非甾類抗炎物質、組合物及其使用方法

專利名稱：非甾類抗炎物質、組合物及其使用方法
本申請要求2002年7月8日提交的美國臨時申請的60/394,671的優先權。
技術問題本發明涉及一般通式I表示的抗炎化合物、其藥學上可接受的鹽和溶劑化物、其制備方法和中間體以及這些化合物在治療人和動物炎性疾病和病癥中的應用。
現有技術具有不同作用機制的非甾類抗炎藥物對特定的炎癥介體起作用，由此提供治療作用。由于不僅在作用機制、而且在所抑制的特定炎癥介體方面存在差異，所以甾類和非甾類藥物具有不同的抗炎作用特性，由此對特定的病癥而言，某些藥物可能比其它藥物更為合適。此外，大部分非甾類抗炎藥物并非絕對具有特異性，并且在以較大劑量或長期使用時其應用伴隨有不利的副作用。已知許多非甾類抗炎藥物起內源性COX-1酶抑制劑的作用，而內源性COX-1酶在維持胃粘膜完整性方面極為重要。因此，這些藥物的應用通常導致胃粘膜受損乃至出血。(Warner T.D.《美國國家科學院學報》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)1999，96，7563-7568)。因此，選擇性抑制COX-2、而不抑制COX-1的活性劑對治療炎性疾病是優選的。另外，已知某些抗炎化合物(諸如茶堿)具有極窄的治療指數，其應用受限。
近來，FDA批準特異性阻斷COX-2的非甾類抗炎藥塞來考昔(celecoxib)用于治療類風濕性關節炎(Luong等《藥物治療學年鑒》(Ann.Pharmacother.)2000，34，743-760)。COX-2還在許多癌癥和癌前期損害中得到表達，并且存在選擇性COX-2抑制劑可以用于治療和預防結腸直腸癌和其它癌癥的確定證據(Taketo，M.M.，《國家癌癥研究院雜志》(J.Natl.Cancer Inst.)1998，90，1609-1620，Fournier等《細胞生物化學雜志》(J.Cell Biochem.)增刊2000，34，97-102)。
大環內酯類、諸如大環內酯類抗生素優選累積在給予這類分子的受試者的不同細胞中，尤其是在吞噬細胞中，諸如單核外周血細胞、腹膜和肺泡巨噬細胞；以及支氣管肺泡上皮周圍的液體中(Glaude R.P.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)，1989，33，277-282；Olsen K.M.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.AgentsChemother.)1996，40，2582-2585)。此外，描述了某些大環內酯類相對弱的炎性作用。例如，近來描述了紅霉素衍生物(Labro M.T.《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)，1998，41，37-46；WO00/42055)和阿奇霉素衍生物(EP 0283055)的抗炎作用。還從實驗性動物模型的體外和體內研究中得知了某些大環內酯類的抗炎作用，諸如zimosane-誘導的小鼠腹膜炎(Mikasa等《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1992，30，339-348)和內毒素-誘導的大鼠氣管中性白細胞累積(《免疫學雜志》(J.Immunol.)1997，159，3395-4005)。大環內酯類對細胞因子、諸如白細胞介素8(IL-8)(《美國呼吸疾病保健藥物標準雜志》(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)1997，156，266-271)或白細胞介素5(IL-5)(EP 0775489和EP 0771564)的調節作用也是已知的。
在1975年，將TNF-α定義為內毒素誘導并在體外和體內導致腫瘤壞死的血清因子(Carswell EA等，《美國國家科學院學報》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)，1975，723666-3670)。除抗腫瘤作用外，TNF-α還具有許多其它在生物體內穩態和病理生理狀況方面重要的生物作用。TNF-α的主要來源為單核細胞-巨噬細胞、T-淋巴細胞和肥大細胞。
抗-TNF-α抗體(cA2)對患有類風濕性關節炎(RA)的患者具有治療作用這一發現(Elliott M等，《柳葉刀》(Lancet)，1994，3441105-1110)導致對尋找能夠作為RA的有效藥物的新TNF-α抑制劑的興趣增加。類風濕性關節炎是一種自身免疫性慢性炎癥疾病，其特征在于關節發生不可逆的病理改變。除RA療法外，TNF-α拮抗劑還可以用于許多病理狀況和疾病，諸如脊椎炎、骨關節炎、痛風和其它關節炎性疾病、膿毒癥、膿毒性休克、毒性休克綜合征、特應性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬、腎小球腎炎、紅斑狼瘡、硬皮病、哮喘、惡病質、慢性阻塞性非失調、充血性心力衰竭、胰島素抵抗、肺纖維化、多發性硬化、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、病毒感染和AIDS。
通過對小鼠進行的體內實驗獲得了表示TNF-α的生物重要性的證據，其中用于TNF-α或其受體的小鼠基因失活。這類動物耐受膠原蛋白誘發的關節炎(Mori L等，《免疫學雜志》(J.Immunol.)，1996，1573178-3182)并耐受內毒素導致的休克(Pfeffer K等，《細胞》(Cell)，1993，73457-467)。在TNF-α水平增加的動物試驗中，發生慢性炎性多關節炎，其通過抑制TNF-α產生得到減輕(Georgopoulos S等，《炎癥雜志》(J.Inflamm.)，1996，4686-97；Keffer J等，《歐洲分子生物學協會雜志》(EMBO J.)，1991，104025-4031)。對這類炎癥和病理狀況的治療通常包括施用非類固醇抗炎藥且在更嚴重的情況中給予金鹽、D-青霉胺或甲氨蝶呤。所述的藥物根據癥狀起作用，但它們不會使病理狀況停止。類風濕性關節炎療法中的新手段基于藥物，諸如替尼達普、來氟米特、環孢素、FK-506并基于抵消TNF-α作用的生物分子。目前存在商購的依那西普(etanercept)(Enbrel，Immunex/Wyeth)、即可溶性TNF-α受體的融合蛋白和英夫利昔單抗(infliximab)(Remicade，Centocor)、即小鼠和人嵌合單克隆抗體。除用于RA療法外，依那西普和英夫利昔單抗已被批準用于克羅恩病療法(Exp.Opin.Invest.Drugs，2000，9103)。
迄今為止尚未描述代表本發明主題的通式I表示的新化合物、其藥學上可接受的鹽、水合物、前體藥物和包括它們的藥物組合物。
此外，尚未將代表本發明主題的化合物描述為抗炎物質或TNF-α抑制劑或COX-1/COX-2抑制劑或IL-1β抑制劑。因此，尚未描述或提示這類“雜化”(hybrid)大環內酯/NSAID化合物在抗炎中的應用，也沒有描述或提示含有有效量的雜化大環內酯/NSAID化合物的用于治療哺乳動物對象、包括人的炎癥狀態的藥物劑型。
技術方案通式I的化合物不同于迄今為止已知化合物的方面在于它們在對患有炎癥狀態的器官或組織聯用時結合了NSAID部分的抗炎特性和大環內酯部分提供的補充的(與大環內酯類優先累積的免疫系統細胞一起)累積特性，并且導致基本上更多地局限于炎癥部分和/或強化對炎癥的緩解作用。由結構I表示的新化合物的這類作用來源于大環內酯部分M，這是由于大環內酯類累積在炎癥分布的免疫細胞內的特定藥動學特性所致，所述的免疫細胞諸如吞噬細胞，包括多形核細胞、嗜酸性細胞、肺泡吞噬細胞等。通式I的化合物具有改善的藥動學和/或安全性分布(甚至對那些作為更具選擇性的COX-2抑制劑的NSAID而言)，并且存在較少和/或更為良性的副作用。
傳統的非甾類抗炎藥(NSAID)將COX-1和COX-2抑制至改變的程度。吲哚美辛也是非選擇性COX抑制劑，但當與大環內酯部分連接時，它成為應顯著減少乃至消除母體化合物胃腸副作用的更具選擇性的COX-2抑制劑。然而，甚至更具選擇性的COX-2抑制劑的NSAID也得益于按照本發明與大環內酯軛合(conjugation)，至少因為它們″靶向″至炎癥部位，在那里它們可以發揮抗炎作用，而同時它們與其它組織或生理過程的相互作用可以產生副作用。認為尚未描述屬于本發明主題的通式I表示的化合物、這類化合物的異構體形式、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和包括它們的藥物組合物。此外，尚未將本發明的化合物描述為抗炎物質或嗜酸性細胞在器官或組織中累積的抑制劑。
本發明涉及(a)通式I表示的新″雜化″化合物 其中M表示具有在炎性細胞中累積特性的大環內酯亞單位，D表示具有抗炎、止痛和/或解熱活性的非甾類抗炎亞單位(NSAID)，且L表示共價連接M和D的連接基；(b)含有上述化合物中的一種或多種的組合物，所述化合物的用量可有效抗炎并由此治療涉及哺乳動物、包括人的炎癥的失調和病癥；和(c)使用這些化合物治療這類失調和病癥的方法。
本發明的化合物可有利地提供改善的治療作用和/或改善的副作用分布。
可以并不限于從多元內酯環分子中選擇用于本發明雜化化合物的合適的大環內酯亞單位，其中″元″指的是環上的碳原子或雜原子，且″多″是原子數超過約10個，優選10-約50個，更優選12-、14-、15-、16-、17-和18-元內酯環的大環內酯類。特別優選14-和15-元環的大環內酯亞單位，最優選阿奇霉素及其衍生物和紅霉素及其衍生物。
可以從中選擇的大環內酯亞單位的更具體的非限制性實例如下(i)大環內酯抗菌素，包括氮雜內酯類(azalides)，例如紅霉素、地紅霉素、阿奇霉素、9-二氫-9-脫氧-9a-氮雜-9a-高紅霉素、HMR 3004、HMR 3647、HMR 3787、交沙霉素、紅霉胺(erythromycylamine)、ABT 773、氟紅霉素、克拉霉素、泰洛星、替米考星、竹桃霉素、脫碳霉糖泰樂菌素(desmycosin)、CP-163505、羅紅霉素、美奧卡霉素和洛他霉素及其衍生物，諸如酮內酯類(例如3-酮)；內酰胺類(例如8a-或9a-內酰胺類)和缺乏一個或多個糖部分的衍生物。
(ii)大環內酯免疫抑制劑，諸如FK 506、環孢菌素、兩性霉素和雷帕霉素；(iii)具有宿主細胞抑制特性的大環內酯抗真菌藥，諸如巴弗洛霉素、刀球骯霉素、制霉菌素、那他霉素、克念菌素、非律平(filipin)、魯斯霉素(etruscomycin)、曲古霉素(trichomycin)。
用于合成上述并非商購的大環內酯類的方法和大環內酯的合成操作一般是本領域技術人員所公知的或可以在下列文獻中找到Denis A等《生物有機和藥物化學通訊》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1999，9，3075-3080；Agouridas C.等《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)1998，41，4080-4100；和EP-00680967(1998)；Sun Or Y.等《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)2000，43，1045-1049；US-05747467(1998)；McFarland J.W.等《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)1997，40，1041-1045；Denis A.等《生物有機和藥物化學通訊》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1998，8，2427-2432；WO-09951616(1999)；Lartey等《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)1995，38，1793-1798；EP 0984019；WO 98/56801，將這些文獻的全部內容引入本文作為參考。
