專利名稱：一種治療急慢性鼻淵的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及用于治療急、慢性鼻淵的中藥組合物，同時涉及該組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代醫(yī)學認為，急慢性鼻竇炎的病因主要是人體抵抗力降低，鼻道內(nèi)和外在的病毒及細菌乘隙侵入，造成鼻腔炎癥。急慢性鼻淵是我國常見病和多發(fā)病，據(jù)文獻報道，各地鼻病發(fā)生率波動在10.7-44.5％之間，尤其在南方各地，氣候潮濕，發(fā)病率甚高，其中76％是發(fā)生在30歲以下，從40-50歲間有6.4％，50歲以后僅有1％或2％，該病病程長，易反復，常因伴有頭痛、頭暈、記憶力減退等癥狀，給患者帶來不利影響。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于公開一種新的治療急慢性鼻淵的中藥組合物；本發(fā)明的另一個目的在于公開制備一種新的治療急慢性鼻淵中藥組合物的方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)辛夷10-30重量份 蒼耳子30-90重量份 麻黃20-60重量份白芷30-90重量份 薄 荷10-30重量份 藁本5-15重量份黃芩20-40重量份 連 翹20-40重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥中還可加入下述組分的原料藥野菊花20-40重量份 天花粉20-40重量份 地黃30-60重量份丹 參20-40重量份 茯 苓40-120重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥中還可加入甘草5-15重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比還可以是(按重量份)辛夷15-25重量份 蒼耳子50-70重量份 麻 黃30-50重量份白芷50-70重量份 薄 荷15-35重量份 藁 本8-18重量份黃芩30-50重量份 連 翹30-50重量份 野菊花30-50重量份天花粉30-50重量份 地黃50-70重量份 丹參30-50重量份茯 苓70-90重量份 甘草8-15重量份上述原料的最佳重量配比為辛 夷20重量份 蒼耳子60重量份 麻 黃40重量份白 芷60重量份 薄 荷20重量份 藁 本10重量份黃 芩40重量份 連 翹40重量份 野菊花40重量份天花粉40重量份 地 黃60重量份 丹 參40重量份茯 苓80重量份 甘 草10重量份上述藥物組成中的蒼耳子以炒為佳。
按照常規(guī)的制劑工藝，可以將上述原料制備成常用的臨床藥物劑型，例如丸劑、片劑、顆粒劑、口服液、膠囊劑、膏劑、乳劑和中藥膜劑等。
本發(fā)明藥物還可根據(jù)需要加入常規(guī)的藥物賦形劑，如調(diào)味劑、分散劑、粘合劑、增稠劑、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、防腐劑等。
本藥物組合物的制備方法以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮1-3小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮1-3次，每次0.5-1.5小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成臨床可接受的劑型。
本組合物制劑在治療急慢性鼻淵中有顯著的效果，具有收膿涕效果好，見效快的特點，它可作用于炎癥反應的多個環(huán)節(jié)，從而減輕炎癥反應的癥狀，使炎癥反應消退，對急慢性炎癥均有良好的抗炎作用；對引起急慢性鼻炎及鼻竇炎的常見致病菌有不同程度的抑菌作用；對非特異免疫功能及特異性免疫功能，都有一定的促進作用。
下面實驗例用于進一步說明本發(fā)明。
本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)對角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹，對組胺和5-羥色胺所致的毛細血管通透性增加，羧甲基纖維素鈉引起的大鼠白細胞游走以及大鼠皮下棉球肉芽腫增生均有明顯抑制作用。提示鼻淵凈顆粒作用于炎癥反應的多個環(huán)節(jié)，從而降低炎癥反應的癥狀，使炎癥反應消退。對急、慢性炎癥均有良好的抗炎作用。體外抑菌試驗選擇7種臨床分離菌株共106株(其中多數(shù)菌株對常用抗菌藥物青霉素和鏈霉素耐藥)及3株標準菌株，對鼻淵凈顆粒進行了體外抗菌作用的實驗研究，結(jié)果表明該藥對引起急、慢性鼻炎及鼻竇炎的常見致病菌，如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、變形桿菌、肺炎桿菌等均有不同程度的抑菌作用。鼻淵凈顆粒對小鼠非特異免疫功能—單核巨噬細胞吞噬功能具有明顯的促進作用，提高小鼠對血中膠體廓清速度；在遲發(fā)性變態(tài)反應中，鼻淵凈顆粒也都能增加DNFB致敏后的耳殼腫脹度，提高正常機體對超敏反應的感受力，提高其細胞免疫功能在免疫器官方面，對脾臟重量有增加趨勢，但無統(tǒng)計學意義在體液免疫方面，對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠溶血素生成都具有一定提高作用。以上研究初步表明，鼻淵凈顆粒對非特異免疫功能及特異性免疫功能，包括細胞免疫，體液免疫都具有一定的促進作用。鼻淵凈顆粒對無芽胞厭氧的體外抑菌試驗選擇有代表性的各種厭氧菌共24株，測定了鼻淵凈顆粒的體外抗厭氧活性，并以甲硝唑作陽性對照。試驗結(jié)果表明鼻淵凈顆粒對3種無芽胞厭氧菌均有一定的抑制作用，但其抑菌活性遠低于對照藥甲硝唑。體內(nèi)抗菌試驗采用預防性給藥，即感染前3天給藥，在較高劑量時對金色葡萄球菌所致小鼠感染有一定的保護作用，ED50為14.4g/Kg。這一結(jié)果與其在體外具有抗金葡萄球菌作用的結(jié)果是一致的。
