含有截短側(cè)耳素衍生物的微球的制作方法

專利名稱：含有截短側(cè)耳素衍生物的微球的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有穩(wěn)定形式的截短側(cè)耳素衍生物作為抗生素的動(dòng)物飼料粒(pellet)。本發(fā)明也涉及穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物的制備方法、上述的動(dòng)物飼料粒的制備方法以及其在控制動(dòng)物感染性疾病方法中的用途。
在下文中，可將截短側(cè)耳素衍生物理解為以含有如下式I大環(huán)結(jié)構(gòu)為特征的化合物， 其中R1是乙基或乙烯基，在碳原子1和2之間或者為雙鍵或者為單鍵，Ra和Rb相互獨(dú)立，分別為氫或鹵素，且T優(yōu)選為如下文詳述的短鏈或長(zhǎng)鏈的有機(jī)基團(tuán)。
在一些文獻(xiàn)中，術(shù)語(yǔ)截短側(cè)耳素、萬(wàn)尼菌素、泰妙菌素和mutilins作為同義詞應(yīng)用。在本文中始終應(yīng)用術(shù)語(yǔ)。
對(duì)獸醫(yī)來(lái)說(shuō)，截短側(cè)耳素是目前應(yīng)用最普遍和有效的抗生素。已知的最具代表性的包括下文中描述的Tiamutin(活性物質(zhì)泰妙菌素)及最新的Econor(活性物質(zhì)萬(wàn)尼菌素)。這兩者均可非常有效地治療動(dòng)物呼吸系統(tǒng)和消化道的所有細(xì)菌感染性疾病，甚至在因?yàn)楫a(chǎn)生耐藥性而不得不將常規(guī)抗生素以多種活性藥物聯(lián)合大劑量方式應(yīng)用的那些棘手情況下也表現(xiàn)出它的有效性。
截短側(cè)耳素的有效菌譜包括如Streptococcus aronson、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、關(guān)節(jié)炎支原體(Mycoplasma arthritidis)、牛生殖道支原體(Mycoplasma bovigenitalium)、Mycoplasma bovimastitidis、牛鼻支原體(Mycoplasma bovirhinis)、支原體屬的種、犬支原體(Mycoplasmacanis)、貍貓支原體(Mycoplasma felis)、發(fā)酵支原體(Mycoplasmafermentans)、雞支原體(Mycoplasma gallinarum)、雞敗血支原體(Mycoplasma gallisepticum)、A.granularum、人型支原體(Mycoplasmahominis)、豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、Actinobacillus laidlawii，火雞支原體(Mycoplasma meleagridis)、溶神經(jīng)支原體(Mycoplasmaneurolyticum)、肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia)和豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)的病原體。
另外，WO 98/01127描述了萬(wàn)尼菌素對(duì)無(wú)論何地飼養(yǎng)的動(dòng)物發(fā)生的疾病綜合征都有顯著活性，如為了運(yùn)輸，占有非常窄的空間(增加了存儲(chǔ)的密度)且因此承受較高的壓力的動(dòng)物。在此具有決定性作用的最普通的病原體是豬肺炎支原體、Serpulina(之前為Treponema)hyodysenteria、Serpulinapilosicoli、Lawsonia intracellularis、雞敗血支原體、多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)、Actinobacillus(Haemophilus)pleuropneumoniae和副豬嗜血菌(Haemophilus parasuis)，經(jīng)常同時(shí)伴有呼吸道和其他感染性疾病并形成復(fù)雜的臨床癥狀。對(duì)所有家養(yǎng)的動(dòng)物如牛、羊及豬，也包括家禽都有效。
在當(dāng)今大范圍的如豬、牛、馬、羊和家禽的家畜的養(yǎng)殖中，對(duì)于所提及的動(dòng)物疾病，不給予抗生素是不可能的，因?yàn)槌墙o予治療，否則疾病經(jīng)整批動(dòng)物迅速蔓延，從而導(dǎo)致不必要的損失。因此，人們急需對(duì)在大量牧群感染前能夠快速有效控制動(dòng)物間傳染性疾病的抗生素。
