增加抗腫瘤活性的化療藥物的聯用的制作方法

專利名稱：增加抗腫瘤活性的化療藥物的聯用的制作方法
技術領域：
本發明涉及丁酸新戊酰氧甲酯，在商業上被稱為PIVANEX，與化療藥物聯合使用，還涉及包含它們的藥物組合物以及治療哺乳動物的方法。本發明證明包含氧基亞烷基的化合物和化療藥物聯用增加了對大量不同癌細胞的抗腫瘤活性。
相關領域的描述 丁酸是發現于黃油中的濃度高達約5％的非毒性天然產物。在消化系統中，其作為微生物發酵產物而分泌。在結腸中其可達到mM濃度。已知丁酸，無論是游離形式或更常見的其堿金屬鹽形式(“丁酸/鹽”)，顯示了抗瘤活性。特別地，這一活性表現為對瘤細胞的毒性、抑制細胞增殖并誘導細胞分化的形式。這樣的活性已在體外和體內得到證明。
因此，例如在多種體外生長的腫瘤細胞，已報道了丁酸/鹽因誘導形態學和生物化學的改變而產生的抗腫瘤活性。一些人源受作用細胞的代表性例子是成神經細胞瘤[Prasad和Kumar，Cancer 361338(1975)]白血病[Collins等Proc.Natl.Acad.Sci.752458(1978)]；結腸癌[Dexter等Histochern.16137(1984)]以及Augeron和Laboisse，Cancer Res.443961(1984)]；胰腺癌[Mclntyres等，Euro.J.Cancer Clin.Onc.20265(1984)]；腎腫瘤細胞[Heifetz等，J.Biol.Chem.2566529(1981)]；乳腺癌[Stevens等，Biochem.Biophys.Res.Coinm.119132(1984)]；前列腺癌[Reese等，Cancer Res.452308(1985)]；星形細胞瘤[McIntyre，J.Cell.Sci.11634(1971)]；人表皮樣癌[Marcher et al，Exp.Cell.Res.11795(1978)]。此外，在本發明人進行的所有體外測試中，作用于從骨髓性白血病患者分離出的白血病細胞上，發現丁酸/鹽是最強的細胞毒劑和細胞分化劑，例如，比維甲酸、1，25-二羥基維生素D以及阿糖胞苷更為有效。
丁酸/鹽體內應用的報道實例如下。成神經細胞瘤患者接受高達10g/天的劑量，但并未產生臨床上可檢測的毒性[Prasad，Life Sci.271351(1980)]。使用0.5g/kg/天的劑量治療頑固性急性骨髓性白血病兒童的復發，致使部分地臨時緩解且無可檢測毒性作用的[Novogrodsky等Cancer 519(1983)]。此外，使用1g/kg/天持續10天和再使用1.5g/kg/天持續6天，本發明人治療了急性骨髓性白血病患者的復發；臨床隨訪顯示無副反應[Rephaeli等，Blood68192a(1986)]。高劑量丁酸/鹽的臨床試驗并沒有導致毒性。
在迄今未公布的工作中(由M.Shaklai和E.Januszewiez進行的)，通過抑制從正常骨髓和白血病患者外周血中獲得的培養于瓊脂糖中的菌落形成單元、粒細胞和巨噬細胞(CFU-GM)證明了丁酸/鹽的選擇性。
Suzanne M.Cutts等，Cancer Research 61，8194-8202描述了多柔比星(Adriamycin)與丁酸新戊酰氧甲酯同時接觸細胞或施用多柔比星長述18小時后再施用丁酸新戊酰氧甲酯時的協同作用。作者報道了相反順序的加入導致拮抗作用。
Elena di Gennaro等，Abstract Number3636 in the Proceedings of theAACR，Volume 44，March 2003指出使用組蛋白脫乙酰酶抑制劑SAHA預處理后接著給予雷替曲塞或5FU產生了相互協同的增效作用。SAHA是辛二酰苯胺異羥肟酸。A.Patnaik等Clinical Cancer Research Vol.8，2142-2148，July2002報道了體外應用的AN-9(丁酸新戊酰氧甲酯)和多西他賽、吉西他濱或順鉑對于多種細胞系具有強于加合的細胞毒作用，但沒有討論這些化療藥物的加入順序。
發明簡介 本發明提供了治療癌癥特別是治療哺乳動物體內癌癥的方法，包括連續地給予治療有效量的包含組蛋白脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑的組合物，該抑制劑包含氧基亞烷基，隨后給予其它化療藥物。在本發明的實例中，該包含氧基亞烷基的HDAC抑制劑是丁酸新戊酰氧甲酯。令人驚奇地，并且與所報道的多柔比星的實踐相反，發現了這一加入順序導致強于加合的效能。
我們已發現對人或動物體內癌癥或其它腫瘤生長的大于加合抑制發生在連續給予治療有效量的包含氧基亞烷基的化合物并隨后給予某些其它化療藥物和/或任選針對癌變部位的其它治療的過程中。我們還觀察到如果反轉給予的順序，出現拮抗(反加合，antiadditive)作用。該增強的抑制作用在較高劑量的包含氧基亞烷基的化合物中尤為顯著，特別是哺乳動物中Pivanex的劑量在超過2g/m2/天尤其是約為3、4、5、6或7g/m2/天，或者腫瘤細胞中Pivanex超過150、160、170、180、190、200、210、220、230、240或250μM。這些增加的劑量或濃度的目的是實質減少對接觸Pivanex的需求，或者說減少Pivanex誘導期(下文中將更詳細地描述和定義)，該誘導期使腫瘤細胞對化療藥物的作用敏感。應用這些增加的劑量或濃度將使得Pivanex誘導期降至低于60、48、36、24、12、6、4以及略高于2小時。
更具體地，本發明提供了抗癌的治療方法，包括藥學載體和包含氧基亞烷基的化合物，隨后繼續使用其它化療藥物進行治療，和/或任選如此處所定義的其它癌癥治療方法伴隨治療該癌癥的方法一起使用。
本發明還還涉及HDAC抑制劑在制備增加所述HDAC抑制劑抗腫瘤活性的化療制劑中的應用，包括在所述的制備中應用微管蛋白作用劑、DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑和鉑絡合物等化療藥物，所述制劑適宜在誘導期內給予HDAC抑制劑，隨后給予所述的化療藥物。
本發明的藥物組合物可適合于口服、腸胃外或直腸給予、局部以及其它方式包括尿道內、陰道內、膀胱內等方式給藥，并可以制成單位劑型，這些均是本領域技術人員所熟知的。
本發明還涉及在動物體內治療腫瘤或產生免疫應答調節效果的方法，其包括對腫瘤部位連續給予有效的抗腫瘤發生或免疫應答調節量的包含氧基亞烷基的化合物，隨后給予一種或多種化療劑，和/或任選其它的治療。本發明還包括使用包含氧基亞烷基的化合物與其它化療劑一起用于制備在動物體內治療腫瘤或產生免疫調節應答的藥物。此處描述的化合物在人和非人動物體內均有效。
本發明的其它目的、特點和優勢將在下面的描述中進行闡述，或者，從描述中是顯而易見的或可以通過實踐本發明而獲知。本發明的目的、特點和優勢可通過特別是在附加權利要求中所指出的方法和組合而實現并獲得。
發明詳述 PIVANEX(丁酸新戊酰氧甲酯)是包含氧基亞烷基的化合物，是丁酸的新戊酸酯衍生物并可從Titan Pharmaceuticals，Inc.購得。
在一個實施方案中，本發明提供一種通過相繼應用包含氧基亞烷基的化合物與某些化療劑的治療方法而增強抗腫瘤活性的方法。在一個實施方案中，包含氧基亞烷基的化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
特別地，化療劑選自DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑、微管蛋白作用劑和鉑絡合物。
