專利名稱：蛇床子素在制備預防和治療性功能障礙藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及蛇床子素在制備預防和治療性功能障礙的藥物中的應用。
背景技術：
男性性功能障礙是一種發病率高，分布范圍廣的常見疾病，并且受到年齡、環境、心理等眾多因素的影響。現代社會人們的生活節奏加快、競爭激烈、精神壓力大，使得男性性功能障礙的發病率大為增加。目前世界上大約有一億男性存在不同程度的性功能障礙。40歲以上男性，50％以上都存在著不同程度的性功能障礙，美國有2-3千萬男性，日本有30％男性存在不同程度性功能障礙；國內報道，上海市對1582例40歲以上中老年男子進行流行病學調查，發現73.1％患有性功能障礙疾病，并且發病率隨年齡增加而增加，60歲以上尤為明顯。近10年來，男科學診治水平迅速發展。雖然目前市場上男性性功能障礙藥物的品種甚多，但真正達到安全、有效、服用方便而能令患者滿意的藥物仍不多見。
目前治療男性性功能障礙的西藥主要有雄激素類藥物，α-腎上腺素能受體阻斷劑類藥物以及其他類藥物。
雄激素類藥物主要有丙酸睪酮(Testosterone propinate)，戊酸睪酮，十一酸睪酮(又稱安雄，Testosterone Undecanoate)和甲睪酮(Methyl testosterone)等。這一類藥物作用與天然雄激素相同，能促進男性性器官及副性征的發育、成熟，促進蛋白質合成及骨質的形成，治療有效率一般在30％左右，但男性患者若長期服用，藥物可能在體內轉化為雌激素，又可能抑制促性腺激素的分泌而引起睪丸萎縮并抑制精子的形成以及其他副作用。
α-受體阻斷劑類藥物較多。如育享賓(Yohimbine)、麻黃堿(Ephedrine)、酚妥拉明(Phentolamine)，冬眠靈(Chlorpromazine)、酚芐明(Phenoxybenzamine)，哌唑嗪(Prazodin)等。此類藥通過抑制腎上腺素和去甲腎上腺素的作用，使交感神經張力降低，導致動脈平滑肌擴張，從而使睪丸海綿竇血量增加，白膜平滑肌受壓，阻斷靜脈回流使陰莖勃起。一般有效率在35％左右。但此類藥易導致甲狀腺機能亢進，高血壓或低血壓，心動過速，腎冠脈功能不全、心絞痛、動脈硬化等疾病，且長期使用，可能引起病態嗜好及耐受性。
其他類藥物中，具有代表性的是由美國輝瑞制藥公司生產的“偉哥”(Viagra)，其化學名是枸椽酸西地那非(Sildenafil Citrate)，于1998年3月由FDA批準上市。其作用機理是通過抑制陰莖海綿體內5型磷酸脂酶(Phosphodiesterase type5，PDE5)的活性，調節NO/cGMP通路，達到舒張陰莖海綿體的目的。該藥機理獨特，服用后勃起有效率高達97％，治療有效率達70％。但該藥同時有一系列副作用，如可導致頭暈、眼花、昏暈、青光眼，低血壓等病癥。該藥對心血管系統、消化系統、血液淋巴系統，神經系統、呼吸系統和泌尿生殖系統均有不良影響。而且，因“偉哥”系外源性藥物，長期服用可產生依賴性，甚至有可能形成永久性陽萎。
中草藥是祖國醫學寶庫，中醫對涉及性功能的單味藥和方劑的研究由來已久。單味藥如人參、鹿茸、鹿角、紫河車、蛤蚧、海狗腎、杜仲、何首烏等，以及經典方劑如金匱腎氣丸、龜鹿二仙膠、參茸衛生丸、龜齡集等均已為人熟知并且延用多年。但這些藥一般多用珍稀藥材，價格昂貴，且由于所用藥材有益腎壯陽補虛作用，大多藥性溫燥，易引發“陽亢”，其作用的有效劑量地域性差異大，不易把握。其治療有效率一般僅在20-30％。
生藥蛇床子是中國醫學界常用的補腎壯陽藥。蛇床子素(Osthole)是從傘形科植物蛇床(Cnidium monnieri(L.)Cuss.)的果實——蛇床子中分離純化得到的化合物，為一種結構已知的芳香族化合物。蛇床子素又名甲氧基歐芹酚，歐芹酚甲醚。分子式C15H16O3，分子量244.28。棱柱狀結晶(乙醚)，針狀結晶(稀乙醇)，mp.83-84℃，bp145-150℃，溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯和沸石油醚，不溶于水和石油醚。
