專利名稱：注射用丹紅及其制備方法和質量控制方法
技術領域：
本發明屬于藥品領域，涉及一種以植物生藥丹參和紅花為原料的注射用丹紅及其制備方法、含量測定方法。
背景技術：
目前已有的丹紅注射液是由丹參和紅花為原料，進行有效成分提取后制備的水針劑，雖然臨床上是確有療效的中藥急癥治療藥物，用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、缺血性腦病、腦血栓及肺心病等心血管性疾病，還可用于治療瘀血閉塞所致的胸痹及中風等。但現有的丹紅注射液存在提取工藝不完善，有效成分提取不全，產品質量控制難度大，制劑質量標準低且不完善，特別是丹紅注射液的穩定性差，運輸、儲存也均不方便等。例如現有丹紅注射液的制備工藝(WS-11220(ZD-1220)-2002)和中國專利CN 1418678A(一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法)所涉及的制備方法中，無監測提取終點的方法，紅花的藥用組分提取不全；紅花的含量測定標準不夠全面；注射液水溶性黃酮苷類成分分解生成的苷元不溶于水；加入注射用氯化鈉調節等滲，而據文獻(曹毅敏等，紅花注射液與五種注射液配伍穩定性考察，廣東藥學，2002，12(4)31-32)報道紅花注射液與氯化鈉注射液配伍，粒徑大于2μm和5μm的微粒均劇增，微粒的負面作用不容忽視；現有的丹紅注射液采用混合提取工藝，成分過于復雜，中間體控制難度大；丹紅注射液穩定性也較差，長期儲存后，顏色會變深，并產生沉淀。文獻(申慶亮等，正交設計法研究丹參紅花注射液最佳精制工藝，前衛藥學雜志，2001，15(1))所述的丹參紅花注射液最佳精制工藝存在明顯的不足，一是僅以丹參的成分之一原兒茶醛的量作為唯一的判斷指標，而不考慮其它主要成分，特別是紅花所含的藥用組份如腺苷和紅花黃色素等；二是采用的提取工藝為丹參紅花二者先混合，再水提醇沉，丹參和紅花也僅有水提組分，也無監測提取終點的方法，產品質量控制難度大；最后，丹參注射液的運輸、儲存很不方便。正是由于上述缺點，本發明對提取工藝進行了更深一步的研究和改進。
發明內容
本發明的目的在于提供一種注射用丹紅有效成分混合液及其質量控制方法，本發明另一目的在于提供將混合液制成凍干粉針的方法。
本發明目的是通過如下技術方案實現的1、丹參先采用20～50倍乙醇回流提取3～4次，每次2～3小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用10～20倍的水煎煮2～3次，每次40～80分鐘，合并煎液，濾過；濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏；取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水沉淀處理，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花先采用20～50倍稀乙醇浸漬提取2～3次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用20～50倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉；第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，濾過，即得紅花藥用組分提取液E。
3、將上述所得提取液B與E混勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中按每毫升加入賦形劑0.05～0.5克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調節PH值至4～9，即得注射用丹紅有效成分混合液；每毫升注射用丹紅含相當于原生藥量丹參0.75～3.0g、紅花0.25～1.0g；將上述注射用丹紅的有效成分混合液按每瓶2ml，5ml，10ml或20ml的規格分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-25℃～-50℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持1～6小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2～0.5Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持10～24小時，最后升溫至40℃，并保持1～5小時，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在1～5％，迅速封口即可。
冷凍干燥過程中可選擇的最佳物理條件是首先將擱板降溫至-30℃，維持3小時，然后使凍干箱內的真空度為0.2Pa，將擱板升溫并嚴格控制在-2℃，保持18小時，將擱板升溫至40℃放入無菌氣體后，控制制劑的含水量為2％。
含量測定原兒茶醛與丹參素的含量測定方法1、色譜條件與系統試用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水-甲醇-冰酷酸(94∶6∶0.6)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按丹參素計算，應不低于5000。
2、對照品溶液的制備密稱取在100～110℃干燥至恒重的原兒茶醛、丹參素對照品各30mg，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1ml中含原兒茶醛、丹參素各0.06mg)。
3、測定法精密量取本發明注射用丹紅5ml，置25ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
本發明注射用丹紅每1ml含丹參提取物以原兒茶醛(C7H6O3)與丹參素(C9H10O5)的總量計，應不少于0.6mg。
總黃酮的含量測定方法1、對照品溶液的制備精密稱取在100-110℃干燥至恒重的蘆丁對照品30mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.3mg)。
2、標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置10ml量瓶中，各加40-60％甲醇至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置4-8分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置5-8分鐘，加氫氧化鈉試液4ml，再加50％甲醇至刻度，搖勻，以相應的溶液為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在500nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
3、測定法精密量取本發明注射用丹紅5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加40-60％甲醇至刻度，搖勻，作為空白對照，另精密量取1ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加50％甲醇至5ml”起，依法立即測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于蘆丁的重量，計算，即得。
本發明注射用丹紅每1ml含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，應不少于6.0mg。
