專利名稱：：因子Ⅶ多肽的液體組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及包含因子VII多肽的液體含水組合物以及制備和使用該組合物的方法。本發明更特別涉及對化學和/或物理降解穩定的液體組合物。
背景技術：
：已經鑒定了凝血過程涉及的多種因子，包括血漿糖蛋白因子VII(FVII)。血管壁受損后，暴露于循環血中的組織因子(TF)與循環中存在的、相當于約1％FVII蛋白質總量的FVIIa之間形成復合物，從而啟動止血。FVII主要以單鏈酶原存在于血漿中，由FXa斷裂成雙鏈活化形式FVIIa。重組的活化因子VIIa(rFVIIa)已開發為前止血劑(pro-haemostaticagent)。因抗體形成而不能利用其它凝血因子產品治療的出血血友病受試者，給予rFVIIa可產生快速、高效的前止血反應(pro-haemostaticresponse)。FVIIa也可以成功治療因子VII缺陷受試者、或凝血系統正常但過量流血的受試者的出血。希望有適合保存和輸送的給藥形式的因子VIIa。理想上藥物產品以液體保存和給藥。或者，藥物產品是凍干的，例如冷凍干燥，然后就在患者使用之前加入合適稀釋劑重新溶解。理想上藥物產品具有足夠穩定性，可以長期保存，即6個月以上。通常根據蛋白質藥物在給藥形式中的穩定性，來決定使最終藥物產品保持液體抑或凍干。蛋白質穩定性特別受到以下因素影響，例如離子強度、pH、溫度、冷凍/融化的重復循環以及受到剪切力。活性蛋白質可因物理不穩定性包括變性和凝聚(可溶性及不可溶性凝聚物形成)、以及化學不穩定性包括例如水解、脫酰胺作用和氧化作用而喪失，僅舉幾個例子。蛋白質藥物穩定性的一般綜述參見例如Manning等人，PharmaceuticalResearch6903-918(1989)。雖然廣泛理解可能發生蛋白質不穩定性，但不可能預測特定蛋白質的特定不穩定性問題。以上任何不穩定性均可導致形成活性降低、毒性增加和/或免疫原性提高的蛋白質副產品、或衍生物。實際上，蛋白質沉淀可能引起血栓形成、劑量形式和數量的不均一性以及注射器阻塞。此外，翻譯后修飾例如某些N端谷氨酸殘基的γ羧基化以及添加糖側鏈產生可能在保存期間對修飾敏感的潛在位點。因子VIIa特異性的絲氨酸蛋白酶也可能因自身催化而發生片段化(酶促降解)。因此，任何蛋白質組合物的安全和效率與其穩定性直接相關。液體形式保持穩定性通常與凍干形式不同，因其分子運動大大增加，從而提高了分子相互作用的幾率。濃縮形式保持穩定性也不同，因為高蛋白質濃度易于形成凝聚物。開發液體組合物時，要考慮很多因素。短期，即6個月以下，液體穩定性一般取決于避免總體結構性變化，例如變性和凝聚。文獻中描述了針對許多蛋白質的的這類方法，也存在許多穩定劑的例子。眾所周知，有效穩定某一蛋白質的試劑實際上使另一種不穩定。一旦使蛋白質的總體結構性變化穩定，形成長期穩定(例如超過6個月)的液體組合物則取決于進一步穩定蛋白質不受特異性針對該蛋白質的各類降解。更特異性的各類降解可能包括，例如二硫鍵錯亂、某些殘基氧化、脫酰胺作用、環化。盡管未必可能確切指出各個降解種類，但發展了測定方法來監控精細變化，以便監控特定賦形劑獨特穩定目的蛋白質的能力。除了穩定性考慮之外，通常選擇由各個世界醫學管理機構批準的賦型劑。希望組合物的pH在注射/輸注時位于生理合適范圍內，否則可能引起疼痛和不適。蛋白質組合物的綜述參見例如Cleland等人ThedevelopmentofstableproteincompositionsAcloserlookatproteinaggregation，deamidationandoxidation，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems1993(4)307-377以及Wang等人，ParenteralcompositionsofproteinsandpeptidesStabilityandstabilizers，JournalofParenteralScienceandTechnology1988(增刊)，42(2S)。有關蛋白質穩定的其它出版物如下。U.S.20010031721A1(AmericanHomeProducts)涉及高度濃縮、凍干及液體因子IX組合物。U.S.5,770,700，700(GeneticsInstitute)涉及液體IX組合物。WO97/19687(AmericanRedCross)涉及血漿蛋白質的液體組合物，特別是因子VIII和因子IX。U.S.4,297,344，344公開了通過加入所選氨基酸例如甘氨酸、丙氨酸、羥脯氨酸、谷氨酰胺和氨基丁酸以及糖類例如單糖、寡糖或糖醇，使凝血因子II和VIII、抗凝血酶III及纖溶酶原對熱穩定。因子VIIa經歷若干降解途徑，特別是聚集(二聚)、氧化和自溶型斷裂(肽主鏈剪切)。此外，可能發生沉淀。從蛋白質中去除水分可以顯著降低上述許多反應。然而，形成因子VIIa的含水組合物的好處在于，消除重新溶解失誤而提高了給藥準確性，并且簡化了產品的臨床使用，從而增加了患者合作。理想上因子VIIa組合物應在各種蛋白質濃度下穩定6個月以上。這提供了給藥方法的靈活性。一般而言，較高度濃縮的形式可以給予較低的體積，從患者觀點極其希望如此。液體組合物較之冷凍干燥產品在易于給藥和使用方面具有很多優點。如今，唯一商品化重組制備的FVII多肽組合物是冷凍干燥的因子FVIIa產品，在使用前重新溶解，包含相對較低的因子VIIa濃度，例如約0.6mg/ml。一瓶(1.2mg)NovoSeven(NovoNordiskA/S，Denmark)包含1.2mg重組人因子VIIa、5.84mgNaCl、2.94mgCaCl2、2H2O、2.64mgGlyGly、0.14mg聚山梨酯(polysorbate)80和60.0mg甘露醇；利用2.0ml注射用水(WFI)重新溶解到pH5.5。重新溶解后，蛋白質溶液穩定使用24小時。因此，目前沒有商品化的液體即用型或濃縮的因子VII產品。故而本領域需要提高因子VII多肽包括人因子VIIa穩定性(化學和/或物理穩定性)、增加濃度、保持活性水平以及提供適于保存的液體組合物的方法。因此，本發明目的在于提供含水因子VII多肽組合物，對化學和/或物理降解產物例如酶促降解或自身催化產物提供合適控制。發明概述本發明人發現，因子VII或其類似物(″因子VII多肽″)與緩沖劑、濃度至少15mM的鈣或鎂鹽或其混合物一起配制成含水溶液時，在pH約4-約8范圍內穩定。一方面，本發明提供了一種液體含水組合物，其包含(i)因子VII多肽，(ii)適于使pH保持在約4.0-約8.0的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物，其中(iii)的濃度為至少15mM。