現有技術中該化合物的藥理作用為，其作用于心血管系統，使貓的動脈壓降低；亦可使大鼠動脈壓和心縮力增加，刺激呼吸；并對鼠腸有解痙作用。臨床上可用作預防和治療心律失常，促進小鼠學習、記憶能力。另外，蛇床子素可提高大鼠的腺垂體-甲狀腺軸功能，還能增強小鼠網狀內皮細胞的吞噬功能，對小鼠遲發性超敏反應有明顯的抑制作用。但到目前為止，國內外均未見有關于用蛇床子素治療性功能障礙的報告。
發明內容
為了克服現有技術的不足，本發明提供了如通式(I)所示的蛇床子素在制備預防和治療性功能障礙的藥物中的應用。
本發明的另一目的在于提供預防和治療性功能障礙的藥物組合物，含有有效劑量的如通式(I)所示的蛇床子素，以及藥效學上可接受的載體。
藥效及藥理作用實驗表明蛇床子素能改善雄性小鼠的性行為。蛇床子素口服給藥后通過閉路電視監測系統觀察15分鐘內雄性小鼠跨騎(包括跨騎潛伏期ML和跨騎頻率MF)、交尾(包括交尾潛伏期IL和交尾頻率IF)及舔陰莖(包括舔陰莖潛伏期LL和舔陰莖頻率LF)三種典型的性行為。50mg/Kg口服劑量給藥可顯著縮短雄性小鼠跨騎、交尾及舔陰莖三種性行為的潛伏期，并顯著增高雄性小鼠三種性行為的發生頻率并提高其性行為的行為百分率；100mg/Kg口服劑量給藥可顯著增高雄性小鼠三種性行為的發生頻率；與對照組相比較，上述各項指標均有統計學顯著差異，表明蛇床子素有很強的增進雄性小鼠性功能的作用。
“金匱腎氣丸”是中醫補腎壯陽經典名方，蛇床子素和藥金匱腎氣丸作對比。金匱腎氣丸組雄性小鼠跨騎、交尾及舔陰莖行為的潛伏期均有所縮短，跨騎、交尾及舔陰莖行為的發生頻率有所增加，但統計學上無顯著性差異。而蛇床子素組雄性小鼠跨騎潛伏期的縮短，跨騎及交尾行為發生頻率的增加均有統計學顯著或非常顯著性差異，表明蛇床子素的促進性功能作用優于陽性對照藥金匱腎氣丸。
蛇床子素能增加雄性小鼠附性器官的濕重。動物的附性器官重量的增加能在一定程度上反映出藥物的補腎壯陽作用及對性功能的增強作用。本發明觀察到50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組附睪濕重明顯增加，與對照組比較有統計學差異；100mg/kg劑量組睪丸溫重的增加與對照組比較也有統計學差異。
性激素也是與性功能密切相關的指標，提高血清SOD活力水平可促進性功能，此外，醫學上公認將SOD活力作為人體衰老的客觀指標之一。本發明還表明蛇床子素對性功能的增強作用是通過多種有利于機體的機制來實現的。
性激素也是與性功能密切相關的指標，蛇床子素能提高雄性小鼠血清睪酮的水平。用放免法測定血清睪酮含量，50mg/Kg劑量組雄性小鼠血清睪酮濃度較正常對照組增高，但無統計學意義。100mg/Kg劑量組雄性小鼠的血清睪酮濃度顯著增高，平均血清睪酮水平提高幅度高達47.25％，與對照組比較有統計學非常顯著性差異。
超氧歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)，是一種在人和動物體內廣泛分布的抗氧化酶類，它是體內氧自由基(O2-)的清除劑。近年來大量研究表明，大多數促進性功能藥物均可提高血清SOD活力水平，尤其是Cu.Zn-SOD活力水平；在人體內各組織中，性器官有著最高的SOD活力；性激活后，其體內SOD活力明顯增長；并且，體內SOD活力水平受與年齡、性別、性活力密切相關，因此，可將SOD活力水平作為衡量性功能強弱的客觀指標之一。蛇床子素能提高雄性小鼠血清SOD(超氧歧化酶)的活力水平。50mg/Kg劑量組和100mg/Kg劑量組雄性小鼠血清總SOD活力水平明顯增高，與對照組相比較，結果均有統計學非常顯著差異，其中50mg/kg劑量組尤其明顯，可使雄性小鼠血清內總SOD平均活力增幅高達99.99％，幾乎增長一倍；100mg/Kg劑量給藥組性小鼠血清內總SOD平均活力增幅也高達79.05％。
試驗表明本發明的化合物毒性很低，無明顯的毒性反應。
