具有免疫調制活性的吡唑并喹啉的制作方法

專利名稱：具有免疫調制活性的吡唑并喹啉的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的雜環化合物、它們的制備方法、含有它們的組合物、以及臨床治療可受益于免疫調制的醫學病癥，包括類風濕性關節炎、多發性硬化、糖尿病、哮喘、移植、全身性紅斑狼瘡和牛皮癬的方法和用途。更具體而言，本發明涉及新的雜環化合物，其是能夠抑制CD80與CD28間相互作用的CD80拮抗劑。
背景技術：
免疫系統具有在免疫反應過程中和免疫反應后，通過各種調節機理控制淋巴細胞的激活與滅活之間內環境穩定的能力。其中有特異性抑制和/或切斷免疫反應的機理。因此，當由MHC分子把抗原呈遞給T-細胞受體時，T-細胞僅在有其它共同-刺激信號存在的條件下被適當激活。在沒有輔助信號存在的條件下，沒有淋巴細胞激活且誘導被稱作無變應性或耐受性的任一功能滅活狀態，或T-細胞由于編程性細胞死亡而被特異性缺失。其中一個這種共同-刺激信號包括專門的抗原-呈遞細胞上的CD80與T-細胞上的CD28的相互作用，其已被證實對于完全的T-細胞激活是很重要的(Lenschow等人，(1996)Annu.Rev.Immunol.，14，233-258)。
Erbe等人在J.Biol.Chem.Vol.277，No.9，pp 7363-7368(2002)中的文章描述了3種結合CD80的小分子配體，并可抑制CD80與CD28和CTLA4的結合。在所公開的配體中，有2種是結構A和B的稠合吡唑酮
發明概述根據本發明，提供一種通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽 其中R1和R3獨立地代表H、F、Cl、Br、-NO2、-CN、被F或Cl任選取代的C1-C6烷基、或被F任選取代的C1-C6烷氧基；R2代表H、或任選取代的C1-C6烷基、C3-C7環烷基或任選取代的苯基；Y代表-O-、-S-、N-氧化物、或-N(R5)-，其中R5代表H或C1-C6烷基；X代表價鍵或二價C1-C6亞烷基；
R4代表-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NHR6或-NHC(＝S)NHR6其中R6代表H、或通式-(Alk)b-Q的基團，其中b為0或1且Alk是任選取代的二價直鏈或支鏈C1-C12亞烷基、C2-C12亞烯基或C2-C12亞炔基，其可被一個或多個不相鄰的-O-、-S-或-N(R8)-基團中斷，其中R8代表H或C1-C4烷基、C3-C4烯基、C3-C4炔基、或C3-C6環烷基，且Q代表H、-CF3、-OH、-SH、其中各R8可相同或不同的-NR8R8、酯基團、或任選取代的苯基、C3-C7環烷基、C5-C7環烯基或具有5-8個環原子的雜環；且R7代表H或C1-C6烷基、或當與和它們相連的原子連接在一起時，R6和R7形成具有5-8個環原子的任選取代的雜環。
通式(I)的化合物是CD80拮抗劑。它們可抑制CD80與CD28間的相互作用并因此激活T細胞，從而調制免疫反應。
因此本發明還包括(i)通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽用于治療受益于免疫調制的病癥的用途。
(ii)通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽用于制備治療受益于免疫調制的病癥的藥劑的用途。
(iii)一種在人類和除人類以外的靈長類動物中進行免疫調制的方法，包括給予需要這種治療的受治療者免疫調制有效劑量的通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽。
(iv)一種包含通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽以及藥學或獸醫學可接受的賦形劑或載體的藥物或獸用組合物。
受益于免疫調制的病癥包括腎上腺機能不全變應性脈管炎和肉芽腫病淀粉樣變關節強硬性脊椎炎哮喘自身免疫性阿狄森氏病自身免疫性脫發自身免疫性慢性活動性肝炎自身免疫性溶血性貧血自身免疫性嗜中性白細胞減少癥自身免疫性血小板減少性紫癜自身免疫性血管炎貝切特氏病小腦退化慢性活動性肝炎慢性炎性脫髓鞘性多神經根神經病皰疹樣皮炎糖尿病伊-蘭肌無力綜合征腦脊髓炎大皰性表皮松解結節性紅斑Gluten-過敏性腸病古德帕斯徹氏綜合征移植物抗宿主疾病格-巴二氏綜合征橋本氏甲狀腺炎甲狀腺功能亢進特發性血色素沉著特發性膜性腎小球性腎炎最小改變性腎病混合型結締組織病多灶性運動神經病發性硬化重癥肌無力視性眼痙攣-肌痙攣綜合征類天皰瘡天皰瘡惡性貧血結節性多動脈炎多肌炎/皮膚肌炎感染后關節炎原發性膽硬化牛皮癬反應性關節炎萊特爾氏病視網膜病類風濕性關節炎硬化性膽管炎斯耶格倫氏綜合征Stiff-man綜合征亞急性甲狀腺炎全身性紅斑狼瘡全身性硬化(硬皮病)顳動脈炎閉塞式血栓脈管炎移植排斥I型和II型自身免疫性多腺綜合征潰瘍性結膜炎眼色素層炎韋格內氏肉芽腫病此處所用術語“亞烷基”是指具有兩個不飽和化合價的直鏈或支鏈的烷基鏈，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-、-CH(CH2CH3)CH2CH2CH3-、和-C(CH3)3。