其它合適的大環內酯類是已知的，某些公開在下列文獻中Bryskier，A.J.等的《大環內酯類、化學、藥理學和臨床應用》(Macrolides，Chemistry，Pharmacology and Clinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993，pp 485-491，14(R)-羥基克拉霉素、紅霉素-11，12-碳酸酯、三-O-乙酰基竹桃霉素、螺旋霉素、白霉素、麥迪霉素、rasaramycin，將該文獻的全部內容引入作為參考；Ma，Z.等《最新藥物化學-抗感染藥》(Current Medicinal Chemisty-Anti-Infective Agents)，2002，1，15-34，也將該文獻的全部內容引入作為參考；苦霉素、那波霉素、HMR-3562、CP-654743、CP-605006、TE-802、TE-935、TE-943、TE-806、6，11-橋連的酮內酯類、CP-544372、FMA-199、A-179461；和Romo，D.等《美國化學協會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)1998，120；12237-12254，也將該文獻的全部內容引入作為參考。特別參見Brys kier等在487-491頁上描述的14-和16-元環的大環內酯類的結構和衍生物；和Ma等描述的各種酮內酯衍生物和合成，注意所有的結構表和所有的反應方案。與NSAIDs軛合后的所有這些大環內酯類屬于本發明的范圍。上述特別具體命名或參照的大環內酯化合物是商購的或其合成方法是已知的。
重要的是大環內酯亞單位來源于具有累積在補充至炎癥部位的免疫系統細胞、尤其是吞噬細胞內特性的大環內酯。已知上述定義的大部分內酯類化合物具有這種特性。例如14-元大環內酯類，諸如紅霉素及其衍生物；15-元大環內酯類，諸如阿奇霉素及其衍生物以及8a-和9a-內酰胺類及其衍生物；16-元大環內酯類，諸如替米考星、脫碳霉糖泰樂菌素；和螺旋霉素。
累積在特定類細胞中的大環內酯類的其它實例可以在下列文獻中找到Pascual A.等《臨床微生物感染》(Clin.Microbiol.Infect.)2001，7，65-69.(“酮內酯HMR 3647在人吞噬和非吞噬細胞中的吸收和胞內活性”(Uptake and intracellular activity of ketolide HMR 3647in human phagocytic and non-phagocytic cells))；Hand W.L.等《國際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，419-425.(“阿奇霉素在人多形核白細胞中累積和流出的特性和機制”(Characteristics and mechanisms of azithromycin accumulation andefflux in human polymorphonuclear leukocytes))；Amsden G.W.《國際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，11-15.(“新一代大環內酯類定向于組織的抗菌素”(Advanced-generationmacrolidestissue-directed antibiotics))；Johnson J.D.等《實驗室臨床藥物雜志》(J.Lab.Clin.Med.)1980，95，429-439.(“肺泡巨噬細胞的抗生素吸收”(Antibiotic uptake by alveolarmacrophages))；Wildfeuer A.等《抗菌藥與化療》(Antimicrob.AgentsChemother.)1996，40，75-79.(“體內條件下各種細胞對阿奇霉素的吸收及其胞內活性”(Uptake of azithromycin by various cells和itsintracellular activity under in vivo conditions))；Scorneaux B.等《家禽科學》(Poult.Sci.)1998，77，1510-1521.(“替米考星在雞吞噬細胞中的胞內累積、亞細胞分布和流出”(Intracellularaccumulation，subcellular distribution，and efflux of in chickenphagocytes))；Mtairag E.M.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1994，33，523-536。(“人中性白細胞體外地紅霉素和紅霉胺吸收的研究”(Investigation of dirithromycin and紅霉胺uptake by human neutrophils in vitro))；Anderson R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，923-933.(“新大環內酯抗菌藥克拉霉素(A-56268，TE-031)的細胞吸收和吞噬細胞內生物活性的體外評價”(An in-vitro evaluation of the cellularuptake and intraphagocytic bioactivity of clarithromycin(A-56268，TE-031)，a new macrolide antimicrobial agent))；TasakaY.等《日本抗生素雜志》(Jpn.J.Antibiot.)1988，41，836-840.(“肺泡巨噬細胞的洛他霉素吸收”(Rokitamycin uptake by alveolarmacrophages))；Harf R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，135-140.(“肺泡巨噬細胞的螺旋霉素吸收”(Spiramycin uptake by alveolar macrophages))，將這些文獻的全部內容引入本文作為參考。
此外，補充至炎癥部位的免疫系統細胞、尤其是吞噬細胞內累積活性的存在易于由本發明領域的普通技術人員使用用于該目的的眾所周知的試驗之一測定。例如，可以使用Olsen，K.M.等在《抗菌劑與化療》(Anitmicrob.Agents & Chemother.)1996，40，2582-2585中所述的具體步驟。簡單的說，可以通過Ficoll-Hypaque離心從健康志愿者的靜脈血中獲得受測試的細胞、例如多形核白細胞，隨后進行2％葡聚糖沉降。通過滲透裂解除去紅細胞并通過錐蟲藍排除法評價PMN。另一方面，可以分離其它細胞級分并按照類似方式測試。將氚代的大環內酯化合物(例如10μM)與2.5×106個細胞一起保溫120分鐘(37℃，5％CO2，90％相對濕度)且隨后通過離心、例如通過硅油-石蠟層(86vol％∶14vol％)從含有化合物的上清液中除去細胞。例如，通過閃爍計數測定化合物的量，并且顯著高于背景的得分表明大環內酯累積在測試細胞中。參見Bryskier等《大環內酯、化學、藥理學和臨床應用》(Mcrolides，Chemistry，Pharmacology and Clinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993pp 375-386，381頁，第2欄，第3行。另一方面，不對該化合物進行放射性標記，而可以通過HPLC測定化合物的量。
可以使用的其它試驗方法公開在Bryskier，A.J.等的《大環內酯、化學、藥理學和臨床應用》(Mcrolides，Chemistry，Pharmacology andClinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993 pp 375-386中，將該文獻引入作為參考。特別參見380-381頁上的吞噬細胞吸收測定和381、383和385頁以及382和383頁上的表對大環內酯類吸收和定位的具體描述。
本發明在某些優選的實施方案中涉及通式I表示的化合物、其鹽和溶劑化物，其中M特別表示14-或15-元內酯環的大環內酯亞單位，最優選通式II表示的化合物 其中(i)Z和W獨立為 或鍵，其中Rt和Rs獨立為H或烷基(優選甲基或H)；RM為OH、ORP、烷氧基或取代的烷氧基(Syn或Anti構型或其混合物)；RN為H、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(＝X)-NRtRs；X為O或S；條件是Z和W不能同時為 或鍵；(ii)U和Y獨立為H、鹵素、烷基或羥基烷基(優選H、甲基或羥基甲基)；(iii)R1為羥基ORP、-O-S2或＝O；(iv)S1為如下通式的糖苷配基(例如去氧糖胺基團)環C/5位上的糖部分
其中R8和R9均為氫或一起形成鍵或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry，其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ，其中RZ為氫或環烷基(優選環己基)或烷基(優選C1-C7烷基)或鏈烯基(優選C2-C7鏈烯基)或炔基(優選C2-C7炔基)芳基或雜芳基或可以為被C1-C7烷基或C2-C7鏈烯基或C2-C7炔基或芳基或雜芳基取代的烷基。(Ry優選氫、甲基或乙基)；R10為氫或RP；(v)S2為如下通式的糖苷配基(例如克拉定糖基)環C/3位上的糖部分 其中R3’可以為氫或甲基；且R11和R12獨立為氫，R11可以為RP或R11和R12共同形成鍵；(vi)R2為氫、羥基、ORP或烷氧基(優選C1-C4烷氧基，最優選甲氧基)、取代的烷氧基；(vii)A為H或甲基；(viii)B為甲基或環氧基；(ix)E為氫或鹵素(優選氟)；(x)R3為羥基、ORP或烷氧基(優選C1-C4烷氧基，最優選甲氧基)，取代的烷氧基或R3為可以與R5一起形成″橋″(例如環碳酸酯或環氨基甲酸酯)的基團或如果W或Z為 那么R3為與W或Z一起形成″橋″(例如環氨基甲酸酯)的基團；(xi)R4為C1-C4烷基(優選甲基)；(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4烷氧基、取代的烷氧基或可以與R3一起形成″橋″(例如環碳酸酯或環氨基甲酸酯)的基團；(xiii)R6為H或C1-C4烷基(優選甲基或乙基)；其中亞單位M含有連接位置，它通過該位置經連接基L與亞單位D連接；所述的連接位置位于下列基團中的一個或多個上a.位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、N或環氧基團，條件是S2(或條件是S2和S1均)被裂解；b.位于Z或W上的活性＞N-RN、-NRtRs或＝O；c.位于R1、R2、R3和R5中任意一個上的活性羥基；d.可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團且然后與L的所有或部分連接的任意其它基團(例如，OH→＝O→環氧基→ 一個或多個RP基團可以獨立地存在于通式II的大環內酯亞單位上，其中RP表示保護基，其可以選自烷基(優選甲基)、烷酰基(優選乙酰基)、烷氧羰基(優選甲氧羰基或叔丁氧羰基)、芳基甲氧羰基(優選芐氧羰基)、芳酰基(優選苯甲酰基)、芳烷基(優選芐基)、烷基甲硅烷基(優選三甲基甲硅烷基)或烷基甲硅烷基烷氧基烷基(優選三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)。可以通過常規技術除去氨基保護基。因此，可以通過溶劑解、例如通過在酸性或堿性條件下水解除去例如酰基，如烷酰基、烷氧羰基或芳酰基。可以在有催化劑、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過氫解裂解芳基甲氧羰基(芐氧羰基)。