黃色素的含量測定方法1、對照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的黃色素對照品100mg，置100ml量瓶中，加60-80％甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含黃色素1.0mg)。
2、標準曲線的制備精密量取對照品溶液1.5ml、3.0ml、4.5ml、6.0ml、7.5ml、9ml、10.5ml，分別置50ml量瓶中，各加70％甲醇至刻度，搖勻，以相應的溶液為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在403nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
3、測定法精密量取本發明注射用丹紅2ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇至刻度，搖勻，作為空白對照，另精密量取1ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇至刻度，依法立即測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于黃色素的重量，計算，即得。
本發明注射用丹紅含黃色素應不低于25％。
本發明注射用丹紅的制備方法提供一種提取工藝更先進、科學，有效成分提取更完全，提取工藝質量可控，制劑質量標準更高，并且穩定性好，藥物濃度高，便于運輸、儲存和使用的注射用丹紅及其制備方法。
實驗例1丹參與紅花有效成分提取工藝的篩選單獨提取工藝(1)乙醇回流提取結合水煎醇沉法提取丹參有效成分稱丹參0.75kg，采用20倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參分別用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至450ml沉淀處理，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B。(2)乙醇浸漬提取結合水溫浸提取法提取紅花有效成分稱取紅花0.25kg，先采用20倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用20倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加水至450ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E。(3)丹參與紅花有效成分提取混合液的制備將上述所得的丹參與紅花藥用組分提取液B和E混合均勻，然后加水至1000ml，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液。
混合提取工藝醇浸水提法提取丹參與紅花有效成分混合液按照丹紅注射液(WS3-B-3267-98)所述的制備方法制備丹參與紅花有效成分混合液。具體做法是稱取丹參0.75kg，用稀乙醇溫浸二次，每次60分鐘，濾過，濾液備用；藥渣與紅花混合后，加水溫浸二次，每次60分鐘，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15的清膏，然后加水至1000ml，冷藏，濾過，即得。
每處理重復3次，實驗結果(見表1)表明以原兒茶醛與丹參素、總黃酮及紅花黃色素計算，丹參與紅花單獨提取工藝，即先采用乙醇回流結合水煎醇沉提取丹參有效成分，再采用稀乙醇浸漬結合水溫浸提取紅花的有效成分，最后將二者混合，該單獨提取工藝所得原兒茶醛與丹參素、總黃酮及紅花黃色素的量均明顯高于混合提取工藝所得的量。
表1 提取工藝對原兒茶醛與丹參素、總黃酮及紅花黃色素量的影響單獨提取工藝 混合提取工藝原兒茶醛與丹參素(mg/ml) 0.99 0.61總黃酮(mg/ml) 7.15.4紅花黃色素(％)32.5％ 14.3％
實驗例2賦形劑的選擇向上述單獨提取工藝所得的藥用組分提取液中加入不同種類的賦形劑，經冷凍干燥制成凍干粉針劑的外觀結果，見表2。
表2 不同賦形劑的影響右旋糖酐 葡萄糖甘露醇水解明膠蔗糖乳糖外觀指標0.05 較好0.05一般0.05 最佳0.05一般0.05萎縮0.05較差0.05 0.05 較好0.05 0.05較差0.05 0.05一般每處理重復3次，表2表明選用甘露醇為最佳賦形劑。
實驗例3本發明所述注射用丹紅比原有的丹紅注射液的質量標準有提高，其“含量測定”項下對比如表3表3 “含量測定”方法與指標的比較方法指標丹紅注射液 HPLC法 原兒茶醛與丹參素不少于0.5mg/ml分光光度法 總黃酮不少于5.0mg/ml注射用丹紅 HPLC法 原兒茶醛與丹參素不少于0.6mg/ml分光光度法 總黃酮不少于6.0mg/ml分光光度法 紅花黃色素不低于25％本發明所述注射用丹紅“含量測定”方法如下(1)原兒茶醛與丹參素的含量測定方法色譜條件與系統試用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水—甲醇—冰酷酸(94∶6∶0.6)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按丹參素計算，應不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的原兒茶醛、丹參素對照品各30mg，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1ml中含原兒茶醛、丹參素各0.06mg)。
測定法精密量取本發明注射用丹紅5ml，置25ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
本發明注射用丹紅每1ml含丹參提取物以原兒茶醛(C7H6O3)與丹參素(C9H10O5)的總量計，應不少于0.6mg。
(2)總黃酮的含量測定方法對照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的蘆丁對照品30mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.3mg)。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置10ml量瓶中，各加50％甲醇至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4ml，再加50％甲醇至刻度，搖勻，以相應的溶液為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在500nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法精密量取本發明注射用丹紅5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，作為空白對照，另精密量取1ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加50％甲醇至5ml”起，依法立即測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于蘆丁的重量，計算，即得。
本發明注射用丹紅每1ml含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，應不少于6.0mg。
