具有血管活性腸肽的生物學活性的化合物在治療結節病中的用途的制作方法

專利名稱：具有血管活性腸肽的生物學活性的化合物在治療結節病中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及作為用于治療與結節病相關的疾病的治療藥物的高度生物學和藥理學活性的肽。根據本發明的方法，可用于治療所述疾病的肽包括至少一種特殊的高度保守的氨基酸殘基序列，該序列似乎在肺和小動脈高壓事件中發揮重要作用。可以證實的是，具有所述特殊序列的已知的天然存在的肽″血管活性腸肽(VIP)和“垂體腺苷酸環化酶-激活多肽(PACAP)”，是有效的藥物，可將其成功地用于治療結節病。此外，本發明公開了用于在所述方法中治療結節病的藥物組合物。
背景技術：
肺的結節病主要是一種間質性肺病，其中炎癥過程累及肺泡、小支氣管和小血管。這些個體一般具有呼吸困難，特別是運動時，并且具有干咳。咯血很少見，也很少有痰。
隨著結節病的進展，在受影響的組織中出現小的腫塊，或者肉芽腫。在少數病例中，肉芽腫不愈合和消失，組織容易保持發炎并且產生瘢痕(纖維化)。
20-30％的結節病患者具有持續的肺損傷。10-15％的患者中結節病可以轉為慢性。
結節病的癥狀可以由許多因素導致，包括肉芽腫的“質量效應”；免疫復合物脈管炎(如在結節紅斑中所出現的)；代謝活性肉芽腫；和甚至在肉芽腫病變緩解之后持續的纖維化變形。
肺是該疾病的主要靶點。大約88％的結節病患者具有肺累及。通常通過比較目前的胸片與起病時拍攝的胸片來對胸內結節病進行分期。胸內結節病分為4期。大約8％的結節病患者處于0期。在該期，在多系統累及存在下，胸片是正常的。肺功能檢查的結果通常是正常的，大多數患者自發緩解。約51％的患者(包括描述于舉例說明的病例中的患者)為1期。在該期，胸片顯示雙側肺門淋巴結病，有或沒有右氣管旁淋巴結增大。
肺功能檢查的結果是正常的，只是擴散量降低，但機械性正常。大多數患者無癥狀，或具有肺以外的癥狀。大多數患者(70-75％)在兩年內緩解，但僅僅10-15％進展到2期。
29％的結節病患者處于2期。在該期，胸片顯示肺門淋巴結病，伴有彌散的肺浸潤。與胸片顯示的異常的嚴重程度相比，體征和癥狀通常較輕。也可存在多發肺結節或浸潤。肺功能檢查證明是限制性疾病，擴散量降低，也可以存在由支氣管累及導致的阻塞性改變。這些患者中的一半自發緩解，但25-30％保持在2期或進展到3期。在患有3期結節病的患者中，胸片顯示彌散的肺浸潤，沒有肺門淋巴結病。
僅有約12％的患者處于3期。胸片通常顯示纖維化，肺體積縮小，膈上升，以及“蜂窩狀”(細纖維化遍布間質肺組織)。
患有3期結節病的患者可以具有輕微的癥狀(即，咳嗽、呼吸困難、輕度體重減輕)或嚴重的問題，包括肺動脈高壓、cor pulmonale和呼吸衰竭。許多3期患者在肺功能檢查中具有內在的限制性改變，但由于支氣管累及，許多也具有阻塞性改變。3期患者通常進行慢性過程，肺纖維化等合并癥是常見并且不可逆的。在該期，肺外表現也是常見的，特別是皮膚累及6。在3期的最多30％患者中，結節病在2年內自發緩解。