在一個實施方案中，其治療活性可有效地治療、預防或改善癌癥和其它增生性疾病。相繼給藥的本發明的化合物特別適用于治療、預防或改善癌癥或其它增生性紊亂的效果，其在受這些疾病折磨的對象中起抗增生或分化劑的作用。這些紊亂包括但不限于白血病比如急性前髓細胞白血病、急性髓細胞樣白血病、急性骨髓單核細胞性白血病、其它骨髓增生異常綜合征，多發性骨髓瘤比如但不限于乳腺癌、子宮頸癌、黑素瘤、結腸癌、鼻咽癌、非Hodgnins淋巴瘤(NHL)、卡波濟肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、其它皮膚惡性腫瘤、畸胎癌、T細胞淋巴瘤、肺癌、神經膠質瘤、成神經細胞瘤、外周神經外胚層瘤、橫紋肌肉瘤以及前列腺瘤和其它實體瘤。該包含氧基亞烷基的化合物可以對非癌細胞具有抗增生效果，可用于治療良性腫瘤和其它增生性疾病比如牛皮癬。
在另一個實施方案中，該治療活性對治療或改善白血病、鱗狀細胞癌和成神經細胞瘤有效。
可以由本發明的方法特別有效地治療的癌癥包括哺乳動物癌癥，尤其是人類癌癥。由本發明的方法特別易于治療的癌癥是對凋亡誘導劑敏感的癌癥。這些癌癥包括乳腺癌、結腸和直腸癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌以及淋巴瘤(lymphoinas)、骨髓瘤和白血病。使用本發明相繼治療的方法特別易于治療的癌癥括乳腺癌、卵巢癌、結腸直腸癌以及非小細胞肺癌。
在生物學評價中，已經證明丁酸新戊酰氧甲酯是一種非myeloablative和非髓抑制的劑。不同于傳統的癌癥療法，該包含氧基亞烷基的化合物已經顯示會誘發癌細胞中基因表達的改變，引起它們進行凋亡。丁酸新戊酰氧甲酯作為分化劑在培養物中具有抗多種腫瘤細胞型的活性。
在治療肺癌和頑固性的惡性肝轉移的初步的I/II臨床試驗中，丁酸新戊酰氧甲酯顯示了良好的耐受性。
在組織培養物中進行了與化療劑相互作用的丁酸新戊酰氧甲酯劑量和給藥方案的檢測以有利于臨床計劃。
已經發現包含氧基亞烷基化合物對腫瘤細胞的生長抑制和細胞毒作用是時間和濃度依賴性的。在腫瘤細胞接觸濃度高于125μM的丁酸新戊酰氧甲酯6小時后或使用濃度高于25μM的丁酸新戊酰氧甲酯處理72小時后觀察到細胞毒性，其是腫瘤細胞系依賴性的。
在使用劑量低至5至25μM的丁酸新戊酰氧甲酯處理72小時后觀察到腫瘤細胞的形態變化和生長抑制。所觀察到的與更加分化的表型相一致的形態變化促進了接觸丁酸新戊酰氧甲酯后癌基因表達的研究。腫瘤細胞接觸劑量為10-50μM的丁酸新戊酰氧甲酯72小時導致p53、c-myc和ras的顯著抑制。P53、c-myc和ras表達的改變與化學耐藥性相關，暗示了使用足以抑制癌基因表達但卻無直接細胞毒性的劑量的PIVANEX進行預處理可以增強細胞毒藥物的作用，并因此與目前的化學療法起加合或協同作用。
使用丁酸新戊酰氧甲酯預處理腫瘤細胞時的協同作用經人癌細胞得以證明。人T24膀胱和A549肺癌細胞接觸濃度不斷增加的丁酸新戊酰氧甲酯6或72小時，接著接觸各種化療劑。使用較低劑量的丁酸新戊酰氧甲酯處理6小時沒有增強這些藥物的細胞毒性，但是使用丁酸新戊酰氧甲酯處理這些細胞系72小時，即使化療劑的濃度低至沒有直接的細胞毒性仍增強了誘導的藥物的細胞毒性。在較高劑量下，如上面討論的丁酸新戊酰氧甲酯的較短的誘導期后將顯示伴隨相繼給藥方案的細胞毒的增加。
評價了Pivanex單獨應用和與標準化療劑多西他賽聯合應用對人非小細胞肺癌細胞系、H522和NCI-H23的生長抑制活性。細胞接觸多西他賽24小時后使用Pivanex處理3天，或者細胞接觸Pivanex 3天后使用多西他賽處理24小時。通過使用MTS四唑活體染色的標準技術判斷在4天的實驗末期的細胞生長抑制。在等效線圖解法分析儀上記錄各種比例的兩種藥物與細胞生長的關系，從而確定后繼的藥物治療是否具有加合、協同作用或弱于加合的作用。Pivanex后接著使用多西他賽的順序產生的數據模式顯示這兩種藥物之間的加合或協同相互作用。相反，多西他賽后接著使用Pivanex的順序產生了不同的模式，期顯示弱于加合甚至拮抗的作用。在H522和NCI-H23細胞中的順序研究的結果支持的優選順序為起始使用Pivanex接著使用多西他賽處理。
相繼聯合治療 包含氧基亞烷基的化合物與一種或多種化療藥物聯合用于治療癌癥或腫瘤。這些聯合相繼給予，其中包含氧基亞烷基的化合物在給予化療藥物之前給予。
該相繼治療方案提供了在誘導期給予包含氧基亞烷基的化合物，其后給予哺乳動物或宿主細胞化療有效量的微管蛋白作用劑、DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑和鉑絡合物組成的化合物。
包含氧基亞烷基的化合物可以在給予化療藥物之前從約多于2小時、優選多于4小時、更優選多于6小時至120小時內的誘導期給予。在本發明的一個實施方案中，該包含氧基亞烷基的化合物可以在給予化療藥物之前約24小時至96小時的誘導期給予。
在另一個實施方案中，丁酸新戊酰氧甲酯在包含氧基亞烷基的化合物之后約48至約84小時的誘導期給予。在本發明的另一個實施方案中，丁酸新戊酰氧甲酯在給予化療藥物之前約54至78小時的誘導期給予。在本發明的另一個實施方案中，該誘導期減至接觸Pivanex 48、36、24、12、6、4以及略長于2小時。
可與包含氧基亞烷基的化合物一起使用的化療藥物通常被分組為DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑和鉑絡合物。各組化療藥物還可通過活性或化合物的類型細分。與包含氧基亞烷基的化合物聯合使用的化療藥物包括這些組的某些成員。參見Dorr等人，Cancer Chemotherapy Handbook，第2版，15-34頁，Appleton&Lange(Connecticut，1994)，對化療藥物及其給藥方法進行了詳細的討論，該文獻在此全部引入作為參考。
DNA-干擾劑包括烷化劑例如卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、環磷酰胺、達卡巴嗪或替莫唑胺，基于嘧啶的核苷比如吉西他濱或基于嘌呤的核苷氟達拉濱。達卡巴嗪是可選用治療多黑色素瘤的藥物。
鉑絡合物包括順鉑、卡鉑和奧沙利鉑。
微管蛋白作用劑通過結合微管蛋白上的特定位點而起作用，微管蛋白聚合形成細胞微管，微管是關鍵的細胞結構單元。當該作用劑與結合相連時，由于所用藥物的不同，微管蛋白被穩定或解聚。微管蛋白作用劑包括秋水仙素、長春新堿、長春堿、長春瑞賓、紫杉醇和多西他賽。
在本發明的一個實施方案中，包含氧基亞烷基的化合物與下列化療藥物一起給藥順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、吉西他濱、紫杉酚、多西他賽和紫杉醇。在本發明的另一個實施方案中，與化療藥物一起給予的氧基亞烷基化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
本發明直接涉及通過相繼給予患者或宿主細胞有效增加治療活性的治療量包含氧基亞烷基的HDAC抑制劑以及一定量的化療藥物而增加某些化合物治療活性。通常，治療活性的增加意味著與正常地不存在化療聯合時相比，特定化合物(即包含氧基亞烷基的化合物和/或化療藥物)的治療效果將會更強、療效增加。增加的治療活性包括活性的增強。此外，相繼給予化療藥物和本發明特定的化合物還可導致協同作用，并允許給予較不存在包含氧基亞烷基的化合物時實現相同療效所需的劑量更低的化療藥物。
定義 此處所用的“藥學上可接受的”組分是適用于人和/或動物而無不適當相反副作用(比如毒性、刺激和變態反應)，具有合理的利益/危險比。
此處所用的“包含氧基亞烷基的化合物”是具有式(I)、(II)和(III)結構的化合物 (I)X-CH2-CHX-CHX-C(＝O)-O-Z (II)CH3-CO-CH2-C(＝O)-O-Z (III)CH3-CH2-CO-C(＝O)-O-Z 其中X是H，或只有一個X可以是OH；Z是-CHR-O-(O＝)C-R′，R表示氫或烷基，R′表示烷基、氨基烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、芳烷氧基和芳氧基，其中芳基自身以及芳烷基、芳烷氧基和芳氧基中的芳基分別選自如下亞組(a)和(b)，其中(a)是未取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，以及(b)選自苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，各基團分別被至少一個選自烷基、烷氧基或鹵素的基團取代，條件是在(I)中當X是H且R′是丙基時，那么R是包含至少三個碳原子的烷基。該包含氧基亞烷基的化合物包括丁酸新戊酰氧甲酯。