在不同實施方案中，試劑(iii)存在的濃度為至少約25mM、50mM、100mM、200mM、400mM、800mM、900mM或至少1000mM。在另一實施方案中，該組合物另外包含(iv)離子強度改變劑。在不同實施方案中，該離子強度改變劑選自中性鹽例如氯化鈉；氨基酸；或小肽，或至少兩種所述改變劑的混合物。在優選實施方案中，該離子強度改變劑是氯化鈉。在不同實施方案中，試劑(iv)存在的濃度為至少約5mM、10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、400mM、800mM、1000mM、1200mM、1500mM、1800mM、2000mM或至少2200mM。在一系列實施方案中，試劑(iii)(鈣和/或鎂鹽)存在的濃度為約15mM-約1000mM，例如約25mM-約1000mM、約50mM-約1000mM、約100mM-約1000mM、約200mM-約1000mM、約300mM-約1000mM、約400mM-約1000mM、約500mM-約1000mM、約600mM-約1000mM、約700mM-約1000mM；約15mM-約800mM、約25mM-約800mM、約50mM-約800mM、約100mM-約800mM、約200mM-約800mM、約300mM-約800mM、約400mM-約800mM、約500mM-約800mM；約15mM-約600mM、約25mM-約600mM、約50mM-約600mM、約100mM-約600mM、約200mM-約600mM、約300mM-約600mM；約15mM-約400mM、約25mM-約400mM、約50mM-約400mM或約100mM-約400mM。在一系列實施方案中，試劑(iv)(離子強度改變劑)存在的濃度為約5mM-約2200mM，例如約25mM-約2200mM、約50mM-約2200mM、約100mM-約2200mM、約200mM-約2200mM、約400mM-約2200mM、約600mM-約2200mM、約800mM-約2200mM、約1000mM-約2200mM、約1200mM-約2200mM、約1400mM-約2200mM、約1600mM-約2200mM、約1800mM-約2200mM或約2000mM-約2200mM；約5mM-約1800mM、約25mM-約1800mM、約50mM-約1800mM、約100mM-約1800mM、約200mM-約1800mM、約400mM-約1800mM、約600mM-約1800mM、約800mM-約1800mM、約1000mM-約1800mM、約1200mM-約1800mM、約1400mM-約1800mM、約1600mM-約1800mM；約5mM-約1500mM、約25mM-約1400mM、約50mM-約1500mM、約100mM-約1500mM、約200mM-約1500mM、約400mM-約1500mM、約600mM-約1500mM、約800mM-約1500mM、約1000mM-約1500mM、約1200mM-約1500mM；約5mM-約1200mM、約25mM-約1200mM、約50mM-約1200mM、約100mM-約1200mM、約200mM-約1200mM、約400mM-約1200mM、約600mM-約1200mM或約800mM-約1200mM。在一個優選實施方案中，試劑(iii)和(iv)的總濃度為約50mM-約2500mM，例如約100mM-約2500mM、約200mM-約2500mM、約400mM-約2500mM、約600mM-約2500mM、約800mM-約2500mM、約1000mM-約2500mM、約1200mM-約2500mM、約1400mM-約2500mM、約1600mM-約2500mM、約1800mM-約2500mM或約2000mM-約2500mM；約50mM-約2000mM、約100mM-約2000mM、約200mM-約2000mM、約400mM-約2000mM、約600mM-約2000mM、約800mM-約2000mM、約1000mM-約2000mM、約1200mM-約2000mM、約1400mM-約2000mM或約1600mM-約2000mM；約50mM-約1600mM、約100mM-約1600mM、約200mM-約1600mM、約400mM-約1600mM、約600mM-約1600mM、約800mM-約1600mM、約1000mM-約1600mM或約1200mM-約1600mM。在一個實施方案中，試劑(iii)和(iv)存在的濃度為約600-約800mM的(iii)以及0-約5mM的(iv)；在另一實施方案中，試劑(iii)和(iv)存在的濃度為約300-約500mM的(iii)以及約1100-約1300mM的(iv)；在另一實施方案中，試劑(iii)和(iv)存在的濃度為約100-約300mM的(iii)以及約1500-約1900mM的(iv)；在另一實施方案中，試劑(iii)和(iv)存在的濃度為約50-約150mM的(iii)以及約1800-約2300mM的(iv)。在不同實施方案中，該組合物的離子強度為至少50，例如至少75、100、150、200、250、400、500、650、800、1000、1200、1600、2000、2400、2800或至少3200。在不同實施方案中，鈣鹽選自氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣和乙酰丙酸鈣。在不同實施方案中，鎂鹽選自氯化鎂、乙酸鎂、硫酸鎂、葡萄糖酸鎂、乙酰丙酸鎂及強酸鹽。在優選實施方案中，試劑(iii)選自氯化鈣、乙酸鈣、氯化鎂、乙酸鎂、硫酸鎂或其混合物；并且離子強度改變劑(iv)是氯化鈉。在另一實施方案中，鈣組合物另外包含(v)張力改變劑。在不同實施方案中，該張力改變劑(v)選自中性鹽；單-、雙-或多糖；糖醇；氨基酸；或小肽，或至少兩種所述改變劑的混合物。在一個實施方案中，該張力改變劑(v)存在的濃度為約1-約500mM；約1-約300mM；約10-約200mM；或約20-約150mM。在另一實施方案中，該組合物另外包含(vi)非離子表面活性劑。在一個實施方案中，該非離子表面活性劑存在的量為按重量約0.005-約2.0％。在另一實施方案中，該非離子表面活性劑是聚山梨酯、或泊洛沙姆(poloxamer)、或聚氧乙烯烷基醚，優選泊洛沙姆188、或泊洛沙姆407、或聚山梨酯20、或聚山梨酯80、或聚氧23十二烷基醚。在另一實施方案中，該組合物另外包含(vii)抗氧化劑。在不同實施方案中，該抗氧化劑是D-或L-甲硫氨酸；甲硫氨酸類似物；包含甲硫氨酸的肽；抗壞血酸；半胱氨酸；甲硫氨酸同系物，例如高半胱氨酸；谷胱甘肽。