此處所用的術語“雜環芳基”是指含有一個或多個雜原子的5-或6-元芳環。這種基團的舉例是噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基。
此處所用的非限定術語“雜環基”或“雜環的”包括上面定義的“雜芳基”，且特別是指含有一個或多個選自S、N和O的雜原子的5-8元芳香或非-芳香雜環，包括例如，吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、嗎啉基、哌嗪基、吲哚基、嗎啉基、苯并呋喃基、吡喃基、異噁唑基、奎寧環基、氮雜-雙環[3.2.1]辛基、苯并咪唑基、亞甲二氧苯基、馬來酰亞胺基和琥珀酰亞胺基。
除非另有說明，本文中出現的、用于此處任何部分的術語“取代的”是指用一個或多個下列取代基取代，即(C1-C6)烷基、三氟甲基、(C1-C6)烷氧基(包括其中環在相鄰環的C原子上被亞甲二氧基或亞乙二氧基取代的特殊情況)、三氟甲氧基、(C1-C6)烷基硫代、苯基、苯甲基、苯氧基、(C3-C8)環烷基、羥基、巰基、氨基、氟、氯、溴、氰基、硝基、氧代、-COOH、-SO2OH、-CONH2、-SO2NH2、-CORA、-COORA、-SO2ORA、-NHCORA、-NHSO2RA、-CONHRA、-SO2NHRA、-NHRA、-NRARB、-CONRARB或-SO2NRARB，其中RA和RB獨立地是(C1-C6)烷基。在其中“取代的”是指被(C3-C8)環烷基、苯基、苯甲基或苯氧基取代的情況下，其環本身可被除(C3-C8)環烷基、苯基、苯甲基或苯氧基外的前述任何一個取代。
此處所用的非限定術語“碳環基”或“碳環的”是指環原子全部是碳的5-8元環。
本發明某些化合物由于不對稱碳原子的存在而含有一個或多個手性中心。不對稱碳原子的存在可產生在每個手性中心具有R或S立體化學的立體異構體或非對映異構體。
形成本發明化合物鹽的鹽包括生理可接受的酸加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽和馬來酸鹽；及堿加成鹽，例如鈉、鉀、鎂、和鈣鹽。當化合物含有氨基時，季氨鹽也是可取的，且包括在本發明內。
在本發明的化合物中，下列是若干結構變量的例子R1可以是，例如H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。目前，優選R1是H、Cl或特別是F；R2可以是，例如H、甲基、甲氧基、環丙基、苯基、或氟-、氯-、甲基、或甲氧基取代的苯基。H或環丙基目前是優選的；R3可以是，例如，H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。目前優選R3是F或Cl，且最優選R3是H；Y可以是，例如，-O-、-S-、或-N(R5)-其中R5代表H或甲基。-NH-或-S-目前是優選的。
X可以是，例如，價鍵、或-CH2-或-CH2CH2-基團。目前優選價鍵。
R4代表-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NHR6、或-NHC(＝S)NHR6。這些之中，-NR7C(＝O)R6，且特別是-C(＝O)NR6R7和-NHC(＝O)NHR6目前是優選的。R7優選H，但R6取代基的寬范圍可產生十分有效的本發明化合物。許多舉例性R6取代基在下面實施例的化合物中出現。
R6可以是，例如H或通式-Alkb-Q的基團，其中b為0或1且Alk可以是，例如，-(CH2)n-、-CH((CH2)mCH3)(CH2)n-、-C((CH2)mCH3)((CH2)pCH3)(CH2)n-、-(CH2)n-O-(CH2)m-、-(CH2)n-NH-(CH2)m-、或-(CH2)n-NH-(CH2)m-NH-(CH2)p-基團其中n為1、2、3或4且m和p獨立地為0、1、2、3或4，且Q可代表H、-OH、-COOCH3、苯基、環丙基、環戊基、環己基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、或噁唑基；且R7可以是，例如H，或當與和它們相連的原子連接在一起時，R6和R7可形成5、6或7元雜環。
R4基團的具體例子包括在此處實施例的化合物中給出的那些。
本發明的化合物可通過文獻中已知的合成方法自商業得到的或很容易商業得到的化合物制備。例如，其中R4是基團-NR7C(＝O)R6的通式(I)化合物可通過用通式(III)的酰基氯使通式(II)的胺酰化而制備 其中R4是基團-NHC(＝O)NHR6的本發明化合物可通過使通式(IIA)的胺與通式(IIIA)的異氰酸酯反應而制備 O＝C＝NR6(IIIA)其中R4是基團-C(＝O)NHR6的本發明化合物可通過使通式(IIB)的酰基氯與胺NHR6R7反應而制備
其中R4是基團-NR7C(＝O)OR6的本發明化合物可通過使通式(II)的胺與氯甲酸酯ClC(＝O)OR6反應而制備。
下列實施例舉例說明本發明化合物的制備中間體1的制備2-(4-硝苯基)-6-氟-2，5-二氫吡唑并[4，3-c]-喹啉-3-酮 室溫下，將部分4-硝苯肼(2.28g，0.014mol)加入到4-氯-8-氟-喹啉-3-羧酸乙酯(3.58g，0.014mol)溶于無水正-丁醇(50ml)的攪拌溶液中。在氮氣條件下，使該混合物回流16小時，冷卻至室溫，然后過濾，剩下橙色固體。通過用醋酸乙酯(20ml)和庚烷(20ml)順序洗滌而純化該固體，然后抽吸干燥，得到深橙色固體吡唑酮(3.93g，87％)，LCMS m/z325.24[M+H]+@RT1.47分。