可以將L選為通式IV表示的連接基X1-(CH2)m-Q- (CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-OC(＝O)-、-C(＝O)-、NO-、-OC(＝O)NH-或-C(＝O)NH-；X2選自-NH-、-CH2-、-NHC(＝O)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)-或-O；Q為-NH-或-CH2-或不存在；其中-CH2-或-NH-基團各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代，其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基；符號m和n獨立為0-4的整數，條件是如果Q＝NH，那么n不能為0。
不僅對通式II的NSAIDs和大環內酯類的雜化物、而且對通式I中的任意軛合物優選該連接基的定義。正如本領域中眾所周知的，可以使用其它連接基，條件是它們提供必要的間隔基且可以用于連接通式I的一個亞單位與另一個亞單位。例如，參見美國專利US 6,297,260，將該文獻的全部內容引入本文作為參考，尤其是其權利要求1和NSAID的具體目錄。
在通式I中，D表示非甾類抗炎亞單位，即非甾類抗炎藥(NSAID)的部分。合適的NSAID包括但不限于抑制環加氧酶的那些藥物，所述的酶可以導致前列腺素和某些自體激素抑制劑的生物合成，包括各種環加氧酶的各種同工酶(包括但不限于環加氧酶-1和-2)抑制劑；且作為環加氧酶和脂氧化酶抑制劑涉及非甾類抗炎藥(NSAID)，諸如商購的NSAID醋氯芬酸、阿西美辛、對乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙酰基-水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒藥醇(α-bisabolol)、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來考昔、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯(phenyl-acethyl-salicylate)、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserveratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸(salicylamide-O-acetyl acid)、水楊酰硫酸酯(salicysulphuric acid)、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環孢菌素。其它NSAID類和特定的NSAID化合物公開在美國專利US 6,297,260中，將該文獻全部引入作為參考(尤其是在其權利要求1的一般通式和其中包含的對NSAID的具體目錄的詳述中)；且thiazulidene NSAIDs公開在國際專利申請WO 01/87890中，將該文獻的全部內容引入本文作為參考。
優選的NSAID為乙酰水楊酸、吲哚美辛、萘普生、布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁。
本文中包含的通式中的黑體鍵表示位于紙面水平上；繪制的虛線鍵(dash-drawn bond)表示位于紙面水平下，而虛線(broken line)表示可以位于紙面水平下或其上的鍵。平行實線和虛線表示單鍵或雙鍵。除非本文另有說明，下列術語具有下文對其所解釋的含義″烷基″指的是1-10個碳原子、更優選1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和一價烴基。優選的直鏈或支鏈烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基。最優選甲基。烷基可以被至多5個取代基取代，包括鹵素(優選氟或氯)、羥基、烷氧基(優選甲氧基或乙氧基)、酰基、酰氨基、氰基、氨基、N-(C1-C4)烷氨基(優選N-甲氨基或N-乙氨基)、N，N-二(C1-C4-烷基)氨基(優選二甲氨基或二乙氨基)、芳基(優選苯基)或雜芳基、硫代羰基氨基、酰氧基、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基酰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、雜芳基、芳氧基、芳氧基芳基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基取代的烷基、羧基-環烷基、羧基取代的環烷基、羧基芳基、羧基取代的芳基、羧基雜芳基、羧基取代的雜芳基、羧基雜環基、羧基取代的雜環基、環烷基、環烷氧基、雜芳氧基、雜環基氧基和氧基羰基氨基。這類取代的烷基屬于本發明″烷基″的定義范圍。本發明烷基的定義可以擴展至其它帶有烷基部分的基團，諸如烷氧基。
″鏈烯基″指的是2-10且優選2-6個碳原子的含有至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈一價烴基。鏈烯基可以被與烷基相同的基團取代且這類任選取代的鏈烯基包括在術語″鏈烯基″中。優選乙烯基、丙烯基、丁烯基和環己烯基。
″炔基″指的是帶有2-10且優選2-6個碳原子的直鏈或支鏈且含有至少一個且優選不超過三個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈一價烴基。炔基可以被與烷基相同的基團取代且這些取代的基團屬于該炔基的定義中。優選乙炔基、丙炔基和丁炔基。
″環烷基″指的是帶有3-8個碳原子的含有任選與芳基或雜芳基稠合的單環的環狀基團。環烷基可以被如下對″芳基″所述的取代基取代，并且取代的環烷基屬于該″環烷基″的定義范圍。優選的環烷基為環戊基和環己基。
″芳基″指的是帶有6-14個碳原子的含有單環、諸如苯基或多稠合環、諸如萘基的不飽和芳族碳環基。芳基可以任選進一步與脂族基團或芳基稠合或可以被一個或多個取代基取代，諸如鹵素(氟、氯和/或溴)、羥基、C1-C7烷基、C1-C7烷氧基或芳氧基、C1-C7烷硫基或芳硫基、烷基磺酰基、氰基或伯氨基或非伯氨基。
″雜芳基″指的是含有2-10個碳原子和1-4個雜原子、諸如O、S或N的單環或二環芳烴環。雜芳環可以任選與另一個雜芳基、芳基或脂族環狀基團稠合。該類的實例為呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吲哚、吡啶、噁唑、噻唑、吡咯、吡唑、四唑、嘧啶、吡嗪和三嗪，優選呋喃、吡咯、吡啶和吲哚。該術語包括被如對上述芳基所述相同的取代基取代的基團。
″雜環基″指的是含有單環或多環以及1-10個碳原子和1-4個選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或不飽和基團，其中在稠合環系中，另一個環或其它環可以為芳基或雜芳基。雜環基可以被如對烷基所述的取代基取代且由此取代的雜環基屬于本定義的范圍。
本發明還包括本發明化合物的藥學上可接受的鹽。本發明化合物的藥學上合適的鹽包括與無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸或硫酸)或有機酸(例如酒石酸、乙酸、甲磺酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、琥珀酸、甲磺酸、草酸和對甲苯磺酸)形成的鹽。
本發明還包括通式I化合物的前體藥物，即在對哺乳動物受試者給藥時在體內釋放通式(I)的活性母體藥物的化合物。通過修飾存在于通式I化合物上的官能基制備通式I化合物的前體藥物，按照這類方式使所述的修飾物可以在體內被裂解以釋放母體化合物。前體藥物包括通式I的化合物，其中通式I化合物的羥基、氨基或羧基與任意可以在體內被裂解而分別重新生成羥基、氨基或羧基的基團結合。前體藥物的實例包括但不限于通式I化合物的酯類(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)或在接觸生理pH時或通過酶作用被轉化成活性母體藥物的任意其它衍生物。
本發明還包括通式I化合物或其鹽的溶劑化物(優選水合物)。
通式I的化合物帶有一個或多個手性中心且隨各取代基性質的不同，它們還可以具有幾何異構體。在原子空間排列上不同的異構體稱作″立體異構體″。彼此不為鏡像的立體異構體稱作″非對映體″且那些彼此為不能重疊的鏡像的稱作″對映體″。當化合物帶有一個手性中心時，出現一對對映體是可能的。對映體的特征可以在于其不對稱中心的絕對構型且由Cahn和Prelog的R-和S-順序法則描述或通過分子繞偏振光面旋轉的方式描述并命名為右旋或左旋(即分別稱作(+)或(-)-異構體)。手性化合物可以作為單個對映體或作為對映體混合物存在。含有等比例的對映體的混合物稱作″外消旋混合物″。本發明包括通式I化合物的所有各異構體。在本說明書和權利要求中對特定化合物的描述或命名用以包括各對映體及其混合物，否則就是其外消旋物。用于測定立體異構體的立體化學及其拆分的方法是本領域眾所周知的。
本發明還包括遇到的syn-anti型立體異構體及其混合物，此時存在肟或類似基團。將與肟的末端雙鍵原子連接的最高Cahn Ingold Prelog優先順序法則的基團與肟的羥基比較。將該立體異構體命名為Z(zusammen＝共同)或Syn，條件是肟羥基位于通過C＝N雙鍵的參考面的同側上作為最優先基團；將另一種立體異構體命名為E(entgegen＝相反)或Anti。
″藥學上可接受的賦形劑″指的是用于制備一般安全、無毒性且既無生物上又無其它不需要的作用的藥物組合物的賦形劑且包括對獸藥應用和人藥應用而言可接受的賦形劑。本申請中所用的″藥學上可接受的賦形劑″包括一種和一種以上這類賦形劑。
″治療(Treating)″或″治療(treatment)″狀態、失調或病癥包括(1)預防或延緩在哺乳動物中發生的狀態、失調或病癥的臨床癥狀的表現，所述的哺乳動物可以患有或傾向于所述的狀態、失調或病癥，但尚未發生或出現所述狀態、失調或病癥的臨床或亞臨床癥狀；(2)抑制狀態、失調或病癥，即阻止或減緩疾病或其至少一種臨床或亞臨床癥狀的發生；或(3)減輕疾病，即使狀態、失調或病癥或其至少一種臨床或亞臨床癥狀退化。