表1顯示在診斷時結節病的分期和胸片結果。在結節病患者中觀察到的其它胸內胸片表現包括可以表現為廣泛或斑片狀的浸潤、肺不張、結節樣空洞、胸膜增厚、胸膜滲出和鈣化。
表1
結節病的治療目的包括緩解干擾器官功能的炎性病變，防止肺纖維化和減輕癥狀。如果患者處于1期或2期病變，肺功能檢查正常并且沒有威脅生命的體征或癥狀，僅僅需要觀察，因為結節病通常是自限性疾病并且不需要特殊治療。如果患者在任一期具有全身癥狀或者肺功能惡化，或患者處于或進展至3期病變，則需要治療。
皮質類固醇仍然是治療的主要手段，但沒有證明它們可以延長壽命。存在一些不同的方案。為了誘導疾病緩解，可以以每日40-60mg劑量，分次施用的強的松開始，共施用6-8周，然后在4-6個月的時間內逐漸減少到15-20mg的劑量。已經采用每隔一日40-60mg劑量的強的松進行初始治療，具有很好的結果。3，8患者然后可以以每日5-10mg的劑量進行維持，以便在長達一年的時間內抑制疾病活動。如果具有以下形式的結節病，患者應該接受治療高鈣血癥和高尿鈣、損壞外形的皮膚病變、眼部結節病(該癥狀可以用局部和/或全身甾體類藥物治療)、心臟結節病、神經系統結節病和其它確定是臨床嚴重的器官累及。8在中斷皮質類固醇治療后，25-40％的結節病患者在2-3個月內緩解。如果這樣，應該重復臨床檢查和實驗室檢驗。一些專家采用“脈沖治療”，其中在急性惡化期以3g/日的劑量靜脈內施用甲基強的松，共施用三天。3吸入的甾體類已經用于結節病患者以緩解癥狀，但還沒有證明該治療減緩疾病進展。吸入和口服的支氣管擴張劑、補充的氧和合成的“液體”眼淚也被用于減輕癥狀。局部的眼用甾體類已經被用于減輕結節病的眼部表現。如果結節紅斑和關節炎的癥狀存在于2期病變的患者中，可以使用非甾體類抗炎藥，如吲哚美辛(Indocin)，劑量為25mg，每日三次。8已經報道了更新的療法。每隔一日給予200mg劑量的羥基氯喹(Plaquenil)，共施用9個月，可以用于治療皮膚結節病，但可以持續損害眼，因此，必須經常進行眼部檢查。還發現羥基氯喹也可以幫助控制高鈣血癥。1以每周一次7.5-15mg的低劑量施用的氨甲喋呤(Rheumatrex)已被證明有益于治療難治性結節病，特別是肌肉骨骼和皮膚型。1也存在其它療法，但只進行了很少的對照試驗苯丁酸氮芥(Leukeran)、環磷酰胺(Cytoxan)和硫唑嘌呤(Imuran)。在很少見的情況下，在患有嚴重、難治性疾病的患者中進行肺移植，其結果不同。一些患者在移植的肺中具有肉芽腫病變的復發。
血管活性腸肽(VIP)VIP是由以下氨基酸序列組成的具有28個氨基酸的肽(從N到C末端)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQID NO.1).