中間鈦2的制備2-(4-氨苯基)-6-氟-2，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮 室溫下，將部分氯化錫(II)二水合物(12.5g，0.055mol)加入到2-(4-硝基-苯基)-6-氟-2，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮(中間體1)(3.59g，0.011mol)溶于乙醇(110ml)的攪拌溶液中。然后加熱該混合物至80℃共8小時，冷卻至室溫并過濾，剩下黃色固體。將該固體混懸于醋酸乙酯的二相溶液(1L)中，即羅謝爾鹽飽和溶液(500ml)和碳酸氫鈉飽和溶液(500ml)，室溫攪拌2小時。過濾該混合物并用水洗滌剩余的固體，真空干燥得到嫩黃色固體的標題化合物(3.39g，99％)，LCMS m/z295.30[M+H]+@RT0.84分。
實施例1N-[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-2-甲基-丁酰胺 室溫下，在30秒內，將(±)-2-甲丁酰氯(13.6μl，0.11mmol)滴加到2-(4-氨基-苯基)-6-氟-2，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮(中間體2)(30mg，0.10mmol)、三乙胺(14μl，0.11mmol)和4-二甲氨基吡啶(2.4mg，0.02mmol)溶于二氯甲烷(1ml)的攪拌溶液中。室溫攪拌該混合物16小時。然后濾出黃色固體并通過用碳酸氫鈉飽和溶液(1ml)、醋酸乙酯(1ml)和乙醇(0.5ml順序洗滌而純化，最后抽吸干燥得到嫩黃色固體的標題化合物(10mg，26％)，LCMS m/z 379.36[M+H]+@RT1.18min.δH(400MHz，(CD3)2SO)9.89(1H，s)，8.52(1H，s)，8.15(2H，d J9.0Hz)，8.01(1H，d J 7.0Hz)，7.69(2H，d J 9.0Hz)7.57-7.46(2H，m)，2.46-2.39(1H，m)，1.69-1.36(2H，m)，1.11(3H，d J 6.8Hz)，0.91(3H，t J 7.3Hz).
在下面測定部分描述的測定法中測試標題化合物，以及后面實施例的化合物，以測定它們作為CD80-CD28相互反應的抑制劑的活性。本發明標題化合物具有***的活性等級。
實施例2-49下列化合物是通過實施例1描述的路徑合成的，其中用適宜的酰基氯取代(±)-2-甲丁酰氯實施例22-甲基-戊酸[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-酰胺 δH(400MHz，(CD3)2SO)9.92(1H，s)，8.53(1H，s)，8.12(2H，d J 9.2Hz)，8.05(1H，d J 7.6Hz)，7.70(2H，dJ 9.2Hz)，7.63-7.53 2H，m)，1.68-1.58(1H，m)，1.38-1.28(3H，m)，1.11(3H，d J 6.6Hz)，0.91(3H，t J 7.1Hz).
活性***實施例31-甲基-1H-吡咯-2-羧酸[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-酰胺
δH(400MHz，(CD3)2SO)9.76(1H，s)，8.50(1H，s)，8.26(2H，d 9.0Hz)，7.97-7.94(1H，m)，7.73(2H，d J 9.0Hz)，7.39-7.28(2H，m)，7.07-7.01(2H，m)，3.91(3H，s).
活性*實施例4N-[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-3-甲基-丁酰胺 δH(400MHz，(CD3)2SO)9.92(1H，s)，8.52(1H，s)，8.14(2H，d J 9.2Hz)，8.01(1H，d J 7.3Hz)，7.67(2H，d J 9.2Hz)，7.57-7.47(2H，m)，2.21(2H，d J 6.8Hz)，2.14-2.07(1H，m)，0.96(6H，d J 6.6Hz).
活性**實施例52-丙基-戊酸[4-(6-氟-3-氧-3，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-酰胺
δH(400MHz，(CD3)2SO)9.93(1H，s)，8.53(1H，s)，8.11(2H，d J 9.0Hz)，8.05(1H，d J 7.8Hz)，7.70(2H，dJ 9.0Hz)，7.59-7.46(2H，m)，2.46-2.35(1H，m)，1.63-1.27(4H，m)，0.90(6H，t J 7.1Hz).
活性*實施例65-[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)苯基氨基甲酰基]-戊酸甲酯 δH(400MHz，(CD3)2SO)9.85(1H，s)，8.47(1H，s)，8.25(2H，d J 9.0Hz)，7.91-7.90(1H，m)，7.59(2H，d J9.0Hz)，7.29-7.20(2H，m)，3.61(3H，s)，2.38-2.28(4H，m)，1.64-1.50(4H，m).
