈普遍，中藥與天然物包括抗氧化劑的銷售量每年均似倍數增長；我們提出以中藥天然物代替或輔助西藥治療，取得了良好的效果，在國內、泰國、日本、美國以及歐洲越來越得到普遍重視。
通過實驗證實1、抗氧化活性實驗檢測方法化學發光、蛋白電泳、生化測定、紫外掃描。膠囊內納米SOD黃芪容物重量0.35±0.05g/粒；抗氧化活性，每粒膠囊抗氧化活力相當于32000活力單位；樣品在60℃加熱2小時后其抗氧化活力相當于6500活力單位；蛋白含量測定樣品在日立全自動生化分析儀上測定總蛋白會含量9.5mg/粒，白蛋白含量＜2mg/粒；蛋白電泳分析取樣品(濃度為50mg/ml)和牛血清白蛋白(25mg/ml)，標準條件下電泳，結果顯示樣品無蛋白帶，標準質控血清及牛血清白蛋白的顯色均十分清晰；樣品中金屬離子測定表明每粒膠囊含鎂0.25mg，未測到鈣、磷、鐵等離子；紫外掃描表明樣品無論加熱與否其最大吸光度均恒定在260nm處，小結該樣品中含有抗氧化活性物質，比黃芪提高10倍。
2、抗輻射實驗對照組NS；試驗組玉米納米SOD黃芪，外周血白細胞計數實驗，數據處理及結果判定，白細胞數為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算P值，P值＜0.05，結論試驗組與對照組之間差異有顯著性，P＜0.05照射前的外周血白細胞計數，用于各組白細胞數目的均衡性檢驗，劑量組與輻射模型對照組比較，差異無顯著性，繼續進行照射及后續實驗。照射后3天輻射模型對照組的白細胞數分別與照射前進行自身比較，差異有顯著性，輻射損傷模型成立，照射后第5天、第14天劑量組與輻射模型對照組比較，白細胞總數增多，差異有顯著性，該實驗陽性。
輻射前后白細胞數比較C(0)C(5)C(14) T(0) Y(5) T(14)M 7.550.6883 2.2000 7.28 1.38 2.84納米SOD黃芪 1.581.310.18 0.48 1.37 0.53P0.80 0.00440.04793、抗疲勞實驗藥物配制(0.5ml/只/次)，試驗組B，12mg/ml P+L(2/3-100ml)；試驗組C，12mg/ml P+L(2/3-100ml)；玉米納米SOD黃芪(40000U/ml)；試驗組D16mg/ml甲魚膠；試驗組E80mg/ml甲魚膠，緩解體力疲勞功能。血清中的尿素室溫下可穩定24h，在4-6℃可穩定7天以上。血乳酸與對照組相比，試驗組B、C、D、E與對照組A比較，P值分別為0.04、0.84、0.17、0.19。差異有顯著性，該實驗陽性。
血清中的尿素比較AB CDEUN9.2±0.9 8.5±1.37.7±1.0 9.4±0.9 8.5±1.2P 0.2467 0.0083☆0.6052 0.2135小鼠負重游泳時間比較
AB CD EMN88 114 116 95 103納米SOD黃芪 20.74825 31.4871428.2101 26.96368 13.62351p 0.0557990.028482 0.516779 0.0846344、納米SOD黃芪吸收實驗(1)、胃酸耐受性結果表明，納米SOD黃芪在小鼠模擬胃酸中37℃保持150min，活力仍殘存91％。
(2)、模擬胃腸道蛋白酶和胰酶對納米SOD黃芪的酶解結果表明，在37℃下保持300min其活力殘存分別為92％和94％。
(3)、離體小腸結扎后納米SOD黃芪的透出量隨時間的變化而變化，10h后小腸外納米SOD黃芪的總活性接近試驗時加入小腸的總活性，這表明納米SOD黃芪可透過小腸從腸膜一側到達另一側。
(4)、小鼠經口攝入納米SOD黃芪后2h，血中納米SOD黃芪活性達到最高值，與對照組相比機體內納米SOD活性提高40％％～50％，因此口服納米SOD黃芪能明顯提高血中的納米SOD黃芪水平。
(5)、用異硫氰酸熒光素(PITC)標記納米SOD黃芪的試驗表明，小鼠口服1h后血中標記物明顯增加，2h后達到最高峰。
試驗結果證實，經口攝取的納米SOD黃芪能夠進入體內。用納米SOD黃芪給小鼠灌胃，2h后在血中達最高峰，大部分納米SOD黃芪分布在血漿中，小部分進入血細胞中，納米SOD黃芪在組織中的分布順序是胃、腸、肌肉、肺、腦、肝、腦、腎、脾、心和睪丸。
