2－氨基－4－吡啶基甲基－二氫噻唑衍生物作為誘導(dǎo)型no－合酶抑制劑的用途的制作方法

專利名稱：2－氨基－4－吡啶基甲基－二氫噻唑衍生物作為誘導(dǎo)型no－合酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式(I)的2-氨基-4-吡啶基甲基-二氫噻唑衍生物， 或其藥學(xué)上可接受的鹽作為誘導(dǎo)型NO-合酶抑制劑的用途。
本發(fā)明的主題是式(I)的2-氨基-4-吡啶基甲基-二氫噻唑衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物組合物中的用途，所述組合物用于預(yù)防及治療其中涉及因誘發(fā)誘導(dǎo)型NO-合酶(NOS-2或iNOS)而導(dǎo)致的一氧化氮(NO)異常產(chǎn)生的疾?。缓行滦?-氨基-4-吡啶基甲基-二氫噻唑衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物；以及新型2-氨基-4-吡啶基甲基-二氫噻唑衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
一氧化氮(NO)是與多種生理和病理過程有關(guān)的擴散型基團，其通過氧化L-精氨酸而合成，此反應(yīng)由稱為一氧化氮合酶或NO-合酶(NOS)的一族酶催化，其國際酶類命名法編號為E.C.1.14.13.39。
已知三種NOS同工酶，其中兩種為組成型，一種為誘導(dǎo)型-神經(jīng)元型NOS(NOS-1或nNOS)最初自神經(jīng)組織分離并復(fù)制，其在所述神經(jīng)組織中為組成酶。NOS-1根據(jù)基于鈣和鈣調(diào)蛋白的機制對各種生理刺激如膜受體激活起反應(yīng)而產(chǎn)生NO。
-誘導(dǎo)型NOS(NOS-2或iNOS)可對免疫刺激如例如各種細胞中的細胞因子或細菌抗原做出反應(yīng)而被誘導(dǎo)，這些細胞如例如巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、肝細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞，以及許多其它類型的細胞。此等同工酶活性不受鈣的調(diào)節(jié)，因此一經(jīng)誘導(dǎo)，就會在延長的時間內(nèi)產(chǎn)生大量的NO。
-內(nèi)皮型NOS(NOS-3或eNOS)屬于鈣和鈣調(diào)蛋白依賴性組成酶，這種NOS最初在血管內(nèi)皮細胞中確認，其中，它對生理刺激如膜受體激活起反應(yīng)而產(chǎn)生NO。
由神經(jīng)元型和內(nèi)皮型組成型同工酶(NOS-1和NOS-3)產(chǎn)生的NO通常與細胞間的信號傳輸功能有關(guān)。例如血管內(nèi)壁上的內(nèi)皮細胞通過產(chǎn)生NO而誘導(dǎo)下面的平滑肌細胞舒張，從而有助于調(diào)節(jié)動脈壓。
由誘導(dǎo)型NOS-2同工酶大量產(chǎn)生的NO尤其涉及與多種組織和器官的急性和慢性炎癥相關(guān)的病理現(xiàn)象。
由此，因誘導(dǎo)NOS-2而過多產(chǎn)生NO在神經(jīng)系統(tǒng)變性病變中發(fā)揮一定的作用，這些病變?nèi)缋缍喟l(fā)性硬化癥、局灶性或全腦缺血、腦或脊髓創(chuàng)傷、帕金森氏病、亨廷頓舞蹈病、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、偏頭痛、抑郁癥、精神分裂癥、焦慮癥、癲癇病。與此類似，除中樞神經(jīng)系統(tǒng)外，NOS-2的誘導(dǎo)也與多種具有炎性因素的病變有關(guān)，如例如糖尿病、動脈粥樣硬化癥、心肌炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、哮喘、腸易激綜合征、克羅恩氏病、腹膜炎、胃食管反流、葡萄膜炎、吉-巴綜合征、腎小球腎炎、紅斑狼瘡和銀屑病。NOS-2還涉及某些形式的腫瘤生長，如例如上皮瘤、腺癌或肉瘤，并涉及革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細胞內(nèi)或細胞外細菌感染。
過多產(chǎn)生NO的所有情況均是有害的，因此通過施用能夠抑制NOS-2的物質(zhì)來減少NO的產(chǎn)生應(yīng)該是可取的。然而，鑒于組成型同工酶NOS-3所發(fā)揮的重要生理作用、特別是在調(diào)節(jié)動脈壓方面的作用，抑制同工酶NOS-2時必須盡量減少對同工酶NOS-3的影響。事實上，已知施用非選擇性NOS同工酶抑制劑會導(dǎo)致血管收縮和動脈壓上升(Moncada，S.、Palmer，R.M.J.和Higgs，E.A.，“自L-精氨酸生物合成一氧化氮一種調(diào)節(jié)細胞功能和通訊的途徑”，Biochem.Pharmacol.，1989，381709-1715)。這些對心血管系統(tǒng)的影響是有害的，因為會減少向組織的養(yǎng)分供應(yīng)。因此，本發(fā)明涉及對NOS-2抑制作用顯著高于對NOS-3抑制作用的化合物。
基于二氫噻唑的NOS抑制劑在專利申請WO94/12165、WO95/11231和WO96/14842中特別述及。
本發(fā)明涉及式(I)的2-氨基-4-吡啶基甲基-二氫噻唑衍生物在制備用于預(yù)防或治療疾病的有用的藥品中的用途，所述疾病涉及因誘發(fā)誘導(dǎo)型NO-合酶(NOS-2或iNOS)而導(dǎo)致的一氧化氮(NO)異常產(chǎn)生，其中R1和R2相同且代表羥基、(C1-C4)烷基、氯或(C1-C4)烷氧基；或者至少R1或R2之一是氫且另一個是(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羥基或氯。