活性***
實施例7N-[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯基]-2，2-二甲基-丙酰胺 δH(400MHz，(CD3)2SO)9.26(1H，s)，8.52(1H，s)，8.15(2H，d J 9.2Hz)，8.03(1H，d J 8.8Hz)，7.71(2H，dJ 9.2Hz)，7.56-7.47(2H，n)，1.26(9H，s).
活性**實施例8-28也是使用適宜的酰基氯通過實施例1的方法制備的


中間體3的制備3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸 室溫下，將部分3-肼苯甲酸(1.91g，0.013mol)加入到4-氯-8-氟-喹啉-3-羧酸乙酯(2.93g，0.011mol)溶于正-丁醇(60ml)的攪拌溶液中。將該溶液加熱回流16小時，冷卻至室溫并濾出所得黃色固體，用叔-丁基甲醚洗滌，然后干燥。將該固體再次溶于四氫呋喃∶水(2∶1；21ml)的溶液中，然后加入氫氧化鋰(1.27g，0.031mol)。室溫攪拌16小時后，向混合物中滴加濃鹽酸(3ml)，沉淀出黃色固體，將其濾出并真空干燥，得到嫩黃色固體的標題化合物(中間體3)(2.32g，63％)。
中間體4的制備3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯 室溫下，在2分鐘內，將草酰氯(20ml，0.2mol)滴加在3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸(中間體3)(2.0g，6.1mmol)溶于二氯甲烷(10ml)的攪拌溶液中。然后加入N，N-二甲基甲酰胺(50μl)并加熱所得混合至50℃共1小時。然后將該溶液冷卻至室溫并真空濃縮，剩下淡棕色固體的標題化合物(中間體4)(2.0g，96％)。
實施例503-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-N-(3-甲氧基-丙基)-苯甲酰胺
將3-甲氧基丙胺(0.026g，0.29mmol)加入到3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯(中間體4)(26mg，0.29mmol)溶于四氫呋喃(2ml)的攪拌溶液中，并室溫下攪拌該混合物15分鐘。然后加入三乙胺(0.2ml，1.4mmol)并攪拌所得混合物過夜。滴加1M鹽酸(3-4ml)，沉淀出黃色固體，過濾并抽吸干燥，得到黃色固體酰胺(79mg，0.20mmol)，LCMS m/z395.25[M+H]+@RT1.04min；δH(400MHz，(CD3)2SO)8.59(1H，m)，8.57(1H，s)，8.39(1H，app d J 9.3Hz)，8.08(1H，app d J 7.3Hz)，7.66-7.53(5H，m)，3.37-3.33(4H，m)，3.27(3H，s)，1.83-1.77(2H，m).
活性**實施例51N-乙基-3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]-喹啉-2-基)-苯甲酰胺 通過實施例53的方法，用乙胺取代3-甲氧基丙胺而制備。
δH(400MHz，(CD3)2SO)主要轉子記錄(major rotomer quoted)；8.56(1H，br s)，8.47(1H，m)，8.21(2H，d J 8.5Hz)，7.94(2H，d J 8.5Hz)，3.96(3H，s)，3.31(2H，q J 7.3Hz)，2.58(3H，s)，1.15(3H，t J 7.4Hz)活性**
實施例52N-苯甲基-3-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺 通過實施例53的方法，用苯甲胺取代3-甲氧基丙胺而制備。
LCMS m/z 427.16[M+H]+@RT1.28分活性*實施例53-64是使用適宜的胺，通過實施例50的方法制備的。

實施例65N-(3-二甲氨基丙基)-4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺步驟12-環丙基-4-氧代-1，4-二氧-喹啉-3-羧酸乙酯 將3-環丙基-3-氧代-丙酸甲酯(6.2g，0.038mol)、2-氨基苯甲酸乙酯(4.95g，0.03mol)和對-甲苯磺酸(0.04g，0.2mmol)溶于甲苯(25ml)的溶液125℃加熱2小時；然后蒸餾15ml溶劑。將乙醇鈉(2M，15ml)的乙醇溶液加入到殘余的橙色溶液中(反應混合物變紅)。120℃下攪拌該紅色混合物2小時；再次蒸餾15ml溶劑。將反應混合物冷卻至室溫，用醋酸乙酯(1升)稀釋，用0.1M HCl和水萃取。在硫酸鈉上干燥結合的有機萃取物，并真空濃縮，剩下橙色殘渣，用冷醋酸乙酯洗滌，得到黃白色固體的2-環丙基-4-氧代-1，4-二氫-喹啉-3-羧酸乙酯(3.87g，53％)。LCMSm/z 244.14[M+H]+@RT0.78分，89％，m/z 230.11[酸+H]+@RT1.27，11％。
δH(400MHz，(CD3)2SO)11.04(1H，s)，8.06(1H，dd，J11.1，J28.1)，7.76-7.66(2H，m)，7.36(1H，td，J11.1，J27.5)，3.89(3H，s)，2.16(1H，m)，1.18(4H，d，J7.0).
