阿比朵爾在制備預防和治療sars病毒藥物中的用途的制作方法

專利名稱：阿比朵爾在制備預防和治療sars病毒藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及阿比朵爾新的藥物用途，具體而言是涉及該化合物在制備預防和治療SARS病毒藥物中的應用。
背景技術：
目前所知，冠狀病毒科(Coronaviridae)只感染脊椎動物，與人和動物的許多疾病有關。人冠狀病毒分別屬于OC43和229E兩個抗原型，它是引起人類上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒，尚無特異性治療和預防手段。SARS全稱是嚴重急性呼吸綜合癥，它與一種新的從未在人類或動物中發現過的冠狀病毒相關。
鹽酸阿比朵爾是非核苷類抗病毒新藥，是一種防治甲型和乙型流感及其它急性呼吸道病毒感染的高效藥物，通過激活2，5-寡聚腺苷酸合成酶，特異性抑制病毒囊膜與宿主細胞膜的融合，從而阻斷流感病毒的復制。相比其他類抗流感病毒藥物具有以下特點1、對流感病毒甲型、乙型均有效。2、兼有直接抑制病毒復制和誘導內源性干擾素的雙重作用。3、毒性低、耐受性良好。
阿比朵爾具有以下藥效學性質1、抗流感病毒本品對甲型和乙型流感病毒均有抑制作用。酶聯免疫吸附試驗顯示它對甲型和乙型流感病毒的抑制率分別為80％和60％，對所有甲型流感病毒的抗原亞型均有活性。
國內體外試驗結果顯示阿比朵爾對流感病毒甲型的H1N1、H2N2、臨床分離株均有抑制作用，其50％抑制病毒病變濃度(IC50)分別為1.22±0.015、1.50±0.056和1.65±0.12μg/mL；其治療指數(TI)分別為37.6±0.48、30.6±1.13和27.9±1.94。表明阿比朵爾有直接抗甲型流感病毒作用。
體內試驗結果顯示連續給藥7～8次，阿比朵爾15～125mg/kg，使小鼠平均生活日明顯延長、死亡率顯著降低、病變明顯減輕，而且其作用明顯優于陽性對照藥病毒唑。表明阿比朵爾對整體動物具有顯著的抗流感病毒作用。
2、誘生干擾素作用國內試驗結果表明小鼠灌胃給予阿比朵爾31.3～125mg/kg或腹腔注射阿比朵爾15～45mg/kg后，其血清中均出現一定濃度的IFN，峰值出現在給藥后18h，以后滴度下降，表明阿比朵爾具有誘生干擾素作用。
國外文獻報道阿比朵爾對人和動物都有誘生干擾素作用，給藥24h可見最大滴度。人口服阿比朵爾服300mg/kg，24小時的干擾素滴度為160IU/mL。
3、免疫調節作用國內試驗結果阿比朵爾灌胃給藥5d，劑量為25～100mg/kg·d使正常昆明種小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數顯著增加；50～100mg/kg·d，使氫化可的松所致免疫低下昆明種小鼠碳廓清K值明顯增加，劑量為12.5～50mg/kg·d使環磷酰胺所致免疫低下昆明種小鼠DTH反應明顯增加，表明給予阿比朵爾不同劑量對正常及免疫低下昆明種小鼠的非特異性免疫功能、體液免疫功能和免疫低下小鼠的細胞免疫功能均有一定的促進作用。
國外文獻報道阿比朵爾在體內外試驗中對巨噬細胞吞噬功能有明顯的激活作用，對遲發型超敏反應和宿主移植反應等細胞免疫功能，對環磷酰胺所致免疫低下小鼠的體液免疫功能均有明顯的促進作用。
本品毒性很低。國外文獻報道大鼠和豚鼠單劑口服2000mg/kg，耐受良好，表明口服急性毒性很低，估計LD50＞3000mg/kg。小鼠口服LD＝340mg/kg慢性毒性試驗，大鼠100-125mg/kg，狗25mg/kg，口服給藥6個月，均未出現病理學變化。對兔和豚鼠長期用藥也是安全的。
體內外試驗均表明本品無誘變作用。大鼠繁殖毒性研究表明本品無致畸作用。

