專利名稱：采用表皮生長因子治療皮膚傷口的方法和組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及采用表皮生長因子(EGF)治療皮膚傷口的方法和組合物。
背景技術：
EGF對上皮細胞代謝作用的促進作用以及對傷口(例如皮膚和胃潰瘍、燒傷和角膜損傷)愈合的刺激作用，顯出其在治療糖尿病性足部潰瘍方面的應用前景。然而，盡管濃度為10g/ml的EGF能促進角膜和燒傷創傷的愈合，相同濃度的EGF卻不能促進靜脈淤積性潰瘍患者傷口的上皮形成。
糖尿病足部潰瘍是糖尿病的主要并發癥。與非糖尿病患者相比，糖尿病患者非外傷性截肢的風險要高5-15倍。在1996-1998年期間，在香港的當地醫院中對47％的糖尿病患者實施了下肢切斷術。盡管采用傳統方法能治愈一些患者，但是對于一些患者而言，糖尿病性足部潰瘍通常是難以醫治的，并且如果伴有感染和壞疽的話，將實施切斷術。據報道，幾種新的療法例如氧艙、血小板衍生生長因子(PDGF)以及各種局部敷裹等取得了一定成果。但是，這類方法的效力多半是比較低的，其中一些方法需要至少6個月才能痊愈。
除了糖尿病性足部潰瘍之外，褥瘡和大的/深部的外科創傷難以用藥療法醫治，這可能是患處較大的緣故。如果這些創傷不能得到及時治療，它們將惡化并且隨后變得無法治愈且危急生命。因此，有效的藥物治療不僅有助于患者從皮膚并發癥中痊愈，而且還能賦予他們以較好的生活質量，減少醫療護理或費用，甚至延長壽命。令人遺憾的是，目前的治療方法對這樣大范圍的創傷不能提供比較有效的治療。
發明內容
因此，本發明的一個目的是解決上述先有技術中存在的至少一種或更多問題。最低程度地，本發明的一個目的是為公眾提供一種有益的選擇。
廣義地說，本發明提供以EGF為活性成分的治療皮膚創傷的方法和相應的組合物。
在本發明的一個方面中，提供了治療皮膚創傷的方法，包括將組合物局部施用到皮膚創傷上的步驟，所述組合物包括局部治療有效量的表皮生長因子(EGF)和局部可接受的載體。
本發明另一方面提供用于治療皮膚創傷的組合物，包括局部治療有效量的表皮生長因子(EGF)和局部可接受的載體。
通過實施例和相應的附圖，對本發明的優選實施方案加以說明。
圖1為平均恢復時間(100％痊愈)，以采用含有不同量EGF的本發明組合物的1-3組患者的存活函數圖(survival function plot)表示。
圖2為平均恢復時間(50％痊愈)，以采用含有不同量EGF的本發明組合物的1-3組患者的存活函數圖表示。
圖3為患者A治療前的傷口照片。
圖4為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療2周后的患者A的傷口照片。
圖5為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療3周后的患者A的傷口照片。
圖6為患者B治療前的傷口照片。
圖7為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療3周后的患者B的傷口照片。
圖8為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療5周后的患者B的傷口照片。
圖9為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療9周后的患者B的傷口照片。
圖10為患者C治療前的傷口照片。
圖11為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療4周后的患者C的傷口照片。
圖12為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療6周后的患者C的傷口照片。
圖13為患者D治療前的傷口照片。
圖14為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療2周后的患者D的傷口照片。
圖15為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療4周后的患者D的傷口照片。
圖16為患者E治療前的傷口照片。
圖17為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療5周后的患者E的傷口照片。
圖18為采用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療9周后的患者E的傷口照片。