健康的個體具有低濃度的VIP(＜40pg/ml血清)。
VIP是一種廣泛分布的肽激素，它能介導多種生理學反應，包括胃腸分泌，胃腸血管和呼吸道平滑肌松弛，脂肪細胞中的脂解，垂體激素分泌以及在注射到中樞神經系統中之后的激動和過熱。在生理學狀態下，VIP起著神經內分泌介質的作用。某些新的發現表明，VIP還能調控正常細胞以及惡性腫瘤細胞的生長和增殖(Hultgardh，Nilsson A.，Nilsson，J.，Jonzon，B.等，血管活性腸多肽的生長抑制特性。Regul.Pept.22，267-274.1988)。所述生物學作用是通過位于各種細胞的表面膜上的特異性受體(VIP-R)介導的(IshiharaT.Shigemoto，R.，Mori，K.等，血管活性腸多肽的新型受體的功能性表達和組織分布。Neuron 8，811-819.1992)。VIP可能對來自成神經細胞瘤，乳腺癌，肺癌和結腸癌的腫瘤細胞產生刺激和營養作用(例如，Moody等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90，4345，1993)，通過反饋機制誘導它的自身的受體。在某些場合下，VIP產生了對有絲分裂的劑量依賴型刺激(Wollman等，Brain Res.，624，339，1993)。業已證實VIP和它的生物學功能性類似物和衍生物具有血管平滑肌松弛活性(Maruno，K，Absood，A.，和Said，S.I.VIP能抑制人氣道平滑肌細胞的基礎和組胺刺激的增殖。Am.J.Physiol.268，L1047-LI051，1995)，毛生長活性，細胞程序死亡活性強化的持續的支氣管擴張活性，而又沒有明顯的心血管副作用，并且能有效治療與支氣管痙攣相關的失調或疾病，包括哮喘，高血壓，陽痿，局部缺血，干眼病和精神疾病，如Alzheimer′s病的某些病例(例如，參見WO9106565，EP 0536741，US 3,880,826，EP 02 04447，EP 04 05242，WO 9527496，EP 0463450，EP0613904，EP 0663406，WO 9735561，EP0620008)。
業已在氣管和支氣管的氣道上皮上檢測到VIP受體。它還在毛細管周圍的巨噬細胞中，在氣管和支氣管的結締組織中，在肺泡壁中，以及在肺靜脈和肺動脈的內膜下表達。肽能神經纖維被認為是肺中的VIP的來源(例如Dey，R.D.，Shannon-WA，Jr，和Said，S.I.VIP-免疫活性神經在狗，貓和人類受試者的氣道和肺血管中的定位。Celland Tissue Research 220，231-238.1981；Said，S.I.哮喘中的血管活性腸多肽(VIP)。Ann.N.Y.Acad.Sci.629，305-318.1991)。VIP能降低肺血管系統的阻力(例如Hamasaki，Y.，MoVarad，和Said，S.I.對貓肺動脈的松弛作用與乙酰膽堿，異丙腎上腺素，和PGE1的比較。J.Appl.Physiol.54，1607-1611，1983；Iwabuchi，S.，Ono，S.，Tanita，T等，血管活性腸肽在分離的大鼠肺中導致一氧化氮依賴型肺血管擴張。Respiration 64，54-58，1997；Saga，T.和Said，S.I.血管活性腸肽能松弛分離的人支氣管，肺動脈和肺實質。Trans.Assoc.Am.Physicians.97，304-310，1984)。進一步的研究表明了VIP-R在肺內的高速度表達，它體現為在注射了99mTc-VIP的PPH患者的肺中放射性標記過的VIP的高水平攝取(例如Raderer，M.Kurtaran，A.，Hejna，M.等。在患有結腸直腸癌的患者體內的123I-標記過的血管活性腸肽受體閃爍照相術。Br.J.Cancer78，1-5，1998；Raderer，M.Kurtaran，A.，Yang，Q.等，在患有胰腺癌的患者體內的碘123血管活性腸肽受體掃描。J.Nucl.Med.39，1570-1575，1998；Raderer，M.Kurtaran，A.，Leimer，M.等。使用(123)I-血管活性腸肽和(111)I-DTPA-D-Phel-octreotide在194位類癌患者中的肽受體閃爍照相術的值Vienna University Experience，1993-1998，J.Clin.Oncol.18，1331-1336，2000；Virgolini，I.，Kurtaran，A.，Raderer，M.等，血管活性腸肽受體閃爍照相術，J.Nucl.Med.36，1732-1739，1995)。
垂體腺苷酸環化酶激活多肽(PACAP)
PACAP是從綿羊下丘腦中分離的神經肽，它由含有以下38個氨基酸殘基的序列組成(從N-到C-末端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ssr-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2).