步驟24-氯-2-環丙基-喹啉-3-羧酸乙酯
將部分磷酰氯(0.77ml，0.082mol)加入到2-環丙基-4-氧代-1，4-二氫-喹啉-3-羧酸乙酯(1.0g，0.041mol)溶于乙腈的混懸液中，并在75℃下加熱該混合物90分鐘(高于65℃時變為澄明的溶液)。將所得淺棕色溶液注入到飽和碳酸氫鈉(100ml)中；用醋酸乙酯萃取該混懸液并干燥結合的有機萃取物，真空濃縮，剩下黃白色固體的4-氯-2-環丙基-喹啉-3-羧酸乙酯(1.15g，106％)。Rf(AcOEt)＝0.73步驟34-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸 將4-氯-2-環丙基-喹啉-3-羧酸乙酯(1.15g，0.0041mol)和4-肼基-苯甲酸(1.0g，0.0068mol)在乙醇(30ml)中回流攪拌16小時。用庚烷稀釋該淺黃色混懸液，過濾，用冷叔-丁基甲醚洗滌，并抽吸干燥，得到含肼的粗固體。將該固體混懸于1M HCl中，過濾，用水洗滌，然后真空干燥，得到黃色固體4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸(1.135g，80％)，LCMS m/z 346.20[M+H]+@RT1.05分96％純度。
δH(400MHz，(CD3)2SO) 11.4(1H，s)，8.43(2H，d，J8.1)，8.21(1H，dd，J11.2，J28.1)，8.07(2H，d，J8.1)，7.92(1H，d，J 8.1)，7.67(1H，t，J 6.6)，7.52(1H，t，J 6.5)，3.43(1H，m)，1.59(2H，m)，1.43(2H，m).
步驟44-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]-喹啉-2-基)-苯甲酰氯 將草酰氯(1.6ml，0.01mol)加入到精細研磨的4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸(0.19g，0.55mmol)溶于二氯甲烷(4ml)的混懸液中，接著滴加二甲基甲酰胺。在氮氣、45℃條件下攪拌該混合物8小時。真空除去溶劑，得到淡黃色固體4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基]-苯甲酰氯，LCMS m/z[M+MeOH-Cl]+@RT1.46分95％純度。沒有進一步純化使用。
步驟5N-(3-二甲氨基丙基)-4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺
在氮氣條件下，向部分4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯(0.1g，0.28mmol)溶于四氫呋喃(6ml)的溶液中加入3-二甲氨基-丙胺(0.03g，0.3mmol)溶于四氫呋喃(3ml)的溶液。RT攪拌該混合物3小時。減壓除去溶劑并用少量飽和碳酸氫鈉、水洗滌黃色固體，真空干燥得到黃色固體N-(3-二甲氨基丙基)-4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]-喹啉-2-基)-苯甲酰胺(57mg，47％)。LCMS m/z 430.11[M+H]+@RT0.99分100％純度。
活性***中間體5的制備4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯
向精細研磨的4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酸(1.1g，3.4mmol)溶于二氯甲烷(6ml)的混懸液中加入草酰氯(2.4ml，29mmol)，接著滴加二甲基甲酰胺。在氮氣、45℃條件下攪拌該混合物3小時。真空除去溶劑得到淺黃色固體4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯(1.15g，定量的)，無需進一步純化使用。
實施例66N-(3-二甲氨基丙基)-4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺鹽酸鹽 在氮氣條件下，向4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰氯(0.1g，0.3mmol)溶于四氫呋喃(5ml)的部分溶液中加入3-二甲氨基-丙胺(0.03g，0.3mmol)溶于四氫呋喃的溶液。室溫攪拌該混合物90分鐘。減壓除去溶劑并經由FCC硅膠(梯度洗脫，MeOH∶H2O，FlukaC18反相)純化黃色固體，得到黃色固體N-(3-二甲氨基丙基)-4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺鹽酸鹽(70mg，53％)。
LCMS m/z 408.39[M+H]+@RT0.89分90％純度活性***
實施例67-141是自適宜的苯甲酰氯和適宜的胺類似制備的。





實施例142{3-[4-(6-氟-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]-喹啉-2-基)-苯基]-脲基}醋酸乙酯 將部分氰酰乙酸乙酯(31mg，0.24mmol)加入到2-(4-氨苯基)-6-氟-2，5-二氫吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮(中間體2)(50mg，0.17mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2ml)的攪拌溶液中，室溫攪拌該混合物16小時。然后向該混合物中加水(1ml)，使固體沉淀，過濾，用水(1ml)和醋酸乙酯(1ml)洗滌，最后抽吸干燥，剩下黃色固體的脲，LCMS m/z 424.40[M+H]+@RT1.06分。