在一個優選實施方案中，該抗氧化劑是L-甲硫氨酸。在一個實施方案中，該抗氧化劑存在的濃度為約0.1-約5.0mg/ml。在一個實施方案中，該組合物的pH保持在約4.0-約7.0；例如約4.5-約7.0；約5.0-約7.0；約5.5-約7.0；或約6.0-約7.0。在一個實施方案中，適于將pH保持在約4.0-約8.0的試劑是選自下列酸和其鹽的緩沖劑檸檬酸、乙酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、glycylglycin、PIPES、glycin或至少兩種所述緩沖劑的混合物。在一個實施方案中，該緩沖劑的濃度為約1mMto100mM；1mM-約50mM；約1mM-約25mM；約2mM-約20mM；或約10mM。在另一實施方案中，該組合物還包含(viii)防腐劑。在一個實施方案中，該防腐劑選自苯酚、苯甲醇、鄰甲酚(orto-cresol)、間甲酚、對甲酚、羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、benzalconiumchloride和benzaethoniumchloride。在一個實施方案中，該組合物是等滲的；在另一實施方案中，它是高滲的。在一個實施方案中，該組合物配制成用于給藥。在一個實施方案中，該組合物在2-8℃穩定和/或穩定至少6個月。在不同實施方案中，該因子VII多肽是人因子VIIa；重組人因子VIIa；因子VII相關多肽；因子VII序列變體；或因子VII多肽，其中在本說明書所述′體外蛋白質水解分析′的測試中，該因子VII多肽活性和天然人因子VIIa多肽(野生型FVIIa)活性至少約1.25，優選至少約2.0或4.0，最優選至少約8.0。在一個實施方案中，該因子VII多肽的糖基化不同于野生型人因子VII。在不同實施方案中，該因子VII多肽存在的濃度為約0.1mg/ml-約10mg/ml；約0.5mg/ml-約5.0mg/ml；約0.6mg/ml-約4.0mg/ml；約1.0mg/ml-約4.0mg/ml；約0.1mg/ml-約5mg/ml；約0.1mg/ml-約4.0mg/ml；約0.1mg/ml-約2mg/ml；或約.1mg/ml-約1.5mg/ml。在另一方面，本發明還提供了制備因子VII多肽的液體含水組合物的方法，其包含提供因子VII多肽溶液的步驟，該溶液包含(i)因子VII多肽；(ii)適合保持pH在約4.0-約8.0的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物；其中(iii)的濃度為至少15mM。在另一方面，本發明還涉及該組合物在制備用于治療對因子VII有反應的綜合征的藥物中的用途。在另一方面，本發明涉及治療對因子VII有反應的綜合征的方法，該方法包含在引起出血減少和/或凝血增加的條件下，給予有此需要的受試者有效量的含水液體組合物，其包含(i)因子VII多肽，(ii)適合保持pH在約4.0-約8.0的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物；其中(iii)的濃度為至少15mM。在不同實施方案中，該綜合癥選自血友病A、血友病B、因子XI缺陷、因子FVII缺陷、血小板減少、血管性血友病(vonWillebrand′sdisease)、存在凝血因子抑制劑、手術、腦內出血、創傷和抗凝劑治療。發明詳述本發明的組合物可用作因子VII多肽的穩定、優選即用型組合物。在2-8℃溫度下保存時，該組合物可穩定至少6個月，優選高達36個月。在2-8℃保存至少6個月時，該組合物化學和/或物理穩定，特別是化學穩定。″穩定″是指該組合物在2-8℃保存至少6個月后，按基本如WO92/15686(實施例II)所述一段式凝結分析(one-stageclotassay)測定，保持至少50％最初的生物活性。簡言之，在50mMTris(pH7.5)、0.1％BSA中稀釋待測樣品，將100μl樣品與100μl因子VII缺陷血漿和200μl包含10mMCa2+的促凝血酶原激酶C溫育。測定凝結時間，與使用系列稀釋的參考標準或檸檬酸抗凝的正常人血漿混合物的標準曲線作比較。優選在2-8℃保存至少6個月以后，該穩定組合物保持至少80％的最初活性。術語″使穩定″可能與″相對穩定″交互使用，是指在2-8℃保存至少6個月以后，相對于在類似條件下保存類似時間的重新溶解的NovoSeven產品溶液所包含的對應降解產物的數量，該組合物包含較低數量的至少一種下列降解產物(i)酶促降解產物，(ii)凝聚物(二聚物、寡聚物和多聚物)，(iii)氧化形式，(iv)脫酰胺形式。術語″物理上穩定″是用來指保持視覺上澄清的組合物。該組合物在不同溫度下保存不同時間以后，利用視覺檢查和混濁度的方法，評價該組合物的物理穩定性。在黑背景下清晰聚焦的光線中進行組合物的視覺檢查。組合物顯示視覺可見的混濁則定為物理上不穩定。因子VII多肽的術語″物理穩定性″涉及在形成二聚、寡聚和多聚形式的因子VII多肽的不可溶性和/或可溶性凝聚物以及該分子的任何結構性破壞和變性。術語″化學上穩定″是用來指該組合物在2-8℃保存6個月后，按基本如WO92/15686所述一段式凝結分析測定，保持至少50％最初的生物活性。術語″化學穩定性″是用來涉及溶液在加速(accelerated)條件下保存時形成因子VII多肽的任何化學變化。例如導致因子VII多肽片段形成的水解、脫酰胺和氧化以及酶促降解。特別是含硫氨基酸傾向于氧化形成相應的亞砜。該組合物包含因子VII多肽、鈣和/或鎂離子、緩沖劑并任選其它可進一步穩定因子VII多肽的賦形劑，包括離子強度改變劑和張力改變劑。因子VII多肽濃度為約0.1-約10mg/mL。此處所用術語″離子強度改變劑″包括影響溶液離子強度的試劑。該試劑包括但不限于中性鹽，例如氯化鈉或氯化鉀；氨基酸；小肽(例如具有2-5個氨基酸殘基，例如甘氨酰甘氨酸)，或至少兩種所述改變劑的混合物。優選試劑為氯化鈉。該離子強度改變劑的存在濃度至少約5mM、10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、400mM、800mM、1000mM、1200mM、1500mM、1800mM、2000mM或至少2200mM。此處所用術語″張力改變劑″包括有助于溶液的重量摩爾滲透壓濃度(osmolality)的試劑。張力改變劑包括但不限于氨基酸；小肽(例如具有2-5個氨基酸殘基)；中性鹽；單-或二糖；多糖；糖醇，或至少兩種所述改變劑的混合物。張力改變劑的例子包括但不限于氯化鈉、氯化鉀、乙酸鈉、蔗糖、葡萄糖、甘氨酰甘氨酸和甘露醇。通常，該改變劑存在濃度為約1-約500mM；約1-約300mM；約10-約200mM；或約20-約150mM，取決于存在的其它成分。