在上述及以下定義中，(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基在直鏈或支鏈中含有1至4個碳原子。
式(I)化合物含有一個或多個不對稱碳，因此其可以是外消旋形式或?qū)τ钞悩?gòu)體和非對映異構(gòu)體形式，這些以及其混合物也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
此外，式(I)化合物可以是互變異構(gòu)形式(Ia) 這些互變異構(gòu)體也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
根據(jù)本發(fā)明有用的式(I)化合物中，可提及以下化合物4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，4-(2-氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，4-(2，6-二氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其外消旋物、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和其互變異構(gòu)體，以及其藥學(xué)上可接受的鹽，更特別地是以下化合物(+)-4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，4-(2-氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，4-(2，6-二氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其互變異構(gòu)體以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
根據(jù)本發(fā)明有用的且特別優(yōu)選的式(I)化合物中，可以提及以下化合物
4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其外消旋物、對映異構(gòu)體和其互變異構(gòu)體，以及其藥學(xué)上可接受的鹽，最特別地是以下化合物(+)-4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其互變異構(gòu)體以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其含有作為活性成分的式(I)衍生物，其中R1和R2相同且代表羥基、(C1-C4)烷基、氯或(C1-C4)烷氧基，或至少R1或R2之一是氫且另一個是(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羥基或氯，以及其外消旋物、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體及其混合物、其互變異構(gòu)體和其藥學(xué)上可接受的鹽。
式(I)化合物可通過將式(II)衍生物環(huán)化而制備， 其中R1和R2具有與式(I)中相同的含義。
該環(huán)化通常在約100℃的溫度下、在水性介質(zhì)中用酸如鹽酸進行。優(yōu)選使用6N鹽酸。
式(II)衍生物可根據(jù)以下反應(yīng)方案獲得
這些通式中，Ra是胺功能保護基團，如那些T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-Interscience Publication(1991)中所述的保護基，優(yōu)選乙酰基或叔丁氧羰基，Rb是(C1-C4)烷基或烷氧羰基，優(yōu)選甲基、乙基或異丁氧羰基，Hal是鹵原子，優(yōu)選氯、溴或碘。
反應(yīng)a通常在(C1-C4)醇鈉(優(yōu)選乙醇鈉)存在下、在相應(yīng)的醇中、在10℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下進行。
反應(yīng)b通常在惰性溶劑如二甲基甲酰胺中、在碘化鋰存在下、在100℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下進行；或者在(C1-C4)脂肪醇中、在氫氧化鈉存在下、在10℃至30℃的溫度下進行，然后用鹽酸水溶液(優(yōu)選6N至12N)中和，之后在反應(yīng)介質(zhì)的沸點溫度下于溶劑如二氧雜環(huán)己烷或(C1-C4)脂肪醇中加熱。
反應(yīng)b’優(yōu)選在約100℃的溫度下、使用12N鹽酸進行。
為得到其中Rb為烷基的衍生物，反應(yīng)b”通常在50℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在無機酸如硫酸存在下，通過(C1-C4)脂肪醇(優(yōu)選甲醇或乙醇)的作用進行。為得到Rb為異丁氧羰基的衍生物，此反應(yīng)通常是在-20℃至0℃的溫度下、在惰性溶劑如四氫呋喃中、在堿如三乙胺存在下通過氯甲酸異丁酯的作用進行。
還原反應(yīng)c優(yōu)選使用氫化物如硼氫化鈉或氫化鋁鋰、在(C1-C4)脂肪醇或四氫呋喃中、于10℃至30℃的溫度下進行。
其中Ra是胺功能保護基團的化合物的脫保護反應(yīng)d是通過任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的脫保護方法進行，特別是T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-Interscience Publication(1991)中所述的那些方法。優(yōu)選地，若保護基團是乙?；?，此反應(yīng)使用鹽酸水溶液、在約100℃的溫度下進行。若保護基團是叔丁氧羰基，此反應(yīng)使用鹽酸、在二氧雜環(huán)己烷中、在約20℃的溫度下進行。