業已鑒定了兩種形式的肽PACAP-38和C-末端截短的PACAP-27。與VIP具有68％同源性的PACAP-27具有以下序列(從N-到C-末端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQ ID No.3)PACAP在刺激腺苷酸環化酶方面非常有效，因此，能提高各種細胞中腺苷3，5-環單磷酸(cAMP)的水平。所述化合物起著下丘腦激素，神經遞質，神經調節劑，血管松弛劑，和神經營養因子的作用。PACAP在垂體細胞中的主要調控作用，似乎是調節垂體激素和/或控制垂體腺細胞生長和分化的調控蛋白的基因表達。所述作用似乎是通過旁分泌或自分泌作用直接或間接表現的。PACAP在內分泌系統中已發揮重要作用，它是作為來自腎上腺髓質的腎上腺素的有效的促分泌素。該化合物還能刺激胰島素的釋放。在精子形成期間，PACAP在睪丸生殖細胞中的階段特異性表達，表明了它在生殖細胞成熟方面的調控作用。在卵巢中，PACAP是在排卵前濾泡的顆粒細胞中瞬時表達的，并且似乎與卵巢中的LH-誘導的細胞事件相關，包括抑制濾泡細胞程序死亡。在中樞神經系統中，PACAP起著神經遞質或神經調節劑的作用。更重要的是，PACAP是神經營養因子，它可能在腦發育期間發揮重要作用。在成人腦中，PACAP似乎起著神經保護因子的作用，它能減輕由各種刺激導致的神經損傷。PACAP廣泛分布于腦和外周器官中，主要分布于內分泌胰腺，性腺，和呼吸道和泌尿生殖道中。業已表征了兩種類型的PACAP結合位點。I型結合位點具有對PACAP的高親和力(以及對VIP的低的多的親和力)，而II型結合位點對PACAP和VIP具有類似的親和力。PACAP受體的分子克隆，業已證實了三種不同受體亞型的存在。這些受體是PACAP-特異性PAC1受體，它是與若干種傳導系統偶聯的，以及兩種PACAP/VIP-不同的VPAC1和VPAC2受體，它們主要與腺苷酰環化酶相關。PAC1受體在腦和垂體以及腎上腺中的含量特別豐富，而VPAC受體主要是在肺，肝，和睪丸中表達。
發明概述本發明首次描述了VIP、PACAP和具有VIP或PACAP的生物活性的化合物用于治療結節病的臨床相關性。VIP和PACAP是在中樞神經系統的多個部分合成的人類肽，例如特殊的腦區，如海馬和皮質，以及垂體腺和外周神經節。另外，VIP是由免疫細胞和某些腫瘤細胞(例如胰腺癌)分泌的。
本發明的目的是提供已知化合物的新用途，以及新的化合物，可將其用于預防和/或治療結節病，以及使用所述化合物的方法。
令人吃驚的是，業已發現包括高度保守的十肽序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-VaL-Lys-Lys-Tyr-Leu的肽或多肽在給患有結節病的癥狀和病癥的患者施用時表現出高效力。包括該序列，并且一共具有10-60，優選10-38，更優選10-28或10-23個氨基酸殘基的化合物，具有與VIP或PACAP非常類似或相同的生物學功能，后者也包括所述高度保守的序列。本發明的另一個結果是，VIP，PACAP以及它的截短形式，例如PACAP-27，也是用于預防和治療結節病的很有效的化合物，它能抑制和/或調控在人體內造成所述疾病的細胞過程。
一般來說，發現VIP-和PACAP-樣肽和多肽可以具有上述治療功能和效力，它們具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸殘基，A和B是彼此獨立的；并且，n，m是0-25的整數；n和m是彼此獨立的。m的值優選為4-18，更優選5-15，最優選10-15。
其中(A)n(如果n＞2)包括位于N-末端方向的靠近(1-10氨基酸殘基)上述十肽序列的三肽序列His-Ser-Asp和/或Phe-Thr-Asp的多肽或肽具有增強了的活性。
因此，這樣的多肽，其中(A)n(如果n＞2)表示(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p，且(X)o(如果o＞2)表示(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X，Y，X′，X″是任何天然存在的氨基酸殘基；并且o，p是0-11的整數，而r，q是0-4的整數，具有特別高的效力。o和p的優選值為0-8，更優選1-5。r的優選值為0-2。
屬于所述通式的優選例子有His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.1，VIP)；His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2，PACAP-38)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQ ID No.3，PACAP-27)；本發明還公開了屬于上述通式的化合物(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中，A，B是任何天然存在的氨基酸殘基，A和B是彼此獨立的；并且n，m是0-25的整數，n和m是彼此獨立的，其前提是，排除了VIP，PACAP和PACAP-27(截短的PACAP)。