可能使用中性鹽例如氯化鈉或氯化鉀。″中性鹽″是指溶解于溶液中時既非酸性也非堿性的鹽。術語″適合保持pH為約4.0-約8.0的試劑″包括使溶液pH保持在約4.0-約8.0(例如約4.0-約7.0、約4.5-約7.0、約5.0-約7.0、約5.0-約6.5、約5.5-約7.0、約5.5-約6.5、約6.0-約7.0、約5.0-約6.0、約6.4-約6.6、或約6.5、約5.2-約5.7、或約5.5)合適范圍內的試劑。該術語可能與″緩沖劑″交互使用。其可能包括但不限于酸和其鹽檸檬酸(鈉或鉀)、乙酸(銨、鈉或鈣)、組氨酸(L-組氨酸)、蘋果酸、磷酸(鈉或鉀)、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、谷氨酸、glycylglycin、PIPES、glycin或至少兩種所述緩沖劑的混合物。選擇緩沖劑濃度范圍，以保持溶液的優選pH。緩沖劑也可能是至少兩種緩沖劑的混合物，其中該混合物能夠提供特定范圍的pH值。在另選實施方案中，該緩沖劑的濃度范圍為約1mM-100mM；1mM-約50mM；約1mM-約25mM；約2mM-約20mM；或約10mM。任選該組合物還可能包含表面活性劑或去污劑。″表面活性劑″或″去污劑″通常包括保護蛋白質防止空氣/溶液界面所致應力以及溶液/表面所致應力(例如引起蛋白質凝聚)的試劑。去污劑優選非離子去污劑，包括但不限于聚山梨酯(例如Tween)，例如聚山梨酯20或80；聚乙烯烷基醚或泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188或407(例如Pluronic多元醇)及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物，或聚乙二醇(PEG)例如PEG8000。表面活性劑的存在量為約0.005-約2.0％。任選該組合物可能包括抗氧化劑。抗氧化劑包括但不限于抗壞血酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、胱氨酸、胱硫醚(cysstathionine)、甲硫氨酸、谷胱甘肽及其它包含半胱氨酸或甲硫氨酸的肽，特別是具有2-5個氨基酸殘基的肽，其中至少一個殘基是甲硫氨酸或半胱氨酸殘基；優選甲硫氨酸、特別是L-甲硫氨酸。包含抗氧化劑的濃度為0.1-5mg/ml，例如0.1-4、0.1-3、0.1-2或0.5-2mg/ml。該組合物中可能包括防腐劑，以阻止微生物生長，從而提供FVII多肽的″多次使用″包裝。防腐劑包括酚、苯甲醇、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、benzalconiumchloride或benzaethoniumchloride。一般包含防腐劑的濃度為0.1-20mg/ml，取決于pH范圍和防腐劑類型。任選該組合物也可能包括能夠抑制脫酰胺作用的試劑。此處所用的特定量可理解為±約10％，例如約50mM包括50mM±5mM；例如4％包括4％±0.4％等。涉及溶于溶液中的固體以及混入溶液中的液體時，均為百分比(重量/重量)。例如，對于Tween，即為100％儲液重量/溶液重量。術語″離子強度″為溶液的離子強度(μ)，由下式定義μ＝1/2∑([i](Zi2))，其中μ是離子強度，[i]是某一離子的摩爾濃度，Zi是該離子的電荷(+或-)(JamesFritzandGeorgeSchenkQuantitativeAnalyticalChemistry，1979)。在本發明不同實施方案中，該組合物的離子強度為至少50，例如至少75、100150、200、250、400、500、650、800、1000、1200、1600、2000、2400、2800或至少3200。術語″等滲″是指″與血清等滲″，即約300±50毫滲(milliosmol)/kg。張力是指測定給藥前溶液的重量摩爾滲透壓濃度。術語″高滲″是指高于血清生理水平的重量摩爾滲透壓濃度水平，例如高于300±50毫滲/kg的水平。術語″藥物有效量″或″有效量″是由有資格的專業人員(qualifiedpractitioner)確定的有效劑量，他可能滴定以獲得所需反應的劑量。劑量的考慮因素包括效力、生物利用度、所需藥代動力學/藥效學特征、治療條件、患者相關因素(例如重量、健康、年齡等)、存在共同給予的藥劑(例如抗凝劑)、給藥時間或醫學專業人員已知的其它因素。術語″治療″定義為，為了對抗疾病、病態或紊亂而處理和照料受試者，例如哺乳動物，特別是人，包括給予因子VII多肽，以防止癥狀或并發癥發作，或減輕癥狀或并發癥，或消除疾病、病態或紊亂。本發明包含因子VII多肽的藥物組合物可能經非腸道途徑給予需要該治療的受試者。可能利用注射器、可選筆式注射器，通過皮下、肌內或靜脈內注射進行非腸道給藥。或者，利用輸注泵進行非腸道給藥。因子VIIa的濃度以mg/mL或IU/mL表示，1mg通常代表43000-56000IU或以上。使用方法本發明的制劑可能用于治療任何對因子VII有反應的綜合征，例如出血性疾病，包括而非限制，由凝血因子缺陷(例如血友病A和B，或凝血因子XI或VII缺陷)、血小板減少或血管性血友病、或凝血因子抑制劑、或任何原因的過量出血所致出血性疾病。該制劑也可能給予與手術或其它創傷有關的患者，或給予接受抗凝劑治療的患者。根據本發明配制的因子VII多肽術語″人因子VII″或″FVII″表示利用包括天然來源提取和純化、以及重組細胞培養系統在內的方法產生的人因子VII。其序列和特征如例如美國專利4,784,950所述。該術語也包括生物學活性的人因子VII等價物，例如全序列中的一個或多個氨基酸不同。此外，本申請所用術語是用來包括因子VII的置換、缺失和插入氨基酸變體、或翻譯后修飾。此處所用″因子VII多肽″包括而非限制，因子VII以及因子VII相關多肽。因子VII相關多肽包括而非限制，具有相對于人因子VII化學修飾的、和/或包含一個或多個相對于人因子VII的氨基酸序列改變(即因子VII變體)、和/或包含相對于人因子VII的截短的氨基酸序列(即因子VII片段)的因子VII多肽。該因子VII相關多肽可能具有相對于人因子VII的不同性質，包括穩定性、磷脂結合、改變的比活性等。術語″因子VII″是用來包括未斷裂(酶原)形式的因子VII多肽，以及經過蛋白水解加工產生相應生物活性形式的因子VII多肽，可能稱作因子VIIa。因子VII典型在殘基152和153之間斷裂，產生因子VIIa。術語″因子VII″還用來包括而非限制，具有野生型人因子VII(如美國專利4,784,950公開)1-406氨基酸序列的多肽，以及來源于其它物種的野生型因子VII，例如牛、豬、犬、鼠和鮭魚的因子VII。