反應(yīng)e是在20℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在惰性溶劑如(C1-C4)脂肪醇(優(yōu)選甲醇或乙醇)中、任選在叔胺如三乙胺存在下，通過異硫氰酸叔丁酯的作用進行。
其中R1和R2是OH的式(II)化合物可通過同樣的作用自式(III)化合物制備，式(III)中Z是甲硅烷基、優(yōu)選叔丁基二甲基甲硅烷基，該制備方法在Synthesis 1994，486和Tetrahedron 1986，42，2725中述及。
其中R1是OH且R2是氫的式(I)化合物可根據(jù)以下反應(yīng)方案制備
這些通式中，Ra是胺功能保護基團，如那些T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-Interscience Publication(1991)中所述的保護基，優(yōu)選乙?；蚴宥⊙豸驶?，且Rb是(C1-C4)烷基或烷氧羰基，優(yōu)選甲基、乙基或異丁氧羰基。Rc是醇功能保護基團，如那些T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-Interscience Publication(1991)中所述的保護基，優(yōu)選甲硅烷基且最特別地是叔丁基二甲基甲硅烷基。
反應(yīng)a通常在10℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在(C1-C4)醇鈉(優(yōu)選乙醇鈉)存在下、在相應(yīng)的醇中進行。
反應(yīng)b通常在100℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在碘化鋰存在下、于惰性溶劑如二甲基甲酰胺中進行；或者在10℃至30℃的溫度下、在氫氧化鈉存在下于(C1-C4)脂肪醇中進行，然后用6N鹽酸水溶液中和，之后在反應(yīng)介質(zhì)的沸點溫度下、在惰性溶劑如二氧雜環(huán)己烷或醇如乙醇中加熱。
反應(yīng)b’優(yōu)選在約100℃的溫度下使用12N鹽酸進行。
為得到其中Rb為烷基的衍生物，反應(yīng)b”通常是在50℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在無機酸如硫酸存在下，通過(C1-C4)脂肪醇(優(yōu)選甲醇、乙醇)的作用進行。為得到其中Rb為異丁氧羰基的衍生物，此反應(yīng)通常是在-20℃至0℃的溫度下、在惰性溶劑如四氫呋喃中、在堿如三乙胺存在下，通過氯甲酸異丁酯的作用進行。
還原反應(yīng)c優(yōu)選在約10℃至約30℃的溫度下、使用氫化物如硼氫化鈉或氫化鋁鋰在(C1-C4)脂肪醇和/或四氫呋喃中進行。
保護反應(yīng)d是通過任何迄今已知的醇功能保護方法進行，如那些T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-IntersciencePublication(1991)中所述的方法，優(yōu)選在約0℃至約30℃的溫度下、使用叔丁基二甲基甲硅烷基氯、在堿如叔胺(優(yōu)選二異丙基乙胺)存在下、在溶劑如二氯甲烷中進行。
反應(yīng)e是在0℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在3-氯-過苯甲酸存在下于溶劑如二氯甲烷中進行。
反應(yīng)f是在10℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在對甲苯磺酰氯存在下、在堿如叔胺(優(yōu)選三乙胺)存在下、在溶劑如醇(優(yōu)選甲醇)中進行。
其中Ra是胺功能保護基團且Rc是醇功能保護基團的化合物的脫保護反應(yīng)g是通過任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的脫保護方法進行，特別是那些T.W.GREENE，“有機合成中的保護基”，J.Wiley-Interscience Publication(1991)中所述的方法。優(yōu)選地，若保護基團Ra是乙?；冶Ｗo基團Rc是甲硅烷基且最特別地為叔丁基二甲基甲硅烷基，則此反應(yīng)是在反應(yīng)介質(zhì)沸點溫度下使用鹽酸水溶液(優(yōu)選6N HCl)進行。
反應(yīng)h是在20℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在惰性溶劑如(C1-C4)脂肪醇(優(yōu)選甲醇、乙醇)中、任選在叔胺如三乙胺存在下，通過異硫氰酸叔丁酯的作用進行。
反應(yīng)i通常是在反應(yīng)介質(zhì)的沸點溫度下、使用酸如鹽酸、在水性介質(zhì)中進行。優(yōu)選使用6N鹽酸。
其中R1是OAlk且R2是氫或R1和R2均為OAlk的式(I)化合物，可分別自其中R1是OH且R2是氫或R1和R2均為OH的式(I)化合物、通過用結(jié)構(gòu)為Hal-Alk的化合物進行烷基化制備。Hal代表鹵原子(優(yōu)選氯、溴或碘)，Alk具有與式(I)中相同的含義。此反應(yīng)通常在20℃至反應(yīng)介質(zhì)沸點之間的溫度下、在酸受體如三烷基胺(例如三乙胺)、堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀)或堿金屬氫化物(例如氫化鈉)存在下、在惰性溶劑如二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氧雜環(huán)己烷、四氫呋喃中進行。
將式(I)化合物分離，并可通過常規(guī)已知方法、例如結(jié)晶、層析或萃取進行純化。