所述新型肽的優選例子有(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-
Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lts-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)，(viii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸殘基。
總之，本發明的目的是提供以下主題·用于治療人肺中與結節病癥狀直接或間接相關的疾病或病癥的用途或方法，包括給予患者具有血管活性腸肽(VIP)或垂體腺苷酸環化酶-激活多肽(PACAP)的生物學活性的化合物，所述化合物優選是包括高度保守的序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)的肽或多肽，更優選地，它們包括His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)和/或Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
·一種相應的用途和方法，其中在施用所述肽和/或多肽后，肺動脈壓降低10％以上，更優選降低20％以上，最優選降低10-30％。
·一種相應的用途和方法，其中在施用所述化合物后，舒張壓降低5-25％，更優選降低10-20％，收縮壓降低10-30％，更優選降低10-25％。
詳細說明本發明的具有治療作用的合適的化合物是那些具有與VIP或PACAP相同，以及減弱了的或增強了的生物學活性的化合物。本發明的優選化合物具有相同或增強了的生物學活性。屬于這一類型的所有化合物包括以下序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ IDNo.4)。
本發明還包括所披露的具有相同生物學活性的肽和多肽的衍生物。
術語“相同的生物學活性”表示與所述肽和多肽，優選VIP或PACAP的相關的特性相當的生物學，生理學或治療活性或功能。
術語“衍生物”表示或多或少直接源于諸如VIP或PACAP的相應的肽的肽化合物，并且通過某些添加，缺失，突變或修飾進行過改變，而沒有改變所述母體肽的生理學特性。例如，合適的VIP衍生物披露于以下文獻中WO 8905857，WO 9106565，EP 0663406和WO 9729126(Fmoc保護的VIP)。所述術語還包括本發明肽和多肽的偶聯物，所述偶聯物包括與諸如脂質體的親脂實體偶聯的母體肽或多肽。例如，VIP-脂質體產物披露于WO 9527496或WO 9735561中，并且在生物利用度和蛋白水解降解方面具有改善了的特性。另外，該術語還包括片段，略微修飾過的片段，包括截短的形式。
術語“類似物”表示與本發明的多肽和肽，優選VIP相比具有不同的結構和組成的化合物，不過，它不具有改變了的生物學特性。VIP類似物可以是天然的或合成的肽，不過也可以是非肽。本發明的VIP類似物優選是肽。已知VIP類似物的例子披露于以下文獻中EP0325044(環狀肽)，EP 0225020(線性肽)，EP 0536741(環狀VIP修飾)，EP 0405242，EP 0184309和EP 0613904。所述術語還包括VIP或PACAP同源物，它們不是VIP或PACAP，不過與VIP具有很高的結構類似性。本發明的VIP同源物是PACAP本身，以及它的截短的形式PACAP-27。該術語還包括這樣的同源物，它像VIP那樣能夠形成兩親性螺旋。優選的VIP/PACAP同源物是包括一個或多個共有序列的肽。其例子包括肽組氨酸異亮氨酸(PHI)，肽組氨酸甲硫氨酸(PHM)，人生長激素釋放因子(GRF)，垂體腺苷酸環化酶激活肽(PACAP)，胰泌素和胰高血糖素。
術語“穩定化形式”表示衍生物或類似物，其中，所述親本肽進行過改變，以便在血液和血清中獲得更高的穩定性和更長的半衰期。如果所述多肽被酶活性分解的話，所述穩定化形式是優選的。可能的穩定化形式有環狀肽或多肽，如環狀VIP或環狀-PACAP，融合蛋白，優選Fc-融合蛋白或聚乙二醇化多肽，如聚乙二醇化的VIP或PACAP。用于生產所述多肽的方法為本領域所熟知。可以通過連接化學部分，保護多肽和肽免受蛋白水解作用。所述連接能有效阻斷蛋白水解酶與所述蛋白主鏈本身發生物理接觸，并因此防止降解。聚乙二醇就是一種這樣的化學部分，業已證實它能抑制蛋白水解作用(Sada等，J.Fermentation Bioengineering 71137-139，1991)。除了防止蛋白水解裂解之外，業已發現生物學活性蛋白的化學修飾在某些場合下能提供額外的優點，如提高所述治療蛋白的穩定性和循環時間，并且降低免疫原性(US.4,179,337；Abuchowski等，Enzymes as Drugs；J.S.Holcerberg和J.Roberts，eds.pp.367-383，1981；Francis，Focus on Growth Factors 34-10；EP 0401384)。與非聚乙二醇化的化合物相比，添加聚乙二醇，在生理學pH下提高了本發明的肽和多肽的穩定性。與鹽相比，聚乙二醇化的多肽/蛋白也得到了穩定。