另外包括可能在個體之間存在和發生的因子VII的天然等位基因變體。并且，糖基化或其它翻譯后修飾的程度和定位可能因所選宿主細胞及宿主細胞環境的性質而改變。此處所用″因子VII相關多肽″包括而非限制，表現與野生型人因子VII基本類似或提高的生物學活性的多肽。這些多肽包括而非限制，化學修飾的因子VII或因子VIIa，以及因子VII變體，其中引入了可修飾或破壞該多肽生物活性的特定氨基酸序列改變。其另外包括帶有略微修飾的氨基酸序列的多肽，例如具有包括N端氨基酸缺失或添加的修飾N端的多肽，和/或相對于人因子VIIa化學修飾的多肽。表現與野生型因子VII基本相同或更好生物活性的因子VII相關多肽、包括多肽變體，包括而非限制，通過插入、缺失或置換一個或多個氨基酸而具有不同于野生型因子VII的氨基酸序列的多肽。具有與野生型因子VIIa基本相同或提高的生物學活性的因子VII相關多肽、包括變體，包括那些在本說明書所述一種或多種凝結分析、蛋白水解分析或TF結合分析中進行測試時，表現至少約25％、優選至少約50％、更優選至少約75％、更優選至少約100％、更優選至少約110％、更優選至少約120％、最優選至少約130％的產生于相同類型細胞的野生型因子VIIa的比活性的變體。在某些實施方案中，該因子VII多肽是因子VII相關多肽、特別是變體，其中在″體外蛋白水解分析″(參見下文″分析″)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之比至少約1.25；在其它實施方案中，該比值至少約2.0；在另外實施方案中，該比值至少約4.0。在本發明某些實施方案中，該因子VII多肽是因子VII等價物、特別是變體，其中在″體外蛋白水解分析″(參見下文″分析″)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之比至少約1.25；在其它實施方案中，該比值至少約2.0；在另外實施方案中，該比值至少約4.0；在另外實施方案中，該比值至少約8.0。在某些實施方案中，該因子VII多肽是人因子VII，例如美國專利4,784,950所公開(野生型因子VII)。在某些實施方案中，該因子VII多肽是人因子VIIa。在一系列實施方案中，因子VII多肽包括表現至少約90％、優選至少約100％、優選至少約120％、更優選至少約140％、最優選至少約160％的人因子VIIa的生物學比活性的多肽。在某些實施方案中，該因子VII多肽通過插入、缺失或置換一個或多個氨基酸而具有不同于野生型因子VII的氨基酸序列。在一系列實施方案中，因子VII多肽包括表現與野生型因子VII(如美國專利4,784,950所公開)的序列至少約70％、優選至少約80％、更優選至少約90％、最優選至少約95％一致性的多肽。使用合適的供序列比對的計算機程序，例如ClustalW程序1.8，1999版(Thompson等人，1994，NucleicAcidRe-search，224673-4680)，可以從比對的序列中方便確定氨基酸序列的同源性/一致性。具有與野生型因子VII基本相同或提高的生物學活性的因子VIIVII變體的非限制性例子包括，S52A-FVII、S60A-FVII(lino等人，Arch.Biochem.Biophys.352182-192，1998)；L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374PFVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII、L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII、V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII、K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII和S336G-FVII；WO01/83725和WO02/22776公開的表現提高的TF非依賴性活性的FVIIa變體；美國專利5,580,560公開的表現提高的蛋白水解穩定性的FVIIa變體；在殘基290和291之間或殘基315和316之間經蛋白水解斷裂的FactorVIIa(Mollerup等人，Biotechnol.Bioeng.48501-505，1995)；以及氧化形式的FactorVIIa(Korn-felt等人，Arch.Biochem.Biophys.36343-54，1999)。因子VII多肽的生物學活性因子VIIa在凝血中的生物學活性來源于其能夠(i)結合組織因子(TF)以及(ii)催化因子IX或因子X的蛋白水解斷裂，產生活化的因子IX或X(分別為因子IXa或Xa)。為了本發明，可能使用因子VII缺陷血漿和促凝血酶原激酶，通過測定某一制劑促進凝血的能力，來定量因子VII多肽的生物學活性(″因子VII生物學活性″)，如美國專利5,997,864或WO92/15686所述。在該分析中，將生物學活性表示為相比對照樣品凝結時間的減少，并通過與包含1個單位/ml因子VII活性的混合人血清標準作比較，轉換為″因子VII單位″。或者，可能如下定量因子VIIa的生物學活性-在包含TF(包埋于脂膜中)和因子X的體系中，測定因子VIIa或因子VII相關多肽產生活化因子X(因子Xa)的能力(Persson等人，J.Biol.Chem.27219919-19924，1997)；-在含水體系中測定因子X水解作用(″體外蛋白水解分析″，參見下文)；-使用基于表面胞質基因共振(Surfaceplasmonresonance)的儀器，測定因子VIIa或因子VII相關多肽與TF的物理結合(Persson，FEBSLetts.413359-363，1997)；以及-測定因子VIIa和/或因子VII相關多肽對合成底物的水解作用(″體外水解分析″，參見下文)；以及-在TF非依賴性體外系統中測定凝血酶的產生。適于測定因子VII多肽生物學活性的分析通過簡單初步的體外測試進行適當的分析，可能選擇用于本發明的因子VII多肽。因此，本說明書公開了因子VII多肽活性的簡單測試(名為″體外水解分析″)。體外水解分析(分析1)可能分析天然(野生型)因子VIIa和因子VII多肽(此處均稱為″因子VIIa″)的比活性。也可能平行分析，以直接比較其比活性。該分析在微孔板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進行。將生色底物D-Ile-Pro-Arg-對硝基酰苯胺(p-nitroanilide)(S-2288，Chromogenix，Sweden)(終濃度1mM)加入處于50mMHepes，pH7.4(其中包含0.1MNaCl、5mMCaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白)的因子VIIa(終濃度100nM)中。