式(I)化合物的對映異構(gòu)體可通過拆分外消旋混合物而獲得，例如按照PIRCKLE W.H.等人，“不對稱合成”，第1卷，Academic Press(1983)中的手性柱層析法進行，或者通過形成鹽或自手性前體合成。其非對映異構(gòu)體可按照已知的常規(guī)方法(結(jié)晶、層析或自手性前體)制備。
在有機溶劑如醇、酮、醚或氯化溶劑中通過無機酸或有機酸的作用可任選將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為無機酸或有機酸的加成鹽。這些鹽也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
可提及的藥學(xué)上可接受的鹽的實例有苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡萄糖酸鹽、碘酸鹽、羥乙基磺酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、亞甲基雙-β-萘酚酸鹽(methylenebis-β-oxynaphthoate)、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、茶堿乙酸鹽(theophyllinacetate)和對甲苯磺酸鹽。
式(I)化合物是誘導(dǎo)型NO-合酶或2型NO-合酶(NOS-2)的抑制劑，因此可用于預(yù)防及治療與一氧化氮產(chǎn)生過多相關(guān)的疾病，如多發(fā)性硬化癥、局灶性或全腦缺血、腦或脊髓創(chuàng)傷、帕金森氏病、亨廷頓舞蹈病、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、偏頭痛、抑郁癥、精神分裂癥、焦慮癥、癲癇病、糖尿病、動脈粥樣硬化癥、心肌炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、哮喘、過腸易激綜合征、克羅恩氏病、腹膜炎、胃食管反流、葡萄膜炎、吉-巴綜合征、腎小球腎炎、紅斑狼瘡和銀屑病，某些形式的腫瘤如例如上皮瘤、腺癌或肉瘤的生長，以及革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細胞內(nèi)或細胞外細菌感染。
這些化合物作為NOS-2和NOS-3抑制劑的活性是通過測定[3H]-L-精氨酸轉(zhuǎn)化為[3H]-L-瓜氨酸的轉(zhuǎn)化率來確定，分別采用自脂多糖預(yù)處理(在采集組織前6小時i.p.10mg/kg)的大鼠或小鼠肺中提取的NOS-2酶級分和重組牛NOS-3市售制劑。在37℃下將化合物于HEPES緩沖液(50mM，pH6.7)中溫育20至30分鐘，所述緩沖液中存在5μM(當測量NOS-2活性時)或10μM(當測量NOS-3活性時)[3H]-L-精氨酸、1mM NADPH、15μM四氫生物蝶呤(tetrabiopterine)、1μM FAD、0.1mM DTT，當測定NOS-3活性時還含有10μg/ml鈣調(diào)蛋白和1.25mM CaCl2。加入含有10mM EGTA的冷HEPES緩沖液(100mM，pH5.5)中止溫育，并加入500mg陽離子型離子交換樹脂(AG50W-X8，反離子Na+)以從[3H]-L-瓜氨酸中分離[3H]-L-精氨酸。放置5分鐘使各相分離后，用閃爍計數(shù)器在合適的閃爍液存在下測定液相中保留的放射性。使用L-[脲基-14C]-瓜氨酸作為外標，能夠估算所形成的L-[3H]-瓜氨酸的回收率。
NOS-2或NOS-3的活性以反應(yīng)介質(zhì)中含有的每毫克蛋白每分鐘所形成的[3H]-L-瓜氨酸的皮摩爾數(shù)表示。
在對NOS-2酶進行的該試驗中，式(I)化合物的IC50值小于或等于10μM。
選擇性是通過IC50NOS-3/IC50NOS-2的比值測定，化合物的選擇性大于45。
式(I)化合物是低毒性的，其經(jīng)皮途徑施用于小鼠測得的LD50大于40mg/kg。
下列實施例說明了本發(fā)明，但并未包括全部內(nèi)容。
實施例1
(+)-4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-噻唑-2-基胺 將0.4g N-(叔丁基)-N’-[2-羥基-1-(3-甲氧基-吡啶-4-基甲基)乙基]-硫脲在4mL 6N鹽酸水溶液中的混懸液在約100℃下加熱18小時。然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮反應(yīng)介質(zhì)。將所得殘余物用25mL蒸餾水處理，并用20mL二氯甲烷將混合物洗滌兩次。在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下蒸發(fā)水相，用15mL乙醇將殘余物處理兩次，并根據(jù)上述條件濃縮，然后在烘箱中在約40℃的溫度兼減壓(10kPa)條件下干燥4小時。獲得約0.31g外消旋4-(2-氨基-4，5-二氫-噻唑-4-基甲基)-1H-吡啶-2-酮鹽酸鹽，為淺黃色固體形式，熔點為124℃。將該產(chǎn)物通過CHIRALCEL OD 20μ柱、用庚烷-乙醇-三乙胺混合物(體積比為80/20/0.1)進行層析純化。收集含有預(yù)期產(chǎn)物的級分并在約40℃的溫度兼減壓(1kPa)條件下濃縮，然后在烘箱中在約40℃的溫度兼減壓(10kPa)條件下干燥殘余物。獲得約0.0131g(+)-4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-噻唑-2-基胺，(0.5％DMSO中的αD20＝+12.1+/-0.7)。[1H NMR譜(300MHz，(CD3)2SO d6，δ(ppm))2.73(dd，J＝13.5和7Hz，1H)；2.80(dd，J＝13.5和7Hz，1H)；3.27(dd，J＝11.5和5.5Hz，1H)；3.62(dd，J＝11.5和7.5Hz，1H)；4.53(mt，1H)；6.13(dd，J＝6.5和1.5Hz，1H)；6.24(s大，1H)；7.34(d，J＝6.5Hz，1H)；自8.90至9.40(mf甚寬，2H)；自9.60至10.40(mf甚寬，1H)]。