活性***實施例143和144 實施例143實施例144LCMS m/z 438.41[M+H]+@RT 1.13分LCMS m/z 514.46[M+H]+@RT 1.35分活性**活性*下列化合物是通過實施例142的方法，用適宜的異氰酸鹽、異硫氰酸鹽或氯甲酸鹽取代氰酰醋酸乙酯而合成的。

中間體6甲基4-氧代二氫苯并噻喃-3-羧酸鹽的制備 在氮氣下下冷卻無水四氫呋喃(60ml)至-50--60℃。加入1M雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰溶于己烷(56ml，56mmol)的溶液。溫度保持在-50--60℃，在20分鐘內滴加二氫苯并噻喃-4-酮。低溫下繼續攪拌60分鐘。在5分鐘內向反應混合物中滴加氰基甲酸甲酯(4.84ml，60.9mmol)。-50--60℃攪拌所得混懸液80分鐘，然后溫熱至室溫。加入飽和氯化銨溶液(100ml)。分離各相，用醋酸乙酯(2×100ml)萃取水相。用水(50ml)洗滌結合的有機相，在硫酸鎂上干燥，過濾并真空濃縮。得到橙色的油并通過柱色譜純化。分離出黃色固體的標題化合物(4.70g，21.1mmol，42％)。LCMSm/z 221[M-H]+。
中間體74-(3-氧代-3a，4-二氫-3H-二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2-基)-苯甲酸 將4-氧代二氫苯并噻喃-3-羧酸鹽(0.50g，2.25mmol)和肼基苯甲酸(0.377g，2.48mmol)在醋酸(6ml)中混合。回流加熱該混合物30分鐘。蒸餾掉過量的醋酸，得到棕色的油。加入二乙醚，通過過濾并在真空下干燥收集所形成的沉淀物。分離出紅/棕色固體的粗產物(797mg)。LCMSm/z 325[M+H]+。沒有進行純化。
中間體84-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酸的制備 將粗4-(3-氧代-3a，4-二氫-3H-二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2-基)-苯甲酸(250mg，0.77mmol)溶于二甲基亞砜(6ml)中。加入O-氯醌(189mg，0.77mmol)，并在室溫下攪拌該混合物過夜。加水(20ml)并過濾收集固體，用水洗滌。用甲苯研磨濾餅，過濾并真空干燥。分離出深棕色固體的標題化合物(230mg，0.71mmol，92％)。LCMSm/z 323[M+H]+可選擇性地，可在與空氣接觸的條件下，在二甲基亞砜中攪拌粗4-(3-氧代-3a，4-二氫-3H-二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2-基)-苯甲酸。發現空氣氧化可提供干凈的產物，然而反應更慢。
實施例165N-[3-(二甲氨基)丙基]-4-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備
將4-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酸(55mg，0.17mmol)混懸于無水二甲基乙酰胺(1ml)中。加入二異丙基-乙胺(46.5mg，0.36mmol，62μl)，接著加入3-二甲氨基丙胺(17.5mg，0.17mmol)和[(苯并三唑-1-氧基)-二甲氨基-亞甲基]-二甲基-六氟磷酸銨(65mg，0.17mmol)。室溫攪拌該混合物4小時，并通過制備型HPLC純化。分離出棕色固體的標題化合物。LCMSm/z 407[M+H]+活性**實施例166N-[(環己氨基)丙基]-4-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備
如上所述進行反應。LCMSm/z 461[M+H]+活性***實施例167N-(吡咯烷-1-基-丁基)-4-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備 如上所述進行反應。LCMSm/z 447[M+H]+活性*實施例1684-(3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)-N-1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基苯甲酰胺的制備
如上所述進行反應。LCMSm/z 475[M+H]+活性**中間體93-[(2-氟苯基)硫烷基]丙酸的制備 在氮氣條件下，將2-氟硫苯酚(5.0g，39mmol)溶于四氫呋喃(50ml)中。加入三乙胺(3.94g，5.33ml，85.8mmol)。室溫下，將丙烯酸(2.81g，2.67ml，39mmol)溶于四氫呋喃中，并在2小時內滴加到反應溶液中。室溫攪拌該混合物過夜。加入1M鹽酸(50ml)并分離各相。用醋酸乙酯(2×50ml)洗滌水相。在硫酸鎂上干燥結合的有機相，過濾并真空濃縮。獲得黃色的油，其在室溫下貯藏后固化。用己烷研磨固體，過濾并真空干燥。分離出黃白色固體的標題化合物(4.19g，20.9mmol，54％)。