圖19為平均恢復時間(100％痊愈)，以采用含有0.03％(g/g)EGF的本發明組合物治療的4組患者的存活函數圖(與1和2組患者比較)。
具體實施例方式
通過實施例和附圖對本發明加以描述。
本發明涉及所述組合物在治療患者皮膚傷口中的應用，所述組合物表現出令人驚奇的正痊愈效應(positive healing effect)，所述組合物含有至少0.02％(g/g)的EGF和局部可接受載體。與現有方法相比，50％痊愈(皮膚傷口區域減少50％)所需要的時間減少。本發明研究發現，采用含有0.02％(g/g)或0.04％(g/g)EGF的組合物，可使到達50％痊愈所需時間減少2-4周。至于燒傷，研究表明0.001％(g/g)的EGF即可有效地促進傷口愈合。
盡管采用0.02％(g/g)EGF的本發明組合物可有效地到達50％痊愈，但是在某些病例中不能達到完全治愈。另一方面，當EGF的用量為0.04％(g/g)時，一些患者在治療4周后到達完全治愈，并且所有患者在12周后完全治愈。同樣還發現，EGF的用量為0.03％(g/g)時，其結果幾乎與0.04％(g/g)的EGF相當。更詳細的資料將在下述實施例中描述。
在本發明的一個實施方案中，患者首先用含有0.02％(g/g)EGF的組合物進行治療，達到50％治愈，接著用含有0.04％(g/g)EGF的組合物進行治療，達到完全治愈。優選在某些病例中采用這種做法，這樣會比單獨采用0.04％(g/g)的EGF更經濟，并且EGF用量越低并發癥就越少。
自然地，當采用本發明方法和組合物治療人時，優選采用人EGF(hEGF)。hEGF的結構有文獻記載，至少可參見“Epidermal Growth Factorand Transforming Growth Factor alpha(King等在Physiology，Biochemistry，and Molecular Biology of the Skin，(L.A.Goldsmith編輯)第二版，1卷，329-350頁，Oxford University出版社，N.Y.)和Han等的Proceedings of the10th Americal Peptide Symposium(Peptides，Chemistry and Biology，(G.R.Marshall編輯)，581-583頁，Escom出版社，Leiden)。然而，如果用于治療其它哺乳動物，則優選采用待治療哺乳動物的內源性EGF。
本發明所用的局部可接受載體應具有以下性質1.無毒，和2.使EGF在直接施用到皮膚傷口時保持穩定和生物活性(bioavailable)。
可采用常規方法，將EGF溶解于液體中、分散或乳化于介質中而形成液體制劑，或者于半固體(凝膠)或固體載體中而形成糊劑、散劑、軟膏、乳膏、洗劑等易于涂敷皮膚上的制劑。可根據情況選擇便利的制劑形式。
盡管對于本領域技術人員而言無需對載體作進一步描述，但是還是列舉了一些適宜載體。這些載體包括局部可接受的液體、乳膏、油類、洗劑、軟膏劑、膠凝，或固體例如常規化妝晚霜、粉底霜、防曬劑、遮光劑、潤手乳液、化妝和化妝基底、面罩等。所述組合物包含其它任選的適宜成分，例如雌激素，維生素A、C和E，α-酮酸例如丙酮酸、乳酸或羥基乙酸的α-羥基，羊毛脂，凡士林，蘆薈，對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯，色素等。適宜的局部可接受載體包括水，石油膏(凡士林)，凡士林油，礦物油，植物油，動物油，有機和無機蠟例如微晶蠟、石蠟和地蠟，天然聚合物例如黃原膠(xanthane)、明膠、纖維素、膠原、淀粉、或阿拉伯樹膠，下述的合成聚合物，醇，多元醇等。優選地，所述載體是水混溶性(miscible)的載體成分(即能基本上混溶于水中)。這樣的水溶性的局部化妝可接受的載體成分包括一種或更多上述適宜成分，還包括緩釋或遲釋放載體，包括含水、水分散性或水溶性成分，例如脂質體、微海綿(microsponge)、微球或微囊、水性基質軟膏、W/O或O/W型乳劑、膠凝等。
實施例以下實施例旨在說明本發明，沒有限制作用。