(3)黃色素的含量測定方法對照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的黃色素對照品100mg，置100ml量瓶中，加70％甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含黃色素1.0mg)。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液1.5ml、3.0ml、4.5ml、6.0ml、7.5ml、9ml、10.5ml，分別置50ml量瓶中，各加70％甲醇至刻度，搖勻，以相應的溶液為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在403nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法精密量取本發明注射用丹紅2ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇至刻度，搖勻，作為空白對照，另精密量取1ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇至刻度，依法立即測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于黃色素的重量，計算，即得。
本發明注射用丹紅含黃色素應不低于25％。
實驗例4注射用丹紅與丹紅注射液穩定性的比較將本發明所述注射用丹紅和相應的丹紅注射液同置于37℃恒溫恒濕箱中存放。定時抽樣檢查(丹紅注射液每天檢查澄明度)，共3個月，檢查項目如下外觀檢查丹紅注射液一般觀察顏色是否變深；注射用丹紅是否變形萎縮，顏色是否變深；澄明度檢查丹紅注射液燈檢是否有沉淀物析出；注射用丹紅取一瓶加5ml蒸餾水，觀察溶解時間，20秒內為速溶，視為合格。燈檢是否有沉淀物析出。
藥液pH值檢查丹紅注射液用25型pH計測定藥液pH值；注射用丹紅取一瓶加5ml蒸餾水溶解后，用25型pH計測定藥液pH值。
主要成分原兒茶醛與丹參素的含量測定按上述方法分別測定丹紅注射液與注射用丹紅的原兒茶醛與丹參素的含量。
表4結果顯示丹紅注射液很不穩定，加速試驗60天即發生沉淀，pH值及原兒茶醛與丹參素的含量均明顯下降。
將注射用丹紅置于37℃連續考察3個月，實驗結果見表5。注射用丹紅的外觀、色澤、水溶性、pH值及原兒茶醛與丹參素的含量均無明顯變化，質量穩定，另外每批含水量測定，均在2％以下。結果表示注射用丹紅穩定性良好，優于丹紅注射液。
表4丹紅注射液37℃加速試驗結果
表5注射用丹紅37℃加速試驗實驗結果
實施例1注射用丹紅混合液的制備處方組成丹參 7.5kg紅花 2.5kg
甘露醇 1kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參7.5kg先采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇1000克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅的有效成分混合液。
實施例2注射用丹紅混合液的制備處方組成丹參 27kg紅花 3kg甘露醇 1kg注射用水適量制成 10000ml
制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參27kg先采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇1000克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅的有效成分混合液。
實施例3注射用丹紅凍干粉針的制備處方組成丹參10kg紅花4kg甘露醇 0.5kg葡萄糖 0.5kg注射用水適量制成10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參10kg，先采用30倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，稱取揀選過的紅花4kg，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇0.5kg，葡萄糖0.5kg，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液。
冷凍干燥將上述注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持20小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例4注射用丹紅凍干粉針的制備處方組成丹參 15kg紅花 6kg
甘露醇 0.8kg葡萄糖 0.8kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參15kg，先采用35倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達80％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，稱取揀選過的紅花6kg，先采用40倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用30倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇0.8kg，葡萄糖0.8kg，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.0，即得注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液。
冷凍干燥將上述注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-35℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持17小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例5注射用丹紅凍干粉針的制備處方組成丹參 30kg紅花 10kg甘露醇2.5kg葡萄糖2.5kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參30kg，先采用50倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，稱取揀選過的紅花10kg，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇和葡萄糖各2.5kg，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液。
冷凍干燥將上述注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-40℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持2小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持18小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例5處方組成丹參 20kg紅花 8kg甘露醇 0.5kg葡萄糖 0.5kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參20kg，先采用35倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達80％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，稱取揀選過的紅花8kg，先采用40倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇0.5kg，葡萄糖0.5kg，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液。