實驗例1本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)的抗炎作用一、實驗材料及統(tǒng)計方法1、藥物鼻淵凈清膏，每毫升含生藥3g，武漢市第三醫(yī)院提供(批號930514)，以下所用濃度均以生藥表示，分別取3g/ml的鼻淵凈顆粒40ml、20ml、10ml，加蒸餾水至100ml配成120％、60％、30％的混懸液備用，用時混勻；地塞米松片(合肥制藥廠，批號890572)，用蒸餾水配成0.125g/ml的溶液備用；阿斯匹林片(濟南第三制藥廠，批號9105812-5)，用乙醇溶解，配成2％的溶液備用；撲爾敏片(山東德州制藥廠，批號920401)；用蒸餾水配成1％的溶液備用。2、試劑角叉菜膠(Nacala Tesqe，Inc Japan)；5-羥色胺(Koch-Light Lab.Ltd.England)；組胺(上海生化所)；羥甲基纖維素鈉(上海賽璐珞廠)。3、動物Wistar大鼠，同濟醫(yī)科大學實驗動物中心提供。4、儀器72型分光光度計，普通光學顯微鏡。5、統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)標準表示，各均數(shù)間差異用方差分析進行差異顯著性檢驗。顯著性界限為p＜0.05。
二、方法與結(jié)果1、對大鼠足跖腫脹的影響Wistar大鼠50只，體重120-160(157±12)g，雌雄各半，隨機分成5組，每組10只，設蒸餾水組、阿斯匹林組和鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組，分別給予每日灌胃一次，連續(xù)3天，末次給藥后1小時，每鼠右后足跖皮下注射1％角叉萊膠0.1ml，給藥前和后1、2、3、4、5和6小時分別測定固定位置的足跖體積(毛細管放大測量法)，二者之差即腫脹度。結(jié)果表明阿斯匹林在上述各時間點對足跖腫脹均有顯著抑制作用。高劑量組在致炎后2、3、4、5和6小時時間點有明顯抑制作用，中、低劑量組在4、5小時時間點有抑制作用，見表1。
表1 鼻淵凈清膏對大鼠足跖腫脹的影響(X±SD)組別 劑量 動物數(shù) 足跖腫脹度(cm3)g/kg (只)1h2h3h4h 5h 6h蒸餾水 - 100.34±0.040.75±0.030.99±0.051.08±0.04 1.12±0.06 1.06±0.05阿斯匹林0.2100.21±0.03** 0.39±0.09** 0.73±0.04** 0.75±0.06**0.82±0.03**0.78±0.03**鼻淵凈高12 100.42±0.090.56±0.07** 0.74±0.08** 0.79±0.05**1.04±0.07**0.83±0.06**鼻淵凈中6 100.41±0.040.72±0.031.00±0.061.00±0.04**1.02±0.06**0.89±0.08鼻淵凈低3 100.32±0.080.73±0.080.97±0.050.98±0.03 1.02±0.06**0.90±0.04與蒸餾水比較**p＜0.012、對血管通透性的影響Wistar大鼠50只，體重150-190(173±12)g，雌雄各半，隨機分成5組，每組10只，分別設蒸餾水組、撲爾敏組和鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組，給藥容量均為10ml/kg，每日灌胃一次，連續(xù)3天。末次給藥后1小時后在背部已剃毛的四個部位，分別皮內(nèi)注射0.1％組胺和0.1％5-HT 0.1ml(各二點)形成小丘，然后立即股靜脈注射1％伊紋氏藍4ml/kg。5分鐘后斷頭處死；剝開背部皮膚，將著色的皮膚剪下，切碎，放人5ml生理鹽水-丙酮溶液(3∶7)內(nèi)浸泡24小時，離心(3000rpm 20min)，取上清液，在610nm波長處比色(72型分光光度計)。結(jié)果表明撲爾敏、鼻淵凈顆粒高、中劑量能明顯抑制組胺和5-HT引起的血管通透性增高，見表2。
表2、鼻淵凈顆粒對血管通透性的影響(X±SD)組別 劑量動物數(shù)(只) 致炎劑 光密度(OD)蒸餾水 10ml/kg 10組胺0.35±0.095-HT0.27±0.11撲爾敏 100mg/kg10組胺0.16±0.06**5-HT0.13±0.04**鼻淵凈高12g/kg 10組胺0.22±0.05**5-HT0.17±0.07*鼻淵凈中6g/kg 10組胺0.25±0.07**5-HT0.18±0.06*鼻淵凈低3g/kg 10組胺0.32±0.095-HT0.25±0.10與蒸餾水組比較*p＜0.05 **P＜0.013、對白細胞游走反應的影響雄性Wistar大鼠50只，體重130-180(153±13)g。隨機分成5組，每組10只，分別設蒸餾水組、地塞米松組和鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組。給藥容量均為10ml/kg，每日灌胃一次，連續(xù)三天。致炎前一天在背部肩胛間區(qū)皮下注射5ml空氣，形成氣囊。末次給藥后1小時，抽囊內(nèi)注入1.5、3和7.5小時從囊內(nèi)吸取液體0.1ml作白細胞計數(shù)。結(jié)果表明地塞米松和高劑量組鼻淵凈顆粒明顯抑制白細胞游走反應，見表3。