術語“融合蛋白”表示包括本發明多肽，優選VIP或VIP衍生物或類似物，如PACAP的化合物，特別是穩定化形式的化合物，它是與另一種肽或蛋白融合的。所述蛋白優選是免疫球蛋白分子，更優選它的片段，最優選IgG分子，優選IgG1的Fc部分。在WO 200024278中披露了一種Fc-VIP融合蛋白，并且在血清和血液中具有延長了的半衰期。另一種例子是Fc-PACAP和FC-PACAP-27。
可以將本發明的化合物用作藥物或用作診斷方式，評估個體的病理學狀況。
術語“個體”優選表示哺乳動物，特別是人。將所述化合物用于藥物組合物和制劑中，所述組合物通常包括可以藥用的載體，賦形劑，或稀釋劑。用于制備和施用本發明化合物的技術，可以從以下文獻中查閱到″Remington′s Pharmaceutical Sciences″Mack PublishingCo.，Easton PA。
在本文中，術語“可以藥用的載體”表示惰性的，無毒的固體或液體填料，稀釋劑或包衣材料，它不會與所述活性化合物或所述患者產生不利的反應，或任何其他制劑，如片劑，丸劑，糖衣藥丸，膠囊，凝膠，糖漿，糊劑，和懸浮液等。合適的，優選液體載體為本領域所熟知，如無菌水，鹽水，葡萄糖水溶液，糖溶液，乙醇，甘油和油，包括來自石油，動物，植物的油或合成的油，例如，花生油，大豆油和礦物油。
本發明的制劑能夠以含有腸胃外施用常用的常規無毒可以藥用的載體，稀釋劑，佐劑和媒介物的單位劑量形式施用。
在這里，術語“腸胃外”包括皮下，靜脈內，關節內，和氣管內注射和輸液技術。腸胃外組合物和組合最優選是以藥團形式或以恒定的輸液形式按照已知方法通過靜脈內途徑施用的。
其它施用途徑，如口服施用或通過吸入或鼻噴霧施用也是適合的。
用于口服的片劑和膠囊包括常規賦形劑，如粘接劑，填料，稀釋劑，成片劑，潤滑劑，崩解劑，以及濕潤劑。可以按照本領域眾所周知的方法對片劑進行包衣。
對于吸入，優選以氣溶膠形式攜帶本發明的化合物。氣溶膠及其制備方法是本領域公知的。如果必須治療直接的肺部癥狀，能夠通過含有本發明的肽或多肽，例如VIP或PACAP的吸入器施用的氣溶膠是優選的。
本發明的單位劑量可以包括每日所需的本發明化合物的量，或構成所述需要的劑量的小的多個劑量。特定患者(哺乳動物，包括人)的最佳的治療上可以接受的劑量和用藥次數，取決于多種因素，如所使用的具體活性材料的活性，年齡，體重，一般健康狀況，性別，飲食，施用時間和途徑，清除速度，酶活性，治療的目標，即治療或預防，以及要治療的疾病的性質。因此，在受治療患者(體內)的組合物和組合中，本發明化合物的每天的藥理學有效劑量為大約5ng-200μg/kg體重，優選20ng-20μg/kg體重。
出乎意料的是，正如在以下實施例中所證實的，發現上文所定義的以及在權利要求書中所限定的肽或多肽，上述所有VIP和PACAP，在治療結節病方面具有有益作用。以上數據證實了用于治療尚不能有效治療的疾病的明顯改進。本發明的一個優點是，所有包括上文所述高度保守的十肽序列的所有實驗過的多肽是有效的。
實施例實施例1一名患有嚴重的3期結節病和繼發性肺動脈高壓的患者正在進行皮質類固醇furosemid和抗凝劑的治療。在VIP吸入治療(每天200μg溶于12ml 0.9％NaCl，每次吸入4×3ml)期間和之后進行右側心導管插入(Swan-Ganz，Baxter，Irvine，CA，USA)以測量平均肺動脈壓(mPAP)、心輸出量(CO)、平均動脈壓(MAP)、肺毛細血管楔壓(PCWP)、混合靜脈氧飽和度(SvO2％)和全身動脈氧分壓(PaO2％)，共進行12周。在VIP治療(每天200μg溶于12ml 0.9％NaCl)期間和之后根據標準方法測量結節病患者的FEV 1(1秒用力呼氣體積)、FVC(用力肺活量)，TLC(總肺容量)，AaD02(動脈-肺泡氧差)。通過MicroDropMaster Jet(MPV，Truma，Germany)吸入VIP 12周，使用3μm的粒度，以便提供所述物質的肺泡沉積。
用VIP治療12周之前和之后的結節病患者的血液動力學和肺功能參數概括于表2。
在6分鐘步行實驗中，患者從治療前的210米改善為治療后的350米。
表2
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序列表<110>Mondobiotech SA<120>具有血管活性腸肽的生物學活性的化合物在治療結節病中的用途<130>PMB-0207 INT<160>14<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>28<212>PRT<213>人<400>1His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20 25<210>2<211>38<212>PRT<213>人<400>2His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys20 25 30Gln Arg Val Lys Asn Lys35