此處所用的術語“安全有效量”是指當按照本發明的方法使用時，足以產生所需的治療應答而無不適當相反副作用(比如毒性、刺激或變態反應)具有合理的利益/危險比的組分的量。“化療有效量”意指有效地產生所需化療應答的本發明化合物的量。例如，有效延緩癌癥、肉瘤或淋巴瘤生長或導致其或使癌收縮或預防轉移，或增加哺乳動物存活時間的量。特定的安全有效量或化療有效量隨著一些因素而改變，這些因素如所治療的特定病情、患者的身體條件、所治療的哺乳動物或其它動物的類型、治療的延續時間、并行治療(如果存在)的性質以及所用的特定制劑和化合物或其衍生物的結構。
此處在一些例子中所用術語“mg/m2”或“g/m2”，取決于個別的化療藥物，可以指每日劑量或在治療或治療期或治療周期的過程中給予的劑量。在少許例子中，劑量為mg/kg/天的形式(例如，對于達卡巴嗪而言)。在大量例子中，化療藥物在治療過程中的某些天或時期給予。給予藥物的這些天或時期之后通常跟隨著不給藥的休藥期。例如，多西他賽的常規劑量是每三周75mg/m2。口服藥替莫唑胺的典型劑量是在28天內，第一個五天給藥的總劑量為750mg/m2，接著為23天的休藥期。丁酸新戊酰氧甲酯的常規劑量在治療的每天是2.5、3、4、5、6、7g/m2。
“藥學鹽”是已通過制備化合物的酸或堿鹽修飾的化療藥物的鹽。例子包括但不限于，堿性殘基比如胺的礦酸或有機酸鹽；酸性殘基比如羧酸的堿性或有機鹽，等等。藥學上可接受的鹽包括但不限于，氫的鹵化物、硫酸鹽、methosulfates、甲基磺酸鹽、甲苯磺酸、硝酸鹽、磷酸鹽、馬來酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽等等。本發明化合物的藥學上可接受的鹽可以通過這些化合物的游離酸或堿形式與化學計量或更大的量的適當的堿或酸在水中或有機溶劑中或兩者的混合物中反應而制備；通常，優選非水介質如如醚、乙酸乙酯、乙醇異丙醇或乙腈。本發明的鹽還可通過例如離子交換而制備。適宜的鹽列表于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，1418頁或The Merck Index，第十三版，2001，MerckResearch Laboratories Division of Merck&Co.Inc.出版，第MISC-22和MISC-23頁中，這些文獻在此全部引入作為參考。藥學上可接受的鹽還包括氨基酸鹽比如精氨酸、賴氨酸、谷氨酸以及天冬氨酸鹽。
如此處所用的“藥物載體”是藥學上可接受的溶劑、懸浮劑或媒介(vehicle)，用以將與其它化療藥物連用的包含氧基亞烷基的化合物釋放于動物或人。該載體可以是液體或固體，并以所設想的計劃的給藥方式進行選擇。脂質體也是一種藥物載體。
如此處所用的“癌癥”是指在哺乳動物體內發現的所有類型的癌癥或腫塊或惡性腫瘤，包括癌和肉瘤。腫瘤的例子包括腦癌、乳腺癌、胰腺癌、宮頸癌、結腸癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、間皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宮癌和成神經管細胞瘤。
術語“白血病”廣泛地指進行性的、血液形成的器官的惡性疾病，且特征通常在于白細胞和其血液及骨髓中的前體的扭曲增生和發展。白血病在臨床上通常基于如下分類(1)急性或慢性疾病的病程和特征；(2)所涉及細胞的類型；髓樣細胞(骨髓生成的)、淋巴樣細胞(淋巴生成的)或單核細胞；以及(3)血液-白血病或非白血病(亞白血病(subleukemic))中異常細胞數量的增加或不增加。P388白血病模型廣泛地被認為可預測體內抗白血病活性。因此，本發明包括治療白血病的方法以及，優選地，治療急性非淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性早幼粒細胞白血病、成人T細胞白血病、非白血性白血病、leukocythemic白血病、basophylic白血病、母細胞白血病、牛白血病、慢性髓細胞白血病、白血病膜皮、胚芽白血病、嗜酸性細胞白血病、Gross氏白血病、毛細胞白血病、血小板白血病、血胚細胞白血病、組織細胞白血病、干細胞白血病、急性單核細胞白血病、白細胞減少的白血病、淋巴性白血病、淋巴母細胞白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴白血病、淋巴樣白血病、淋巴肉瘤細胞白血病、肥大細胞白血病、巨核細胞白血病、淋巴肉瘤細胞白血病、小原粒型白血病、單核細胞白血病、原始粒細胞白血病、髓細胞性白血病、髓樣粒細胞白血病、粒單核細胞白血病、Naegeli白血病、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞白血病(plasmacytic leukemia)、前髓細胞白血病、Rieder細胞白血病、Schilling’s白血病、干細胞白血病、亞白血病的(subleukemic)未分化細胞白血病的方法。
術語“肉瘤”通常是指由類似的胚胎結締組織物質組成的腫瘤，且通常由植入原纖維的接近的致密的細胞或同質物質組成。可以使用包含氧基亞烷基的化合物和化療藥物治療的肉瘤包括軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、Abemethy′s肉瘤、脂肪肉瘤、脂肉瘤(liposarcoma)、軟組織腺泡狀肉瘤、成釉細胞肉瘤、葡萄樣肉瘤、綠色瘤、絨膜癌、胚胎肉瘤、Wilins′腫瘤肉瘤、子宮內膜肉瘤、間質肉瘤、尤因氏肉瘤、筋膜肉瘤、成纖維細胞的肉瘤、巨細胞肉瘤、綠色肉瘤、何杰金氏肉瘤、特發性多發性色素沉著出血性肉瘤、B細胞免疫母細胞肉瘤、淋巴瘤、免疫母細胞肉瘤、晏森氏肉瘤、卡波濟氏肉瘤、庫普弗細胞肉瘤、血管肉瘤、白血病性肉瘤、惡性間葉瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、網狀細胞肉瘤、勞氏肉瘤、漿液囊性肉瘤、滑膜肉瘤以及毛細血管擴張性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。
術語“黑色素瘤”用于意指源于皮膚及其它器官黑素細胞的系統的腫瘤。可以使用包含氧基亞烷基的化合物和化療藥物治療的黑色素瘤包括例如阿克拉爾-雀斑的黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、良性青年性黑色素瘤、Cloudman氏黑素瘤、S91黑素瘤、硬化-帕西黑素瘤、青年性黑色素瘤、惡性小痣黑素瘤、惡性黑色素瘤、小節的黑素瘤、subungal黑素瘤以及淺表擴展性黑素瘤。