根據本發明還涉及蛇床子素作為活性成份和常規藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發明藥物組合物含有0.1-99％重量的蛇床子素。
本發明藥物組合物可根據本領域已知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將活性成分與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，制成可作為人藥使用的適當施用形式或劑量形式。
本發明的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。
本發明的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內注射和穴位注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發明的組合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。
為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。
例如，將本發明的組合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、pH調節劑等。這些輔料是本領域常用的此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發明藥用組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應，給藥途徑、給藥次數等，因此本發明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發明中藥學成分的使用劑量是本領域技術人員公知的。可以根據本發明藥用組合物中最后的制劑中所含有的實際有效藥物數量，加以適當的調整，以達到其治療有效量的要求，完成本發明的的目的。通常對體重約75公斤患者，所給化合物的日劑量為0.001mg/kg體重～500mg/kg體重，優選3mg/kg體重～30mg/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥，這受限于給藥醫生的臨床經驗以及給藥方案。
具體實施例方式
下面的實施例用來進一步說明本發明，但這并不意味著對本發明有任何限制。
一、安全性實驗實施例1按照急性毒性試驗規則，蛇床子素一次經口給藥未測出小鼠的LD50，因此改做其最大耐受量(MTD)。MTD試驗結果表明20只小鼠給藥后均無明顯的毒性反應，兩周內亦無死亡。因此，蛇床子素一次經口給藥的小鼠最大耐受量大于5.0g/kg，屬“實際無毒”。
二、藥效及藥理作用實驗實施例2 蛇床子素對雄性小鼠性行為的影響昆明種雄性小鼠(30-34g)與同種雌素化(皮下注射苯甲酸雌二醇20μg/只，48hr后使用)的雌鼠(30-34g)合籠4天(1雄+1雌)，使雄鼠獲得性經驗。第5天取出雌鼠，令雄鼠休息3天。雄鼠隨機分成三組(1)對照組，喂相應溶劑；(2)50mg/kg劑量組；(3)100mg/kg劑量組。每組7只，灌胃給藥，每天一次，連續10天。末次給藥后2hr檢測雄小鼠性行為。受試雄鼠放在一容器(直徑24cm，高24cm)中適應5分鐘，放入2只雌素化的雌鼠，通過閉路電視監測系統觀察15分鐘內雄性小鼠跨騎(包括跨騎潛伏期ML和跨騎頻率MF)、交尾(包括交尾潛伏期IL和交尾頻率IF)及舔陰莖(包括舔陰莖潛伏期LL和舔陰莖頻率LF)三種典型的性行為。
如表1-3所示，50mg/Kg口服劑量給藥可顯著縮短雄性小鼠跨騎、交尾及舔陰莖三種性行為的潛伏期，并顯著增高雄性小鼠三種性行為的發生頻率并提高其性行為的行為百分率；100mg/Kg口服劑量給藥可顯著增高雄性小鼠三種性行為的發生頻率；與對照組相比較，上述各項指標均有統計學顯著差異，表明蛇床子素有很強的增進雄性小鼠性功能的作用。