<210>3<211>27<212>PRT<213>人<400>3His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu20 25<210>4<211>10<212>PRT<213>人<400>4Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu1 5 10<210>5<211>23<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(8)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<400>5Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>6
<211>23<212>PRT<213>人<400>6Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>7<211>18<212>PRT<213>人<400>7Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu<210>8<211>23<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基
<400>8His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>9<211>23<212>PRT<213>人<400>9His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>10<211>23<212>PRT<213>人<400>10His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>11<211>28<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(24)..(28)<223>第24-27位的X可以是任何天然存在的氨基酸殘基。
第28位的X可以是H或任何天然存在的氨基酸殘基<400>11His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Mat Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25<210>12<211>38<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(38)<223>X是任何天然存在的氨基酸殘基<400>12His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa35<210>13<211>3<212>PRT<213>人<400>13Phe Thr Asp1<211>14<211>3<212>PRT<213>人<400>14His Ser Asp權利要求
1.一種化合物在制備用于治療患有與結節病直接或間接相關的疾病或病癥的患者的藥物中的用途，其中，所述化合物是包括以下氨基酸序列的肽或多肽Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)。
2.如權利要求1的用途，其中，所述肽或多肽還包括至少一種下列氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)；Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
3.如權利要求1的用途，其中，所述肽或多肽還包括以下氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)和Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
4.如權利要求1的用途，其中，所述肽或多肽具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸殘基，A和B是彼此獨立的；并且n，m是0-2 5的整數；n和m是彼此獨立的。
5.如權利要求4的用途，其中，如果n＞2，(A)n具有以下序列(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p其中X，Y是任何天然存在的氨基酸殘基，X和Y是彼此獨立的；并且o，p是0-11的整數，o和p是彼此獨立的。