表3、鼻淵凈顆粒對大鼠白細胞游走反應的影響(x±SD)白細胞數(shù)(109/L)組別劑量 動物數(shù)1.5h 3h7.5h蒸餾水 10ml/kg 104.34±0.285.79±0.47 26.26±2.48地塞米松1.25mg/kg102.18±0.28* 2.80±0.62*14.27±1.79*鼻淵凈高12g/kg 103.70±0.46* 4.75±0.47*21.88±3.27*鼻淵凈中6g/kg104.20±0.285.55±0.48 26.28±2.30鼻淵凈低3g/kg104.46±0.315.63±0.45 27.29±1.66
與蒸餾水組比較*p＜0.014、對大鼠皮下棉球肉芽腫增生的影響雄性Wistar大鼠50只，體重120-160(142±12)g，隨機分成5組，每組10只，分別設蒸餾水組，地塞米松組和鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組。淺麻醉無菌條件下，將棉球(29-31mg)植入兩側(cè)腹股溝。術(shù)前三天給藥，每日灌胃十次，連續(xù)10天。給藥結(jié)束后斷頭處死動物，剝出棉球肉芽腫，90℃烤箱內(nèi)干燥，1小時后稱重。結(jié)果表明地塞米松和高、中劑量鼻淵凈顆粒明顯抑制皮下棉球肉芽腫增生，抑制率分別為24.8％、20.0％和13.3％，見表4。
表4、鼻淵凈顆粒對大鼠棉球肉芽腫的影響(X±SD)組別劑量 動物數(shù)(只) 肉芽腫重(mg)抑制率(％)蒸餾水 10mg/kg 10 105±15撲爾敏 1.25mg/kg10 79±13**24.8鼻淵凈高12g/kg 10 84±14**20.0鼻淵凈中6g/kg10 91±12* 13.3鼻淵凈低3g/kg10 94±13 10.5結(jié)論該項研究對鼻淵凈顆粒在四種大鼠動物模型上進行了實驗。其劑量由人用量折算而來。人用每日劑量30-45g(10-15g Tid)相當于生藥16.8-25.2g，按公斤體重計為0.34-0.50g/kg/日，實驗結(jié)果表明，鼻淵凈顆粒對角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹，對組胺和5-羥色胺所致的毛細血管通透性增加，羧甲基纖維至少鈉引起的大鼠白細胞游走以及大鼠皮下棉球肉芽腫增生均有明顯抑制作用。提示鼻淵凈顆粒對炎癥反應的多個環(huán)節(jié)都有作用，從而降低炎癥反應的癥狀，使炎癥反應消退。對急、慢性炎癥均有良好的抗炎作用。
實驗例2本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)體外抑菌作用一、實驗材料1、樣品鼻淵凈清膏，每毫升含生藥3g，武漢第三醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)，批號930514。配制方法同前，以蒸氣100℃，30min滅菌備用。2、藥敏紙片青霉素G，(10IU/片)，批號931211鏈霉素(10IU/片)，批號931127諾氟沙星(10ug/片)。以上藥敏紙片均由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)部生產(chǎn)。3、培養(yǎng)基MH(Muller-Hinton)培養(yǎng)基，每100中含牛肉膏3g，蛋白胨17.5g，可溶性淀粉1.5g，瓊脂17g，PH 7.4經(jīng)高壓滅菌(115℃，30分鐘后)備用。鏈球菌接種于巧克力瓊脂平板。4、菌種選用與該藥主治疾病有關(guān)的臨床分離所得致病菌及部分標準菌株(金黃色葡萄球菌ATCC25925，大腸桿菌ATCC25922，綠膿桿菌ATCC27853)共109株。其中金黃色葡萄球菌21株，表皮葡萄球菌19株，溶血性鏈球菌3株，大腸桿菌22株，綠膿桿菌16株，變形桿菌15株，肺炎桿菌13株。受試菌株經(jīng)同濟醫(yī)科大學微生物學教研室和協(xié)和醫(yī)院檢驗科細菌室鑒定。
二、方法和結(jié)果1、紙片法藥敏試驗，將測試菌分別接種于肉湯中，置37℃培養(yǎng)6-8h，用無菌棉拭子蘸取菌液均勻涂布于瓊脂表面，置37℃培養(yǎng)16-18h后測量抑菌圈大小。按照統(tǒng)一規(guī)定的抗菌藥物藥敏試驗判斷標準進行判斷。2、MIC測定，將測試菌分別接種于肉湯中，置37℃培養(yǎng)16-18h(大腸桿菌和綠膿桿菌培養(yǎng)8h)后，用無菌肉湯稀釋成1∶1000的菌液備用。采用平皿內(nèi)藥液稀釋法，取不同濃度(6g/ml，3g/ml，1.5g/ml…0.009375g/ml)的鼻淵凈清膏2ml分別加入18ml MH培養(yǎng)基中，搖勻后倒人無菌平皿內(nèi)，使培養(yǎng)基內(nèi)藥物終濃度分別為0.6g/ml 0.3g/ml 0.15g/ml……，0.009375g/ml)，同時設藥物對照平皿(僅藥物與培養(yǎng)基混合，不接種細菌)和受試菌株對照平皿(培養(yǎng)基內(nèi)不含藥物)。待瓊脂凝固后，用接種環(huán)劃線接種各實驗菌液，并于平皿底部標明藥物濃度和細菌種類及菌株編號，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。MIC為抑制細菌生長的最低藥物濃度。3、結(jié)果紙片法藥敏試驗結(jié)果見表5。本試驗所收集的臨床致病菌92％的菌株對諾氟沙星敏感，所有金黃色葡萄球菌和73％表皮葡萄球菌對青霉素耐藥，44％革蘭氏陰性桿菌對鏈霉素耐藥。鼻淵凈顆粒的體外抗菌活性見表6。由表6可見，鼻淵凈顆粒對受試菌株具有不同程度的抑菌作用，對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、肺炎桿菌的MIC50的分別為0.02812、0.02344、0.18、0.09、0.206＞0.6g/ml；MIC90分別為0.03750.0625 0.42 0.14＞0.6＞0.6g/ml，對溶血性鏈球菌的MIC范圍為0.075-0.6g/ml。本試驗所設藥物對照平皿均未見細菌生長，受試菌株對照生長良好，表明藥物本身不含有活菌，培養(yǎng)條件符合試驗要求。