對治療的受試者的有益性或具有統計學意義或至少對患者或臨床醫師而言是可感受到的。
″治療有效量″指的是當對哺乳動物給藥治療狀態、失調或病癥時足以進行這類治療的用量。″治療有效量″隨化合物、疾病及其嚴重程度和所治療哺乳動物的身體情況和反應性的不同而改變。
急性炎癥的四種傳統癥狀為患病區域發紅、升溫、腫脹和疼痛且患病器官功能喪失。
與具體病癥相關的炎癥癥狀和征候包括·類風濕性關節炎-涉及的關節疼痛、腫脹、溫熱和觸痛；全身性強直和晨僵；·胰島素依賴性糖尿病-胰島炎；該病可以導致各種與炎性成分相關的并發癥，包括視網膜病、神經病、腎病；冠狀動脈疾病、外圍血管疾病和腦血管疾病；·自身免疫性甲狀腺炎-虛弱、便秘、氣短、面部、手和足浮腫(puffiness)、外周性水腫、心律過緩；·多發性硬化-痙攣狀態、視力模糊、眩暈、肢體虛弱、感覺異常；·眼色素層視網膜炎-夜視力下降、周邊視力降低；·紅斑狼瘡-關節痛、疹、光敏感性、發熱、肌痛、手和足浮腫、尿液分析異常(血尿、管型尿(cylinduria)、蛋白尿)、腎小球腎炎、認知功能障礙、血管血栓形成、心包炎；·硬皮病-雷諾氏病；手、臂、腿和面部腫脹；皮膚增厚；手指和膝疼痛、腫脹強直、胃腸功能障礙、限制性肺病；心包炎；腎衰竭；·具有炎性成分的其它關節炎性疾病，諸如類風濕性脊椎炎、骨關節炎、膿毒性關節炎和多關節炎-發熱、疼痛、腫脹、觸痛；·其它炎性腦病，諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎-畏光、認知功能障礙、記憶損失；·其它炎性的眼部炎癥，諸如視網膜炎-視力下降；·炎性皮膚病，諸如濕疹、其它皮炎(例如特應性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發的灼傷(日光射線和類似的UV源)-紅斑、疼痛、脫屑、腫脹、觸痛；·炎癥性腸病，諸如克羅恩病、潰瘍性結腸炎-疼痛、腹瀉、便秘、直腸出血、發熱、關節炎；·哮喘-氣短、喘鳴；·其它過敏性疾病，諸如過敏性鼻炎-噴嚏、癢、鼻漏；·與急性哮喘相關的疾病，諸如中風后的損傷-感覺缺失、運動喪失、認知喪失；·因心肌缺血導致的心臟組織損傷-疼痛、氣短；·肺損傷，諸如發生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷-氣短、換氣過度、氧合作用下降、肺浸潤；·伴有感染的炎癥，諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征-發熱、呼吸衰竭、心動過速、低血壓、白細胞增多；·其它與特定器官或組織相關的炎性疾病，諸如腎炎(例如腎小球腎炎)-少尿、尿液分析異常；
附件炎-發熱、疼痛、觸痛、白細胞增多；痛風-涉及的關節疼痛、觸痛、腫脹和紅斑、血清和/或尿的尿酸升高；膽囊炎-腹痛和觸痛、發熱、惡心、白細胞增多；慢性阻塞性肺病-氣短、喘鳴；充血性心力衰竭-氣短、啰音、外周性水腫；II型糖尿病-晚期器官并發癥，包括心血管、眼、腎和周圍血管疾病；肺纖維化-換氣過度、氣短、氧合作用下降；血管疾病，諸如動脈粥樣硬化和再狹窄-疼痛、感覺喪失、脈搏下降、功能喪失；和導致移植物排斥的同種異體免疫-疼痛、觸痛、發熱。
亞臨床癥狀包括、但不限于用于炎癥的診斷標記，其表現可以先于臨床表現。一類亞臨床癥狀為免疫學癥狀，諸如促炎淋巴樣細胞在器官或組織中的侵入或累積或識別對器官或組織特異性的病原體或抗原的活化促炎淋巴樣細胞局部或周圍的存在。可以通過本領域中公知的技術測定淋巴樣細胞的活化。
″轉運″至宿主內特定部位的活性組分的治療有效量指的是在特定部位產生治療上有效的活性組分的血藥濃度。例如，可以通過對宿主局部或全身給予活性組分達到上述目的。
在通式II表示的化合物中，優選Z和W共同為-N(RN)C(O)-、-C(O)N(RN)-、＞C-NRsRt、-C(O)-、＞C＝N-RM、-CH2NRN-或-NRNCH2-，最優選-NCH3CH2-、-NHCH2-、-CH2NH-、-C(O)NH、-NHCO-；Rs、Rt為甲基或H；RM為OH或甲氧基；X為O；RN為H、甲基或-C(＝X)-NRtRs；A為H或甲基；U、Y為H、F、甲基或羥甲基；R1為羥基、-O-S2或＝O；
R2為H、羥基或甲氧基；R3為OH、甲氧基或與W或Z形成環氨基甲酸酯橋的基團；R4為甲基；R5為H、OH、甲氧基或與R3形成環碳酸酯或環氨基甲酸酯橋的基團；連接鍵通過N/9a或N/8a位上Z的氮或通過均位于S2糖C/4″位上R12的碳或R11的氧；R6為H、甲基或乙基；R8為H、N(CH3)2、NH(CH3)或N(CH3)CH2CH3；R9為H；連接位置優選位于C/3位上，或通過S1糖C/3′位上或C/11位或W或Z上的氨基或通過S2糖C/4″位。
還優選通式I中的化合物，其中M具有通式II且(i)Z為NCH3，W為CH2，R2為羥基；或(ii)Z為NH，W為＝CO且R2為甲氧基。(該段中所述的化合物可以滿足或可以不滿足前一部分中剩余的上述優選條件，但優選它們滿足這些條件。)本發明的另一個方面涉及通式I表示的化合物的制備方法。一般來說，可以通過下列方式獲得通式I的化合物首先使鏈L的一端與大環內酯亞單位M連接，然后使該鏈的另一端與非甾類亞單位D連接；或首先使鏈L的一端與非甾類抗炎亞單位D連接，然后使該鏈的另一端與大環內酯亞單位M連接；或最后，使該鏈的一個部分與大環內酯亞單位M連接，而使該鏈的另一個部分與非甾類亞單位D連接，然后使鏈部分的末端以化學方式連接形成鏈L。
本領域技術人員可以理解需要使用用于制備通式I化合物的中間體的被保護的衍生物。可以通過本領域中公知的方法對官能基進行保護和脫保護。羥基或氨基可以被任意羥基或氨基保護基保護，例如，如GreenT.W.；Wuts P.G.M.在《有機合成中的保護基》(Protective Groups inOrganic Synthesis)John Wiley和Sons，New York，1999中所述。可以通過常規技術除去氨基保護基。例如，可以通過溶劑解、例如通過在酸性或堿性條件下水解除去酰基、諸如烷酰基、烷氧羰基和芳酰基。可以在有催化劑、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過氫解裂解芳基甲氧羰基(例如芐氧羰基)。
更具體地說，可以通過下列方法制備通式I中的化合物。
a)可以通過使通式V表示的非甾類抗炎亞單位與通式VIa表示的大環內酯的游離氨基反應生成其中X2為-NH-的通式I化合物，其中通式V的結構式如下 其中L1表示離去基團(諸如羥基)，且通式VIa的結構式如下 該反應一般與具有活化非甾類抗炎亞單位的羧酸基能力的酸性衍生物進行，諸如鹵化物、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類(諸如-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳環二亞胺(EDC)和苯并三唑類)。該反應在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環境中并有堿、諸如有機堿(例如三乙胺)存在的情況下進行。該反應可能需要幾小時至幾天才能完成。
通式V表示的非甾類抗炎亞單位是商購的。非甾類抗炎亞單位D可以含有-C(O)L1基團(諸如游離羧酸基團)或通過本領域中公知的方法衍生。
方案I 按照方案I，可選擇地通過下列步驟衍生含有羥基的NSAID化合物在有吡啶存在情況下的琥珀酸酐的作用，隨后使由此產生的中間體與三乙胺、4-吡咯并吡啶在二氯甲烷中反應而生成含有游離羧酸基團的NSAID(Huang C.M.等《化學與生物學》(Chem.& Biol.)2000，7，453-461，Hess S.等《生物有機和藥物化學》(Bioorg.& Med.Chem.)2001，9，1279-1291)。可以使由此產生的NSAID衍生物與連接基大環內酯化合物、諸如通式VIa偶聯或直接與大環內酯偶聯。
方案II 按照方案II，可選擇地通過下列步驟衍生含有氨基的NSAID化合物氫化鈉和叔丁基碘乙酸酯在N，N-二甲基甲酰胺中的作用而產生NSAID的丁氧羰基衍生物，然后使其與三氟乙酸在二氯甲烷中反應生成含有游離羧酸基團的NSAID(Hess S.等《生物有機和藥物化學》(Bioorg.& Med.Chem.)2001，9，1279-1291)。可以使由此產生的NSAID衍生物與連接基大環內酯化合物、諸如通式VIa偶聯或直接與大環內酯偶聯。
方案III
可選擇地，可以按照方案III衍生含有氨基的NSAID化合物，通過琥珀酸酐在有二甲氨基吡啶、N，N′-二異丙基乙胺存在下的二甲基甲酰胺中的作用產生含有游離羧酸基團的NSAID來進行(Pandori M.W.等《化學與生物學》(Chem.& Biol.)2002，9，567-573)。可以使由此產生的NSAID衍生物與連接基大環內酯化合物、諸如通式VIa偶聯或直接與大環內酯偶聯。
VIa結構的原料大環內酯亞單位的制備已經描述在PCT/HR02/00001中，將該文獻的全部內容引入作為參考，將其復制件作為附錄1。另外參見Bright的美國專利US4,474,768和Bright，G.M.等《抗生素雜志》(J.Antibiot.)1988，41，1029-1047，將每篇文獻的全部內容引入作為參考。
例如，當L為-K-NH-(其中K為與大環內酯結合的連接分子L的部分)時，可以通過將大環內酯環上的＞NH基團衍生成N-K-NH2基團、并使衍生的大環內酯與通式V表示的非甾類抗炎亞單位反應而生成通式I的化合物，其中L1為方案IV的離去基團。
方案IV 當大環內酯上的NH基團連接在大環內酯糖環S1(即去氧糖胺糖)的3′位上時，也可以按照方案IV進行該反應
方案V 或當大環內酯上的NH基團連接在糖環S2的4′位上時，可以按照方案VI進行該反應方案VI 可以通過下列步驟生成反應物大環內酯亞單位將含有克拉定糖上4″位上的羥基取代基的相應大環內酯氧化得到4″位上的＝O取代基，將4″位上的 轉化成環氧基 并用合適的反應物裂解環氧基而得到反應物大環內酯亞單位(M-CH2-NH-K-NH2)。
b)可以通過使通式V表示的非甾類抗炎亞單位與通式VIb表示的大環內酯亞單位的游離羥基反應生成其中X2為-OC(O)-的通式I表示的化合物
該反應一般與具有活化非甾類抗炎亞單位的羧酸基能力的酸性衍生物進行，諸如鹵化物(諸如二氯化乙烯EDC))、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類。該反應一般在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環境中進行。該反應可能需要幾小時至幾天才能完成。
通式VIb結構表示的原料大環內酯亞單位是已知的或可以按照對類似化合物所述的步驟獲得，諸如Costa A.M.等在《四面體通訊》(Tetrahedron Letters)2000，41，3371-3375中所述，將該文獻引入本文作為參考。
例如，當連接部分L為-K-O-時，可以通過(1)將大環內酯環上的＞NH基團衍生成N-K-OH基團和(2)使衍生的大環內酯與非甾類抗炎亞單位D上的游離羧酸基團按照方案VII反應而生成通式I的化合物方案VII 連接基-K-OH可以如下所述與大環內酯亞單位的伯或仲氮原子連接。使大環內酯亞單位與鏈烯酰基衍生物反應，諸如CH2＝CH(CH2)mC(O)O-烷基(例如，甲基丙烯酸酯)。然后諸如使用金屬氫化物(例如LiAlH4)在無水有機溶劑中還原酯基(即-C(O)O-烷基)而得到含有連接基-K-OH的大環內酯亞單位(即M-K-OH)。該還原反應一般在低溫且優選在0℃或0℃以下進行。