在SpectraMaxTM340平板讀取儀(MolecularDevices，USA)中，連續測定405nm吸光度。使用溫育20分鐘產生的吸光度，減去不含酶的空白孔的吸光度，計算因子VII多肽與野生型因子VIIa的活性之比比值＝(A405nm因子VII多肽)/(A405nm因子VIIa野生型)基于此，可能鑒定活性低于、相當于或高于天然因子VIIa的因子VII多肽，例如因子VII多肽與天然因子VII(野生型FVII)的活性比值為1.0上下的因子VII多肽。使用生理學底物，例如適當濃度100-1000nM的因子X(″體外蛋白水解分析″)，在加入合適生色底物(例如S-2765)之后測定所產生的因子Xa，也可能測定因子VII多肽活性。此外，可能在生理溫度下進行活性分析。體外蛋白水解分析(分析2)可能平行分析天然(野生型)因子VIIa和因子VII多肽(此處均稱為″因子VIIa″)，直接比較其比活性。該分析在微孔板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進行。將處于100μL50mMHepes，pH7.4(包含0.1MNaCl、5mMCaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白)中的因子VIIa(10nM)和因子X(0.8μM)溫育15分鐘。然后通過加入含有0.1MNaCl、20mMEDTA和1mg/ml牛血清白蛋白的50μL50mMHepes，pH7.4，來終止因子X的斷裂。通過加入生色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-對硝基酰苯胺(S-2765，Chromogenix，Sweden)(終濃度0.5mM)，測定所產生的因子Xa的數量。在SpectraMaxTM340平板讀取儀(MolecularDevices，USA)中，連續測定405nm處吸光度。使用10分鐘產生的吸光度，減去不含FVIIa的空白孔的吸光度，計算因子VII多肽與野生型因子VIIa的蛋白水解活性之比比值＝(A405nm因子VII多肽)/(A405nm因子VIIa野生型)基于此，可能鑒定活性低于、相當于或高于天然因子VIIa的因子VII多肽，例如因子VII多肽與天然因子VII(野生型FVII)的活性比值為1.0上下的因子VII多肽。在包含生理濃度的所有相關凝血因子和抑制劑(模擬血友病A狀況時缺少因子VIII)以及激活的血小板的分析中(分析4)，也可以測定因子VIIa或因子VII多肽產生凝血酶的能力(如Monroe等人(1997)Brit.J.Haematol.99，542-547中543頁所述，在此引入以供參考)。使用基本如WO92/15686或US5,997,864所述一段式凝結分析(分析4)，也可能測定因子VII多肽的活性。簡言之，在50mMTris(pH7.5)、0.1％BSA中稀釋待測樣品，將100μl樣品與100μl因子VII缺陷血漿和200μl包含10mMCa2+的促凝血酶原激酶C溫育。測定凝結時間，與使用系列稀釋的參考標準或檸檬酸抗凝的正常人血漿混合物的標準曲線作比較。因子VII多肽的制備與純化優選通過DNA重組技術，例如Hagen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA832412-2416，1986或歐洲專利200.421(ZymoGenetics，Inc.)所述，制備適用于本發明的純化的人因子VIIa。也可能利用Broze和Majerus，J.Biol.Chem.255(4)1242-1247，1980以及Hedner和Kisiel，J.Clin.Invest.711836-1841，1983所述方法制備因子VII。這些方法產生不含可檢測量其它凝血因子的因子VII。包括另外的凝膠過濾作為最后純化步驟，可能獲得甚至更純的因子VII制劑。然后通過已知方法，例如利用若干不同的血漿蛋白質，諸如因子XIIa、IXa或Xa，將因子VII轉變為活化因子VIIa。或者，如Bjoern等人(ResearchDisclosure，269September1986，564-565頁)所述，將其通過離子交換層析柱例如MonoQ(PharmaciafineChemicals)等、或在溶液中自身活化，可能活化因子VII。因子VII相關多肽也可能通過修飾野生型因子VII、或通過重組技術而制備。利用已知方法，例如位點特異性誘變，通過在編碼天然因子VII的核酸中改變氨基酸密碼子或去除某些氨基酸密碼子而修飾編碼野生型因子VII的核酸序列，可能制備與野生型因子VII相比具有改變的氨基酸序列的因子VII相關多肽。本領域技術人員顯而易見，可以在因子VIIa分子的功能決定性區之外造成置換，而仍產生活性多肽。可能利用本領域已知的方法，例如定點誘變或丙氨酸掃描誘變(參見例如Cunningham和Wells，1989，Science2441081-1085)，來鑒定為因子VII多肽活性所必需的氨基酸殘基，從而優選不進行置換。后一技術在分子中的每一正電殘基處引入突變，測試所得突變分子作為促凝劑的各自交聯活性，以鑒定為該分子活性所必需的氨基酸殘基。通過分析由諸如核磁共振分析、晶體學或光親和標記技術所確定的三維結構(參見例如deVos等人，1992，Science255306-312；Smith等人，1992，JournalofMolecularBiology224899-904；Wlodaver等人，1992，FEBSLetters30959-64)，也可以測定底物-酶相互作用位點。使用本領域已知的任何方法，可能通過定點誘變在核酸序列中引入突變，使一個核苷酸交換為另一核苷酸。特別有用的方法是利用帶有目的插入序列的超螺旋雙鏈DNA載體以及包含所需突變的兩條合成引物。寡核苷酸引物分別與載體的相反鏈互補，利用PfuDNA聚合酶在溫度循環期間延伸。摻入引物后，產生包含交錯切口的突變質粒。溫度循環之后，利用特異性針對甲基化和半甲基化DNA的Dpnl處理產物，消化親本DNA模板，選擇包含突變的合成DNA。也可能使用本領域已知的形成、鑒定和分離變體的其它方法，例如基因改組或噬菌體展示技術。可能利用本領域已知的任何方法從其起源細胞中分離多肽，包括而非限制，從粘附細胞培養物中移出包含目的產物的細胞培養基；離心或過濾去除未粘附細胞等。任選可能進一步純化因子VII多肽。