三、結(jié)論鼻淵凈顆粒是中藥復方制劑，具有清熱解毒等作用。本試驗選擇7種臨床分離菌株共106株(其中多數(shù)菌株對常用抗菌藥物青霉素和鏈霉素耐藥)及3株標準菌株，對鼻淵凈顆粒進行了體外抗菌作用的實驗研究，結(jié)果表明該藥對引起急、慢性鼻炎及鼻竇炎的常見致病菌，如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、變形桿菌、肺炎桿菌等均有不同程度的抑菌作用。
表5臨床分離株對3種抗菌藥物的紙片法藥敏試驗結(jié)果菌種 青霉素C 鏈霉素 諾氟沙星株數(shù)SMR(％)SMR(％)SM R(％)金黃色葡萄球菌 200020(100) 19 01(5) 19 0 1(5)表皮葡萄球菌154011(73) 4011(73) 13 0 2(15)大腸桿菌21-- - 5313(62) 15 0 6(29)綠膿桿菌15-- - 249(60)15 0 0(0)變形桿菌15-- - 14 01(7) 14 1 0(0)肝炎桿菌12-- - 705(42)12 0 0(0)S敏感菌株數(shù)，M中度敏感菌株數(shù)，R(％)耐藥菌株數(shù)(耐藥朱百分比)。
表6鼻淵凈清膏對109株細菌的MIC測定細菌 株數(shù) 藥物濃度(g/ml) MIC10MIC10MIC范圍0.009375 0.01875 0.03750.75 0.150.30.6＞0.6金黃色葡萄球菌211 1820.02812 0.0375 0.01875-0.075表皮葡萄球菌 19 5 3 6 50.02344 0.0625 0.009375-0.075溶血性鏈球菌 3 12 0.075-0.6大腸桿菌 2210 6 6 0.180.420.15-0.6綠膿桿菌 16 6 9 1 0.090.140.075-0.6變形桿菌 15 4 2 3 4 20.206 ＞0.6 0.009375-＞0.6肝炎桿菌 13 3 10 ＞0.6 ＞0.6 0.6-＞0.6實驗例3本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)對免疫功能作用一、鼻淵凈顆粒對小鼠碳粒廓清的影響1、材料鼻淵凈清膏，每毫升含生藥3g，批號930541，系武漢市第三醫(yī)院研制，配制方法同前；云芝多糖膠囊系南京老山制藥廠產(chǎn)品，批準文號蘇衛(wèi)藥準字(87)3612-1號；規(guī)格是0.5克/粒，用去離子水稀釋成10％濃度混懸液，供試驗使用，使用時振搖；印度墨汁系英國Winsor&Newton產(chǎn)品；751分光光度計，上海分析儀器廠產(chǎn)品；動物昆明種小鼠，由同濟醫(yī)科大學動物實驗中心提供；2、方法取20-24g健康小鼠50只，雌雄各半，隨機分成5組，即蒸餾水組、云芝多糖陽性對照組、鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組，各組均按10ml/kg體重口服灌胃給藥，每日一次，連續(xù)7天，第7天給藥后每鼠尾靜脈注射印度墨汁10ml/kg體重，于2、10分鐘后分別從眼眶靜脈取血0.03ml，加到0.1％碳酸鈉溶液2ml中搖勻，用751紫外光分光度計在680mm波長處測定光密度，按下列公式計算廓清指數(shù)K值。K＝(logOD2-logOD10)/(t10-t2)OD2和OD10分別代表2、10分鐘所測血樣的光密度，t10和t2代表測定時間，取血完畢后，小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取肝、脾重量，然后根據(jù)下列公式計算吞噬指數(shù)a值a＝(體重/脾肝重)×3√K各組的K值和a值均以XSD表示，進行F檢驗，比較各組差異顯著性。3、實驗結(jié)果蒸餾水組廓清指數(shù)K值和吞噬指數(shù)a值分別是5.2±1.7(K×1000，XSD下同)和2.75±0.5(x±sD下同)，而云芝多糖組分別是13.75±5.7和3.7±9.50，兩者具有顯著性差異(p＜0.01)。證實此方法是可靠的，與文獻報道一致[10]，云芝多糖能增加小鼠吞噬功能，鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)與蒸餾水組比較都具有顯著差異(p＜0.05)，與云芝多糖比較，除低劑量組有顯著差異外(p＜0.05)，高、中劑量則無顯著差異(p＞0.05)，這表明在較高劑量時，鼻淵凈顆粒具有與云芝多糖類似的增加小鼠吞噬功能的作用，鼻淵凈顆粒各個劑量組廓清指數(shù)與劑量間有一定相關(guān)性，劑量增大，吞噬活性增強，高低劑量相比較，具有顯著性差異(p＜0.05)，吞噬指數(shù)各個劑量組之間則無顯著差異(p＞0.05)，以上結(jié)果表明；鼻淵凈顆粒可增加單核巨噬細胞系統(tǒng)對血中膠體碳的廓清速度，提高其吞噬功能，見表7。