當NH連接在大環內酯糖環(諸如大環內酯5位上的糖)的3′位上時，也可以進行該反應。
c)可以通過使如下通式表示的大環內酯亞單位與如下通式表示的含有游離氨基的衍生的非甾類抗炎亞單位在諸如乙腈這類溶劑中反應制備其中X1為-OC(O)-，Q為-CH2-或NH，且X2為-NH-的通式I表示的化合物；其中表示大環內酯亞單位的通式如下 其中4″為糖S2、諸如克拉定糖上的4位；其中含有游離氨基的衍生的非甾類抗炎亞單位的通式如下 從而得到 可以通過使合適的胺(含有連接基-K-NH2)與非甾類抗炎藥的羧酸基團反應生成衍生的非甾類抗炎亞單位(即D-C(O)-NH-K-NH2)。
d)可以通過使大環內酯亞單位和衍生的含有氨基的非甾類抗炎亞單位如下所示反應制備其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NH-的通式I表示的化合物。
e)還可以通過使大環內酯亞單位和含有游離羧酸基團的非甾類抗炎亞單位如下所示反應制備其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NH-的通式I表示的化合物。
f)可以通過使含有離去基團L2(諸如Br)的大環內酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應制備通式I表示的化合物。
可以通過裂解連接在大環內酯環3-位上的糖基且然后使所述的大環內酯與L2-L-L1的試劑反應制備原料大環內酯亞單位，其中L2為離去基團。
g)可以通過使含有離去基團L2(諸如Br)的大環內酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應制備通式I表示的化合物。
h)可以通過使含有離去基團L2(諸如Br)的大環內酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應制備通式I表示的化合物。
傳統上基于糖苷配基的取代模式將16-元環大環內酯類分成亞家族。該家族的主要原型以白霉素、螺旋霉素和泰洛星為代表。
泰洛星是有代表性的16-元大環內酯類，其含有帶有兩個雙鍵(tylonolide)和第三個糖取代基(β-D-mycinose)β-D-mycinose以及與5-羥基連接的二糖的高度取代的糖苷配基。從二糖中水解mycarose得到desmycarosyl-泰洛星(脫碳霉糖泰樂菌素)。
脫碳霉糖泰樂菌素上可能的修飾位置 例如，可以通過對C-20位醛基進行還原氨基化制備16-元環的大環內酯雜化物。
該反應還可以用于17-元氮雜內酯類，如8a-氮雜-高脫碳霉糖泰樂菌素及其衍生物(諸如二-和四氫衍生物)。
R14為氫或羥基
16-元環大環內酯衍生的其它可能性為通過環氧化轉化雙鍵和使用合適的反應物(諸如二胺類)裂解環氧基而得到反應劑大環內酯亞單位(M-CH2-NH-K-NH2)。
還可以用羥基胺鹽酸鹽修飾9位上的酮而得到肟且然后還原成胺。
本發明的另一個方面涉及通式I的化合物在治療炎性疾病、失調和病癥中的應用，所述的性疾病、失調和病癥的特征在于不需要的炎癥免疫反應或與之相關，尤其是TNF-α和IL-1過度分泌誘導或與之相關的所有疾病和病癥。
可以通過本領域中公知的方法測定本發明化合物的治療有效量。由于可以將本發明的化合物比相應單獨的非甾類抗炎藥更有效地轉運至所需部位，所以可以給予比非甾類抗炎藥摩爾量更少的化合物而仍然可以獲得相同的治療作用。此外，由于給予該化合物可以產生比使用相應非甾類抗炎藥更少的副作用，所以可以增加NSAID的量。因此，下表僅用作指導。以摩爾為基準，化合物、其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的治療有效量閾值一般等于或小于非甾類抗炎藥的治療有效量。化合物、其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的寬和優選有效量如下表中所示。
因此，例如，吲哚美辛的優選劑量范圍為50-200mg/天，相當于140-560μmol/天的范圍。相同的基于摩爾的范圍140-560mol的本發明雜化化合物為測定優選劑量范圍的起點。對該手段的精化也屬于本領域技術人員的范圍。
此外，本發明涉及藥物組合物，它含有有效量的本發明化合物和藥學上可接受的賦形劑、諸如載體或稀釋劑。
本發明藥物組合物的制備包括混合、成粒、壓片和溶解組分的步驟。化學載體可以是固體或液體形式。固體載體可以為乳糖、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、硬脂酸鎂、脂肪酸，并不限于此。液體載體可以為糖漿；油，諸如橄欖油、向日葵籽油或大豆油；水；或生理鹽水，并不限于此。類似地，載體還可以含有使活性成分緩釋的成分，諸如硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯。可以制備幾種劑型的藥物組合物。如果使用固體載體，那么這些劑型可以包括可以口服給藥的片劑、膠囊形片劑、硬膠囊、粉劑或顆粒，并不限于此。固體載體的量可以改變，但主要在25mg-1g的范圍。如果使用液體載體，那么制劑可以為糖漿劑、乳劑、軟膠囊或無菌可注射液體或非水液體混懸劑形式。
可以通過局部或全身給予本發明的化合物，例如口服、非腸道、皮下粘膜，例如口含、鼻內、直腸內和陰道內。″非腸道″指的是通過靜脈內、肌內或皮下途經。本發明化合物的相應制劑可以用于預防和治療(預防、延緩、抑制或減輕)因異常或不需要(過度、未調節或調節不良)的炎性免疫反應導致或與之相關的幾種失調(疾病和其它病理性炎癥情況)，所述的異常或不需要炎性免疫反應包括炎癥細胞因子或其它炎癥介體產生，包括但不限于TNF-α和IL-1β。這些疾病包括自身免疫疾病，諸如類風濕性關節炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、多發性硬化、眼色素層視網膜炎、紅斑狼瘡、硬皮病；其它具有炎性成分的關節炎病，諸如類風濕性脊椎炎、骨關節炎、膿毒性關節炎和多關節炎；其它炎性腦病，諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎；其它炎性眼部炎癥，諸如視網膜炎；炎性皮膚病，諸如濕疹、其它皮炎(例如特異性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發的灼傷(日光射線和類似的UV源)；炎癥性腸病，諸如克羅恩病、潰瘍性結腸炎；哮喘；其它過敏性疾病，諸如過敏性鼻炎；與急性哮喘相關的疾病，諸如中風后的大腦損傷；因心肌缺血導致的心臟組織損傷；肺損傷，諸如發生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷；伴有感染的炎癥，諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征；其它與特定器官或組織相關的炎性疾病，諸如腎炎(例如腎小球腎炎)；附件炎；痛風；膽囊炎；慢性阻塞性肺病；充血性心力衰竭；II型糖尿病；肺纖維化；血管疾病，諸如動脈粥樣硬化和再狹窄；和導致移植物排斥的同種異體免疫。
可以通過用于評價炎癥或抗炎作用的任意方法評價本發明化合物的功效。存在許多用于該目的的已知方法，包括但不限于使用超聲造影并結合注射微氣泡、測定炎癥細胞因子(諸如TNF-α、IL-1、IFN-γ)、測定活化的免疫系統細胞并觀察(水腫減少、紅斑減少、癢或燒灼感減輕、體溫下降、患病器官功能改善)以及下面提供的任意方法。
在體外和體內實驗、諸如下列實驗中測定本發明化合物的治療作用。TNF-α和IL-1β在體外人外周血單核細胞中分泌的測定由用Ficoll-PaqueTMPlus(Amersham-Pharmacia)分離PBMC后的肝素化全血制備外周血單核細胞(PBMC)。為了測定TNF-α水平，在具有平底的微量滴定板(96孔，Falcon)中的RPMI 1640培養基內將總體積為200μl的3.5-5×104個細胞培養18-24小時，所述的培養基中補充了10％加熱失活的人AB血清(Croatian Centre For Transfusion Medicine，Zagreb)、100個單位/ml的青霉素、100mg/ml鏈霉素和20mMHEPES(Invitrogen Life Technologies)。在37℃和含有5％CO2的氣體環境以及90％濕度下保溫細胞。在陰性對照中，僅在培養基(NC)中培養細胞，而在陽性對照中，通過添加1μg/ml脂多糖(LPS，大腸桿菌血清型0111B4，SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細胞培養物后測定測試物質對TNF-α分泌的作用。通過ELISA步驟、按照制造商(R & D Systems)的建議測定細胞上清液中TNF-α的水平。測試靈敏度＜3pg/ml TNF-α。如對TNF-α測定所述進行IL-1β水平的測定，僅使用1×105個細胞/孔和0.1ng/ml的LPS。通過ELISA(R & D Systems)測定IL-1β水平。通過下列等式計算TNF-α或IL-1β產生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]*100。
將IC50值定義為抑制50％TNF-α產生的物質濃度。將表現出20μM或20dμM以下濃度的IC50的化合物視為具有活性。使用Graph Pad Prism軟件計算IC50。
RAW 264.7細胞TNF-α分泌的測定使細胞生長在37℃下含有5％CO2的氣體環境以及90％濕度下在DMEM培養基中的(Invitrogen Life Technologies)10％胎牛血清(FBS)中。將20000個細胞/孔平板固定在96孔平板(Falcon)中。在陰性對照中，僅在培養基(NC)中培養細胞，而在陽性對照中，通過添加500pg/ml脂多糖(LPS，大腸桿菌血清型0111B4，SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌，并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細胞培養物后測定測試物質對TNF-α分泌的作用。通過ELISA、按照制造商(R & D Systems)的建議測定細胞上清液中TNF-α的水平。通過下列等式計算TNF-α產生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]×100。
將IC50值定義為抑制50％TNF-α產生的物質濃度。將表現出10μM或10μM以下濃度的IC50的化合物視為具有活性。
