一種具有降糖降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品的制作方法

專利名稱：一種具有降糖降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品的制作方法
技術領域：
本發明屬植物藥物技術領域。具體涉及一種具有降糖降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品。
美國科學家近20年的研究證明，肌醇(inositol)類分子(以肌醇myo-Inositol和D-手性-肌醇D-Chiro-inositol為代表)在胰島素作用的信號傳遞過程中扮演了重要的角色。研究發現正常人血中及尿液中含有一定濃度的肌醇，而在II類糖尿病人中則幾乎檢測不到，提示這些病人可能無法產生足夠量的肌醇，造成胰島素作用的信號傳遞受阻。多個實驗室的結果均確認，通過給試驗動物補償肌醇能有效促進胰島素功能，降低血糖、血中胰島素、血甘油三脂水平等。正在進行人體臨床檢驗亦表明，純化的D-手性-肌醇和肌醇對II類糖尿病、多囊性卵巢綜合癥有顯著療效。因此，若能從天然物質中有效地提取肌醇類分子，對于開發生產治療II類糖尿病、多囊性卵巢綜合癥、高血壓、肥胖癥及其它心血管疾病的藥品具有重大的科學價值和經濟價值。
南瓜、苦瓜為葫蘆科植物(Cucurbit moschata Duch)的果實，其營養成份全面而獨特，是大眾喜愛的蔬菜和保健食品。我國古代就有對南瓜食療保健作用的記載。在《本草綱目》中，李時珍將南瓜與靈芝放在一起，說它有“補中、補肝氣、益心氣、益肺氣、益精氣”的作用。李時珍謂苦瓜“苦寒、無毒、除邪熱、解勞乏、清心明目”。近年來現代醫學的研究發現，南瓜還具有控制和輔助治療糖尿病及由糖尿病引起的高血壓、高血脂、肥胖癥等作用。
但是，人們對苦瓜和南瓜中的功效成分尚不清楚，本發明人經過大量的研究，首次從南瓜和苦瓜中發現了大量的肌醇類分子，從而進一步在理論上解釋了南瓜、苦瓜的降糖、降脂功效。另一方面本發明將可直接應用于開發生產治療II型糖尿病、高血脂、高血壓、肥胖癥及其它心血管疾病的藥品和相關的保健食品。
本發明提供了一種具有降糖、降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品。本發明的產品可以是藥物組合物也可以是保健食品。
本發明提供了一種具有降糖、降脂作用的藥物組合物，該藥物組合物是包括苦瓜、南瓜中提取物作為活性成分與藥用輔料組成的。其中活性成分與藥用載體的配比，按重量百分比計含活性成分90％-10％及含藥用載體10％-90％的比例配制。在本發明的藥物組合物中，活性成分中的苦瓜與南瓜提取物可按各種比例配制組成100％的活性成分，也可以僅選用苦瓜或南瓜提取物之一種成為活性成分。
本發明的藥物組合物可以為片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液或口服液。
本發明的藥物組合物，一般人用量為1000-6000mg苦瓜提取物/天或1000-7000mg南瓜提取物/天或1000-7000mg苦瓜-南瓜提取物/天。
本發明提供了一種能預防和改善糖尿病的保健食品，該保健食品包括苦瓜、南瓜提取物作為活性成分為食用輔料組成的，其中活性成分與食用輔料的配比按重量百分比計，含活性成分90％-10％及含食用輔料10-90％的比例配制。在本發明的保健食品中，活性成分中的苦瓜與南瓜提取物可按各種比例配制組成100％的活性成分，也可以僅選用苦瓜或南瓜提取物之一種成為活性成分。
本發明的保健食品用量，一般成人用量為500-4000mg苦瓜提取物/天或500-4000mg南瓜提取物/天或500-4000mg苦瓜-南瓜抽提物/天。