5、納米SOD黃芪抗疲勞實驗小鼠負重游泳試驗組別 劑量 動物數游泳時間 P值(g/kg)(只) X±S陰性對照組 0 1088±20.42SOD黃芪組8010103±140.05納米SOD黃芪組8010148±320.001實驗結果表明，受試物中SOD黃芪和納米SOD黃芪組小鼠游泳時間與陰性對照組比較，SOD黃芪明顯延長(P＜0.05)，納米SOD黃芪組的平均游泳時間則顯著延長(P＜0.001)。小鼠負重游泳試驗結果為陽性。兩種SOD黃芪均具有抗疲勞功能，而納米SOD黃芪的抗疲勞作用更為明顯。
根據一氧化氮、超氧化物自由基和超氧化歧化酶的互相關系，納米SOD黃芪可能作為口服制劑的有效成分之一。它可用于防治消化道的慢性炎癥，并可預防或輔助治療消化道內癌癥。高新工程技術酶工程是利用酶的催化作用進行物質轉化的技術，是將生物體內具有特定催化功能的酶分離，結合化工技術，在液體介質中固定在特定的固相載體上，作為催休生化反應的反應器，以及對酶進行化學修飾，或采用多肽鏈結構上的改造，使酶化學穩定性、催化性能甚至抗原性能發生改變，以達到特定目的的工程技術。酶工程在功能性食品的應用廣泛，諸如功能性低聚糖、肽、氨基酸、維生素等功效成成分的制造。納米SOD是生物體內防御氧化損傷的一種重要的酶，能催化超氧自由基發生歧化反應，維持細胞內超大型氧自由基處于無害的低水平狀態。
我們應用自由基生物學、自由基醫學、中醫中藥學與營養學，在黃芪或其提取物中加入含有抗氧化劑納米SOD及抗氧化維生素為主的復合劑，成為納米SOD黃芪或其提取物的組合物，經過一系列實驗，證明它是一種高效的藥品或保健品。納米SOD黃芪在人體小腸內的通透性極大提高；釋放速率提高；功效和有效利用率大大提高，可有效突破機體生物屏障對藥物食品作用的限制，使藥物食品更好地進入血液循環，人體有許多保護機體不受損害的天然生物屏障，如血腦屏障，血眼屏障，細胞生物膜屏障等，一般藥物很難通過這些機體生物屏障，納米SOD黃芪微粒則可穿過這些屏障，對病灶部位起到治療作用。
納米SOD黃芪，利用現代生化技術及現代中醫藥學理論，即純化的SOD與黃芪提取物的納米化組合應用，而非SOD與原始中草藥黃芪的直接應用，提高藥物濃度及有效成份，抗氧化活性提高10倍以上，皮膚、粘膜吸收率達98％以上，半衰期延長兩個數量級以上；能進入細胞內直接發揮清除自由基，具有更強的抗脂質過氧化的作用，綜合藥效發揮更徹底，遠非傳統中藥可比，用于改善呼吸功能，提高抗缺氧能力，發揮抗疲勞功效，提高運動耐力，該技術克服了目前SOD等生物蛋白酶以及中草藥的應用限制和不足，為其廣泛應用打開了新的大門，是對人類醫藥事業的一大創舉，宜于普及推廣。
本發明附圖1為納米SOD與黃芪結合示意圖，附圖2為抗疲勞實驗結果示意圖。
具體實施例方式實施例1納米SOD與黃芪或其提取物組合物，配比為納米SOD1萬活性單位納米黃芪1克，粒徑50納米。
實施例2我們采用一種玉米超氧化物歧化酶SOD復合酶大規模制造方法，制取的SOD納米化，納米SOD母液可達到6000-10000活性單位/克；納米SOD干粉可達到40000-60000活性單位/克。
實施例3用于治療慢性乙型肝炎藥納米SOD母液6克，60000活性單位、納米黃芪6克。
實施例4用于治療病毒性心肌炎藥納米SOD干粉3克，48000活性單位、納米黃芪甙1.5克。
實施例5在于以純化SOD與黃芪乳液按重量比2∶1混合均質，置于納米對撞機中，壓力200Mpa，納米通道10nm納米。
實施例6在于以納米SOD與納米黃芪甙按配比混合后的液體與甘油或其它油性液體及表面活性劑混合，配比為1-10∶1-10∶1-5；形成乳狀液后，向其中滴加表面活性劑(如正丁醇)，滴加到一定數量時體系變為澄清透明的油包水(W/O)微乳液。
實施例7在于納米SOD與黃芪或其提取物組合物作為中間體，用于食品、保健品、藥品、化妝品、日用化工制品、煙酒制品的載體。
實施例8在于納米SOD與黃芪或其提取物組合物，作為軟膠囊、膠囊、乳劑、片劑、注射液或其它劑型的載體。