人前列腺素-H合酶-1(hPGH-1)和人前列腺素-H合酶-2(hPGH-2)抑制試驗使用PCR、應用來自人胎盤cDNA文庫(Stratagene)的Platinum pfxDNA聚合酶(Invitrogen Life Technologies)擴增編碼hPGH-1和hPGH-2的基因。用于PGH-1的引物序列為5′ATATAAGCTTGCGCCATGAGCCGGAGTCTTC3′和5′ATATGGATCCTCAGAGCTCTGTGGATGGTCGC3′；用于hPGH-2的引物序列為5′ATATAAGCTTGCTGCGATGCTCGCCCGC3′和5′ATATGGATCCCTACAGTTCAGTTCAGTCGAACGTTC 3′。將PCR產物克隆入pcDNA3.1 Hygro(+)質粒(Invitrogen Life Technologies)的HindIII和BamHI限制位點，通過測序證實序列。
對COS-7細胞(ATCC)進行轉染，在37℃下含有5％CO2的氣體環境以及90％濕度下，使細胞在24孔平板(Falcon)內的DMEM培養基中的(Invitrogen Life Technologies)中的10％胎牛血清(FBS)中生長至中完全融合。按照制造商的建議將1μg質粒DNA(含有PGH-1或PGH-2基因或pcDNA Hygro 3.1(+)的pcDNA Hygro 3.1(+)作為陰性對照樣品)與1，5μl Lipofectamine 2000(Invitrogen Life Technologies)合并。轉染后24-48小時，將在DMEM中的測試化合物加入到細胞中，但不除去培養基并在40分鐘后，加入花生四烯酸(Sigma)至終濃度為20μM。30分鐘后，取出上清液并用PGE-2試驗試劑盒(Cayman)。按照制造商的說明測定PGE-2。在陰性對照中沒有檢測到PGE-2。
通過下列等式計算抑制％抑制％＝(1-樣品PGE-2濃度/陽性對照PGE-2濃度)*100小鼠體內LPS-誘導的TNF-α過度分泌的體內模型按照已經上述方法誘導小鼠體內TNF-α分泌(Badger AM等，J.Pharmac.And Env.Therap.，1996，2791453-1461)。在本試驗中，使用8-12周齡的分成6-10只動物一組的雄性Balb/C小鼠。僅用溶劑口服給藥治療動物(陰性對照和陽性對照中)或在用LPS(大腸桿菌血清型0111B4，Sigma)處理前30分鐘給予物質溶液，劑量為1-25μg/動物。2小時后通過腹膜內注射Roumpun(Bayer)和鹽酸氯胺酮(ketanest)(Parke-Davis)對動物實施安樂死。將每只動物的血樣取入“vacutainer”管(BectonDickinson)并按照制造商的建議分離血漿。通過ELISA(Biosource，R & D Systems)、按照制造商所述的方法測定血漿中的TNF-α水平。測試靈敏度＜3pg/ml TNF-α。通過下列等式計算TNF-α產生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]*100。
將在10mg/kg劑量下表現出30％或30％以上TNF-α產生抑制的化合物視為具有活性。
將對上述試驗中的四個和下面的舉例化合物中的三種定量表示的有代表性的結果列在下面
ND-未測定用于止痛活性的扭體試驗在本試驗中，通過將刺激劑、最常見的是乙酸注入小鼠腹腔誘發疼痛。動物具有指定試驗名稱的特征扭體反應(Collier HOJ等，《藥物與化療》(Pharmac.Chemother.)，1968，32295-310；Fukawa K等，《藥理學方法雜志》(J.Pharmacol.Meth.)，1980，4251-259；SchweizerA等，《活性劑的作用》(Agents Actions)，1988，2329-31)。本試驗適合于測定化合物的止痛活性。方法使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River，Italy)。對對照組在腹膜內給予0.6％濃度的乙酸前30分鐘口服給予甲基纖維素，而對驗組在腹膜內給予0.6％乙酸(體積0.1ml/10g)前30分鐘口服給予標準品(乙酰水楊酸)或在甲基纖維素中的測試物質。將小鼠各自置于玻璃漏斗中并在20分鐘期限中記錄每只動物扭體的次數。按照下列等式計算扭體抑制的百分比抑制％＝(對照組中扭體次數-試驗組中扭體次數的平均值)/對照組中扭體的次數×100。
將表現出與乙酰水楊酸相同活性或優于其活性的化合物視為具有活性。
LPS-誘發的小鼠休克的體內模型使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River，Italy)。用無菌鹽水稀釋分離自粘質沙雷氏菌(Serratie marcessans)(Sigma，1-6136)的LPS。首先真皮內給予劑量為4μg/小鼠的LPS注射。18-24小時后，通過靜脈內給予200μg/小鼠劑量的LPS。按照上述方式對對照組給予兩次LPS注射。對試驗組在各自給予LPS前半小時口服所述物質。24小時后觀察存活率。
將在30mg/kg劑量下產生存活率為40％或更好存活率的物質視為具有活性。
實施例1-12的化合物至少在兩次研究試驗中表現出活性。不過，這些結果僅是對化合物生物活性的解釋，而不應以任何方式來限定本發明。
制備方法與實施例前體非甾類抗炎亞單位


化合物D2為S-(+)-布洛芬；帶有手性中心的其余化合物為外消旋混合物。化合物D1為吲哚美辛；D3為氟比洛芬；D4為萘普生；D5為酮洛芬；D6為乙酰水楊酸；D7為舒林酸；D8為依托度酸；D9為酮咯酸；D10為舒洛芬；D11為氟尼辛；D12為雙氯芬酸鈉；且D13為托美丁鈉。
大環內酯亞單位
表1，通式IIA
L1＝-(CH2)3-OHL2＝-(CH2)3-NH2L3＝-CH2-NH-(CH2)2-NH2L4＝-C(O)-(CH2)2-NH-(CH2)2-NH2名稱M1-M6相應于通式IIA的大環內酯亞單位，其中變量R1-R13如表中指定。
實施例1化合物1(通式1M＝M1，L＝L1，D＝D1)在氬氣環境中向吲哚美辛(D1)(200mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應混合物在-5℃下攪拌24小時，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應混合物在100℃下加熱48小時、蒸發并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到56mg化合物1； MS(m/z)1133[MH]+.IR(KBr)cm-13449，2972，2936，1731，1686，1622，1564，1546，1512，1478，1460，1374，1323，1263，1225，1168，1089，1057，1013，958，925，834，804，756，732。
實施例2化合物2(通式I；M＝MI，L＝L1，D＝D2)在氬氣環境中向S-(+)-布洛芬(D2)(115mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應混合物在-5℃下攪拌24小時，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應混合物在100℃下加熱48小時、蒸發并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到43mg化合物2； MS(m/z)981.7[MH]+.IR(KBr)cm-13483，2971，2937，2873，2787，1733，1655，1638，1561，1511，1459，1421，1379，1332，1248，1167，1109，1055，1013，1000，958，900，836，803，756，728，640。
實施例3化合物3(通式I；M＝M1，L＝L1，D＝D3)在氬氣環境中向氟比洛芬(D3)(137mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應混合物在-5℃下攪拌24小時，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應混合物在100℃下加熱48小時、蒸發并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到46mg化合物3； MS(m/z)1119.5[MH]+.IR(KBr)cm-13452，2973，2937，2879，2829，2777，1734，1688，1659，1625，1582，1565，1546，1512，1461，1420，1379，1329，1267，1171，1109，1054，1013，999，959，899，834，801，767，726，699，640。
實施例4化合物4(通式I；M＝M1，L＝L2.D＝D1)在氬氣環境中向吲哚美辛(D1)(104mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到127mg化合物4；MS(m/z)1131.8[MH]+.IR(KBr)cm-13451，2971，2936，2829，1722，1675，1659，1542，1595，1563，1546，1529，1478，1461，1374，1323，1260，1227，1168，1110，1089，1054，1013，957，927，899，834，806，755。
實施例5化合物5(通式1；M＝M1，L＝L2.D＝D2)在氬氣環境中向(S)-(+)-布洛芬(D2)(60mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時且然后蒸發。用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)而得到239mg化合物5；
MS(m/z)981.0[MH]+.IR(KBr)cm-13433，2971，2936，2872，1720，1686，1655，1561，1545，1511，1460，1378，1264，1167，1109，1054，1013，1000，958，902，835，642。
實施例6化合物6(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D3)在氬氣環境中向氟比洛芬(D3)(70mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時且然后蒸發。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到160mg化合物6；MS(m/z)1018.9[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2973，2937，2881，2834，2782，1720，1655，1625，1581，1560，1544，1484，1458，1419，1378，1267，1167，1109，1053，1012，958，900，835，767，726，699，641。
實施例7化合物7(通式1；M＝M1，L＝L2，D＝D4)在氬氣環境中向萘普生(D4)(67mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到162mg化合物7；MS(m/z)1004.9[MH]+.IR(KBr)cm-13433，2972，2937，2876，2829，2788，1719，1655，1607，1560，1542，1508，1459，1377，1265，1230，1167，1109，1053，1013，1000，958，928，895，853，809，755，640。