N-(叔丁基)-N’-[2-羥基-1-(3-甲氧基-吡啶-4-基甲基)乙基]-硫脲
將約0.337mL異硫氰酸叔丁酯加入0.3g 2-氨基-3-(3-甲氧基-吡啶-4-基)-1-丙醇的50mL無水乙醇溶液中，然后在約20℃兼惰性氣氛下將反應(yīng)介質(zhì)攪拌18小時。再加入0.337mL異硫氰酸叔丁酯，并在約60℃的溫度下將反應(yīng)混合物加熱4小時。冷卻后，在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮反應(yīng)介質(zhì)。得到的油在氬壓力(50kPa)下用硅膠柱(粒徑40-63μm，直徑4cm，高22cm)層析純化，用20％二氯甲烷/甲醇/氨水混合物(體積比為90/10/0.5)洗脫，得到10mL級分。收集含有預(yù)期產(chǎn)品的級分并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到約0.4g N-(叔丁基)-N’-[2-羥基-1-(3-甲氧基-吡啶-4-基-甲基)乙基]-硫脲，為黃色油狀物形式。[紅外光譜CH2Cl23620；3411；2972；1614；1561；1532；1400；1319；1161；1041和815cm-1]。
2-氨基-3-(3-甲氧基-吡啶-4-基)-1-丙醇 在約100℃的溫度下將1.2g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(3-甲氧基-吡啶-4-基)乙基]-乙酰胺在60ml 6N鹽酸水溶液中的混合物加熱30分鐘。在約20℃的溫度下冷卻后，滴入足量的30％氫氧化鈉水溶液，將pH調(diào)至約10。然后用100mL乙酸乙酯將混合物萃取三次，將有機萃取液合并，用硫酸鎂干燥，然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到約0.3g 2-氨基-3-(3-甲氧基-吡啶-4-基)-1-丙醇，為黃色油狀物形式。[紅外光譜CH2Cl23628；3335；2948；1614；1561；1400；1319；1162；1044和815cm-1]。
N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(3-甲氧基-吡啶-4-基)乙基]-乙酰胺 向5.12g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(1-氧基-吡啶-4-基)乙基]-乙酰胺在150mL無水甲醇中的混合物中加入約6g對甲苯磺酰氯，然后加入8.9mL三乙胺。在約60℃的溫度下將反應(yīng)介質(zhì)加熱96小時，然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。用200mL二氯甲烷處理殘余物，并用150mL蒸餾水和100mL氯化鈉飽和水溶液洗滌三次。有機相用硫酸鎂干燥、過濾，然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。殘余物在氬壓力(50kPa)下用硅膠柱(粒徑40-63μm，直徑7cm，高30cm)層析純化，用20％二氯甲烷/甲醇/氨水混合物(體積比為95/5/0.5)洗脫，得到10mL級分。合并含有預(yù)期產(chǎn)物的級分，并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到約1.24g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(3-甲氧基-吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺，為黃色油狀物形式。[紅外光譜CCl43446；2954；2930；2858；1684；1614；1562；1499；1399；1255；1117；1043和837cm-1]。
N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(1-氧基-吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺 在惰性氣氛、攪拌下，緩慢將約9.4g 3-氯-過苯甲酸加入21g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺在250mL二氯甲烷中的混合物中，然后在約40℃的溫度下加熱30分鐘。之后，將反應(yīng)介質(zhì)冷卻，并用200mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌三次、再用150mL蒸餾水洗滌。有機相用硫酸鎂干燥，然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到的油在氬壓力(50kPa)下用硅膠柱(粒徑40-63μm，直徑7cm，高37cm)層析純化，相繼用20％二氯甲烷/甲醇/氨水(體積比為97/3/0.5、95/5/0.5、90/10/0.5)洗脫，得到50mL級分。將含有預(yù)期產(chǎn)物的級分合并，并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。由此獲得4.5g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(1-氧基-吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺，為黃色油狀物形式。[1HNMR譜(300MHz，(CD3)2SO d6，δ(ppm))；0.07(s，6H)；0.90(s，9H)；1.65(s，3H)；2.57(dd，J＝13.5和9.5Hz，1H)；2.85(dd，J＝13.5和4.5Hz，1H)；自3.40至3.60(mt，2H)；3.96(mt，1H)；7.22(d，J＝7Hz，2H)；7.73(d，J＝8Hz，1H)；8.12(d，J＝7Hz，2H)。