本發明的另一目的是提供了從苦瓜或南瓜中分離提取肌醇分子的方法，該方法為a從南瓜中分離、提取肌醇分子的方法其特征為將南瓜與不同濃度的熱乙醇或者甲醇(0％～80％)按不同的比例3-10(重量比)，在pH2-7的范圍內水浴煮2-4小時，經過濾、離心、噴霧干燥即得南瓜提取物。用這種方法所得提取物中肌醇、南瓜多糖、果膠均具有較高的含量。其中以南瓜與20％的乙醇溶液按重量比為5的比例在pH2時，水浴煮3小時后，經過濾、離心、噴霧干燥所得南瓜提取物中所含肌醇、南瓜多糖、果膠均最高，分別達到1.7％、32％、4.5％；b.從苦瓜中分離、提取肌醇分子的方法取苦瓜100g，用1-10倍的0-80％乙醇或者甲醇勻漿，蒸沸1-3小時，經過濾、離心、噴霧干燥得苦瓜提取物，該提取物中所含肌醇、苦瓜甙均具有較高的含量。其中以苦瓜與30％的乙醇溶液按重量比為5的比例在pH2時，水浴煮3小時后，經過濾、離心、噴霧干燥所得南瓜提取物中所含肌醇、苦瓜甙均最高，分別達到3.2％、0.57％。
大規模生產抽提物的工藝可在此基礎上略作修改，并添置大型設備如碾磨機、勻漿攪拌機、蒸汽蒸發爐、工業離心機、板框過濾機等。
本發明的又一目的是提供了上述一種具有降糖降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品的制備方法，該方法包括下列步驟(1)按上述方法分別制備苦瓜和南瓜提取物；(2)純化將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物，分別按干重加入0.5倍量體積的75％丙腈，碾磨成勻漿；另外，用具有3-氨醛鍵修飾的9％硅膠填充制備分離柱，然后將提取物的勻漿上柱進行分離純化，用60-75％丙腈洗脫，控制每分鐘0.4ml，以5ml為單位吸集不同組分的洗脫液，分取含肌醇量高的洗脫液，濃縮至干燥得干粉；或者將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物碾磨成勻漿，用硅藻土或者皂土或者PVPP樹脂填充的分離柱，勻漿物在此柱上得到分離。收集富含肌醇類分子的洗脫液，濃縮，噴霧干燥，制備成干粉。
(3)制備產品按配方要求取經步驟(2)純化的苦瓜或南瓜提取物與藥用輔料或食用輔料制成藥物組合物或保健食品。
本發明的產品通過下列動物實驗說明其效果本發明提取物的降糖實驗結果如下1.鼠化學誘導糖尿病實驗模型選取平均重量為250-280克的雄性Sprague-Dawley鼠，按45mg/kg的劑量IP注射STZ(Streptozocin，Sigma Chemicals Co.，溶于檸檬酸緩沖液中)溶液。24小時后從鼠尾靜脈抽血，用葡萄糖氧化法(Beckman葡萄糖分析儀，Fullerton，CA)測定其中的血糖含量。選取血糖在350至400mg/dl的大鼠作為糖尿病試驗動物(正常大鼠的血糖水平為116mg/dl)。
2.上述選取的經化學誘導的糖尿病大鼠隨機分組，每組以一定劑量的經過本發明實施例二得到的抽取物處理(抽取物溶于0.5ml生理鹽水中，用滴管喂食，每日一次)。陽性對照(純化的肌醇及D-手性-肌醇)也溶于生理鹽水中喂食。處理前和處理1天、2天、4天及8天后，以鼠尾靜脈抽取0.5ml血樣用測量葡萄糖含量。
按下表1中的劑量給予糖尿病大鼠，其結果為表1 提取物在STZ誘導的糖尿病大鼠中的降糖效應

*P＜0.05 **P＜0.01
上述數據均為10只實驗鼠的平均值，0天時間的血糖含量設為100，并將其它時間點數據作相應調整。上述10組處理的0天血糖濃度分別為0mg/kg(對照)，381.7±14.5mg/dl；25mg/kg苦瓜抽提物，372.4±17.8mg/dl；50mg/kg苦瓜抽提物，375.8±20.1mg/dl；100mg/kg苦瓜抽提物，371.5±15.9mg/dl。25mg/kg南瓜抽提物，375.6±18.4mg/dl；50mg/kg南瓜抽提物，378.1±20.4mg/dl；100mg/kg南瓜抽提物，373.5±17.1mg/dl。25mg/kg苦瓜∶南瓜(1∶1)抽提物，377.2±18.9mg/dl；50mg/kg苦瓜∶南瓜(1∶1)抽提物，376.8±21.3mg/dl；100mg/kg苦瓜∶南瓜(1∶1)抽提物，374.2±17.5mg/dl。