實施例8化合物8(通式I；M＝M1 L＝L2，D＝D5)在氬氣環境中向酮洛芬(D5)(74mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到114mg化合物8；MS(m/z)1028.9[MH]+.IR(KBr)cm-13450，3062，2972，2937，2876，2834，2788，1722，1658，1598，1580，1544，1458，1378，1319，1284，1168，1109，1081，1053，1013，1000，957，902，834，755，723，705，643。
實施例9化合物9(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D6)在氬氣環境中向乙酰水楊酸(D6)(52mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到127mg化合物9；MS(m/z)955[MH]+.
實施例10化合物10(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D1)將化合物4(120mg；0.1mmole)溶于3mL 0.5 M HCl。將該反應混合物在室溫下攪拌24小時。然后向該反應混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調節至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到32mg化合物10。MS(m/z)973.8[MH]+.
實施例11化合物11(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D2)將化合物5(120mg；0.1mmole)溶于3mL 0.5 M HCl。將該反應混合物在室溫下攪拌24小時。然后向該反應混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調節至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到28mg化合物11。
MS(m/z)822.1[MH]+.IR(KBr)cm-13450，2971，2873，1710，1656，1544，1511，1459，1380，1350，1262，1173，1111，1073，1050，978，957，934，898，803，755，634。
實施例12化合物12(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D5)將化合物8(150mg；0.15mmole)溶于5mL 0.5 M HCl。將該反應混合物在室溫下攪拌24小時。然后向該反應混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調節至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到42mg化合物12。
MS(m/z)870.1[MH]+.IR(KBr)cm-13439，3067，2972，2936，2876，1721，1657，1598，1580，1544，1458，1378，1349，1319，1283，1173，1136，1111，1074，1050，1000，956，904， 863，723，705，643。
實施例13化合物13(通式I；M＝M3，L＝L2，D＝D1)將化合物4(68mg；0.06mmole)溶于10mL甲醇。加入38mg(0.28mmole)的NaOACx3H2O和15mg(0.06mmole)的I2。用500W的鹵素燈將該反應混合物照射2小時。然后加入2-3滴0.1 M Na2S2O3。隨后在減壓條件下蒸發溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯，用水和飽和NaHCO3溶液洗滌。用無水Na2SO4干燥有機層并蒸發。用硅膠柱純化產物，溶劑系統為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到32mg量的化合物13；MS(m/z)1117.9[MH]+。
實施例14化合物14(通式1；M＝M4，L＝L2，D＝D1)將化合物13(100mg；0.09mmole)溶于3mL甲醇。向該溶液中加入127μl N，N-二異丙基乙胺和45μl乙基碘。將該反應混合物在50℃的溫度下攪拌20小時。隨后用30mL乙酸乙酯稀釋該體系并用30mL飽和碳酸氫鈉水溶液和30mL水洗滌。用無水硫酸鈉干燥有機層。通過減壓蒸發溶劑。用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到48mg的化合物14；MS(m/z)1145.7[MH]+。
實施例15化合物15(通式I；M＝M5，L＝L3，D＝D1)在惰性氣體環境中的10mL干燥二氯甲烷中溶解84mg吲哚美辛D1(0.2mmole)。隨后向該溶液中加入0.25mL三乙胺、53mg羥基苯并三唑、200mg大環內酯ML6(0.2mmole)和157mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓條件下蒸發溶劑，并用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到130mg的化合物15；MS(m/z)1188.6[MH]+。
實施例16化合物16(通式1；M＝M6，L＝L4.D＝D1)在惰性氣體環境中的10mL干燥二氯甲烷中溶解43mg吲哚美辛D1(0.1mmole)。隨后向該溶液中加入0.12mL三乙胺、32mg羥基苯并三唑、103mg大環內酯ML7(0.1mmole)和82mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓條件下蒸發溶劑并用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到80mg的化合物16；MS(m/z)1203.1[MH]+；MS(m/z)981.0[MH]+.IR(KBr)cm-13424，2972，2936，2833，1734，1678，1595，1562，1544，1526，1477，1459，1374，1324，1258，1225，1179，1108，1090，1073，1039，1015，959，926，902，836，798，755，693，666，642。
實施例17化合物17(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D7)在氬氣環境中向舒林酸(D7)(103mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到262mg化合物17；MS(m/z)1130.3[MH]+。
實施例18化合物18(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D8)在氬氣環境中向依托度酸(D8)(83mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到78mg化合物18；MS(m/z)1061.4[MH]+。
實施例19
化合物19(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D9)在氬氣環境中向酮咯酸(D9)(74mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到110mg化合物19；MS(m/z)1029.5[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2972，2936，2876，1719，1655，1624，1572，1561，1544，1492，1465，1430，1400，1379，1342，1272，1167，1109，1052，1013，1000，958，894，835，797，758，724，699，670。
實施例20化合物20(通式1；M＝M1，L＝L2，D＝D10)在氬氣環境中向舒洛芬(D10)(75mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到128mg化合物20；MS(m/z)1034.4[MH]+.IR(KBr)cm-13448，3082，2972，2937，2877，2833，2789，1719，1655，1638，1606，1560，1542，1517，1458，1415，1378，1355，1289，1167，1109，1053，1013，1000，958，901，886，860，845，806，753，724，665，640。
實施例21化合物21(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D11)在氬氣環境中向氟尼辛(D11)(86mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到76mg化合物21；MS(m/z)1070，4[MH]+.IR(KBr)cm-13451，2973，2938，2881，1722，1642，1593，1524，1462，1379，1321，1321，1278，1259，1168，1121，1081，1053，1020，958，899，835，795，772，721，666，640。
實施例22化合物22(通式1M＝M1，L＝L2，D＝D12)在氬氣環境中向雙氯芬酸鈉(D12)(92mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到140mg化合物22；MS(m/z)1069.1[MH]+.IR(KBr)cm-13426，3073，2972，2937，2876，2829，2788，1722，1658，1578，1562，1546，1511，1454，1378，1301，1281，1167，1110，1053，1013，999，958，898，836，750，668。
實施例23化合物23(通式IM＝M1，L＝L2，D＝D13)在氬氣環境中向托美丁鈉(D13)(80mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時，然后在減壓條件下蒸發至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到183mg化合物23；MS(m/z)1031.3[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2972，2937，2876，1774，1719，1655，1624，1601，1561，1545，1509，1477，1458，1376，1265，1180，1167，1110，1076，1053，1012，1000，957，883，834，794，751，669，639，620。
權利要求
1.通式I的化合物及其藥學上可接受的鹽和溶劑化物及其各非對映異構體 其中M表示大環內酯亞單位；D表示非甾類亞單位；L為與M和D中的每一個共價連接的連接分子。