實施例9在于納米SOD與黃芪或其提取物組合物，可根據不同目的加入各種藥物，作為多種配方的載體。
權利要求
1.納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，其配比為納米SOD1-10萬活性單位∶納米黃芪或其提取物1-50克，粒徑≤10-80納米。
2.根據權利要求1所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，配比為納米SOD1萬活性單位∶納米黃芪1克，粒徑50納米。
3.根據權利要求1所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，提取物為蒙古黃芪的黃芪甙I、II、IV，大豆皂甙，酸性多糖及近二十多種微量元素，其中鈣、磷、鎂、鐵等含量較高；膜莢黃芪的黃芪甙I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII，含21種游離氨基酸，其中天冬酰胺，刀豆氨酸，游離氨基酸總量約為1.26％及近二十種微量元素，其中含量較高的有鈣、磷、鎂、鐵等。
4.根據權利要求1所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，用于治療慢性乙型肝炎藥藥納米SOD母液6克，60000活性單位、納米黃芪6克。
5.根據權利要求1所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物，在于用于治療病毒性心肌炎藥納米SOD干粉3克，48000活性單位、納米黃芪甙1.5克。
6.納米SOD與黃芪或其提取物的組合物制備方法，在于SOD與黃芪或其提取物的組合物組合后納米化；或者納米SOD與納米黃芪或其提取物的組合。
7.根據權利要求6所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物的制備方法，在于納米SOD母液可達到6000-10000活性單位/克；納米SOD干粉可達到40000-60000活性單位/克。
8.根據權利要求6所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物的制備方法，在于以純化SOD與黃芪乳液按重量比2∶1混合均質，置于納米對撞機中，壓力200Mpa，納米通道10nm納米。
9.根據權利要求6所述納米SOD與黃芪或其提取物的組合物的制各方法，在于以納米SOD與納米黃芪甙按配比混合后的液體與甘油或其它油性液體及表面活性劑混合，配比為1-10∶1-10∶1-5；形成乳狀液后，向其中滴加表面活性劑(如正丁醇)，滴加到一定數量時體系變為澄清透明的油包水(W/O)微乳液。
10.納米SOD與黃芪或其提取物的組合物的應用，在于納米SOD與黃芪或其提取物組合物作為中間體，用于食品、保健品、藥品、化妝品、日用化工制品、煙酒制品的載體；在于作為軟膠囊、膠囊、乳劑、片劑、注射液或其它劑型的載體；在于根據不同目的加入各種藥物，作為多種配方的載體。
全文摘要
納米SOD與黃芪或其提取物的組合物及其制備方法，納米SOD 1－10萬活性單位納米黃芪或其提取物1－50克，粒徑≤10－80納米。即納米SOD與黃芪或其提取物納米化的組合物聯合應用，提高藥物濃度及有效成分，抗氧化活性提高10倍以上，皮膚、粘膜吸收率達98％以上，半衰期延長兩個數量級以上；能進入細胞內直接清除自由基，具有更強的抗脂質過氧化的作用，綜合藥效發揮更徹底，遠非傳統復方中藥可比，用于防治感冒、治療小兒支氣管哮喘、治療慢性乙型肝炎、治療慢性腎炎、治療病毒性心肌炎、治療消化性潰瘍，還可用于神經系統，適合運動員、急癥病人、外傷創傷人員使用，吸收速度極快，藥效比SOD提高3－5倍，比黃芪提高5－10倍，是對人類醫藥事業的一大貢獻。
文檔編號A61K38/44GK1596982SQ20041002159
公開日2005年3月23日 申請日期2004年8月2日 優先權日2004年8月2日
發明者王成余, 王剛, 王強 申請人:王成余