專(zhuān)利名稱(chēng)：西洋參莖葉中三萜皂苷及其醫(yī)藥用途和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)它是西洋參莖葉中三萜皂苷及其醫(yī)藥用途和制備方法。
背景技術(shù)：
西洋參(Panax quinquefolium L.)是五加科(Araliaceae)人參屬(Panax)植物。人參屬植物的主要有效成分為皂苷類(lèi)成分，尤其是達(dá)瑪烷型三萜皂苷，具有廣泛的分布和多種藥理活性。通過(guò)對(duì)人參屬植物近40年的研究，從該屬藥用植物中已鑒定同結(jié)構(gòu)的達(dá)瑪烷型皂苷135種，按苷元結(jié)構(gòu)不同可分為34種類(lèi)型。此外，各種具有匍匐根莖的人參屬植物中還含有大量齊墩果酸型(oleanolic acid type)五環(huán)三萜皂苷。有關(guān)西洋參莖葉的化學(xué)研究文獻(xiàn)報(bào)道，迄今為止從中分離鑒定了11種三萜皂苷類(lèi)成分；人參皂苷Rd，Rb1，Rb2，Rb3，F(xiàn)2，Rh1，Rg1，Re，絞股藍(lán)皂苷XVII，擬人參皂苷F11，RT5。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明西洋參莖葉皂苷具有明顯的防治心血管疾病、抗應(yīng)激等藥物作用活性。中國(guó)專(zhuān)利號(hào)98126147公開(kāi)了一種名稱(chēng)為“含有西洋參莖葉總皂甙的藥物組合物”的發(fā)明專(zhuān)利，它是利用西洋參莖葉總皂甙和多種醫(yī)學(xué)上可接受的載體或賦形劑組成的藥物組合物，西洋參莖葉總皂甙是在煮沸條件下，經(jīng)三次水提取，過(guò)濾并用大孔樹(shù)脂吸附濾液后，用95～98％乙醇洗脫得到的。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供西洋參莖葉中下述通式(1)、通式(2)或通式(3)所示的三萜皂苷類(lèi)化合物及其醫(yī)藥用途和制備方法。
其中式中R1是氫或糖基(含1～3個(gè)糖基)，R2是氫、羥基或糖基(含1～2個(gè)糖基)，R3是含有不同位置和個(gè)數(shù)的羥基和(或)雙鍵的C2～C6的直鏈至支鏈低級(jí)烷基，R4是氫或羥基，R5是氫或糖基(含1～2個(gè)糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基，糖鏈的連接方式可為(1-2)或(1-6)連接。
其中新化合物是
上述總?cè)圃碥栈騿我唤?jīng)合物的醫(yī)藥用途是保護(hù)肝細(xì)胞損傷。
上述總?cè)圃碥栈騿我换衔锏闹苽浞椒?，其特征是包括如下四步驟a西洋參莖葉用水提??；加水浸泡，藥材與水的比例為1∶2～10，加熱于(室溫至所用液體沸點(diǎn))條件下，每次0.5～10小時(shí)，提取1～10次，合并各次提取液，濃縮至藥材的2～100倍；b提取液經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附，用稀醇(0～40％)洗去雜質(zhì)，再用20％～100％醇液洗脫得醇溶液，回收溶劑得粗總皂苷；c經(jīng)硅膠色譜分離，流動(dòng)相1)氯仿/甲醇(0～100％)梯度洗脫；2)氯仿—甲醇—水(65∶35∶10，下相)；3)正丁醇—乙酸乙酯—水(4∶1∶5，上相)d所得流份經(jīng)重結(jié)晶，HPLC色譜十八烷基鍵合硅膠(ODS)為固定相，甲醇(乙睛、四氫呋喃)/冰(10～95％)為流動(dòng)相，紫外192～215nm檢測(cè)，得各三萜皂苷類(lèi)成分。
其中步驟a中的提取液可以是不同濃度乙醇或甲醇，濃度0～95％；提取方法可以是煎煮或滲濾；步驟b中吸附用大孔樹(shù)脂，可用陰(或陽(yáng))離子交換樹(shù)脂；步驟c中固定相可用氧化鋁；步驟d可用正相HPLC，以硅膠為固定相，1)氯仿—甲醇—水，2)氯仿—甲醇，3)乙酸乙酯—丙酮為流動(dòng)相。
國(guó)內(nèi)外報(bào)道人參皂苷類(lèi)成分具有保護(hù)肝損傷的作用，但對(duì)西洋參莖葉中的三萜皂苷類(lèi)成分的保護(hù)肝細(xì)胞作用尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。我們對(duì)其保護(hù)D-GalN/TNF-α所致的肝細(xì)胞損傷作用進(jìn)行了考察。結(jié)果表明西洋參莖葉中的三萜皂苷類(lèi)成分具有保護(hù)D-GalN/TNF-α所致的肝細(xì)胞損傷作用1)原人參二醇型皂苷，隨著3位、20位糖鏈增長(zhǎng)，活性增強(qiáng)，如RH2＜F2(Rg3)＜Rd＜Rb1＜Rb2＜Rb3；但20位連接木糖時(shí)，活性明顯增強(qiáng)，如西洋參皂苷L5、人參皂苷Rb3的抑制活性均達(dá)到80％以上。