發明內容
鑒于上述阿比朵爾的作用，我們通過體外病毒初篩實驗來證明阿比朵爾對SARS病毒是否敏感，是否對SARS有效，從而獲得治療因SARS病毒感染引起的呼吸道疾病的藥物，這一設想得到了以下實驗強有力的支持，取得預期效果。
具體實施例方式
本發明阿比朵爾對預防和治療冠狀病毒有效，尤其對預防和治療SARS病毒有效，而且優選鹽酸阿比朵爾。
實施例1、鹽酸阿比朵爾體外抗SARS病毒初篩試驗一、實驗材料1、藥品鹽酸阿比朵爾原料藥2、細胞非洲綠猴腎細胞(Vero E6)，由軍事醫學科學院微生物流行病研究所病毒室細胞庫提供3、病毒SARS病毒，BJ-01株，由軍事醫學科學院微生物流行病研究所病毒室提供4、培養基DMEM培養基加10％小牛血清二、試驗的基本條件病毒測定在生物安全三級實驗室。
三、病毒毒力測定Vero E6細胞接種于96孔板，每孔100μ1，含細胞2×104，37□培養24h，細胞長成單層，加入10倍稀釋9個濃度的病毒培養基，37□，5％CO2溫箱培養，每天用顯微鏡觀察細胞病變(CPE)，每濃度4孔，用Reed-Muench法計算病毒半數感染劑量(TCID50)。
四、藥物對細胞毒性的測定Vero E6細胞接種于96孔板，每孔100μl，含細胞2×104，37□培養24h，細胞長成單層。藥物設3個濃度即100、50、10μg/ml(終濃度)，每濃度4孔，設正常細胞對照。每天觀察給藥細胞病變，觀察到7天，確定藥物的無毒濃度。
五、藥物抗病毒藥效測定VeroE6細胞接種于96孔板，每孔100μl，含細胞2×104個/孔，37℃培養24h，細胞長成單層。每孔加100μl病毒(100TCID50)，吸附2小時后，棄去病毒。然后加入不同濃度待測藥物。將最大無毒濃度以下的藥物對倍稀釋5個濃度，分別加入細胞板中，每孔100μl，每濃度4個孔，37℃5％CO2溫箱繼續培養。同時設病毒對照、細胞對照、藥物對照。當病毒對照孔出現明顯病變時，用CPE法判斷藥效。
六、結果1、病毒毒力測定病毒的TCID50是10-7；2、藥物對細胞毒性的測定阿比朵爾的無毒濃度為10μg/ml，在此濃度下細胞形態與正常照相同，沒有出現病變(表1)；3、藥物抗病毒作用藥物濃度為10μg/ml時對病毒有完全的抑制作用(表2)。
表1阿比朵爾的細胞毒性測定結果

“+”為細胞病變“-”為細胞正常表2阿比朵爾抗SARS病毒的作用

“-/4”為4個孔均為陰性，“+/4”為4個孔均為陽性
權利要求
1.阿比朵爾在制備預防和治療SARS病毒藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其中的阿比朵爾優選鹽酸阿比朵爾。
全文摘要
本發明涉及阿比朵爾在制備預防和治療SARS病毒藥物中的應用。阿比朵爾已經作為抗流感病毒藥物廣泛應用，本發明通過體外細胞實驗證明，阿比朵爾對SARS病毒具有顯著的抑制作用，因此本品可以作為預防和治療SARS病毒的藥物應用于臨床。
文檔編號A61P11/00GK1552321SQ0313714
公開日2004年12月8日 申請日期2003年6月5日 優先權日2003年6月5日
發明者李建青, 張宏武, 劉超, 王榮端, 申東民, 李銀貴 申請人:中奇制藥技術(石家莊)有限公司