7、鼻淵凈顆粒對小鼠碳粒廓清功能的影響(XSD)組別 劑量 動物數(shù)(只) 廓清指數(shù)(K值) 吞噬指數(shù)(a值)蒸餾水組 10ml/kg 10 5.2±1.7 2.75±0.53云芝多糖組 1g/kg10 13.7±5.7**3.71±0.50**鼻淵凈低 3g/kg10 8.2±3.1*# 3.45±0.68*#鼻淵凈中 6g/kg10 10.1±4.5**3.85±0.45**鼻淵凈高 12g/kg 10 12.7±4.4**@ 3.66±0.75**與蒸餾水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與云芝多糖組比較，#p＜0.05；與鼻淵凈顆粒低劑量組比較@p＜0.05二、鼻淵凈顆粒對遲發(fā)性變態(tài)反應的影響(一)、材料1、鼻淵凈顆粒，云芝多糖膠囊同前，按同法配成試驗所需濃度。2、雷公藤片，系湖北省黃石市制藥廠產(chǎn)品，批準文號鄂衛(wèi)藥準字(89)240號，用去離子水稀釋成0.0033％混懸液供實驗使用，使用時振搖。3、2，4-二硝氟苯(DNFB)系上海金山化工廠產(chǎn)品，用丙酮麻油溶液配制成1％DNFB。4、動物昆明種小鼠，同濟醫(yī)科大學動物實驗中心提供；(二)、方法取18-22g健康小鼠60只，雌雄各半隨機分成6組，即蒸餾水空白對照組，云芝多糖對照組，雷公藤對照組，鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組，按口服灌胃給藥，每日一次，連續(xù)7天，在第一天給藥的同時，各鼠腹部去毛，范圍約為3×3CM2，用1％DNFB丙酮麻油溶液50ul均勻涂抹皮膚表面致敏，第二天再強化致敏一次，給藥第6天，將1％DNFB溶液10ul均勻涂抹右耳廓兩面進行攻擊，左耳作對照。攻擊24小時后，頸部脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑3mm的耳片，稱重，兩耳片重量之差為耳腫脹度，同時取出各鼠脾臟和胸腺稱重，分別以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)的，即脾指數(shù)＝脾重(mg)/體重(g)×10胸腺指數(shù)＝胸腺重重(mg)/體重(g)×10將耳殼腫脹度，脾指數(shù)、胸腺指數(shù)進行F檢驗，判斷各組差異顯著性。
(三)、結(jié)果雷公藤組其耳殼腫脹度是0.49±0.24，較蒸餾水組1.24±0.47有較明顯地下降，與文獻報道雷公藤抑制遲發(fā)性變態(tài)反應結(jié)果完全一致，而鼻淵凈顆粒高、中、低三種劑量給藥組和云芝多糖給藥組其耳殼腫脹度分別是1.83±0.38，1.66±0.38，2.51±0.36和2.31±0.35，均較蒸餾水組有明顯增加，低劑量組作用更強(見表8)。對脾臟指數(shù)有一定的提高作用，但無顯著意義，中高劑量對胸腺指數(shù)有降低作用，低劑量對其無影響，通過本實驗揭示鼻淵凈顆粒能增強小鼠致敏反應，參與機體的免疫功能的調(diào)節(jié)作用。
表8鼻淵凈顆粒對小鼠耳殼腫脹、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響(x±SD)組別 劑量動物數(shù)腫脹度 脾指數(shù) 胸腺指數(shù)(mg)(mg/10g體重) (mg/10g體重)蒸餾水組10ml/kg 101.24±0.47 42.9±12.324.8±6.7雷公藤組330ug/kg100.49±0.24**26.7±16.7* 5.80±4.5**云芝多糖1g/kg 102.31±0.35**44.4±12.419.1±6.3*鼻淵凈高12g/kg 101.83±0.38* 49.3±10.617.1±5.9*鼻淵凈中6g/kg 101.66±0.38* 51.3±16.317.2±6.7*鼻淵凈低3g/kg 102.51±0.36**50.3±10.424.1±4.5與蒸餾水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；三、鼻淵凈顆粒對環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下血清溶血素生成的影響(一)、材料1、鼻淵凈顆粒、雷公藤、云芝多糖膠囊同前實驗。2、環(huán)磷酰胺系上海十二制藥廠產(chǎn)品，批準文號滬衛(wèi)藥準字(1981)第0364號一(十二)。3、SRBC保存液(Alsever)葡萄糖2.05g，氯化鈉0.42g，檸檬酸鈉0.8g，檸檬酸0.05g，蒸餾水100ml，溶解混合過濾，在8磅壓力下滅菌10分鐘，在4℃保存?zhèn)溆谩?、都氏溶液(用測定血紅蛋白使用)碳酸氫鈉1.0g，高鐵氰化鋼，0.2g，氰化鉀0.05g加蒸餾水1000ml。5、補體取新鮮豚鼠(3只)混合血清經(jīng)SRBC(以10∶1)的體積比例(于4℃吸收30分鐘，震蕩離心(2000rpm，10分鐘)取上清液，用蒸餾水按1∶10將血清稀釋備用。6、SRBC在無菌條件下，從健康成年綿羊頸靜脈取血，將血液放入有玻璃珠的三角燒杯中輕搖10分鐘以除去纖維蛋白，加入2倍量的保存液，放入4℃冰箱備用，臨時用生理鹽水洗滌3次，經(jīng)2000rpm，10分鐘，得壓積紅細胞，再按所需濃度稀釋。7、昆明種小鼠由同濟醫(yī)科大學動物實驗中心提供。