冷凍干燥將上述注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持20小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例6處方組成丹參 15kg紅花 7.5kg甘露醇 0.8kg葡萄糖 0.8kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、丹參經揀選、洗凈、烘干、粉碎成細粒狀，稱取粉碎成細粒狀的丹參15kg，先采用30倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至4500ml，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用。
2、紅花經揀選，稱取揀選過的紅花7.5kg，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，加入注射用水至4500ml，濾過，即得紅花藥用組分提取液E，供配液使用。
3、將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中加入甘露醇0.8kg，葡萄糖0.8kg，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水至10000ml，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液。
冷凍干燥將上述注射用丹紅凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持20小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
權利要求
1.一種注射用丹紅的有效成分混合液，其特征在于每毫升注射用丹紅的混合液含相當于原生藥量丹參0.75～3.0g、紅花0.25～1.0g。
2.如權利要求1所述的注射用丹紅的有效成分混合液，其特征在于每毫升注射用丹紅的混合液含相當于原生藥量丹參2.7g、紅花0.3g。
3.如權利要求1所述的注射用丹紅有效成分混合液的制備方法，其特征在于丹參的藥用組分采用乙醇回流與水煎煮相結合提取；紅花的藥用組分采用稀乙醇浸漬與水溫浸相結合提取；提取工藝步驟如下丹參粉碎成細粒狀，先采用20～50倍乙醇回流提取3～4次，每次2～3小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用10～20倍的水煎煮2～3次，每次40～80分鐘，合并煎液，濾過；濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏；取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水沉淀處理，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用；紅花經揀選，先采用20～50倍稀乙醇浸漬提取2～3次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用20～50倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉；第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，濾過，即得紅花藥用組分提取液E；將上述所得提取液B與E混勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中按每毫升加入賦形劑0.05～0.5克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調節PH值至4～9，即得注射用丹紅有效成分混合液。
4.如權利要求3所述注射用丹紅有效成分混合液的制備方法，其特征在于該方法為丹參粉碎成細粒狀，先采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，用薄層層析法控制提取終點，得丹參有效成分提取液A；再將乙醇回流提取過的丹參用20倍的水煎煮三次，每次60分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達75％，第二次使含醇量達85％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液A合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水沉淀處理，過夜，然后取上清液濾過，即得丹參藥用組分提取液B，供配液使用；紅花經揀選，先采用50倍稀乙醇浸漬提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得紅花有效成分提取液C；再將乙醇浸漬提取過的紅花用40倍水溫浸提取，濾過，濾液濃縮至稠膏狀后加入乙醇進行兩次醇沉，第一次使含醇量達80％，第二次使含醇量達85％，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后加水，攪勻，冷藏，濾過，即得紅花藥用組分提取液D；將紅花有效成分提取液C與D合并，濾過，即得紅花藥用組分提取液E；將上述所得的藥用組分提取液B和E混合均勻，即得注射用丹紅所用植物生藥的有效成分提取液，向有效成分提取液中按每毫升加入賦形劑0.05克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調節PH值至6.5，即得注射用丹紅的有效成分混合液。
5.如權利要求3、4所述注射用丹紅的有效成分混合液的制備方法，其特征在于加入賦形劑可為甘露醇、右旋糖酐或葡萄糖∶甘露醇為1∶1的混合物。
6.如權利要求1、2所述注射用丹紅有效成分混合液的制備凍干粉針的方法，其特征在于將混合液按每瓶定量分裝后，未封口放入凍干箱的金屬盤內，并將其擱板的溫度降低至-25℃～-50℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內，維持1～6小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內的真空度為0.2～0.5Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持10～24小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在1～5％，迅速封口即可。
7.如權利要求6所述注射用丹紅有效成分混合液的制備凍干粉針的方法，其特征在于冷凍干燥過程中可選擇的最佳物理條件是首先將擱板降溫至-30℃，維持3小時，然后使凍干箱內的真空度0.2Pa，將擱板升溫并嚴格控制在-2℃，保持18小時，將擱板升溫至40℃放入無菌氣體后，控制制劑的含水量為2％。
全文摘要
本發明公開了一種以植物生藥丹參和紅花為原料的注射用丹紅及其制備方法和含量測定方法。本發明的制備方法為丹參采用乙醇回流提取，再將乙醇回流提取過的丹參用水煎煮，合并煎液，濾過；紅花乙醇浸漬提取，濾過。將丹參及紅花提取液混勻制成注射劑。本發明制備方法工藝先進、科學，有效成分提取更完全，提取工藝質量可控，制劑質量標準更高，并且穩定性好，藥物濃度高，便于運輸、儲存和使用的注射用丹紅及其制備方法。
文檔編號A61P9/00GK1640421SQ20041000032
公開日2005年7月20日 申請日期2004年1月7日 優先權日2004年1月7日
發明者李亞平, 任武賢, 李亞政, 馮偉, 衛銀波 申請人:山西亞寶藥業集團股份有限公司, 中國科學院上海藥物研究所