實施例1糖尿病性足部潰瘍組研究方法和患者采用隨機雙盲對照試驗(88位患者)，研究了人表皮生長因子(hEGF)對糖尿病性足部潰瘍愈合的促進作用。用于選擇患者的預定判斷標準為1-2度潰瘍，潰瘍位于踝關節下部，適當的灌注(臂踝指數0.7)。排除以下患者血糖控制很差(HbAlc 12％)或潰瘍嚴重(3)。按照常規的糖尿病性足部臨床規范，進行最初的鑒定和標準的傷口護理。患者2周以后復查。在第二輪會診中，排除經常規足部潰瘍護理后其25％以上潰瘍愈合的患者。余下的患者填寫試服志愿書，并且通過抽取信封的形式進行隨機分組，患者在實驗期間不知曉hEGF的濃度。確定的試驗對象隨機分為3組1.組-1，單獨用Acetovegin5％乳膏治療，所述乳膏包裝上標示含有以下成分1g乳膏中含有2mg(干重)的小牛血去蛋白血衍生物(hemoderivative)，0.2mg氯化苯甲烴銨。選擇Acetovegin5％乳膏作為對照品沒有特別的原因，只是因為在進行試驗的醫院能購得該乳膏。
2.組-2，患者用Acetovegin5％乳膏(含有如上所述的成分)加上0.02％(g/g)hEGF治療。
3.組-3，患者用Acetovegin5％乳膏(含有如上所述的成分)加上0.04％(g/g)hEGF治療。
對所有患者實施兩周一次的傷口護理和清創術并修剪角質(keratosis)。如果出現感染(例如膿性排出物或陽性細菌培養)，可給予抗生素。對傷口大小的照片進行計算機測量，并與已知尺寸的參比面積比較。
局部應用待試乳膏，并用消毒紗布覆蓋。告知患者每日在普通門診部涂敷生理鹽水和局部應用乳膏，或者由地段護士對那些非住院患者進行家訪。
在每次就診時記錄傷口參數(例如感染肉芽組織和焦痂的滲出物體征)。完全愈合定義為沒有排出物傷口的上皮完全形成。
統計分析采用Kaplan Meier存活分析法比較不同組間的愈合率，對治療加以分析。單邊ANOVA分析用于臨床參數分析。如果患者存在不止一個傷口，將潰瘍面積合在一起并作為單一傷口處理。
結果在進入試驗的88位患者中，因各原因排除了56位患者23位患者(41％)的潰瘍因在第二次常規處理的就診時已治愈25％以上。19位患者(33.9％)臂踝指數＜0.7；5位患者(8.9％)出現高度的足部潰瘍；5位患者(8.9％)因社會原因而被拒絕；2位患者(3.6％)出現血糖控制差(poor diabetes control)；另2位患者(3.9％)出現上踝潰瘍。
將患有未治愈潰瘍的30位患者隨機編入上述3個組中組-1(9/30)，為對照組，單獨用Acetovegin5％乳膏治療；組-2(9/30)，用Acetovegin5％乳膏加上0.02％(g/g)hEGF治療組-3(14/32)，用Acetovegin5％乳膏加上0.04％(g/g)hEGF治療。治療終點定義為傷口完全閉合，無法治愈定義為治療12周后仍愈合不完全。
接著，由于精神病學(pyschiatric)征兆復發和較差的順從性(她的腳背出現4處潰瘍，其中2處潰瘍已在被排除前治愈)，而在完成研究前排除組-1中的這位患者。組-3中的一位患者由于其個人衛生較差而被排除(她的腳背和足底出現5處潰瘍。其中4個處潰瘍已在第8周被排除前治愈)。最終的分析由具有37處潰瘍的28位患者組成。各組的基本特征如表1所示。其中組-3中的女病人較多。組間的其它臨床參數沒有統計學上的差異。在12周結束時，組-1中的4位患者、組-2中的5位患者、組-3中的所有患者的愈合率分別為57％、55％和100％。
圖1表示組1、組2和組3患者的平均100％治愈時間分別為9.79±1.24周(置信區間(C.I)7.35-12.21)、9.43±1.38周(C.I6.73-12.13)和6.67±0.93周(C.I.4.84-8.49)。對存活分布是否相等的檢驗統計為9.00(對數秩檢驗，df為2和顯著性為0.0111)。有關圖1的進一步統計數據如表2示。可以觀察到，組3患者的治愈時間平均比其他二組少3周，該差異具有統計學顯著意義。
圖2表示組1、組2和組3患者的平均50％治愈時間分別為7.33±1.21周(置信區間(C.I)4.96-9.71)、5.71±1.02周(C.I3.72-7.71)和4.50±0.82周(C.I.2.89-6.11)。對存活分布是否相等的檢驗統計為4.25(對數秩檢驗，df為1和顯著性為0.0392)。有關圖2的進一步統計數據如表3示。從圖2中可以看出一種趨勢，即在采用hEGF治療的組-3和組-2中，潰瘍大小減小50％所需要的時間也減少。
表1.基本特征
*置信水平P＝0.052；#置信水平P＝1表2.對圖1中100％治愈時間(周)的存活分析(12周內組1和2的中倍值)
表3.對圖2中50％治愈時間(周)的存活分析(12周內組1和2的中倍值)
結論上述研究數據表明，濃度為0.04％(g/g)hEGF對糖尿病性足部潰瘍的治療顯示出顯著的治愈作用。經該濃度hEGF治療的患者的平均恢復時間約為6周，至少3周，與膏基或0.02％(g/g)hEGF相比，治療時間明顯減少。