表1 蛇床子素對雄性小鼠跨騎行為的影響組 別 動物數ML(min) MF/15min M％對 照 7 8.81±4.344.71±3.19 10050mg/Kg 7 3.60±2.19*15.86±8.39**100100mg/Kg7 9.17±5.168.43±4.85*100*P＜0.05**P＜0.01與對照組相比較表2 蛇床子素對雄性小鼠交尾行為的影響組 別 動物數IL(min)IF/15minI％對 照 7 12.16±3.331.71±1.83 8050mg/Kg 7 6.12±2.30*7.29±2.65**100100mg/Kg7 12.00±3.264.86±5.81*100*P＜0.05**P＜0.01與對照組相比較表3 蛇床子素對雄性小鼠舔陰莖行為的影響組 別 動物數LL(min)LF/15min L％對 照 713.64±1.91 1.00±1.07 8050mg/Kg 77.08±3.78**5.86±4.82*100100mg/Kg713.10±2.21 3.29±4.95*80*P＜0.05**P＜0.01與對照組相比較實施例3 蛇床子素和陽性對照藥金匱腎氣丸對雄性小鼠性行為的影響昆明種雄性小鼠(30-34g)與同種雌素化(皮下注射苯甲酸雌二醇20μg/只，48hr后使用)的雌鼠(30-34g)合籠4天(1雄+1雌)，使雄鼠獲得性經驗。第5天取出雌鼠，令雄鼠休息3天。雄鼠隨機分成三組(1)對照組，喂相應溶劑；(2)金匱腎氣丸陽性對照組，劑量1.8g/Kg，(10×人劑量)；(3)蛇床子素組，劑量100mg/kg。每組7只，灌胃給藥，每天一次，連續10天。末次給藥后2hr檢測雄小鼠性行為。受試雄鼠放在一容器(直徑24cm，高24cm)中適應5分鐘，放入2只雌素化的雌鼠，通過閉路電視監測系統觀察15分鐘內雄性小鼠跨騎、交尾及舔陰莖三種典型的性行為。
如表4-6所示，在本實驗中金匱腎氣丸組雄性小鼠跨騎、交尾及舔陰莖行為的潛伏期均有所縮短，跨騎、交尾及舔陰莖行為的發生頻率有所增加，但統計學上無顯著性差異。而蛇床子素組雄性小鼠跨騎潛伏期的縮短，跨騎及交尾行為發生頻率的增加均有統計學顯著或非常顯著性差異，表明蛇床子素的促進性功能作用優于陽性對照藥金匱腎氣丸。
表4 蛇床子素和金匱腎氣丸對雄性小鼠跨騎行為的影響組 別動物數ML(min)MF/15min M％對 照7 10.77±3.282.71±3.1085.7金匱腎氣丸7 7.60±3.99 6.29±3.4585.71.8g/Kg蛇床子素0.1g/K7 4.11±3.04**8.80±4.49*100*P＜0.05**P＜0.01與對照組相比較表5 蛇床子素和金匱腎氣丸對雄性小鼠交尾行為的影響組 別 動物數IL(min)IF/15min I％對 照 7 13.47±2.000.86±1.12 42.9金匱腎氣 7 9.56±4.21 3.00±2.33 85.71.8g/Kg蛇床子素0.1g/Kg7 7.87±5.85 4.20±5.04*80*P＜0.05與對照組相比較表6 蛇床子素和金匱腎氣丸對雄性小鼠舔陰莖行為的影響組 別 動物數LL(min) LF/15min L％對 照 7 15.00±0.00 1.86±2.360金匱腎氣丸1.8g/Kg7 12.69±3.08 0.71±0.8842.9蛇床子素0.1g/K 7 12.44±3.18 1.00±1.1060實施例4 蛇床子素對雄性小鼠附性器官濕重的影響第(一)部分實驗中的對照組、50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組小鼠在檢測性行為后繼續給藥4天，第4天處死小鼠，取睪丸，副睪，精囊腺和包皮腺，除去周圍脂肪，立即在精密天平上稱取濕重。
動物的附性器官重量的增加能在一定程度上反映出藥物的補腎壯陽作用及對性功能的增強作用，如表7所示，本實驗觀察到50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組附睪濕重明顯增加，與對照組比較有統計學差異；100mg/kg劑量組睪丸溫重的增加與對照組比較也有統計學差異；50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組包皮腺的濕重也大于正常雄性小鼠，但無統計學差異；而精囊腺則對蛇床子素不敏感。