(二)、方法，取健康小鼠60只，體重在20-24g，雌雄各半隨機分成6組，即蒸餾水組，環(huán)磷酰胺組，環(huán)磷酰胺加云芝多糖組，環(huán)磷酰胺加鼻淵凈顆粒高、中、低劑量組。給藥前先給各鼠(除蒸餾水組外)環(huán)磷酰胺按110mg/kg皮下注射造成免疫功能低下的病理模型，然后連續(xù)口服給藥7天，在給藥第二天每鼠腹腔注射致敏。第八天從小鼠眼眶摘除眼球取血，分離血清，將血清稀釋800倍，在試管內(nèi)依次加入經(jīng)稀釋的血清1ml，5％SRBC0.5ml，10％補體1ml，加都氏液3ml，搖勻后放置10分鐘，在540nm波長處比色記錄吸光度，另外取5％SRBC0.25ml，加都氏液4ml，記錄其吸光度值，此值即為實驗所用SRBC半數(shù)溶血時的肖光度值，最后按下式計算樣品的半數(shù)溶血值。
(三)、結(jié)果環(huán)磷酰胺組半數(shù)溶血值(HC50)325.4166.10(XSD)明顯地低于蒸餾水組464.8615.85，其差異有顯著性(P＜0.01)，通過給環(huán)磷酰胺造成體液免疫功能低下，在給予環(huán)磷酰胺同時，給予鼻淵凈顆粒，都能提高半數(shù)溶血值，其高、中、低劑量組HC50值分別是427.94±33.63，396.9675.66和397.29±71.32，與單用環(huán)磷酰胺組比較，差異都具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，云芝多糖組作用非常明顯，其HC50值與環(huán)磷酰胺組比較明顯提高(P＜0.01)，在鼻淵凈顆粒各組中，高劑量組作用最強，見表9。
表9.鼻淵凈顆粒對免疫功能低下小鼠血清溶血素生產(chǎn)的影響(x±SD)組別 劑量 動物數(shù) HC50值(X±SD)蒸餾水組 10ml/kg 1064.84±15.85環(huán)磷酰胺組11g/kg 10325.4166.10##環(huán)磷酰胺+低劑量鼻淵凈顆粒 11g/kg 10397.29±71.32*3g/kg環(huán)磷酰胺+中劑量鼻淵凈顆粒 11g/kg 10396.96±75.56*6g/kg環(huán)磷酰胺+高劑量鼻淵凈顆粒 11g/kg 10427.94±33.63**12g/kg環(huán)磷酰胺+云芝多糖 11g/kg 10539.23±101.13**1g/kg
##與蒸餾水組比較P＜0.01；*與環(huán)磷酰胺比較P＜0.05；**與環(huán)磷酰胺組比較P＜0.01。
鼻淵凈顆粒對免疫功能藥效學結(jié)論實驗結(jié)果表明，三種劑量鼻淵凈顆粒對小鼠非特異免疫功能—單核巨噬細胞吞噬功能都具有明顯的促進作用，提高小鼠對血中膠體廓清速度，高劑量組較低劑量組作用更為明顯；在遲發(fā)性變態(tài)反應中，三種劑量鼻淵凈顆粒也都能增加DNFB致敏后的耳殼腫脹度，提高正常機體對超敏反應的感受力，提高其細胞免疫功能，其中以低劑量組作用更強在免疫器官方面，對脾臟重量有增加趨勢，但無統(tǒng)計學意義；在體液免疫方面，三種劑量鼻淵凈對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠溶血素生成都具有一定提高作用。以上研究初步表明，鼻淵凈顆粒對非特異免疫功能及特異性免疫功能，包括細胞免疫，體液免疫都具有一定的促進作用。
實驗例4本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)對無芽胞厭氧的體外抑菌試驗一、材料和方法1、試驗藥品，試驗藥鼻淵凈清膏(鼻淵凈未濃縮劑型)，每毫升含生藥3g，武漢第三醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)，批號960620。用蒸餾水配制5000mg/ml，以蒸氣100℃，30min滅菌備用，用時稀釋。陽性對照藥甲硝唑，武漢濱湖制藥廠生產(chǎn)，批號960541，配制成320ug/ml。2、試驗菌株，試驗用菌株均為武漢地區(qū)臨床病例標本的分離株，其中脆弱類桿菌20株，齒齦類桿菌2株，共計3種24株。受試菌株經(jīng)同濟醫(yī)科大學微生物學教研室細菌室鑒定。標準菌株(脆弱類桿菌5524)購于北京生物藥品檢驗所。所有菌株均凍干存于-30℃，使用時用無菌生理鹽水稀釋，接種于厭氧分離培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)48h，再挑取單個菌落接種于厭氧菌基礎培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)24h，調(diào)整菌液至106cfu/ml。3、培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)基，購于上海醫(yī)工所。4、試驗方法，瓊脂平板稀釋法，取5000mg/ml的鼻淵凈顆粒和320ug/ml甲硝唑2ml分別作對倍稀釋，最小濃度分別為39mg/ml和0.3ug/ml。分別取兩種藥物各種濃度藥液2ml加入18ml厭氧瓊脂培養(yǎng)基中，搖勻后分別倒人無菌平皿內(nèi)。待瓊脂凝固后，用接種環(huán)劃線接種各實驗菌液，同時接種不含藥物的平皿，于平皿底部標明藥物濃度和細菌種類及菌株編號，37℃厭氧條件下培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。MIC為抑制細菌生長的最低藥物濃度。
二、結(jié)果鼻淵凈顆粒和甲硝唑?qū)?4株無芽胞厭氧菌的最小抑菌濃度見表10。