術語“癌”是指由傾向于浸潤周圍組織并引起轉移的上皮細胞構成的惡性新生長瘤。可以使用包含氧基亞烷基的化合物和化療藥物治療的例示性癌包括例如腺泡癌、腺泡狀癌(acinous carcinoma)、囊性腺樣癌、腺樣囊性癌、腺癌、腎上腺皮質癌、蜂窩狀癌、肺泡細胞癌、基底細胞癌、basocellulare癌、類基底細胞癌、基底鱗狀細胞癌、細支氣管肺泡癌、細支氣管癌、支氣管癌、髓樣癌、膽管細胞癌、絨膜癌、膠樣癌、粉刺癌、子宮體癌、篩狀癌、鎧甲狀癌、皮膚癌、柱狀癌、柱狀細胞癌、管癌、硬癌、胚胎性癌、髓樣癌(encephaloid carcinoma)、epiermoid癌、腺樣上皮細胞癌、外植癌、潰瘍性癌、硬癌(carcinoma fibrosum)、膠樣癌(gelatiniform carcinoma)、凝膠狀癌(gelatinous carcinoma)、巨細胞癌(giant cell carcinoma)、巨細胞癌(carcinomagigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒層細胞癌、發母質癌、多血癌、肝細胞癌、Hurthie細胞癌、粘液癌、hypemephroid癌、幼稚的胚胎性癌、原位癌(carcinomain situ)、表皮內癌、上皮內癌、克羅姆佩柯赫爾氏腫瘤癌、庫爾契茨基氏細胞癌、大細胞癌、豆狀癌(lenticular carcinoma)、豆狀癌(carcinoma lenticulare)、脂肪瘤癌、淋巴上皮癌、髓樣癌(carcinomamedullare)、髓樣癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、軟癌、粘液癌(carcinomamucosum)、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液瘤樣癌、鼻咽癌、燕麥細胞癌、骨化性癌(carcinoma ossificans)、類骨質癌(osteoid carcinoma)、乳頭狀癌、門脈周癌、原位癌、鱗狀細胞癌、粉刺癌、腎的腎細胞癌、貯備細胞癌、梭形細胞癌、sclmeiderian癌、硬癌、陰囊癌、印戒細胞癌、單純癌、小細胞癌、馬鈴薯狀癌、球狀的細胞癌、繩捆癌、癌spongiosum、鱗狀細胞癌、鱗狀細胞癌、線癌、血管擴張性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管擴張性癌(carcinoma telangiectodes)、轉移細胞癌、結節性皮癌(carcinoma tuberosum)、結節性皮癌(tuberous carcinoma)、疣狀癌以及絨毛狀癌。
其它可使用本發明的包含氧基亞烷基的化合物治療的癌癥包括例如，何杰金病、非Hodgliin′s淋巴瘤、多發性骨髓瘤、成神經細胞瘤、乳腺癌、ovanan癌癥、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發性血小板增多、伯宏球蛋白血、小-細胞肺腫瘤、原發腦腫瘤、胃癌、結腸癌、惡性的胰腺的insulanoma、惡性的類癌瘤、膀胱癌癥、惡變前的皮膚損害、睪丸癌癥、淋巴瘤、甲狀腺癌、成神經細胞瘤、食道癌癥、泌尿生殖道癌癥、惡性的高鈣血癥、子宮頸的癌癥、子宮內膜的癌癥、腎上腺皮層的癌癥以及前列腺癌癥。
如此處所用的“化療藥物”包括但不限于DNA-干擾劑或烷化劑，比如某些嘧啶或嘌呤核苷、基于鉑的細胞毒藥物以及微管蛋白作用劑。本發明的“化療藥物”的例子包括但不限于順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、紫杉醇、多西他賽、吉西他濱和氟達拉濱。
如此處所用“聯合治療”或“添加治療(adjunct therapy)”意指給予需要藥物的患者另一種治療該疾病的藥物與包含氧基亞烷基的化合物聯用進行治療。該聯合治療是相繼治療，其中首先使用包含氧基亞烷基的化合物治療患者，例如丁酸新戊酰氧甲酯，然后使用一種或多種其它化療藥物治療。
術語“誘導期”意指期間基本上除了給予包含氧基亞烷基的化合物外不給予其它化療藥物的化療治療期。該句中術語“基本上除了”意指在誘導期將給予不超過10％的其它化療藥物，優選不超過5％，最優選0％的其它化療藥物。該誘導期使所治療的腫瘤細胞敏感，以變得更易于接受誘導期后給予的其它化療藥物的化療。其理解為，在誘導期給予的包含氧基亞烷基的HDAC抑制劑不限于恒定的日劑量而可包括給予可變劑量的HDAC抑制劑。相似地，誘導期后給予的其它化療藥物的劑量可以是恒定的或可變的。本文中術語“可變”包括除恒定劑量外所有的劑量變化。這意味著，例如劑量可以從誘導期的第1天至第2天或該誘導期后增加或減少。
術語“組蛋白”描述高堿性多肽，其被分類為富含賴氨酸、輕微地富含賴氨酸以及富含精氨酸。許多堿性氨基酸集聚于氨基末端尾部。它們是高度多陽離子的并與DNA多陰離子骨架相互作用以形成不帶電的核蛋白。組蛋白參與維持染色體的構成材料-染色質所必需的相互作用。組蛋白及其功能更詳細地描述于Thomas M.Devlin Textbook of Biochemistry with ClinicalCorrelations，Wiley-Liss，1992，637、639-641頁中，該文獻在此全部引用作為參考。
術語“組蛋白脫乙酰化酶抑制劑”或“HDAC”抑制劑描述了一類阻礙組蛋白脫乙酰化的分子。組蛋白的乙酰化將導致組蛋白的多陽離子特性中和從而導致染色質的基本結構單元-核小體的部分打開。這導致更為松弛的DNA構型，使得轉錄元件靠近DNA并促進基因表達。“HDAC抑制劑”在乙酰化期保留組蛋白并誘導多種人癌細胞生長停止和凋亡。HDAC抑制劑更詳細地描述于Paul A.Marks等Curr Opiiz Qicol 2001，13477-483，2001中，該文獻在此全部引入作為參考。
本發明描述的所有特征、特性和范圍，無論是在實施方案中、無論作為優選與否描述的，均可與其它聯合。例如，HDAC抑制劑的優選特征或劑量范圍可以與此處所描述的第二化療藥物更廣泛定義的并非優選特征或劑量范圍聯合。
包含氧基亞烷基的化合物與一種或多種化療藥物的聯合通過可任何可用于藥物聯合的常規方法給藥，可作為單獨藥物或與其它藥物的聯合給藥。與包含氧基亞烷基的化合物一起用于治療癌癥、腫瘤、白血病或其它相關疾病的化療藥物的用量和種類將根據患者的反應和生理狀況、副作用的類型和嚴重程度、所治療的疾病、優選的給藥方法、患者的預后或其它類似的因素而改變。
這里包含氧基亞烷基的化合物與其它化療藥物聯合使用，包含氧基亞烷基的化合物與其它藥物的比例將根據所需的治療效果、觀察到的聯合副作用或醫學領域技術人員已知的其它這樣的考慮而改變。通常，包含氧基亞烷基的化合物與其它治療藥的比例在基于重量的約0.5％∶99.5％至約99.5％∶0.5％之間。
在治療癌癥、腫瘤或其它疾病的其它藥物之前給予包含氧基亞烷基的化合物的用量、包含氧基亞烷基的化合物和其它藥物各自的劑量以及給藥方案可以改變。相繼治療可以在合理的時間內在完成第一治療之后開始第二治療之前的誘導期范圍內。
給予PIVANEX的劑量范圍從約0.01g/m2/天至約10g/m2/天，高于2、3、4、5、6或7g/m2/天。通常該劑量范圍在約0.1g/m2/天至約5g/m2/天。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的紫杉醇的給藥劑量范圍是約10mg/m2至200mg/m2每療程之間。優選該劑量范圍是約20mg/m2/天至約150mg/m2之間。The Physicians Desk Reference，2003，2193頁提供了其它的劑量指導(該文獻在此全部引入作為參考)。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的吉西他濱給藥劑量范圍是高達10000mg/m2每療程，該療程長達12周。在此范圍內，適當的劑量范圍可以約是100mg/m2至8000mg/m2。The Physician′s Desk Reference，2003，第57版，1837頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的吉西他濱給藥方案超過30′給予1000mg/m2，每周一次長達7周，接著一周的休藥期，接著在四周內三個連續周中每周一次進行治療。吉西他濱是一種選擇用于治療胰腺癌、非小細胞肺癌及相關疾病的藥物。優選靜脈內途徑給藥。該產品可以用于靜脈內給藥的200mg及1g鹽酸鹽的小瓶提供。