另一方面，由傷口面積減少50％所需時間變短可知，包含0.02(g/g)或0.04％(g/g)hEGF的樣品均能促進糖尿病性足部潰瘍的治愈進程。
實施例2患有糖尿病潰瘍的個體3位患有長期糖尿病潰瘍的患者，用包含0.04％(g/g)hEGF的本發明組合物治療。觀察到以下結果，所有患者在4周的治療后治愈。
I.患者A患者A，72-歲女士，患有2型糖尿病(1度)3年。口服治療期間出現眼并發癥和正常振動感受閾試驗(borderline vibration threshold)。
附圖描述圖潰瘍面積(cm2)痊愈率(％)治療前 3 1.60 --治療2周后 4 1.02 36.25治療3周后 5 0100II.患者B患者B，68-歲女士，患有2型糖尿病(1度)8年。出現眼和腎并發癥，和臨界性振動感受閾測試。
附圖描述圖潰瘍面積(cm2)痊愈率(％)治療前 6 6.67 --治療3周后 7 3.79 43.18治療5周后 8 1.62 75.71治療9周后 9 0.16 97.60III.患者C患者C，46-歲女士，患有2型糖尿病(1度)，沒有較大并發癥。
附圖描述圖潰瘍面積(cm2)痊愈率(％)治療前 10 13.23--治療4周后 11 1.41 89.34治療6周后 12 0100
實施例3外科傷口長期未愈合的個體患者D，50歲，在11個月前拔右側下頜磨牙并切除面部瘺管后，出現右側面部非痊愈性潰瘍。面部潰瘍增大，并且有進一步惡化的趨勢。右側下頜牙槽脫落(sloughing)，并且傷口有觸痛。
血液檢查、組織病理學和微生物學試驗表明非愈合性傷口沒有特異病原。重復的活組織切片檢查和微生物學的研究表明沒有特異性診斷。然而，一位病理學家曾報道“惡性非基底細胞癌的決定性否定發現，看起來很正常的口腔上皮粘膜”。對面部的計算機x線斷層掃描診斷顯示，右側面部潰瘍深至面部肌肉，但是沒有骨損害。骨掃描顯示整個下頜骨的熱吸收。
患者在局部應用hEGF(0.04％(g/g))2周后進行復查。所用的組合物與上述組-3患者相同。右側面部傷口愈合，傷口基底看起來豐滿，并且沒有排出物。傷口區域的大小約減少30％。接下來可注意到傷口大小進一步減小。治療進程如圖13-15所示，其中圖13表示患者A治療前的傷口照片；圖14為患者A用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療2周后的傷口照片；和圖15為患者A用含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療5周后的照片。
結論是經局部施用0.04％表皮生長因子(hEGF)5周后，頑固性(refractroy)面部傷口的大小約減少50％，并且傷口深度也減少。
實施例4患有褥瘡的個體病人E，年齡82，年老在家臥床不起好幾年。她因全身性皰疹而出現類天皰瘡(pemphoid)，業已施用持續劑量的強的松8個月以上。該患者因2個月治療后傷口惡化并伴有中樞性壞疽(central grangrene)而就診。
對其采用氯己定(Hibitane)敷料治療2周，然后每日用生理鹽水敷料和含有0.04％(g/g)EGF的本發明組合物治療。她的傷口愈合并且再治療3個月后完全閉合。
附圖描述圖治療前 16治療5周后17治療9周后18實施例50.03％(g/g)EGF的結果重復實施例1試驗，采用Acetovegin5％乳膏加上0.03％(g/g)hEGF。共治療8位患者，命名為組-4。結果如下所示時間(周)狀態累積存活標準誤差累積治愈 剩余患者數2 治愈0.8750 0.1169 1 74 治愈2 64 治愈0.6250 0.1712 3 56 治愈0.5000 0.1768 4 48 治愈0.3750 0.1712 5 310 治愈0.2500 0.1531 6 212 治愈0.1250 0.1169 7 112 治愈7 0病例數8排除(Censored)1(12.50％) 治愈7存活時間 標準偏差95％置信區間均值(12周內)7 1 (5，10)中倍值 6 3 (0，12)圖19表示組1、組2(從上述實施例1結果所得)和組-4患者的平均100％治愈時間分別為9.79±1.24周(置信區間(C.I)7.35-12.21)、9.43±1.38周(C.I6.73-12.13)和7周(C.I.5-10)。對存活分布是否相等的檢驗統計為6.79(對數秩檢驗，df為21和顯著性為0.0366)。可以看出，用0.03％(g/g)EGF治療的組-4的愈合速度(7周)幾乎與用0.04％(g/g)EGF治療的組(6.67周)相同，二者沒有顯著的統計學差異。