N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺 在攪拌下，向25g N-(1-羥甲基-2-(吡啶-4-基)-乙基)-乙酰胺在700mL二氯甲烷中的混懸液中加入約87g叔丁基二甲基甲硅烷，然后滴加112mL二異丙基乙胺。在約20℃的溫度下將反應(yīng)介質(zhì)攪拌24小時，然后加入蒸餾水。靜置使各相分離后，有機相用250mL蒸餾水和200mL氫氧化鈉飽和水溶液洗滌三次。然后用硫酸鎂干燥，過濾并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到的油在氬壓力(50kPa)下用硅膠柱(粒徑40-63μm，直徑11cm，高40cm)層析純化，用20％二氯甲烷/甲醇/氨水混合物(體積比為95/15/0.5)洗脫，得到100mL級分。將含有預(yù)期產(chǎn)物的級分合并，并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。得到21g N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺，為白色固體形式。[質(zhì)譜DCIm/z＝309MH+]。
N-(1-羥甲基-2-(吡啶-4-基)-乙基)-乙酰胺 在惰性氣氛、攪拌下，向21.5g 2-(乙?；被?-3-(4-吡啶基)丙酸乙酯的800mL無水甲醇溶液中緩慢加入約8.7g硼氫化鈉，溫度維持在30℃以下。加完之后，繼續(xù)在約20℃的溫度下將反應(yīng)介質(zhì)攪拌24小時，然后在約30℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。殘余物用450mL水處理，再用150mL二氯甲烷萃取四次。在約50℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮水相，殘余物在氬壓力(50kPa)下用硅膠柱(粒徑40-63μm，直徑7.5cm，高40cm)層析純化，用20％二氯甲烷/甲醇/氨混合物(體積比為90/10/0.5)洗脫，得到50mL級分。將含有預(yù)期產(chǎn)物的級分合并，并在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮。由此得到2.6g N-(1-羥甲基-2-(吡啶-4-基)-乙基)-乙酰胺，為固體油形式。[紅外光譜(KBr)3279；3200；2865；1647；1609；1560；1374；1080；1057；1005；907；806；566和517cm-1]。
2-(乙酰基氨基)-3-(4-吡啶基)-丙酸乙酯 將約51.2mL 5N氫氧化鈉水溶液滴加至49.4g 2-(乙?；被?-2-(4-吡啶基甲基)-丙二酸二乙基的600mL無水乙醇溶液中。在約20℃的溫度下將混合物攪拌1小時，然后滴加21.3mL 12N鹽酸水溶液，并在約70℃的溫度下將反應(yīng)介質(zhì)加熱5小時。在約20℃的溫度下冷卻后，在約50℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮反應(yīng)介質(zhì)。用200mL冷乙醇處理殘余物，由此形成的沉淀用30mL冷乙醇洗滌兩次。按照上述條件蒸發(fā)濾液。重復(fù)以上操作幾次，以從反應(yīng)介質(zhì)中除去氫氧化鈉。由此得到43.1g 2-(乙?；被?-3-(4-吡啶基)丙酸乙酯，為桔黃色油的形式。[質(zhì)譜EI m/z＝236M+；m/z＝178M-NHAc；m/z＝121 C7H9N2+；m/z＝93 C6H7N+；基峰值m/z＝43C2H3O+]。
2-(乙酰基氨基)-2-(4-吡啶基甲基)-丙二酸二乙酯 在惰性氣氛、攪拌下，向750mL乙醇滴加約9g氫氧化鈉。加入氫氧化鈉后，將反應(yīng)混合物的溫度維持在約20℃，緩慢加入42g乙酰氨基丙二酸二乙酯，然后在約20℃的溫度下將混合物攪拌1小時30分鐘。然后，快速加入61.5g 4-溴甲基-吡啶氫溴酸鹽在250mL乙醇中的混懸液，將所得混懸液在約20℃的溫度下攪拌18小時。然后在約40℃的溫度兼減壓(2kPa)條件下濃縮反應(yīng)介質(zhì)。用200mL蒸餾水處理殘余物，并用1N鹽酸水溶液中和直至pH等于7。在約0℃溫度下冷卻所得混懸液，過濾，用50mL冰冷的水將不溶物洗滌兩次，然后在烘箱中在約40℃的溫度兼減壓(10kPa)條件下干燥18小時。由此得到49.4g 2-(乙?；被?-2-(4-吡啶基甲基)丙二酸二乙酯，為淡粉紅色固體形式。[紅外光譜CH2Cl23409；2895；1741；1681；1603；1496；1302；1198；1057；855；557和524cm-1]。
4-溴甲基-吡啶氫溴酸鹽 在惰性氣氛、攪拌下，向140g溴化三苯基膦在750mL二氯甲烷中的混懸液中加入30g 4-吡啶基-甲醇的250mL二氯甲烷溶液，將混合物的溫度維持在27℃以下。在約20℃的溫度下將反應(yīng)介質(zhì)攪拌4小時，然后將所得不溶物過濾，并用100mL二氯甲烷沖洗，旋轉(zhuǎn)過濾。由此得到61.5g 4-溴甲基-吡啶氫溴酸鹽，為白色固體形式。[質(zhì)譜EI m/z＝171 M+；m/z＝92 C6H6N；基峰值m/z＝65 C5H5+]。
本發(fā)明的藥物組合物由式(I)化合物或該化合物的異構(gòu)體或互變異構(gòu)體或鹽以純物質(zhì)形式或以與任何其它藥學(xué)相容的可為惰性或生理活性的產(chǎn)品混合的組合物形式組成。本發(fā)明的藥品可經(jīng)口服、經(jīng)腸胃外、經(jīng)直腸或局部使用。