紫杉酚的劑量范圍將在10mg/m2至500，優選40至300mg/m2每療程。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的多西他賽的給藥劑量范圍是約10mg/m2至200mg/m2每療程之間，優選50mg/m2至150mg/m2。更優選該劑量約為60mg/m2至100mg/m2。。The Physician′s Desk Reference，2003，773頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的多西他賽治療乳腺癌包括轉移乳腺癌的給藥方案每三周作為1小時輸液給予100mg/m2。優選的非小細胞肺癌的治療方案在60mg/m2至100mg/m2范圍內，更優選每三周在超過1小時靜脈給予75mg/m2。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的卡鉑的有效劑量范圍是約1mg/m2至約1000mg/m2每療程之間。卡鉑的優選劑量約為100mg/m2至約500mg/m2每療程之間。The Physician′s Desk Reference，2003，1126頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的卡鉑給藥方案每四周第1天360mg/m2或應用如第1129頁描述的Caivert公式。該產品可以50、150和450mg靜脈內輸液的單一劑量小瓶提供。卡鉑是選擇治療各種形式的卵巢癌包括卵巢carcinoma及相關疾病的一種藥物。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的順鉑的有效劑量范圍是約1mg/m2至約300mg/m2每療程之間。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的奧沙利鉑的有效劑量范圍是約10mg/m2至約250mg/m2每療程之間。The Physician′s Desk Reference，2003，2999頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的奧沙利鉑給藥方案每兩周在超過120′靜脈內給予的85mg/m2。奧沙利鉑是選擇治療結腸直腸癌或直腸癌或相關疾病的一種藥物。該產品以50或100mg的小瓶提供。
與包含氧基亞烷基的化合物聯合的達卡巴嗪的劑量范圍是每10天約0.5至10mg/m2，優選1至8mg/m2之間。The Physician′s Desk Reference，2003，885頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的達卡巴嗪給藥方案2至4.5mg/kg/天，在相連10天內給藥。該治療可以在四周間隔重復。另一種方案為250mg/m2/天，給藥5天，每三周重復該治療。達卡巴嗪是選擇治療轉移性惡性黑色素瘤或霍奇金病或相關疾病的一種藥物。該藥物以用于靜脈內注射的100mg和200mg小瓶形式提供。
替莫唑胺是口服給予的化療藥物。在與包含氧基亞烷基的化合物聯合中，其給藥的劑量為每療程的總劑量為500、750、1000和1250mg/m2，該療程通常是5天。The Physician′s Desk Reference，2003，3081頁(該文獻在此全部引入作為參考)推薦了如下的替莫唑胺給藥方案每個28天療程的起始劑量為每天口服150mg/m2，持續5天。在血小板計數監測下，該劑量可以增加至200mg/m2。替莫唑胺是選擇治療頑固性間變的星細胞瘤或相關疾病的一種藥物。該藥物以250mg膠囊形式提供。
在一個實例中，丁酸新戊酰氧甲酯以約0.5g/m2/天至5g/m2/天的劑量連續給藥三天，接著在第4天給予約50mg/m2至100mg/m2的多西他賽。
應理解為此處所指示的劑量范圍僅是一般的指導。包含氧基亞烷基的化合物的給藥劑量范圍的比例可以據包含氧基亞烷基基團的HDAC抑制劑(例如，丁酸新戊酰氧甲酯)和上面所提供的化療藥物的有效劑量范圍而確定，還可以據給定劑量范圍和比例的治療的有效性而確定。治療醫師擁有很大的靈活性并運用它們的專業判斷確定對個別患者最有效的方案。還應理解為此處公開的相繼治療以及給藥方案的加合或優于加合(協同)的效果需要可能超出此處公開的劑量范圍的劑量變化或調整。
準確的方案還將取決于所治療的疾病、疾病的程度以及對治療的反應。
化療藥物、藥物載體以及給予的化合物的量將取決于哺乳動物的種類和體重以及所治療腫瘤的類型而廣泛地改變。給予的劑型也可取決于已知的因素而改變，這些因素比如特定化療藥物的藥物動力學特性及其給藥方式和路線；接受者的年齡、性別、代謝率、吸收效率、健康和體重；癥狀的本性和限度；給予的并行治療的種類；治療的頻率；以及所需的療效。
包含氧基亞烷基的化合物以及一種或多種化療藥物優選以兩種或多種不同劑型分別給予。取決于所應用的劑型，它們可以經同一途徑或經兩種或多種不同給藥途徑獨立給予。
適宜的藥物組合物和劑型將優選包括包含氧基亞烷基的化合物和一種或多種化療藥物。
化療藥物的劑量和范圍將取決于特定的藥物和所治療癌癥的類型。本領域技術人員將能夠確定適當的劑量。
劑型 相繼治療還可以口服、靜脈內(推注或輸液)、腹膜內、皮下或肌內的形式給藥，本領域技術人員熟知所有的應用劑型。
與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物典型地與適宜的藥物稀釋劑、增充劑、賦形劑或載體(此處通稱為藥學上可接受的載體或載體材料)混合給予，考慮到想要的給藥形式進行適宜地選擇并與常規的制藥實踐相一致。該單位形式將是適于口服、直腸、靜脈內注射或胃腸外給藥的形式。此外，可使用局部或其它的給藥方式包括尿道內、陰道內或膀胱內給藥。
與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物可以單獨給藥但通常與藥學上可接受載體混合。此載體可以是固體或液體，載體的類型通常基于所采用的給藥類型進行選擇。
藥學上可接受載體和賦形劑的特定例子可以如RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，A.Gennaro，ed.，第20版，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA；Advances in Pharmaceutical Sciences(DavidGanderton，Trevor Jones，Eds.，1992)；Advances in Pharmaceutical Sciences Vol7.(David Ganderton，Trevor Jones，James McGinity， Eds.，1995)中的描述所使用。Pivanex作為Intralipid 20％IV Fat Emulsion與200-強度單位的乙醇中的乳劑靜脈內(IV)給藥。將其稀釋于乙醇(2mL/g的Pivanex)中，然后加至Intralipid 20％IV Fat Emulsion生成20mg Pivanex/mL的儲備乳劑。
與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物還可以以脂質體釋放系統的方式給藥，比如小的單層囊泡、大的單層囊泡以及多層囊泡。脂質體可由由多種磷脂形成，比如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿。
還可配制持續釋放劑型，首先在誘導期釋放Pivanex，接著釋放口服活性的化療藥物比如替莫唑胺。本領域已知這樣劑型的制備方法。