中間體108-氟-2，3-二氫-4H-二氫苯并噻喃-4-酮的制備 0-5℃下，將3-[(2-氟苯基)硫烷基]丙酸(4.0g，20mmol)與濃硫酸(20ml)混合。在0-5℃下攪拌反應溶液3小時，然后溫熱至室溫過夜。將混合物滴加到冰中驟冷，得到白色混懸液。用醋酸乙酯(1×200ml，1×100ml)萃取水相。用飽和碳酸氫鈉溶液(1×50ml)、水(1×50ml)、1M鹽酸(50ml)和水(2×50ml)洗滌結合的有機相。將有機相在硫酸鎂上干燥，過濾并真空濃縮。分離出黃色固體的標題化合物(2.10g，11.5mmol，58％)。
中間體11甲基8-氟-4-氧代二氫苯并噻喃-3-羧酸酯的制備 在氮氣條件下，將1M六甲基二硅雜疊氮(silazide)鋰的己烷溶液(13.2ml)溶于無水四氫呋喃(20ml)中。將溶液冷卻至-78℃。將8-氟-2，3-二氫-4H-二氫苯并噻喃-4-酮(2.00g，11mmol)溶于四氫呋喃(40ml)中，將溶液轉移到滴液漏斗中，并在30分鐘內滴加到維持在低于-60℃的反應混合物中。在-78℃至-65℃下攪拌2小時得到橙色的澄明溶液。將氰基甲酸甲酯(0.935g，0.87ml)溶于四氫呋喃(2ml)中并滴加到反應溶液中。低溫下持續攪拌1小時，然后使混合物溫熱至室溫。加入飽和氯化銨溶液(20ml)和水(10ml)，混合各相5分鐘并分離。用醋酸乙酯(2×100ml)洗滌水相并在硫酸鎂上干燥結合的有機相。過濾該混合物，并真空除去溶劑，得到橙色的油。通過柱色譜純化粗油；流動相己烷，梯度至己烷/醋酸乙酯[90∶10]。分離出黃色固體的標題化合物(1.19g，4.95mmol，45％)。
中間體124-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酸的制備 將甲基8-氟-4-氧代二氫苯并噻喃-3-羧酸鹽(1.19g，4.95mmol)和4-肼基苯甲酸(755mg，4.95mmol)與冰醋酸(10ml)混合。回流加熱該混合物4小時。真空除去過量醋酸，產生橙色的油。加入醋酸乙酯(10ml)并聲波處理該混合物。觀察到橙色固體的沉淀。過濾收集該固體并用醋酸乙酯洗滌。將濾餅溶于二甲基亞砜(10ml)中，并在室溫下空氣氧化1周。向反應混合物中加水(20ml)，過濾收集固體，在醋酸乙酯中調成漿，過濾并真空干燥。分離出橙色粉末的標題化合物(175mg，0.51mmol，10％)。
LCMSm/z 341實施例169N-[3-(二甲氨基)丙基]-4-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備
將4-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酸(41mg，0.12mmol)溶于無水二甲基乙酰胺(1ml)中。加入二異丙基-乙胺(46mg，0.36mmol，62μl)，接著加入[(苯并三咪-1-氧基)-二甲氨基-亞甲基]-二甲基-六氟磷酸銨(65mg，0.17mmol)和3-二甲氨基丙胺(12mg，0.12mmol)。室溫攪拌該混合物過夜并通過制備型HPLC純化。分離出棕色固體的標題化合物。LCMSm/z 425[M+H]+活性**實施例170N-[(環己氨基)丙基]-4-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備
按照上面所述進行反應。LCMSm/z 479[M+H]+活性**實施例171N-(吡咯烷-1-基-丁基)-4-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)苯甲酰胺的制備
按照上面所述進行反應。LCMSm/z 465[M+H]+活性***實施例1734-(6-氟-3-氧代二氫苯并噻喃并[4，3-c]吡唑-2(3H)-基)-N-1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基苯甲酰胺的制備 按照上面所述進行反應。LCMSm/z 493[M+H]+活性***測定部分在沒有細胞的Homogenous Time Resolved Fluorescence(HTRF)測定法中測試上述實施例，以測定它們作為CD80-CD28相互作用的抑制劑的活性。
在測定法中，銪和別藻藍蛋白(APC)與CD28和CD80間接相關(通過抗體連接體)形成復合物，其使銪和APC緊密接觸，從而產生信號。該復合物包含下列六種蛋白熒光標記1、連接抗體1、CD28融合蛋白、CD80融合蛋白、連接抗體2、和熒光標記2。下表更詳細地描述這些試劑。
在形成復合物時，銪和APC緊密接觸并產生信號。
非特異性相互作用是通過用小鼠Fab片段(C215)取代CD80小鼠Fab片段融合蛋白(1.9μg/ml)而測量的。在30μl終體積的黑色384孔平板中進行測定。測定緩沖液50mM Tris-HCl、150mM NaCl pH7.8，含使用前才加入的0.1％BSA(w/v)。
以100μM-1.7nM的濃度系列將化合物加入到上述試劑中。室溫培養反應物4小時。雙重測量是使用Wallac Victor 1420 Multilabel Counter進行的。第一次測量激發340nm、發射665nm、延遲50μs、窗口時間200μs。第二次測量激發340nm、發射615nm、延遲50μs、窗口時間200μs。計數是相對于熒光交叉、淬火和背景自動校正的。
通過舉例說明，實施例15、21、29、35和83化合物的EC50結果分別為8μM、1.9μM、950nM、148nM和90nM。為了方便，以概括形式記錄上面所測試化合物的EC50如下EC50*＝＞10μM、**＝1-10μM、***＝＜1μM