2.如權利要求1中所述的化合物，其中M表示通式II的基團 其中(i)Z和W獨立為＞C＝O、＞CH2、＞CH-NRtRs、＞N-RN或＞C＝N-RM或鍵，其中Rt和Rs獨立為氫或烷基；RM為羥基、烷氧基、取代的烷氧基或ORP；RN為氫、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(X)-NRtRs；其中X為＝O或＝S；條件是Z和W不能同時為＞C＝O、＞CH2、＞CH-NRtRs、＞N-RN或＞C＝N-RM或鍵；(ii)U和Y獨立為氫、鹵素、烷基或羥基烷基；(iii)R1為羥基、ORP、-O-S2基團或＝O；(iv)S1為下列通式的糖部分 其中R8和R9均為氫或彼此形成鍵，或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry，其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ，其中RZ為氫或烷基或鏈烯基或炔基或環烷基或芳基或雜芳基或被C2-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、芳基或雜芳基取代的烷基；R10為氫或RP；(v)S2為下列通式的糖部分 其中R3’為氫或甲基；R11為氫、RP或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環氧基的基團；R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環氧基的基團；(vi)R2為氫、羥基、ORP或烷氧基；(vii)A為氫或甲基；(viii)B為甲基或環氧基；(ix)E為氫或鹵素；(x)R3為羥基、ORP、烷氧基或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環碳酸酯或環氨基甲酸酯的基團；或如果W或Z為＞N-RN，則R3為與W或Z形成環氨基甲酸酯的基團；(xi)R4為C1-C4烷基；(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4-烷氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環碳酸酯或環氨基甲酸酯的基團；(xiii)R6為氫或C1-C4-烷基；其中M含有連接位置，它通過該位置經連接基L與D連接；條件是連接位置位于下列基團中的一個或多個上a)位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、氮或環氧基，條件是S1或/和S2被裂解；b)位于Z或W上的活性＞N-RN或-NRtRs或＝O；c)位于R1、R2、R3和R5中任意一個上的活性羥基；d)可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團的任意其它基團；且RP為羥基或氨基保護基。
3.如權利要求1中所述的化合物，其中L表示通式IV的基團X1-(CH2)m-Q-(CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-C(O)-、OC(O)-、N-O-、-OC(O)NH-或-C(O)NH-；X2為-NH-或-NHC(O)-、-OC(O)-、-C(O)-、-O或-CH2-；Q為-NH-或-CH2-或不存在；其中-CH2-或-NH-基團各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代，其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基；符號m和n獨立為0-4的整數，條件是如果Q為NH，那么n不能為0。
4.如權利要求1中所述的化合物，其中D來源于NSAID，所述的NSAID選自醋氯芬酸、阿西美辛、對乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙酰基-水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒藥醇、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來考昔、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserveratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸、水楊酰硫酸酯、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環孢菌素。
5.如權利要求2中所述的化合物，其中Z和W共同為-N(CH3)-CH2-、-NH-CH2-、-CH2-NH-、-C(O)-NH-或-NH-C(O)-；A和B為甲基；E為氫；R為羥基或甲氧基；S1表示去氧糖胺糖，其中R8選自氫、甲基、氨基、C1-C6烷氨基或C1-C6二烷氨基；R9和R10為氫；R1為羥基或O-S2基團，其中S2表示克拉定糖，其中R11為氫或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成＞C＝或環氧基的基團；R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環氧基的基團；R13為甲基；U為氫；Y為甲基；R6為羥基、甲基或乙基；R5為氫、羥基、甲氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環碳酸酯或環氨基甲酸酯橋的基團；R3為羥基或與W或Z形成環氨基甲酸酯橋的基團，或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環碳酸酯或環氨基甲酸酯橋的基團；R4為甲基；條件是連接鍵通過N/9a位上Z的氮或通過均在S2糖C/4″位上的R12的碳或R11的氧。
6.如權利要求3中所述的化合物，其中X1為-CH2-或-OC(O)-；X2為-NHC(O)-；Q為-NH-或不存在。
7.如權利要求4所述的化合物，其中D來源于NSAID，所述的NSAID選自S-(+)-布洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、萘普生、酮洛芬、乙酰水楊酸、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁鈉。
8.特征在于如下式的化合物1
9.特征在于如下式的化合物2
10.特征在于如下式的化合物3
11.特征在于如下式的化合物4
12.特征在于如下式的化合物5
13.特征在于如下式的化合物6
14.特征在于如下式的化合物7
15.特征在于如下式的化合物8
16.特征在于如下式的化合物9
17.特征在于如下式的化合物10
18.特征在于如下式的化合物11
19.特征在于如下式的化合物12
20.特征在于如下式的化合物13
21.特征在于如下式的化合物14
22.特征在于如下式的化合物15
23.特征在于如下式的化合物16
24.特征在于如下式的化合物17
25.特征在于如下式的化合物18
26.特征在于如下式的化合物19
27.特征在于如下式的化合物20
28.特征在于如下式的化合物21
29.特征在于如下通式的化合物22
30.特征在于如下式的化合物23
31.通式I化合物的制備方法 該方法包括a)為了得到其中X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使通式V的化合物與通式VIa表示的大環內酯的游離氨基反應，其中通式V如下 其中L1表示離去基團，且通式VIa如下 b)為了得到其中X2為-OC(O)-的通式I化合物，使通式V的化合物與通式VIb表示的大環內酯的游離羥基反應， c)為了得到其中X1為-OC(O)-，Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環內酯 與如下通式表示的化合物的游離氨基反應， d)為了得到其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環內酯 與如下通式表示的化合物的游離氨基反應， e)為了得到其中X1為-CH2-，Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環內酯 與通式V的化合物反應；f)為了得到通式I的化合物，使具有離去基團L2的通式VIIf或通式VIIg或通式VIIh表示的大環內酯與非甾類抗炎亞單位的游離羧酸反應，其中通式VIIf、通式VIIg、通式VIIh如下
32.藥物組合物，包含如權利要求1-30中所述的化合物及其藥學上可接受的鹽或溶劑化物以及藥學上可接受的稀釋劑或載體。
33.如權利要求1-30中所述的化合物用于制備治療炎性疾病、失調和病癥的藥物的用途，所述的炎性疾病、失調和病癥的特征在于不需要的炎性免疫反應或與之相關，尤其是TNF-α和IL-1過度分泌誘導或與之相關的所有疾病和病癥。
34.通式I表示的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物用于制備治療有此需要的對象中與白細胞浸潤入發炎組織相關的炎性病癥和免疫或過敏性失調的藥物的用途，包括給予所述的對象治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物。
35.權利要求34所述的用途，其中炎性病癥和免疫失調選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎和囊性纖維化。
36.權利要求34所述的用途，其中所述的炎性病癥和免疫失調選自肺、關節、眼、腸、皮膚和心臟的炎性病癥或免疫失調。
37.權利要求34所述的用途，其中所述的炎性病癥和免疫失調選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎、囊性纖維化、類風濕性關節炎、類風濕性脊椎炎、骨關節炎、痛風性關節炎、眼色素層炎、結膜炎、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、遠端直腸炎、牛皮癬、濕疹、皮炎、冠狀動脈梗死性損害、慢性炎癥、內毒素休克和平滑肌增生性失調。
38.通式I表示的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物用于制備減輕患病器官或組織炎癥的藥物的用途，包括將治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物遞送至所述的器官或組織。
全文摘要
本發明涉及(a)通式I表示的新化合物、(b)其藥學上可接受的鹽、前體藥物和溶劑化物、(c)其制備方法和中間體和(d)它們在治療人和動物的炎性疾病和失調中的應用其中M表示來源于具有在炎性細胞內累積特性的大環內酯的大環內酯亞單位(大環內酯部分)，D表示來源于具有抗炎、止痛和/或解熱活性的非甾類藥物(NSAID)的非甾類亞單位(非甾類部分)，且L表示共價連接M和D的連接基。
文檔編號A61P9/10GK1665829SQ03816092
公開日2005年9月7日 申請日期2003年7月7日 優先權日2002年7月8日
發明者M·默塞普, M·麥西克, L·托馬斯科維克, S·馬科維克 申請人:普利瓦研究院有限公司