表10鼻淵凈顆粒和皿硝唑?qū)?4株厭氧菌的體外抑菌作用菌數(shù)株數(shù)藥物 MIC脆弱類桿菌 20 鼻淵凈(mg/ml)31～≥250甲硝唑(ug/ml)0.06～32齒齦類桿菌 2 鼻淵凈(mg/ml)125甲硝唑(ug/ml)0.03，0.125瘡皰丙酸桿菌 2 鼻淵凈(mg/ml)125甲硝唑(ug/ml)0.06，0.25脆弱類桿菌5542 1 鼻淵凈(mg/ml)62.5甲硝唑(ug/ml)0.125討論本試驗選擇有代表性的各種厭氧菌共24株，測定了鼻淵凈顆粒的體外抗厭氧活性，并以甲硝唑做陽性對照。試驗結(jié)果表明鼻淵凈顆粒對3種無芽厭氧菌均有一定的抑制作用，但其抑菌活性遠低于對照藥甲硝唑。
實驗例5本組合物制劑(鼻淵凈顆粒)體內(nèi)抗菌試驗材料和方法1、藥品，試驗藥鼻淵凈清膏(鼻淵凈顆粒未濃縮劑型)，棕色液體，每ml含生藥3g，武漢市第三醫(yī)院生產(chǎn)，批號960620。用蒸餾水配成不同濃度(0.3、0.6、0.9、1.2、1.5g/ml)的混懸液，用時混勻。對照藥乳酸環(huán)丙沙星注射液(200mg/100ml)，廣州僑光制藥廠生產(chǎn)，批號95091502，用無菌生理鹽水配制成0.3mg/ml。2、試驗菌株，用于感染動物的細菌為臨床分離的金黃色葡萄球菌，經(jīng)同濟醫(yī)科大學附屬同濟醫(yī)院檢驗科細菌室鑒定。3.菌液制備，試驗前一日，取5個菌落移種于5ml肉湯試管，37℃培養(yǎng)18h后作為原菌液。原菌液用生理鹽水適當稀釋，取稀釋后的菌液1ml加5％胃膜素9ml，制成均勻混懸液。根據(jù)MLD預試驗結(jié)果最終用5％胃膜素制成感染動物用菌液。MLD為最小100％致死病菌(Minimal100％ lethaldose of bacteria)。本試驗選用80％-90％小鼠死亡的細菌量感染動物。4.試驗動物，昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半，試驗前18h禁食供水。試驗動物由同濟醫(yī)科大學醫(yī)學實驗動物中心提供。5、試驗方法，按動物體重，性別分層隨機分組，每組10只，共分7組，即蒸餾水陰性對照，環(huán)丙沙星(3mg/kg/次)陽性對照，5組不同劑量的鼻淵凈顆粒組(3、6、9、12、15g/Kg/日)。用準備好的菌液采用腹腔注射感染動物，每只小鼠0.5ml。鼻淵凈顆粒于感染前3天及感染后4天每天灌胃一次，環(huán)丙沙星于感染后即刻及感染后6h各靜脈注射一次，陰性對照組給予等容量蒸餾水，給藥容量為0.1ml/10g。觀察時間7天，記錄各組小鼠死亡數(shù)，按Bliss法計算鼻淵凈顆粒的ED50。
二、結(jié)果小鼠感染金黃色葡萄球菌后，鼻淵凈顆粒及對照組小鼠死亡數(shù)見表11，鼻淵凈顆粒的ED50與95％可信限分別為14.4g/kg和9.1～22.8g/Kg。
表11 鼻淵凈顆粒金黃色葡萄球菌感染小鼠的體內(nèi)保護試驗菌種 藥物名稱劑量(g/kg)對數(shù)劑量X動物數(shù)死亡動物數(shù)(只)死亡率 ED50與95％可信限(g/kg)(只)(％)鼻 3 0.477110 9 90淵 6 0.778210 10 100凈 9 0.954210 7 7014.4金黃色葡萄球菌 顆 12 1.079210 6 60(9.1～22.8)粒 15 1.176110 4 40環(huán)丙沙星 3mg/kg 10 0 0蒸餾水 - 10 9 90討論由于中藥抗菌作用較弱，難以在體內(nèi)達到有效抗菌濃度，且中藥?？赡芡ㄟ^調(diào)動非特異抗感染能力而起效，故正式試驗時感染菌量應低于MLD，以選取80-90％小鼠死亡的細菌量感染動物，并且研究中藥體內(nèi)抗菌作用時常采用預防性給藥。本試驗蒸餾水組和環(huán)丙沙星對照組小鼠死亡率分別為90％和0％，說明所選用的感染菌量是適當?shù)摹Ｔ囼炈幈菧Y凈顆粒采用預防性給藥，即感染前3天給藥。研究結(jié)果表明，本品在較高劑量時對金黃色葡萄球菌所致小鼠感染有一定的保護作用，ED50為14.4g/kg。這一結(jié)果與其在體外具有抗金葡萄球菌作用的結(jié)果是一致的。
下列實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。
實施例1辛夷10g蒼耳子30g麻黃20g白 芷30g薄 荷10g藁本5g 黃 芩20g連翹20g野菊花20g天花粉20g地黃30g丹 參20g茯苓40g甘 草5g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成軟膠囊。
實施例2辛夷30g蒼耳子90g麻黃60g白 芷90g薄 荷30g藁本15g黃 芩40g連翹40g野菊花40g天花粉40g地黃60g丹 參40g茯苓120g 甘 草15g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成膠囊。
實施例3辛夷15g 蒼耳子50g麻黃30g白 芷50g薄 荷15g藁本8g黃 芩30g連翹30g野菊花30g天花粉30g地黃50g 丹 參30g茯苓70g甘 草8g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成片劑。
實施例4辛夷25g蒼耳子70g麻黃50g白 芷70g薄 荷35g藁本18g黃 芩50g連翹50g野菊花50g天花粉50g地黃70g丹 參50g茯苓90g甘 草15g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成軟膠囊。
實施例5辛夷20g蒼耳子60g麻黃40g白 芷60g薄 荷20g藁本10g黃 芩40g連翹40g野菊花40g天花粉40g地黃60g丹 參40g茯苓80g甘 草10g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮至60℃相對密度1.35-1.40的清膏；與輔料混合制粒，干燥整粒，制成200粒，噴揮發(fā)油，密閉24小時，即得顆粒劑。每粒0.3克，相當原料藥2.8g，開水沖服，一日3次，一次10-15g，每袋裝10g。