可能使用本領域已知的任何方法進行純化，包括而非限制，親和層析例如因子抗因子VII抗體柱(參見例如Wakabayashi等人，J.Biol.Chem.26111097，1986；以及Thim等人，Biochem.277785，1988)；疏水相互作用層析；離子交換層析；大小排阻層析；電泳方法(例如制備型等電聚焦(IEF))、不同溶解度(例如硫酸銨沉淀)或提取等。通常參見Scopes，ProteinPurification，Springer-Verlag，NewYork，1982以及ProteinPurification，J.C.Janson和LarsRyden編者，VCHPublishers，NewYork，1989。純化以后，制備物優選包含按重量計少于約10％、更優選少于約5％、最優選少于約1％的來源于宿主細胞的非因子VII多肽。可能使用因子XIIa或具有胰蛋白酶樣特異性的其它蛋白酶，例如因子IXa、激肽釋放酶、因子Xa和凝血酶，通過蛋白水解斷裂而活化因子VII多肽。參見例如Osterud等人，Biochem.112853(1972)；Thomas，美國專利4,456,591；以及Hedner等人，J.Clin.Invest.711836(1983)。或者，將其通過離子交換層析柱例如MonoQ(Pharmacia)等、或在溶液中自身活化，可能活化因子VII多肽。所得活化因子VII多肽然后可能如本申請所述配制和給藥。附圖描述圖1顯示在2-8℃保存3個月以后，FVII凝聚物和FVII片段的含量。以下實施例說明本發明的實施。這些實施例僅為說明目的，并非意在以任何方式限制本發明所要求的范圍。實驗性實施例實施例1分析方法利用非變性大小排阻HPLC測定凝聚物含量。由RP-HPLC測定氧化形式的含量。由RP-HPLC測定酶促降解形式的含量。在WatersProteinPak300SW柱7,5×300mm上，使用0.2M硫酸銨、5％2-丙醇pH7,0為流動相，進行非變性大小排阻層析。流速0.5ml/分鐘。檢測215nm。上樣25μgFVIIa。在粒子大小5μm、孔徑300的專利4,5×250mm丁基鍵合硅柱上進行反相HPLC。柱溫70℃。A-緩沖液0.1％v/v三氟乙酸。B-緩沖液0.09％v/v三氟乙酸、80％v/v乙腈。利用30分鐘內從X至(X+13)％B的線性梯度洗脫柱子。調整X，以便FVIIa在保留時間約26分鐘洗脫。流速1.0ml/分鐘。檢測214nm。上樣25μgFVIIa。實施例2組合物制備一般而言，通過凝膠過濾柱交換緩沖液，從純化的原液中制備供這些實驗性實施例分析的含水FVIIa組合物樣品。組合物添加劑按最終比例包含于洗脫緩沖液中、或加入洗脫物中。所得溶液使用無菌膜濾器(0.2μm孔徑或相當)無菌過濾，裝入無菌玻璃瓶，利用丁基橡膠塞和flip-off型鋁帽蓋緊并密封。實施例3pH對化學/物理穩定性的作用rFVIIa含水組合物的小瓶包含1.4mgrFVIIa/mL、50mM氯化鈉、10mM氯化鈣以及調到pH3、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5和9.0的10mM甘氨酰甘氨酸、乙酸和組氨酸混合物，于溫度2-8℃、或升高的保存溫度30℃下溫育，然后在不同時間點取出，利用RP-HPLC和GP-HPLC分析pH和化學穩定性的變化。2-8℃保存長達3個月之后，該含水組合物顯示pH變化不顯著。對2-8℃保存長達3個月的樣品進行非變性大小排阻HPLC，顯示該藥物產品在pH≥5.5未顯著凝聚(圖1)。對這些樣品進行RP-HPLC，顯示在pH4.5-5.5范圍內該蛋白質的片段化或氧化未顯著增加。圖1顯示2-8℃保存3個月后的數據。開始的凝聚物含量約0.5％，開始的片段含量約9％。實施例4不同緩沖液的緩沖容量rFVIIa含水組合物的小瓶包含1.4mgrFVIIa/mL、50mM氯化鈉、10mM氯化鈣以及濃度為10mM的一種下列緩沖物質甘氨酰甘氨酸、蘋果酸、組氨酸、谷氨酸和檸檬酸，于溫度2-8℃、或升高的保存溫度30℃下溫育長達3個月。調整零時的pH為5.5，因該pH產生的降解產物量最低(圖1)。測定包含甘氨酰甘氨酸的組合物的pH，顯示在保存期間升高到6.2。其它組合物在同一時期顯示5.5+/-0.1的穩定值。實施例5包含不同去污劑的含水組合物的物理穩定性制備了12種不同的組合物。該組合物為rFVIIa0.75mg/mlNaCl2.92mg/mlCaCl2，2H2O1.47mg/ml甘氨酰甘氨酸1.32mg/ml去污劑/溶解劑xmg/mlpH5.5所測試的去污劑/溶解劑(solubiliser)的濃度如下表所述。從rFVIIa的液體原液中制備該組合物。在包含上述濃度的NaCl、CaCl2，2H2O和甘氨酰甘氨酸的緩沖液中制備去污劑/溶解劑的儲液。將rFVIIa原液和去污劑溶液混合，調整溶液pH到5.5。將組合物過濾(0.2μm)，并裝入小瓶(1ml溶液/瓶)。通過視覺檢查測定組合物外觀，并測定組合物400nm處吸光度。然后小瓶在室溫下振搖19小時(800/分鐘)。振搖完成后，測定外觀及400nm處吸光度。結果如下表所列。″Part.″＝″顆粒″該結果表明，參照(未加任何去污劑/溶解劑)在振搖時變得視覺可見的渾濁，觀察到400nm處吸光度顯著升高。加入Tween20(＝聚山梨酯20)、Tween80(＝聚山梨酯80)、泊洛沙姆188、PluronicF127(＝泊洛沙姆407)、Brij35(＝聚乙二醇23十二烷基醚)和LPCM(＝α-十四烷酰溶血卵磷脂)幾乎完全防止濁度和吸光度升高，觀察到Myrj59(＝硬脂酸100聚羥氧基酯)和Myrj52(＝硬脂酸40聚羥氧基酯)的濁度略微升高(相比參照)。甘油、聚乙二醇400或聚乙二醇4000在本實驗所用濃度下不能防止濁度升高。實施例6包含抗氧化劑甲硫氨酸的含水組合物的化學穩定性制備了3種不同的組合物。該組合物為rFVIIa0.75mg/mlNaCl2.92mg/mlCaCl2，2H2O1.47mg/ml甘氨酰甘氨酸1.32mg/ml甲硫氨酸0或0.25或1.0mg/mlpH6.5從rFVIIa的液體原液中制備該組合物。將甲硫氨酸溶解于包含上述濃度NaCl、CaCl2，2H2O和甘氨酰甘氨酸的緩沖液中。將rFVIIa原液和甲硫氨酸溶液混合，調整溶液pH到6.5。將組合物過濾(0.2μm)，并裝入小瓶(1ml溶液/瓶)。將小瓶保存于5℃、25℃和40℃。取出樣品，在下表所述時間點分析其氧化形式的含量(利用RP-HPLC)。下表顯示氧化形式的含量(％)。該結果表明，加入甲硫氨酸減慢了組合物的氧化速率。實施例7包含氯化鈣的含水組合物的化學穩定性制備了4種不同的組合物。該組合物為rFVIIa1.0mg/mlNaCl2.92mg/mlCaCl2，2H2O分別為1.47mg/ml(10mM)、29.4mg/mL(200mM)、58.8mg/mL(400mM)以及117.6mg/mL(800mM)甘氨酰甘氨酸1.32mg/mlpH7.0從rFVIIa的液體原液中制備該組合物。