可以使用的用于口服施用的固體組合物包括片劑、丸劑、粉劑(明膠膠囊劑、扁囊劑)或顆粒劑。在這些組合物中，本發(fā)明的有效成分在氬氣流下與一種或多種惰性稀釋劑如淀粉、纖維素、蔗糖、乳糖或二氧化硅混合。這些組合物還可包含除稀釋劑外的物質(zhì)，例如一種或多種潤滑劑如硬脂酸鎂或滑石粉、染料、包衣物(糖衣)或光澤劑。
可以使用的用于口服施用的液體組合物包括藥學(xué)上可接受的溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑和酏劑，含有惰性稀釋劑如水、乙醇、甘油、植物油或液態(tài)石蠟。這些組合物還可包含除稀釋劑外的物質(zhì)，例如濕潤產(chǎn)品、甜味劑、增稠劑、調(diào)味劑或穩(wěn)定劑。
用于腸胃外施用的無菌組合物可優(yōu)選是水性或非水性溶液劑、混懸劑或乳劑?？墒褂玫娜軇┗蛸x形劑包括水、丙二醇、聚乙二醇、植物油、特別是橄欖油、可注射有機酯例如油酸乙酯，或其它適宜的有機溶劑。這些組合物還可包含輔助劑，特別是潤濕劑、等張劑、乳化劑、分散劑和穩(wěn)定劑。滅菌可以以幾種方式進行，例如通過無菌過濾、在組合物中加入滅菌劑、通過輻射或通過加熱進行。它們還可制成無菌固體組合物形式，其使用時可溶于無菌水或任何其它可注射的無菌介質(zhì)中。
用于直腸施用的組合物為栓劑或直腸膠囊，其除了含有活性產(chǎn)物外，還含有賦形劑如可可油、半合成甘油酯或聚乙二醇。
用于局部施用的組合物可以是例如乳膏劑、洗劑、滴眼劑、漱口劑、滴鼻劑或氣霧劑。
對人類疾病的治療中，本發(fā)明的化合物特別可用于治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化癥、局灶性或全腦缺血、腦或脊髓創(chuàng)傷、帕金森氏病、亨廷頓舞蹈病、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、偏頭痛、抑郁癥、精神分裂癥、焦慮癥、癲癇病、糖尿病、動脈粥樣硬化癥、心肌炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、哮喘、腸易激綜合征、克羅恩氏病、腹膜炎、胃食管反流、葡萄膜炎、吉-巴綜合征、腎小球腎炎、紅斑狼瘡、銀屑病、某些形式的腫瘤如例如上皮瘤、腺癌或肉瘤的生長，以及革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細胞內(nèi)或細胞外細菌感染。
劑量取決于所需的效果、治療持續(xù)時間和所使用的施用途徑；通常成人一天的口服量為1mg至100mg，單位劑量含0.5mg至50mg活性物質(zhì)。
一般而言，醫(yī)生會根據(jù)待治療個體的年齡、體重和所有其它個體情況確定合適的劑量。
下列實施例說明了本發(fā)明的組合物實施例A根據(jù)常規(guī)技術(shù)制得含有50mg活性產(chǎn)物且具有以下組成的凝膠膠囊-式(I)化合物 ………………………………………………50mg-纖維素………………………………………………………18mg-乳糖…………………………………………………………55mg-膠態(tài)二氧化硅………………………………………………1mg-羧甲基淀粉鈉………………………………………………10mg-滑石粉………………………………………………………10mg
-硬脂酸鎂………………………………………………1mg實施例B根據(jù)常規(guī)技術(shù)制得含有50mg活性產(chǎn)物且具有以下組成的片劑-式(I)化合物 ………………………………………… 50mg-乳糖…………………………………………………… 104mg-纖維素………………………………………………… 40mg-聚維酮………………………………………………… 10mg-羧甲基淀粉鈉………………………………………… 22mg-滑石粉………………………………………………… 10mg-硬脂酸鎂……………………………………………… 2mg-膠態(tài)二氧化硅………………………………………… 2mg-羥甲基纖維素、甘油、二氧化鈦混合物(72-3.5-24.5)適量1片薄膜包衣成品片劑的重量為245mg。
實施例C含有10mg活性產(chǎn)物且具有以下組成的注射液-式(I)化合物 ………………………………………… 10mg-苯甲酸………………………………………………… 80mg-芐醇…………………………………………………… 0.06ml-苯甲酸鈉……………………………………………… 80mg-95％乙醇……………………………………………… 0.4ml-氫氧化鈉……………………………………………… 24mg-丙二醇………………………………………………… 1.6ml-水……………………………………………………… 適量4ml本發(fā)明還涉及預(yù)防和治療其中涉及因誘發(fā)誘導(dǎo)型NO-合酶(NOS-2或iNOS)而導(dǎo)致的一氧化氮(NO)異常生成的疾病的方法，其通過施用式(I)化合物、其外消旋混合物、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體以及其混合物、其互變異構(gòu)體和其藥學(xué)上可接受的鹽進行。