通常，水、適宜的油、鹽水、右旋糖(葡萄糖)水溶液以及相關的糖溶液和二元醇比如丙二醇或聚乙二醇均是用于注射液的適宜載體。胃腸外給藥的溶液優選包含活性成分的水溶性鹽、適宜的穩定劑，以及如果需要，緩沖物質。抗氧化劑比如亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸，單獨或聯合地適用作穩定劑。還可使用檸檬酸及其鹽和EDTA鹽。此外，腸胃外溶液可包含防腐劑，比如氯芐烷銨、對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯以及氯代丁醇。適宜的藥物載體描述于RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，本領域的標準參考文獻。
胃腸外和靜脈內形式還可以包括使其與所選擇的注射或其它釋放系統相容的礦物以及其它材料。
下面解釋了給予與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物的有用藥物劑型。
可注射溶液 適于經注射給藥的胃腸外組合物通過在10％體積的丙二醇和水中攪拌1.5％重量份的活性成分而制備。該溶液經氯化鈉制備成等滲溶液并滅菌。
治療方法 治療方法可以是任何適宜的方法，其對所治療的特定癌癥或腫瘤類型有效。治療可以是直腸、胃腸外或靜脈內給藥或注射入腫瘤或癌癥。給予有效量的方法還可取決于所治療的紊亂或疾病而不同。在本發明的一個實施方案中，通過靜脈內、皮下或肌內應用與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物、與適當的載體、其它抑制癌癥的化合物或有利于應用的稀釋劑相配制的胃腸外治療將是給予溫血動物這些化合物的優選方法。
本領域技術人員將認識到，可以在體外或體內使用已知細胞系通過常規篩選確定與一種或多種化療藥物聯合的包含氧基亞烷基的化合物的效力。可以從American Tissue Type Culture或其它實驗室獲得細胞系。
如下的實施例進行了舉例說明但并不意在限制本發明。
實施例1 腫瘤細胞系和細胞培養 T24膀胱移行癌細胞、Calu-6間變性肺癌細胞以及SK-MES-1鱗狀肺癌細胞購自American Type Culture Collection(Manassas，VA)。所有的細胞系均在含10％胎牛血清的RPMI-1640中培養。對于在微量滴定皿中的培養，細胞平鋪的密度為104細胞/孔，在37℃、5％CO2中培養過夜。
培養過夜后，一式四份向孔中加入藥物并在存在或不存在包含氧基亞烷基的化合物的情況下培養6至96小時。移出培養基之前，加入新鮮培養基和細胞毒藥物，并繼續培養該培養基6小時。
然后洗滌各孔并向各孔中加入不含藥物的培養基。隨后培養微量滴定皿3天，然后使用結晶紫測定法測定細胞密度。在顯微照相之前，一些培養物還可在甲醇中固定并使用蘇木精和曙紅(H&E)染料染色5分鐘。
抗腫瘤藥物 PIVANEX(pivaloyloxymethyl butyrate)自Titan Pharmaceuticals Iric.(South San Francisco，CA獲得，并在加入培養基之前與0.05％lntralipidTM(Fresenius Kabi，Clayton，NC)混合。細胞毒藥物吉西他濱(Gemzar；Eli Lilly and Co.，Indianapolis，IN)、順鉑(Platinol，Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ)、紫杉醇(Taxol；Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ)以及多西他賽(Taxotere，Aventis Pharmaceuticals Products，Inc.，Bridgewater，NJ)與PIVANEX一起進行研究。
結晶紫微量滴定測試法 微量滴定皿中的細胞經PBS漂洗，并于兩體積的100％冷甲醇中固定5分鐘。加入一體積溶于20％甲醇中的0.5％結晶紫并染色貼壁細胞10分鐘。然后洗滌該細胞，并使用0.1N檸檬酸鈉緩沖液洗脫結晶紫，在ELISA平板讀數儀上于490nm處讀數。
癌基因表達分析 使用標準方法分離腫瘤細胞培養mRNA，并進行RT-PCR以確定c-Myc癌基因表達水平。用于RT-PCR循環的c-Myc引物對是 c-Myc 5′-GCC AAG CCA GTT CCA TTA AA-3′ 3′-ACT CCC GGA CTG TCT GTC AT-5′ 該c-Myc引物對按如下程序循環95℃3分鐘，然后30周期(95℃1分鐘，然后55℃1分鐘，然后72℃1分鐘)，接著72℃保持溫度7分鐘，然后迅速降溫至4℃。利用1％瓊脂糖凝膠電泳和凝膠密度測定法定量分析樣品。
表1aPivanex降低c-Myc癌基因的表達Pivanex濃度μMCalu-6NSCLC T24膀胱癌Calu-6NSCLC T24膀胱癌接觸96小時PCR單位細胞n＝2 PCR單位 細胞n＝3SDSD0880 706663010893 760205925743 97213723450711 966072100647 6402082200460 560131 a表顯示了單位為μM的PIVANEX濃度(接觸96小時)與任意PCR單元的關系，表明PIVANEX降低了c-Myc癌基因的表達。
表2aPivanex和順鉑的細胞毒性在T24膀胱癌細胞系中的加合作用順鉑劑量(μM)0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex100μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD100μMPiv SD00.4790.480.4220.0120.020.0472.50.4860.4810.4060.4240.0230.0090.0170.00650.4340.4270.3360.4180.0210.0220.030.046100.4040.3780.3180.310.0120.0280.0340.027200.250.2870.2310.2180.0120.0360.0340.003 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后順鉑的濃度(μM)對T24癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和順鉑的細胞毒性具有加合性。
表3aPivanex克服了SK-MES-1非小細胞肺癌細胞對紫杉醇的耐藥性紫杉醇濃度0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD00.7370.7430.7690.0160.0890.051250.6550.6690.6820.0370.020.016500.6270.5810.5590.0160.0510.0371000.420.1180.2170.1130.0240.019 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后紫杉醇的濃度(μM)對SK-MES-1癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX克服了對紫杉醇的耐藥性。
表4aPivanex和順鉑的細胞毒性在Calu-6非小細胞肺癌細胞系中的加合作用μMPivanex0μM順鉑2.5μM順鉑5μM順鉑10μM順鉑20μM順鉑0μMPivanex0.6660.6080.5570.3280.23810μMPivanex0.6170.580.5270.3680.24650μMPivanex0.5770.4860.4430.3650.242100μMPivanex0.2840.2330.160.1150.081 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后順鉑的濃度(μM)對Calu-6癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和順鉑的細胞毒性具有加合作用。