從上述實施例可知，本發明對嚴重的、長期和未治愈性皮膚傷口提供比較有效的治療。此類皮膚傷口由糖尿病性足部潰瘍、褥瘡或外科傷口引起。最低程度地，本發明為傳統治療方法無法治愈的那些皮膚傷口提供一種解決方案。進一步地，完全愈合所需要的的周期相對變短，對于某些病例僅需2-4周，對于其它更嚴重的傷口最多需要8周。
通過上述實施例對本發明優選實施方案作了描述，對本領域技術人員顯而易見的是，可針對本發明進行并不偏離本發明范疇和精神的改進和變化。此外，對本發明實施方案的理解不應僅僅局限于實施例或附圖。
權利要求
1.治療皮膚傷口的方法，包括向皮膚傷口局部施用組合物的步驟，所述組合物包括局部有效量的表皮生長因子(EGF)和局部可接受的載體。
2.按照權利要求1的方法，其中皮膚傷口是由于糖尿病性足部潰瘍、褥瘡或外科傷口所致。
3.按照權利要求1的方法，其中EGF是人EGF(hEGF)。
4.按照權利要求3的方法，其中hEGF的局部有效量至少為0.02％(g/g)。
5.按照權利要求4的方法，其中hEGF的局部有效量至少為0.03％(g/g)。
6.按照權利要求5的方法，其中hEGF的局部有效量至少為0.04％(g/g)。
7.按照權利要求1的方法，進一步包括步驟-將含有0.02％(g/g)EGF的所述組合物局部施用到皮膚傷口上，使皮膚傷口區域減少50％；和-在皮膚傷口區域減少50％后，將含有0.04％(g/g)EGF的所述組合物局部施用到皮膚傷口上，使皮膚傷口完全治愈。
8.按照權利要求1的方法，其中局部可接受的載體是水可混溶性載體。
9.按照權利要求8的方法，其中局部可接受的載體包括選自水、石油膏、凡士林油、礦物油、植物油、動物油、蠟和聚合物的成分。
10.按照權利要求9的方法，其中所述水可混溶性載體是水、石油膏、凡士林油、礦物油、植物油、動物油、蠟或聚合物。
11.用于治療皮膚創傷的組合物，包括有效量的表皮生長因子(EGF)和局部可接受的載體。
12.按照權利要求11的組合物，其中EGF是人EGF(hEGF)。
13.按照權利要求11的組合物，包括至少0.02％(g/g)的hEGF。
14.按照權利要求13的組合物，包括至少0.03％(g/g)的hEGF。
15.按照權利要求14的組合物，包括至少0.04％(g/g)的hEGF。
16.按照權利要求11的組合物，其中局部可接受的載體是水可混溶性載體。
17.按照權利要求16的組合物，其中局部可接受的載體包括選自水、石油膏、凡士林油、礦物油、植物油、動物油、蠟和聚合物的成分。
18.按照權利要求17的組合物，其中所述水混溶性載體是水、石油膏、凡士林油、礦物油植物油、動物油、蠟或聚合物。
19.局部有效量的表皮生長因子(EGF)和局部可接受的載體在生產用于治療皮膚的組合物中的應用。
20.按照權利要求19的應用，其中皮膚傷口是由于糖尿病性足部潰瘍、褥瘡或外科傷口所致。
21.按照權利要求20的應用，其中EGF是人EGF(hEGF)。
22.按照權利要求21的應用，其中hEGF的局部有效量至少為0.02％(g/g)。
23.按照權利要求22的應用，其中hEGF的局部有效量至少為0.03％(g/g)。
24.按照權利要求23的應用，其中hEGF的局部有效量至少為0.04％(g/g)。
25.按照權利要求19的應用，其中-將含有0.02％(g/g)EGF的所述組合物局部施用到皮膚傷口上，使皮膚傷口區域減少50％；和-在皮膚傷口區域減少50％后，將含有0.04％(g/g)EGF的所述組合物局部施用到皮膚傷口上，使皮膚傷口完全治愈。
全文摘要
對分泌重組(excretory recombinant)方法產生的表皮生長因子(EGF)在治療各種皮膚傷口中的效力進行了研究。在隨機對照研究中，制備了局部用乳膏樣品，其中EGF在局部適宜的載體中的終濃度低至0.02％(g/g)，該乳膏對糖尿病性足部潰瘍的恢復有促進作用。與對照品相比，這種促進作用具有統計學顯著意義，使平均痊愈時間減少3周。與對照品相比，含有0.02％(g/g)和0.04％(g/g)的人EGF的樣品表現出刺激效應趨勢，潰瘍50％痊愈。EGF樣品同樣對由于褥瘡和外科所致傷口的治療具有高度的促進作用。
文檔編號A61K38/18GK1649619SQ03809985
公開日2005年8月3日 申請日期2003年3月11日 優先權日2002年3月12日
發明者黃允強, 林佶侃, 曾文和 申請人:生物鍵有限公司