2)側(cè)鏈具有烯丙位羥基可使活性明顯增強(qiáng)，如人參皂苷M6a、西洋參皂苷L7、珠子參苷F1、F2的抑制率均在50％以上。
3)側(cè)鏈存在兩個(gè)或無(wú)雙鍵，使活性下降，如西尖參皂苷L9、L1、L12、L13及擬人參皂苷F11均活性較小。
4)越南人參皂苷R3的抑制活性可與水飛薊賓相當(dāng)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，提供了可期待具有作為保肝劑的醫(yī)藥用途的西洋參莖葉中的三萜皂苷類(lèi)化合物，部分化合物具有很強(qiáng)的保護(hù)肝細(xì)胞作用。應(yīng)用本發(fā)明的提取方法，可以得到除去大量蛋白、糖類(lèi)、淀粉等雜質(zhì)得高純度三萜總皂苷和單體三萜皂苷。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。本發(fā)明不受此限制。
實(shí)施例西洋參莖葉(2.0kg)粉碎后，10倍量水煎煮提取3次，每次3小時(shí)，提取液濃縮至10升，經(jīng)大孔樹(shù)脂柱色譜處理后，得到精制總皂甙。利用正反相硅膠柱色譜，制備薄層，反相Lobar柱色譜以及Rp18-HPLC等方法，從中得到43個(gè)單體化合物，其分離流程如說(shuō)明書(shū)附圖
所示。
所得化合物的保護(hù)D-GalN/rNF-α所致的肝細(xì)胞損傷作用結(jié)果比較濃度殘存率 SD 抑制率(％) P(mM)(％)正常99.914.7控制49.84.9硅酸化 20 64.27.028.70.0018100 109.5 10.4 119.0 0.0000Rd 20 53.16.06.7 0.3227100 70.115.0 40.40.0048F2 20 52.74.3-3.60.4965100 51.44.1-6.40.2344Rc 20 62.56.217.90.0249100 71.97.738.40.0010Rb1 20 63.43.419.90.0027100 79.02.454.00.0000Rb2 20 66.66.726.90.0043100 85.44.368.00.0000Rb3 20 71.38.237.10.0017100 91.53.881.30.0000G-IX20 67.55.924.30.0361100 69.26.228.20.0211G-XVII 25 65.314.6 19.10.2577100 83.010.0 60.30.0011N-Fe20 72.811.9 36.70.0273100 89.35.875.20.0001Q-L520 79.58.752.30.0017100 91.64.080.40.0000Rg3 20 53.64.5-15.1 0.0558100 59.85.20.4 0.9666
濃度 殘存率 SD 抑制率P比較(mM) (％)(％)正常 99.9 14.7控制 49.8 4.9硅酸化 20 64.2 7.0 28.7 0.0018100109.5 10.4 119.00.0000Rg120 53.6 8.4 7.6 0.337310075.3 21.2 50.8 0.0069Rg220 61.6 7.4 23.4 0.007610073.2 4.8 46.6 0.0000P-F1120 63.6 11.9 27.4 0.015410063.9 10.5 28.1 0.0086Re 20 64.9 8.0 18.2 0.133010082.7 12.9 59.7 0.003120R-Rg220 57.3 4.2 -6.0 0.386910066.9 3.9 17.8 0.025320R-Rh120 63.7 3.2 10.0 0.139710063.9 12.0 10.5 0.4427Comp. concentration survival rate SDinhibition P(mM) (％)(％)normal99.9 14.7control 49.8 4.9silibinin 20 64.2 7.0 28.7 0.0018100109.5 10.4 119.00.0000V-R320 88.5 5.6 73.2 0.000110098.6 6.2 96.7 0.0000M-F420 68.2 4.0 26.0 0.018510081.1 4.9 55.8 0.0003M6a20 