表5aPivanex和順鉑的細胞毒性在Calu-6非小細胞肺癌細胞系中的加合作用μMPivanex0μMcis SD2.5μMcis SD5μMcis SD10μMcis SD20μMcis SD0μMPivanex0.0260.0310.0410.0150.00910μMPivanex0.0380.0210.0750.0930 04350μMPivanex0.0110.0080.0160.0470.026100μMPivanex0.0090.0080.0570.0560.013 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后順鉑的濃度(μM)對Calu-6癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和順鉑的細胞毒性具有加合性。
表6aPivanex和吉西他濱(”Gem”)的細胞毒性在Calu-6非小細胞肺癌細胞系中的加合作用 0nM Gem. 25nM Gem. 50nM Gem. 100nM Gem. 200nM Gem. 0nM Gem.SD 25nM Gem.SD 50nM Gem.SD 100nM Gem.SD 200nM Gem.SD 0μM Pivanex 0.666 0.587 0.466 0.456 0.403 0.026 0.028 0.027 0.025 0.011 10μM Pivanex 0.617 0.565 0.479 0.437 0.313 0.038 0.058 0.041 0.039 0.038 50μM Pivanex 0.577 0.481 0.453 0.368 0.268 0.011 0.039 0.03 0.028 0.049 100μM Pivanex 0.284 0.217 0.211 0.194 0.204 0.009 0.023 0.016 0.052 0.03 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后吉西他濱的濃度(nM)對Calu-6癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和吉西他濱的細胞毒性具有加合性。
表7aPivanex和吉西他濱的細胞毒性在T24細胞系中的作用超過加合作用MPivanex0nM吉西他濱25nM吉西他濱50nM吉西他濱100nM吉西他濱0nM SD10nMSD50nMSD00.4790.480.4220.010.020.052250.4790.4760.4090.4240.0230.0090.017500.4550.4610.4180.4180.0150.0220.031000.4140.410.4010.310.0120.0280.0342000.410.3590.3660.2180.0120.0360.034 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后吉西他濱的濃度(nM)對T24癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和吉西他濱的細胞毒性超過了加合作用。
表8aPivanex和順鉑的細胞毒性在SK-MES-1非小細胞肺癌細胞系中的作用超過加合作用 Pivanex 濃度 Pivanex 單用(Abs) Piv+ 10μM順鉑 Piv+ 20μM順鉑 Piv 單獨SD Piv+10μM順鉑 SD Piv+20μM順鉑 SD 0 2.232 1.562 1.477 0.048 0.166 0.242 25 1.852 0.751 0.11 0.051 100 1.908 0.755 0.127 0.085 200 1.952 0.779 0.02 0.061 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX(μM)和順鉑的濃度(μM)對SK-MES-1非小細胞癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和順鉑的細胞毒性超過了加合性。
表9aPivanex和多西他賽的細胞毒性在Calu-6非小細胞肺癌細胞系中超過加合的作用多西他賽濃度0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD00.7160.7320.5530.0170.040.083250.2190.2140.1170.0470.0470.027500.1830.1480.1060.0780.0720.0261000.1740.1310.0990.0790.0280.0172000.1480.1130.0920.0520.0180.007 a表顯示了單位為μM的PIVANEX處理和PIVANEX處理后多西他賽的濃度(μM)對Calu-6非小細胞癌細胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和多西他賽的細胞毒性超過了加合作用。
PIVANEX和化療藥物對腫瘤細胞生長的作用概述如下 已發現處理膀胱癌細胞系(T24)時，PIVANEX與順鉑聯合具有加合作用，與吉西他濱聯合具有超過加合的作用。
已發現處理化學耐藥性的非小細胞肺癌細胞系(SK-MES-1)時，PIVANEX與順鉑或紫杉醇聯合具有大于加合作用的作用。
已發現治療非小細胞肺癌細胞系(Calu-6)時，PIVANEX與順鉑或核苷類似物吉西他濱聯合具有加合作用，與紫杉烷多西他賽聯合具有超過加合的作用。
對于某些適應癥，已發現PIVANEX與化療藥物的聯合具有加合作用，對于另一些適應癥，該聯合具有超過加合的作用的作用。
幾種癌細胞系(Calu-6、SK-MES-1、T-24)在培養基中接觸濃度低至10-50μM的PIVANEX 96小時，降低了c-Myc癌基因的表達。
PIVANEX對癌基因表達的調節是時間依賴性的也是腫瘤細胞系依賴性的。
實施例2 該實施例顯示了在藥物聯合中PIVANEX和多西他賽的細胞毒性，其具有3天的誘導期(72小時)，接著接觸多西他賽24小時。
方法 細胞系 人NSCLC細胞系H522(快速生長；t＝28小時)和H23(緩慢生長；t＝38小時)購自ATCC(Rockville，MD)，維持在75-cm 2塑料組織培養瓶內包含10％胎牛血清(FBS；Nova Tech)的RPMI培養基中(RPMI；Nova Tech，Grand Island，N.Y.)。在37℃包含5％CO2的潮濕空氣中培養細胞。
處理 在100％乙醇中稀釋Pivanex(Titan Pharmaceuticals)以形成1M儲備液，終乙醇濃度＜0.5％。多西他賽(Taxotere TM)由Aventis(Strasbourg，France)慷慨提供并溶解于100％二甲亞砜中(DMSO)以形成1000x儲備液。對于細胞培養研究，Pivanex和多西他賽均稀釋于細胞培養基中以分別形成終濃度＜0.5％乙醇和＜0.1％DMSO。