將氯化鈣溶解于包含NaCl和甘氨酰甘氨酸的緩沖液中，在與rFVIIa原液混合后產生上述濃度。混合后調整溶液的pH到7.0。將組合物過濾(0.2μm)，并裝入小瓶(1ml溶液/瓶)。小瓶于5℃保存。利用凝結分析測定因子VII活性(IU/ml)。權利要求1.一種液體含水組合物，其包含(i)因子VII多肽；(ii)適合保持pH在約4.0-約8.0范圍內的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物；其中(iii)的濃度至少15mM。2.權利要求1的組合物，其還包含(iv)離子強度改變劑。3.權利要求2的組合物，其中該離子強度改變劑(iv)選自中性鹽例如氯化鈉；氨基酸；或小肽，或至少兩種所述改變劑的混合物。4.權利要求3的組合物，其中該離子強度改變劑(iv)是氯化鈉。5.權利要求1-4中任一項的組合物，其中試劑(iii)存在的濃度為至少約25mM，例如至少約50mM、100mM、200mM、400mM或至少約800mM。6.權利要求2-5中任一項的組合物，其中試劑(iv)存在的濃度為至少約5mM，例如至少約10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、400mM、800mM、1000mM、1200mM、1500mM、1800mM、2000mM或至少約2200mM。7.權利要求1-6中任一項的組合物，其中鈣鹽選自氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣和乙酰丙酸鈣。8.權利要求1-7中任一項的組合物，其中鎂鹽選自氯化鎂、乙酸鎂、硫酸鎂、葡萄糖酸鎂和乙酰丙酸鎂。9.權利要求6-8中任一項的組合物，其中試劑(iii)選自氯化鈣、乙酸鈣、氯化鎂、乙酸鎂、硫酸鎂或其混合物；并且其中該離子強度改變劑(iv)是氯化鈉。10.權利要求1-9中任一項的組合物，其還包含(v)張力改變劑。11.權利要求10的組合物，其中該張力改變劑(v)選自中性鹽；單-、雙-或多糖；糖醇；氨基酸；或小肽，或至少兩種所述改變劑的混合物。12.權利要求10或11的組合物，其中該張力改變劑(v)存在的濃度為1mM-500mM。13.權利要求12的組合物，其中所述濃度為10-250mM。14.權利要求1-13中任一項的組合物，其還包含(vi)非離子表面活性劑。15.權利要求14的組合物，其中該非離子表面活性劑是聚山梨酯或泊洛沙姆或聚氧乙烯烷基醚，例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚山梨酯20、聚山梨酯80或聚氧23十二烷基醚。16.權利要求1-15中任一項的組合物，其還包含(vii)抗氧化劑。17.權利要求16的組合物，其中該抗氧化劑(vii)選自L-或D-甲硫氨酸、甲硫氨酸類似物、包含甲硫氨酸的肽、甲硫氨酸同系物、抗壞血酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、胱氨酸和胱硫醚。18.權利要求17的組合物，其中該抗氧化劑為L-甲硫氨酸。19.權利要求16-18中任一項的組合物，其中該抗氧化劑存在的濃度為約0.1-約5.0mg/ml，例如約0.1-約4mg/ml、約0.1-約3mg/ml、約0.1-約2mg/ml、或約0.5-約2mg/ml。20.權利要求1-19中任一項的組合物，其中pH保持在約4.0-約7.0范圍內，如約4.5-約7.0、約5.0-約7.0、約5.5-約7.0、或約6.0-約7.0。21.權利要求1-20中任一項的組合物，其中適于將pH保持在約4.0-約7.0范圍內的試劑選自下列酸和其鹽檸檬酸、乙酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、glycylglycin、PIPES、glycin或至少兩種所述試劑的混合物。22.權利要求21的組合物，其中該試劑的濃度為約1mM-約50mM。23.權利要求22的組合物，其中緩沖液濃度約10mM。24.權利要求1-23中任一項的組合物，其還包含(viii)防腐劑，例如苯酚、苯甲醇、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、benzalconiumchloride或benzaethoniumchloride。25.權利要求1-24中任一項的組合物，它是等滲的。26.權利要求1-25中任一項的組合物，它配制成用于給藥。27.權利要求1-26中任一項的組合物，它在2-8℃穩定至少6個月。28.權利要求1-27中任一項的組合物，其中因子VII多肽是人因子VIIa，優選重組制備的人因子VIIa。29.權利要求1-29中任一項的組合物，其中因子VII多肽是因子VII序列變體。30.權利要求29的組合物，按本說明書所述″體外蛋白水解分析″測試時，其中因子VII多肽活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)活性之比為至少約1.25，優選至少約2.0或4.0，最優選至少約8.0。31.權利要求1-30中任一項的組合物，其中該因子VII多肽存在的濃度為約0.1-約10mg/ml，例如約0.5-約5.0mg/ml、約0.6-約4.0mg/ml、或約1.0-約4.0mg/ml。32.制備因子VII多肽的液體含水組合物的方法，其包括提供在溶液中的因子VII多肽的步驟，該溶液包含(ii)適合保持pH在約4.0-約8.0范圍內的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物，其中(iii)的濃度為至少15mM。33.權利要求1-31中任一項的組合物在制備用于治療對因子VII有反應的綜合征的藥物中的用途。34.治療對因子VII有反應的綜合征的方法，該方法包括給予有此需要的受試者有效量的含水液體組合物，其包含(i)因子VII多肽，(ii)適合保持pH在約4.0-約8.0范圍內的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物，其中(iii)的濃度為至少15mM。全文摘要一種液體含水組合物，其包含(i)因子VII多肽，(ii)適合保持pH約4.0－8.0的試劑；(iii)選自以下的試劑鈣鹽、鎂鹽或其混合物，其中(iii)的濃度至少15mM。文檔編號A61K47/16GK1607958SQ02825877公開日2005年4月20日申請日期2002年12月20日優先權日2001年12月21日發明者B·L·漢森,M·B·延森,T·科恩費爾特申請人:諾和諾德醫療保健公司