由此可見，本發明的抽提物表現為1.降糖功效與其中所含的肌醇含量成正比，亦即肌醇含量越高，降糖功效越明顯。
2.降糖功效不能完全由肌醇解釋，還有其他物質協同作用，苦瓜甙、南瓜多糖和南瓜果膠是其中可能的三種活性物質。
表2 本發明抽提物樣品中主要活性成份及含量 經過3-氨醛鍵修飾的9％硅膠填充柱或其他離子交換柱(硅藻土、皂土、PVPP樹脂等)純化，收集洗脫液，濃縮，噴霧干燥，制備成干粉后，苦瓜抽提物、南瓜抽提物、苦瓜∶南瓜(1∶1)抽提物中的Myo-Inositol和D-Chiro-Inositol的含量分別可達512mg/g、48mg/g；312mg/g、23mg/g；487mg/g、21mg/g；而其中的苦瓜甙、南瓜多糖、南瓜果膠的含量保持不變或略有提高。
本發明的產品具有很好的降糖降脂功效，在醫學臨床和人們的日常生活中均有廣泛的用途。
圖2南瓜抽提物降糖劑量效應縱座標為血糖含量，橫座標為處理時間。
圖3苦瓜、南瓜(1∶1)提取物降糖劑量效應縱座標為血糖含量，橫座標為處理時間。
實施例二從苦瓜中分離、提取肌醇分子的方法取苦瓜100g，用1-10倍的0-80％的乙醇(水)或者0-80％的甲醇(水)勻漿，蒸沸1-3小時，過濾，取濾液烘干，得干粉。
實施例三從南瓜中分離、提取肌醇的方法取南瓜100g，用1-10倍的0-80％的乙醇(水)或者0-80％的甲醇(水)勻漿，調pH2-7，蒸沸1-3小時，過濾，濾液調pH至7，濃縮并干燥，得干粉。
實施例四本實施例是肌醇分子的純化及測定為了進一步純化肌醇類分子，將實施例一、二、三所得到的抽提物按干重加入0.5倍體積(0.5ml/g)的75％丙腈(acetonitrile)，碾磨成勻漿。制備分離柱，該分離柱用具有3-氨醛(aminopropyl)鍵修飾的硅膠(9％)填充(Aldrich Chemical Company Inc.產品)，勻漿物在此柱上得到分離。用60-75％丙腈洗脫，0.4ml/Min。以5ml為單位收集不同組分洗脫液，其中的1ml蒸發干燥用于氣相色譜分解。各組分在Hewlett-Packard 5890 Series II氣相色譜儀上分析，分離柱為DB-1701(30-mlength，0.25-mmi.d.，0.25um film thickness，J&w Scientific產品)。柱溫為275℃和325℃。攜帶氣(Carrier gas)是氦氣(1.0ml/min)，split 1∶100；檢測氣是氫氣(30ml/min)、空氣(300ml/min)和氮氣(30ml/min)。肌醇類分子含量是根據標準曲線，并與標樣的保留時間和峰面積對比而計算的。肌醇、D-手性-肌醇及其它衍生物的標準均購自Sigma公司。
實施例五本實施例是肌醇分子的純化為了進一步純化肌醇類分子，將實施例一、二、三所得到的抽提物按干重加入0.5倍體積(0.5ml/g)的75％丙腈(acetonitrile)，碾磨成勻漿。制備分離柱，該分離柱用硅藻土或者皂土或者PVPP樹脂填充，勻漿物在此柱上得到分離。收集富含肌醇類分子的洗脫液，濃縮，噴霧干燥，制備成干粉。
實施例六本實施例是苦瓜甙、南瓜多糖、果膠含量的測定。