64.9 3.5 18.2 0.067910078.9 3.8 50.8 0.0004Q-L720 80.2 5.4 53.9 0.000410081.6 3.7 57.2 0.0002M-F120 67.2 4.9 23.6 0.033210079.7 7.6 52.6 0.0011Q-L120 70.0 9.4 25.5 0.042410068.2 6.1 21.0 0.0291Q-L920 66.7 8.5 17.3 0.117510060.9 6.3 3.0 0.7278Q-L1220 63.9 18.1 10.5 0.587910063.1 5.8 8.4 0.3113Q-F120 48.1 6.7 -28.80.008910051.5 6.2 -20.30.034權(quán)利要求
1.西洋參莖葉中三萜皂苷，其特征在于a、下述通式(1)表示的達(dá)瑪烷衍生物 其中式中R1是氫或糖基(含1～3個(gè)糖基)，R2是氫、羥基或糖基(含1～2個(gè)糖基)，R3是含有不同位置和個(gè)數(shù)的羥基和(或)雙鍵的C2～C6的直鏈至支鏈低級(jí)烷基，R4是氫或羥基，R5是氫或糖基(含1～2個(gè)糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基，糖鏈的連接方式可為(1-2)或(1-6)連接。b、下述通式(2)表示的ocotillol型達(dá)瑪烷衍生物 其中，R2是氫、羥基或糖基(含1～2個(gè)糖基)，R4是氫或羥基，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基，糖鏈的連接方式可為(1-2)或(1-6)連接。c、下述通式(3)表示的達(dá)瑪烷衍生物 其中R2是氫、羥基或糖基(含1～2個(gè)糖基)，R4是氫或羥基，R5是氫或糖基(含1～2個(gè)糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基，糖鏈的連接方式可為(1-2)或(1-6)連接。
2.一種如權(quán)利要求1所述的西洋參莖葉中三萜皂苷的用途，其特征在于通式(1)、通式(2)或通式(3)表示的三萜皂苷類(lèi)化合物用于制備保護(hù)肝細(xì)胞損傷的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的西洋參莖葉中三萜皂苷的制備方法，其特征在于制備方法包括如下步驟a西洋參莖葉用水提??；加水浸泡，藥材與水的比例為1∶2～10，加熱于(室溫至所用液體沸點(diǎn))條件下，每次0.5～10小時(shí)，提取1～10次，合并各次提取液，濃縮至藥材的2～100倍；b提取液經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附，用稀醇(0～40％)洗去雜質(zhì)，再用20％～100％醇液洗脫得醇溶液，回收溶劑得粗總皂苷；c經(jīng)硅膠色譜分離，流動(dòng)相1)氯仿/甲醇(0～100％)梯度洗脫；2)氯仿—甲醇—水(65∶35∶10，下相)；3)正丁醇—乙酸乙酯—水(4∶1∶5，上相)d所得流份經(jīng)重結(jié)晶，HPLC色譜十八烷基鍵合硅膠(ODS)為固定相，甲醇(乙睛、四氫呋喃)/水(10～95％)為流動(dòng)相，紫外192～215nm檢測(cè)，得各三萜皂苷類(lèi)成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的西洋參莖葉中三萜皂苷的制備方法，其特征在于步驟a中的提取液可以是不同濃度乙醇或甲醇，濃度0～95％；提取方法可以是煎煮或滲濾；步驟b中吸附用大孔樹(shù)脂，可用陰(或陽(yáng))離子交換樹(shù)脂；步驟c中固定相可用氧化鋁；步驟d可用正相HPLC，以硅膠為固定相，1)氯仿—甲醇—水，2)氯仿—甲醇，3)乙酸乙酯—丙酮為流動(dòng)相。
全文摘要
本發(fā)明西洋參莖葉中三萜皂苷及其醫(yī)藥用途和制備方法，如通式(1)、通式(2)或通式(3)所示。提取方法經(jīng)水煎煮(或滲濾)、大孔樹(shù)脂及離子交換樹(shù)脂脫糖脫色得總皂苷、再經(jīng)柱層析和HPLC法而分別制得。式中R
文檔編號(hào)A61P1/00GK1490326SQ0313417
公開(kāi)日2004年4月21日 申請(qǐng)日期2003年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月29日
發(fā)明者李銑, 王金輝, 張永煜, 李 銑 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)