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物， 其中R1和R2相同且代表羥基、(C1-C4)烷基、氯或(C1-C4)烷氧基；或者至少R1或R2之一是氫且另一個是(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羥基或氯；其中(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基在直鏈或支鏈中含有1至4個碳原子；其外消旋物、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體及其混合物、其互變異構(gòu)體和其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中式(I)化合物選自以下化合物4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-噻唑-2-基胺，4-(2-氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，和4-(2，6-二氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其外消旋物、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體及其混合物、其互變異構(gòu)體和其藥學(xué)上可接受的鹽。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中式(I)化合物選自以下化合物(+)-4-(2-羥基-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-噻唑-2-基胺，4-(2-氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，和4-(2，6-二氯-吡啶-4-基甲基)-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-基胺，其互變異構(gòu)體以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
4.權(quán)利要求1至3的化合物，其用作藥品。
5.藥物組合物，其含有處于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中的權(quán)利要求1至3所定義的化合物。
6.權(quán)利要求4的藥品，其中所述藥品包含至少一種權(quán)利要求1至3所定義的化合物，醫(yī)治性應(yīng)用于治療其中涉及因誘發(fā)誘導(dǎo)型NO-合酶(NOS-2)而導(dǎo)致的一氧化氮(NO)異常生成的疾病。
7.權(quán)利要求4的藥品，其中所述藥品包含至少一種權(quán)利要求1至3所定義的化合物，醫(yī)治性應(yīng)用于治療帕金森氏病。
8.制備如權(quán)利要求1中所定義的式(I)化合物的方法，其中將式(II)衍生物環(huán)化， 其中R1和R2具有與權(quán)利要求1中相同的含義，并任選將其轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
9.權(quán)利要求8的制備方法，其中的環(huán)化在約100℃的溫度下、在酸性介質(zhì)中進行。
10.權(quán)利要求9的制備方法，其中酸性介質(zhì)優(yōu)選為6N鹽酸。
11.制備如權(quán)利要求8所定義的且其中R1和R2具有與權(quán)利要求1中相同的含義的式(II)化合物的方法，包括以下步驟使式(IIa)化合物， 其中Ra是氫原子或胺功能保護基團如CO2tBu或Ac，且Rb是烷基或烷氧羰基，受到還原劑的作用，以便獲得式(IIb)化合物， 使式(IIb)化合物受到脫保護劑的作用，以便獲得式(IIc)化合物， 使式(IIc)化合物受到異硫氰酸叔丁酯的作用，以便獲得式(II)化合物，
12.制備如權(quán)利要求1中所定義的其中R1是OH且R2是H的式(I)化合物的方法，包括將式(IV)衍生物環(huán)化的步驟， 并任選將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
13.權(quán)利要求12的制備方法，其中的環(huán)化在約100℃的溫度下、在酸性介質(zhì)中進行。
14.權(quán)利要求13的制備方法，其中酸性介質(zhì)優(yōu)選為6N鹽酸。
15.制備權(quán)利要求12的式(IV)化合物的方法，包括以下步驟在堿存在下、在醇溶劑中使式(V)化合物， 其中Ra和Rc是氫或胺和醇功能保護基團，如Ra是COMe或COOtBu且Rc是叔丁基二甲基甲硅烷基，受到對甲苯磺酰氯的作用，以便獲得式(VI)化合物， 使式(VI)化合物受到脫保護劑的作用，以便獲得式(VII)化合物， 使式(VII)化合物受到異硫氰酸叔丁酯的作用，以便獲得如權(quán)利要求12所定義的式(IV)化合物。
16.如權(quán)利要求15所定義的式IV、V、VI、VII化合物。
17.如權(quán)利要求11所定義的式II、IIa、IIb、IIc化合物，2-乙酰基氨基-3-(2-乙氧基-吡啶-4-基)-丙酸乙酯除外。
18.化合物，其為N-(叔丁基)-N’-[2-羥基-1-(3-甲氧基-吡啶-4-基-甲基)乙基]-硫脲；2-氨基-3-(3-甲氧基-吡啶-4-基)-1-丙醇；N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(3-甲氧基-吡啶-4-基)乙基]-乙酰胺；和N-[1-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-2-(1-氧基-吡啶-4-基)-乙基]-乙酰胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的2－氨基－4－吡啶基甲基－二氫噻唑衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為誘導(dǎo)型NO－合酶抑制劑的用途，其中R
文檔編號A61P43/00GK1602311SQ02824693
公開日2005年3月30日 申請日期2002年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月9日
發(fā)明者E·巴克, A·比戈, J-C·卡里, S·米尼亞尼, B·羅南, M·塔巴爾 申請人:安萬特醫(yī)藥股份有限公司