1.苦瓜提取物中苦瓜甙的含量測定精密稱取0.8g供試品于50ml錐形瓶中，加入10％硫酸10ml置電爐上煮沸，并保持微沸30分鐘，取出放冷，轉移至準備好的漏斗內，抽濾，洗凈三角燒瓶并洗滌水解物至中性，并在105℃干燥，將坩堝內物質用氯仿洗滌多次至5ml容量瓶中，定容。用微量吸管吸取上述溶液50μl點于硅膠G薄層板上，置于層吸缸中以石油醚-氯仿-甲醇(1∶98∶1)展開。展開15cm取出，揮去溶劑后將薄層板在碘蒸汽筒內顯色，用小針畫出斑點位置，然后在空氣中放置到碘完全揮發，將色斑刮入帶塞試管中，用在同一位置的空白處取下同樣大小的硅膠以作為對照；加濃硫酸至5ml，加熱15分鐘冷卻測定。測定時取樣品溶液50μl于50ml容量瓶中，加濃硫酸至刻度，90℃水浴半小時后，取出放置半小時，以不加樣為空白，在400nm處測吸光度。
測定所用標樣β-谷甾醇由中國生物制品檢定所提供；所用儀器為紫外可見分光光度計。
2.南瓜多糖含量測定稱取研細的南瓜提取物粉末3g，用水提醇沉法提取。加入水100ml、水浴回流提取4次，每次1小時，趁熱過濾。合并四次水提所得液，經石油醚脫脂后，取下層清液；上層石油醚層再加入水相反復萃取，同樣取下層清液，合并所有的水相層，濃縮成漿狀物后，加入5倍量的無水乙醇沉淀多糖固體，冰箱內過夜。過濾，沉淀反復用無水乙醇洗滌多次，最后得到的多糖固體用水溶解，離心，上清液轉移至100m.l容量瓶內，定容。稀釋100倍后用于檢測。檢測時，精密量取樣品溶液2ml依次分別加入2ml 5％苯酚、濃硫酸5ml于試管中，靜置20分鐘后，搖勻置30℃水浴30分鐘后，取出至室溫，以葡萄糖作為對照于波長487nm處檢測。檢測所用儀器為紫外可見分光光度計。
3.果膠含量測定精密稱取樣品0.5g于250ml燒杯中，加入150ml水溶解，煮沸1小時(煮沸過程中不斷補充水，以保證其體積不變)，移入250ml容量瓶，加水至刻度、過濾；取25ml濾液于500ml燒杯中，加入100ml0.1mol/l的NaOH溶液，靜置30分鐘后，再加入50ml 1mol/l的HCL溶液，5分鐘后加入50ml1mol/l的CaCl2溶液，放置1小時后煮沸5分鐘，過濾，用熱水洗滌至無Cl-，將沉淀物放入稱量瓶中于105℃烘至恒重。即得果膠鈣的量，通過公式換算得果膠含量。
實施例七制備苦瓜藥物組合物取實施例二制得的苦瓜提取物按配比加入藥用輔料，以常規方法制成片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液或口服液的藥物組合物。
實施例八制備南瓜藥物組合物取實施例三制得的南瓜提取物按配比加入藥用輔料，以常規方法制成片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液或口服液的藥物組合物。
實施例九制備苦瓜-南瓜藥物組合物按配比取實施例二、三制得的苦瓜、南瓜提取物加入藥用輔料，以常規方法制成片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液或口服液的藥物組合物。
實施例十制備苦瓜保健食品按實施例六操作，以食用輔料代替藥用輔料制得苦瓜保健食品。
實施例十一制備南瓜保健食品按實施例九操作，以南瓜提取物代替苦瓜提取物制得南瓜保健品。
實施例十二制備苦瓜-南瓜保健食品按實施例九操作，以苦瓜-南瓜提取物代替南瓜提取物，制得苦瓜-南瓜保健食品。
權利要求
1.一種具有降糖、降脂作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物包括含苦瓜、南瓜提取物作為活性成分與藥用輔料組成的。
2.一種具有降糖、降脂功效的保健食品，其特征在于該保健食品包括含苦瓜、南瓜提取物作為活性成分與食用輔料組成的。
3.根據權利要求1或2所述的一種具有降糖、降脂作用的藥物組合物或保健食品，其特征在于其中所述的活性成分與藥用輔料或食用輔料的配比，按重量百分比計，含活性成分90％-10％及含藥用輔料或食用輔料為10％-90％的比例配制成100％的活性成分，也能僅選苦瓜或南瓜提取物的一種作為活性成分。