6.如權利要求5的用途，其中，如果o＞2，(X)o具有以下序列(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X′，X″是任何天然存在的氨基酸殘基，X′和X″是彼此獨立的；并且r，q是0-4的整數，r和q是彼此獨立的。
7.如權利要求4的用途，其中，所述肽或多肽的序列選自下組(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Ash-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)；(viii)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQID No.1，VIP)；(ix)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQID No.3，PACAP-27)；(x)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；(xi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2，PACAP-38)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸殘基。
8.如權利要求7的用途，其中，任意所述肽或多肽是穩定化形式。
9.如權利要求1-8中任意一項的用途，其中所述肽或多肽具有VIP或PACAP、或其任意生物學活性衍生物、截短形式、類似物或融合蛋白的生物學功能，或與VIP或PACAP、或其任意生物學活性衍生物、截短形式、類似物或融合蛋白功能上相似。
10.如權利要求1-9中任意一項的用途，其中所述藥物是作為可用于吸入的氣溶膠提供。
11.一種治療人肺中與結節病直接或間接相關的疾病或病癥的方法，包括給患者施用包括以下氨基酸序列的肽或多肽Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)。
12.如權利要求11的方法，其中，所述肽或多肽還包括至少一種下列氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)；Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
13.如權利要求11的方法，其中，所述肽或多肽具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸殘基，A和B是彼此獨立的；并且n，m是0-25的整數；n和m是彼此獨立的。
14.如權利要求13的方法，其中，如果n＞2，(A)n具有以下序列(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p其中X，Y是任何天然存在的氨基酸殘基，X和Y是彼此獨立的；并且o，p是0-11的整數，o和p是彼此獨立的。
15.如權利要求14的方法，其中，如果o＞2，(X)o具有以下序列(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X′，X″是任何天然存在的氨基酸殘基，X′和X″是彼此獨立的；并且r，q是0-4的整數，r和q是彼此獨立的。
16.如權利要求13的方法，其中，所述肽或多肽的序列選自下組(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)；(viii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸殘基。
17.如權利要求11-16中任意一項的方法，其中，任意所述肽或多肽是穩定化形式。
18.如權利要求11-17中任意一項的方法，其中所述肽或多肽具有VIP或PACAP、或其任意生物學活性衍生物、截短形式、類似物或融合蛋白的生物學功能，或與VIP或PACAP、或其任意生物學活性衍生物、截短形式、類似物或融合蛋白功能上相似。
19.如權利要求11-18中任意一項的方法，其中所述藥物是作為可用于吸入的氣溶膠提供。
全文摘要
本發明涉及作為用于治療與結節病相關的疾病的治療藥物的高度生物學和藥理學活性的肽。根據本發明的方法，可用于治療所述疾病的肽包括至少一種特殊的高度保守的氨基酸殘基序列，該序列似乎在肺和小動脈高壓事件中發揮重要作用。可以證實的是，具有所述特殊序列的已知的天然存在的肽″血管活性腸肽(VIP)和“垂體腺苷酸環化酶－激活多肽(PACAP)”，是有效的藥物，可將其成功地用于治療結節病。此外，本發明公開了治療患有結節病的患者的方法。
文檔編號A61K38/00GK1658896SQ03813424
公開日2005年8月24日 申請日期2003年6月5日 優先權日2002年6月10日
發明者D·貝維克 申請人:蒙杜生物科技安斯塔特實驗室