實施例6辛夷20g蒼耳子60g麻黃40g白芷60g薄荷20g藁 本10g黃芩40g連翹40g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上八味，辛夷、薄荷、藁本三味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他五味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成軟膠囊。
實施例7辛夷20g蒼耳子60g麻黃40g白 芷60g薄 荷20g藁本10g黃 芩40g連翹40g野菊花40g天花粉40g地黃60g丹 參40g茯苓80g其中，蒼耳子以炒為佳。
以上十三味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他九味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成軟膠囊。
權(quán)利要求
1.一種中藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的辛夷10-30重量份蒼耳子30-90重量份 麻黃20-60重量份白芷30-90重量份薄 荷10-30重量份 藁本5-15重量份黃芩20-40重量份連 翹20-40重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于還可加入下述組分的原料藥野菊花20-40重量份 天花粉20-40重量份 地黃30-60重量份丹 參20-40重量份 茯 苓40-120重量份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于還可加入甘草5-15重量份。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的辛 夷15-25重量份 蒼耳子50-70重量份 麻 黃30-50重量份白 芷50-70重量份 薄 荷15-35重量份 藁 本8-18重量份黃 芩30-50重量份 連 翹30-50重量份 野菊花30-50重量份天花粉30-50重量份 地 黃50-70重量份 丹 參30-50重量份茯 苓70-90重量份 甘 草8-15重量份。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的辛 夷20重量份 蒼耳子60重量份 麻 黃40重量份白 芷60重量份 薄 荷20重量份 藁 本10重量份黃 芩40重量份 連 翹40重量份 野菊花40重量份天花粉40重量份 地 黃60重量份 丹 參40重量份茯 苓80重量份 甘 草10重量份。
6.如權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中蒼耳子優(yōu)選炒蒼耳子。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮1-3小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮1-3次，每次0.5-1.5小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序，加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成臨床可接受的劑型。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味藥提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；其他十味藥加水煎煮2小時，趁熱過濾；將上述兩種藥渣合并，再加水煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液與上述辛夷等蒸餾后的水溶液，濃縮成清膏；最后經(jīng)過常規(guī)工序加入藥學上可接受的賦形劑輔料制成臨床可接受的劑型。
9如權(quán)利要求1-5所述的任一藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可加入賦形劑制成臨床可接受的劑型，例如丸劑、片劑、顆粒劑、口服液、膠囊劑、膏劑、乳劑和中藥膜劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于所說的賦形劑是調(diào)味劑、分散劑、粘合劑、增稠劑、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、防腐劑中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療急、慢性鼻淵的中藥組合物及其制備方法。該組合物由辛夷、蒼耳子、麻黃、白芷、薄荷、藁本、連翹、野菊花、天花粉、地黃、丹參、茯苓、甘草等十四味藥組成。該中藥組合物可制備成各種不同的臨床劑型，達到使有效藥物的充分發(fā)揮。本組合物治療急慢性鼻淵具有很好的效果。
文檔編號A61P11/00GK1515278SQ0310018
公開日2004年7月28日 申請日期2003年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月9日
發(fā)明者熊富良 申請人:臨沂新時代藥業(yè)有限公司