表7 蛇床子素對雄性小鼠性器官的影響動物 睪 丸 副 睪 精囊腺 包皮腺組 別 數 (mg/10g體重)(mg/10g體重) (mg/10g體重) (mg/10g體重)對 照 767.67±11.1618.62±2.7526.99±6.8231.42±11.3950mg/Kg 774.41±7.58 26.46±1.76* 25.64±3.9736.42±6.79100mg/Kg787.02±2.31*26.67±1.37* 24.39±4.9739.46±9.51*P＜0.05與對照組相比較實施例5 蛇床子素對雄性小鼠血清睪酮水平的影響第(一)部分實驗中的對照組、50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組小鼠在檢測性行為后繼續給藥4天，第4天處死小鼠，眼球取血分離血清，用放免法測定血清睪酮含量。50mg/Kg劑量組雄性小鼠血清睪酮濃度較正常對照組增高，但無統計學意義。100mg/Kg劑量組雄性小鼠的血清睪酮濃度顯著增高，平均血清睪酮水平提高幅度高達47.25％，與對照組比較有統計學非常顯著性差異。性激素也是與性功能密切相關的指標，因而，蛇床子素對性激素分泌的改善也是其改善和增強性功能的原因之一。
表8 蛇床子素對雄性小鼠血清睪酮含量的影響組 別 動物數睪酮含量(ng/dl)對 照 7 139.67±22.5450mg/kg 7 170.96±44.16100mg/kg7 205.67±28.69******P＜0.005與對照組相比較實施例6 蛇床子素對雄性小鼠血清SOD(超氧歧化酶)活力水平的影響第(一)部分實驗中的對照組、50mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組小鼠在檢測性行為后繼續給藥4天，第4天處死小鼠，眼球取血分離血清，測定血清SOD活力(包括Cu.Zn-SOD活力、Mn-SOD活力和總SOD活力)。
如表9所示，50mg/Kg劑量組和100mg/Kg劑量組雄性小鼠血清總SOD活力水平明顯增高，與對照組相比較，結果均有統計學非常顯著差異，其中50mg/kg劑量組尤其明顯，可使雄性小鼠血清內總SOD平均活力增幅高達99.99％，幾乎增長一倍；100mg/Kg劑量給藥組性小鼠血清內總SOD平均活力增幅也高達79.05％。由表9可知，蛇床子素對雄性小鼠血清內總SOD活力水平的增高作用主要是通過增高其血清內Cu.Zn-SOD活力水平來實現的，其血清內Mn-SOD活力水平基本無變化。
表9 蛇床子素對雄性小鼠血清SOD的影響組 別 總SOD活力(NU/ml)Cu.Zn-SOD活力(NU/ml)Mn-SOD活力(NU/ml)對 照 157.14±30.45 110.21±22.15 46.93±8.0750mg/Kg 314.28±38.06***271.36±28.87***42.92±11.87100mg/Kg281.36±41.65***236.17±15.19***45.19±9.41***P＜＜0.005，與對照組相比較
權利要求
1.如通式(I)所示的蛇床子素在制備預防和治療性功能障礙的藥物中的應用。
2.一種預防和治療性功能障礙的藥物組合物，其特征在于，含有有效劑量的如通式(I)所示的蛇床子素，以及藥效學上可接受的載體。
3.根據權利要求2的任一藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統。
全文摘要
本發明公開了如通式(I)所示的蛇床子素在制備預防和治療性功能障礙的藥物中的應用。
文檔編號A61K31/366GK1605337SQ200310100219
公開日2005年4月13日 申請日期2003年10月10日 優先權日2003年10月10日
發明者費仁仁, 陳若云, 朱海波, 張嶺 申請人:中國醫學科學院藥物研究所