生長抑制測試 使用胰蛋白酶(0.05％)/EDTA(0.02％)收獲指數生長細胞，并在包含10％FBS的新鮮培養基中再懸浮。在第0天將100μl生長培養基中的細胞懸浮液平鋪于96孔微量滴定板(Falcon，Oxnard，CA)中，濃度為104細胞/孔。藥物處理之前，在37℃包含5％CO2的潮濕空氣中培養細胞24小時。第1天，向細胞板中加入100μl包含系列稀釋濃度藥物和媒介的部分，并在各自序列指定的時間培養。在37℃潮濕培養器(5％CO2的/95％HEPA過濾空氣)中培養4天后，移出100μl生長培養基。加入20μl MTS四唑鹽[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2-四唑-內鹽]化合物(1.9mg/ml的PBS溶液，pH 6.0)后于37℃培養細胞1小時。該MTS四唑鹽化合物經活細胞生物還原成可溶于細胞培養基中的有色甲(formazan)產物。在DynexHD微量反應板讀數儀上于490nm波長處記錄吸收度。使用PrismGrapIiPad軟件據3組不同的測試測定IC50值，各組測試對于每一劑量測定涉及4次重復。所示數值為生長抑制百分比，其中0％代表僅加入媒介(0.1％DMSO)的孔中的均值，按照如下計算 ％生長抑制＝(1-(OD測試/OD媒介))×100 其中OD測試是受試樣品的光密度，OD媒介是溶解有關藥物的媒介的光密度。
H23細胞加PIVANEX/多西他賽 在Pivanex后繼用多西他賽的相繼聯合研究，結果顯示兩種藥物在抑制腫瘤細胞生長方面具有協同/加合作用。
H23-使用Pivanex后繼用多西他賽的治療導致協同的生長抑制活性，然而單獨使用PIVANEX和多西他賽顯示了接觸24小時后H23細胞生長的急劇增加。
H522-使用Pivanex后繼用多西他賽的治療顯示加合/協同的生長抑制活性，然而單獨使用PIVANEX和多西他賽顯示了接觸24小時后H522細胞生長的急劇增加。
在該測試中，在Pivanex/多西他賽濃度介于60/40至25/75之間的范圍內，給予H23的Pivanex產生了超過加合(協同)的生長抑制作用，其活性高于加合的基線的5至25％之間(25/75為5％；50/50為12％以及40/60為25％)。相對于加合基線值此作用的生長抑制活性相應增加約12.5％、25％和60％。
實施例3 Pivanex Intralipid的配制方法 在層流通風廚中使用無菌操作。適當量的Pivanex置于無菌瓶中，并向該瓶中加入2ml乙醇(200標準強度)/克Pivanex。然后向該瓶中加入適當量的Intralipid(20％)以生成Pivanex濃度為20mg/mL的儲備液。然后將該瓶輕輕地倒轉幾次。使用Intralipid(20％)進一步稀釋該乳劑至所需的濃度。
媒介對照 適當量的Intralipid(20％)置于無菌玻璃瓶中。加入適當量的乙醇(200標準強度)以形成4％濃度。輕輕地導致該瓶幾次。
盡管本發明已在此參照具體實施方式
進行了描述，可以認為，對于本領域技術人員而言將容易地進行許多修改或變化。所公開并詳細描述的優選實例是例示性的并不因此意在限制本發明。因此，所有這樣的變化或修改均包括在本發明的范圍內。
前述公開包括所有被認為必需的信息，能購使得本領域技術人員實踐所要求保護的發明。由于所引用的專利或出版物可以提供其它有用的信息，這些引用的資料在此全部并入作為參考。
權利要求
1.一種增加組蛋白脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑抗腫瘤活性的方法，其包括在誘導期連續地給予哺乳動物或宿主細胞化療有效量的包含氧基亞烷基的HDAC抑制劑，隨后給予哺乳動物或宿主細胞化療有效量的微管蛋白作用劑、DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑或鉑絡合物。
2.權利要求1的方法，其中包含氧基亞烷基的HDAC抑制劑是具有式(I)、(II)和(III)的化合物
(I)X-CH2-CHX-CHX-C(＝O)-O-Z
(II)CH3-CO-CH2-C(＝O)-O-Z
(III)CH3-CH2-CO-C(＝O)-O-Z
其中X是H，或只有一個X可以是OH；Z是-CHR-O-(O＝)C-R′，R表示氫或烷基，R′表示烷基、氨基烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、芳烷氧基和芳氧基，其中芳基自身以及芳烷基、芳烷氧基和芳氧基中的芳基分別選自如下亞組(a)和(b)，其中(a)是未取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，以及(b)是苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，各基團分別被至少一個選自烷基、烷氧基或鹵素的基團取代，條件是在(I)中當X是H且R′是丙基時，那么R是包含至少三個碳原子的烷基。
3.權利要求1的方法，其中包含氧基亞烷基的化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
4.權利要求1的方法，其中微管蛋白作用劑是紫杉酚、紫杉醇或多西他賽，DNA-干擾劑是基于嘧啶的核苷類似物或氟達拉濱，DNA-烷化劑是達卡巴嗪、替莫唑胺或環磷酰胺，且鉑絡合物是順鉑、卡鉑或奧沙利鉑。
5.權利要求4的方法，其中基于嘧啶的核苷類似物是吉西他濱。
6.權利要求1的方法，其中誘導期為約從超過2小時至120小時。
7.權利要求1的方法，其中誘導期約為24至96小時。
8.權利要求1的方法，其中誘導期約為48至84小時。
9.權利要求1的方法，其中誘導期約為54至78小時。
9.權利要求1的方法，其中哺乳動物是人。
10.權利要求1的方法，其中與化療藥物聯合的有效量的包含氧基亞烷基的化合物的給藥劑量在約0.01g/m2/天至約10g/m2/天之間。
11.權利要求5的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的吉西他濱在長達12周的療程內的給藥劑量可高達約10000，優選100至4000mg/m2。
13.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的紫杉醇和多西他賽的每療程給藥劑量在約10mg/m2至約200mg/m2之間。
14.權利要求13的方法，其中多西他賽的給藥劑量在10mg/m2至200mg/m2之間，優選50mg/m2至120mg/m2。
15.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的卡鉑的每療程給藥劑量在約10mg/m2至約1000mg/m2之間。
16.權利要求15的方法，其中有效量的卡鉑的給藥劑量在約100mg/m2至500mg/m2之間。
17.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的奧沙利鉑的每療程給藥劑量在約10mg/m2至約250mg/m2之間。
18.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的順鉑的每療程給藥劑量在約1mg/m2至約300mg/m2之間。
19.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的達卡巴嗪在十天的療程內的給藥劑量在約0.5mg/kg/天至10mg/kg/天之間。
20.權利要求4的方法，其中與包含氧基亞烷基的化合物聯合的有效量的替莫唑胺的每療程給藥劑量為500mg/m2至1250mg/m2。
21.權利要求3的方法，其中丁酸新戊酰氧甲酯以0.5g/m2/天至5g/m2/天的劑量給予，連續給藥三天，隨后在第4天給予約50mg/m2至100mg/m2的多西他賽。
22.HDAC抑制劑在制備用于增加所述HDAC抗腫瘤活性的化療制劑中的應用，其中包括應用如下化療藥物微管蛋白作用劑、DNA-干擾劑、DNA-烷基化劑以及鉑絡合物，所述制劑適用于誘導期，期間給予HDAC抑制劑，隨后給予所示化療藥物。
全文摘要
包含氧基亞烷基基團的組蛋白脫乙酰酶抑制劑與另一種抗瘤藥物相繼使用以增加在細胞和哺乳動物內的抗腫瘤活性。
文檔編號A61K31/225GK1681489SQ03822108
公開日2005年10月12日 申請日期2003年7月11日 優先權日2002年7月17日
發明者路易斯·R·布卡洛, 蘇尼爾·斯里達蘭 申請人:蒂坦藥物股份有限公司