權利要求
1.一種通式(I)的化合物或其藥學或獸醫學可接受的鹽 其中R1和R3獨立地代表H、F、Cl、Br、-NO2、-CN、被F或Cl任選取代的C1-C6烷基、或被F任選取代的C1-C6烷氧基；R2代表H、或任選取代的C1-C6烷基、C3-C7環烷基或任選取代的苯基；Y代表-O-、-S-、N-氧化物、或-N(R5)-，其中R5代表H或C1-C6烷基；X代表價鍵或二價C1-C6亞烷基；R4代表-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NHR6或-NHC(＝S)NHR6，其中R6代表H、或通式-(Alk)b-Q的基團，其中b為0或1且Alk是任選取代的二價直鏈或支鏈C1-C12亞烷基、C2-C12亞烯基或C2-C12亞炔基，其可被一個或多個不相鄰的-O-、-S-或-N(R8)-基團中斷，其中R8代表H或C1-C4烷基、C3-C4烯基、C3-C4炔基、或C3-C6環烷基，且Q代表H、-CF3、-OH、-SH、其中各R8可相同或不同的-NR8R8、酯基團、或任選取代的苯基、C3-C7環烷基、C5-C7環烯基或具有5-8個環原子的雜環；且R7代表H或C1-C6烷基、或當與和它們相連的原子連接在一起時，R6和R7形成具有5-8個環原子的任選取代的雜環。
2.根據權利要求1所述的化合物，其中R1是H、F、Cl、甲基或甲氧基。
3.根據權利要求1或2所述的化合物，其中R2是H、甲基、甲氧基、環丙基、苯基、或氟-、氯-、甲基、或甲氧基-取代的苯基。
4.根據前述權利要求任何一項所述的化合物，其中R3是H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。
5.根據前述權利要求任何一項所述的化合物，其中Y是-O-、-S-、或-N(R5)-，其中R5代表H或甲基。
6.根據前述權利要求任何一項所述的化合物，其中X是價鍵、或-CH2-或-CH2CH2-基團。
7.根據前述權利要求任何一項所述的化合物，其中R4代表-C(＝O)NHR6、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NHR6或-NHC(＝S)NHR6，且這些之中R6是H或通式-Alkb-Q的基團，其中b為0或1且Alk是-(CH2)n-、-CH((CH2)mCH3)(CH2)n-、-CH((CH2)mCH3)((CH2)pCH3)(CH2)n-、-(CH2)n-O-(CH2)m-、或-(CH2)n-O-(CH2)n-O-(CH2)m-，基團其中n為1、2、3或4且m和p獨立地為0、1、2、3或4，且Q代表H、-OH、-COOCH3苯基、環丙基、環戊基、環己基、吡啶基、呋喃基、噻吩基或噁唑基，且R7是H，或當與和它們相連的氮原子連接在一起時，R6和R7形成吡咯烷-2-酮或吡咯烷-2，5-二酮環。
8.根據權利要求1所述的化合物，其中R1是H、F、或Cl；R2是H；R3是H、F、或Cl；Y是-NH-；X是價鍵；且R4代表-C(＝O)NHR6、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6或-NHC(＝O)NHR6其中R6是H或通式-Alkb-Q的基團，其中b為0或1且Alk是-(CH2)n-、-CH((CH2)mCH3)(CH2)n-、-CH((CH2)mCH3)((CH2)pCH3)(CH2)n-、-(CH2)n-O-(CH2)m-、或-(CH2)n-O-(CH2)n-O-(CH2)m-，基團其中n為1、2、3或4且m和p獨立地為0、1、2、3或4，且Q代表H、-OH、-COOCH3苯基、環丙基、環戊基、環己基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、或噁唑基，且R7是H，或當與和它們相連的氮原子連接在一起時，R6和R7形成吡咯烷-2-酮或吡咯烷-2，5-二酮環。
9.根據權利要求1所述的化合物，其中R1是F，R2是H或環丙基，R3是H，X是價鍵，且R4是-C(＝O)NHR6、-NRHC(＝O)R6、或-NHC(＝O)NHR6。
10.N-(3-二甲氨基丙基)-4-(4-環丙基-3-氧代-3，5-二氫-吡唑并[4，3-c]喹啉-2-基)-苯甲酰胺，或其藥學或獸醫學可接受的鹽。
11.根據權利要求1-10任何一項所述的化合物用于治療受益于免疫調制的病癥的用途。
12.根據權利要求1-10任何一項所述的化合物用于制備治療受益于免疫調制的病癥的藥劑的用途。
13.一種在人類和非人靈長類中進行免疫調制的方法，包括給予需要這種治療的受治療者免疫調制有效劑量的權利要求1-10任何一項所述的化合物。
14.一種含有權利要求1-10任何一項所述的化合物以及藥學或獸醫學可接受的賦形劑或載體的藥物或獸用組合物。
全文摘要
本發明涉及新的雜環化合物、它們的制備方法、含有它們的組合物、以及臨床治療可受益于免疫調制的醫學病癥，包括類風濕性關節炎、多發性硬化、糖尿病、哮喘、移植、全身性紅斑狼瘡和牛皮癬的方法和用途。更具體而言，本發明涉及新的雜環化合物，其是能夠抑制CD80與CD28間相互作用的CD80拮抗劑。
文檔編號A61K31/4745GK1729191SQ200380106669
公開日2006年2月1日 申請日期2003年11月21日 優先權日2002年11月22日
發明者I·R·馬修斯, T·S·庫爾特, C·吉龍, C·J·布倫南, M·K·烏丁, L·O·G·彼得松, D·D·G·思里格, P·赫克斯利 申請人:活躍生物技術股份公司