4.一種從苦瓜或南瓜中提取肌醇分子的方法，其特征在于該方法為a.從南瓜中分離、提取肌醇分子的方法其特征為將南瓜與不同濃度的熱乙醇或者甲醇(0％～80％)按不同的比例3-10(重量比)，在pH2-7的范圍內水浴煮2-4小時，經過濾、離心、噴霧干燥即得南瓜提取物干粉，用這種方法所得提取物中肌醇、南瓜多糖、果膠均具有較高的含量；其中以南瓜與20％的乙醇溶液按重量比為5的比例在pH2時，水浴煮3小時后，經過濾、離心、噴霧干燥所得南瓜提取物中所含肌醇、南瓜多糖、果膠均最高，分別達到1.7％、32％、4.5％；b.從苦瓜中分離、提取肌醇分子的方法取苦瓜100g，用1-10倍的0-80％乙醇或者甲醇勻漿，蒸沸1-3小時，經過濾、離心、噴霧干燥得苦瓜提取物干粉，該提取物中所含肌醇、苦瓜甙均具有較高的含量；其中以苦瓜與30％的乙醇溶液按重量比為5的比例在pH2時，水浴煮3小時后，經過濾、離心、噴霧干燥所得南瓜提取物中所含肌醇、苦瓜甙均最高，分別達到3.2％、0.57％。
5.一種如權利要求1所述的一種具有降糖、降脂作用的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)制備苦瓜或南瓜提取物按權利要求4的方法制得；(2)純化將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物，分別按干重加入0.5倍量體積的75％丙腈，碾磨成勻漿；另外，用具有3-氨醛鍵修飾的9％硅膠填充制備分離柱，然后將提取物的勻漿上柱進行分離純化，用60％-75％丙腈洗脫，控制每分鐘0.4ml，以5ml為單位吸集不同組分的洗脫液，分取含肌醇量高的洗脫液，濃縮至干燥得干粉；或者將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物碾磨成勻漿，用硅藻土或者皂土或者PVPP樹脂填充的分離柱，勻漿物在此柱上得到分離，收集富含肌醇類分子的洗脫液，濃縮，噴霧干燥，制備成干粉；(3)制備藥物組合物按配方要求，取經步驟(2)純化的苦瓜、南瓜提取物與藥用輔料制成藥物組合物，片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液或口服液。
6.一種如權利要求2所述的一種具有降糖降脂功效的保健食品的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)制備苦瓜或南瓜提取物按權利要求4的方法制得；(2)純化將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物，分別按于重加入0.5倍量體積的75％丙腈，碾磨成勻漿；另外，用具有3-氨醛鍵修飾的9％硅膠填充制備分離柱，然后將提取物的勻漿上柱進行分離純化，用60％-70％丙腈洗脫，控制每分鐘0.4ml，以5ml為單位吸集不同組分的洗脫液，分取含肌醇量高的洗脫液，濃縮至干燥得干粉；或者將步驟(1)制得的苦瓜或南瓜提取物碾磨成勻漿，用硅藻土或者皂土或者PVPP樹脂填充的分離柱，勻漿物在此柱上得到分離，收集富含肌醇類分子的洗脫液，濃縮，噴霧干燥，制備成干粉；(3)制備保健食品按配方要求，取經步驟(2)純化的苦瓜、南瓜提取物與食用輔料制成保健食品。
全文摘要
本發明屬植物藥物技術領域。本發明提供了一種具有降糖降脂作用的含苦瓜、南瓜提取物的產品。本發明的產品經動物實驗證實對糖尿病、高血脂等有很好的預防和治療功效。本發明提供了制備方法，并首次提取了肌醇分子，同時證實了肌醇分子在降脂、降糖中的主要作用。
文檔編號A61P3/10GK1431005SQ0311512
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月23日 優先權日2003年1月23日
發明者夏濤, 劉華奇 申請人:上海諾金科生物科技有限公司