盡管截短側(cè)耳素作為抗生素在功效方面滿足了人們所有的期望，但是它們有一個(gè)不能輕視的共同缺點(diǎn)，即它們?cè)诮o藥形式下的相對(duì)不穩(wěn)定性，而該給藥方式由于易于操作對(duì)于獸醫(yī)而言尤為重要。如在WO 01/41758中所討論的，截短側(cè)耳素、尤其是游離堿形式的截短側(cè)耳素特別不穩(wěn)定，這使得人們不得不在注射溶液中采用酸加成鹽形式，優(yōu)選為鹽酸鹽。酸加成鹽在室溫下可穩(wěn)定保存五年。獸用的口服給藥形式至今卻是個(gè)例外，即使作為飼料添加劑，也僅僅應(yīng)用在有限范圍內(nèi)。
而人用抗生素可以極其不同的給藥形式給藥，如片劑、糖衣片劑、乳劑、注射溶液等，因?yàn)榭梢砸蕾囉诨颊叩姆男约捌湎肟祻?fù)的愿望，但是對(duì)于動(dòng)物而言，這個(gè)方面卻是一個(gè)要面對(duì)的相當(dāng)實(shí)際的問(wèn)題。
在動(dòng)物中，必須制備一種能夠服用藥物的制備物。當(dāng)然，以動(dòng)物不得不吞咽或注射的方式給予抗生素從而對(duì)單個(gè)動(dòng)物或少量動(dòng)物進(jìn)行治療也是可能的。然而這些強(qiáng)制方式不能被大批動(dòng)物接受，因?yàn)檫@是高強(qiáng)度的勞動(dòng)，在個(gè)別情況下需要獸醫(yī)在場(chǎng)，最終導(dǎo)致高成本，而這些成本則因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)的存在而無(wú)法轉(zhuǎn)嫁給肉或奶制品消費(fèi)者。因此，在大規(guī)模的畜牧場(chǎng)中，需要簡(jiǎn)便可靠的給藥形式，牧場(chǎng)主就能獨(dú)立操作或甚至完全自動(dòng)化，并且成本控制在合理的范圍內(nèi)。
一種解決所有這些問(wèn)題的方法為在動(dòng)物的干飼料(也就是所說(shuō)的飼料粒)中摻入準(zhǔn)確劑量的抗生素。
當(dāng)今家養(yǎng)動(dòng)物和生產(chǎn)性家畜，如豬，以及牛、羊和家禽經(jīng)常飼養(yǎng)于配備最現(xiàn)代化的全自動(dòng)飼養(yǎng)系統(tǒng)的動(dòng)物舍內(nèi)。在這種情況下，根據(jù)動(dòng)物年齡和體重完全可以自動(dòng)化地分配飼料并每天在確定的時(shí)間將每日確定的量運(yùn)送給每一個(gè)動(dòng)物且填入它的飼料槽內(nèi)。所說(shuō)的飼料粒常應(yīng)用于這種完全自動(dòng)化系統(tǒng)中。這種粒是植物和/或動(dòng)物基的濃縮干飼料，可添加如蛋白、維生素和礦物質(zhì)的添加劑進(jìn)行強(qiáng)化。這種飼料粒為簡(jiǎn)單合成的具有流動(dòng)性的長(zhǎng)的或園的顆粒，或者根據(jù)不同的生產(chǎn)方法，將其加工成與動(dòng)物的種類和年齡相符的統(tǒng)一大小規(guī)格的桿狀，從用于家禽的幾毫米到用于成年豬和牛的約1厘米。商業(yè)飼料廠通過(guò)將有機(jī)原料磨碎、將成分混合成所需的組合物并最后壓制成粒狀來(lái)生產(chǎn)飼料粒的；將飼料粒裝入袋內(nèi)并運(yùn)送給那些將其添加入分配系統(tǒng)的牧場(chǎng)主。由于這種粒具有規(guī)格統(tǒng)一、可流動(dòng)性和貯存穩(wěn)定性，所以這種粒的最大優(yōu)點(diǎn)是易于操作?？奢p易地將其從容器內(nèi)完全自動(dòng)化地倒出，計(jì)量分成小份，經(jīng)由傳送帶或管將恰好準(zhǔn)確量的飼料粒運(yùn)輸至每一個(gè)動(dòng)物。而且，飼料粒較新鮮飼料占用更少的空間，最重要的是，動(dòng)物可以自愿地享用而沒(méi)有任何問(wèn)題。
因此，不僅將蛋白質(zhì)和其他如維生素和礦物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)素而且將所需的抗生素加入那些飼料粒內(nèi)都是有益的。在實(shí)踐中，已經(jīng)應(yīng)用這種方式，但是在此討論的截短側(cè)耳素類活性物質(zhì)的情況中，這種方式面臨著一些具體的困難，這些困難對(duì)于此類物質(zhì)而言是特異的，在下文中將更詳細(xì)地進(jìn)行解釋。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)截短側(cè)耳素有點(diǎn)兒不穩(wěn)定，首先，在飼料粒制備中當(dāng)與飼料原材料(尤其是植物和動(dòng)物纖維)接觸時(shí)，相當(dāng)大部分就已在制備中損失了。在飼料粒制備中，干的動(dòng)物源性或植物源性的有機(jī)原材料被磨碎，與添加劑、維生素、微量元素、抗生素(在此情況下為截短側(cè)耳素衍生物)等充分混合，也就是充分均勻地混合，然后用約5-10％重量的水或水蒸汽潤(rùn)濕，在約60-80℃(優(yōu)選65-75℃)的高溫、約1-100kbar(常用25-100kbar)的高壓下壓制成粒劑。持久的高溫(如100℃)對(duì)產(chǎn)生不利效果，大大降低了粒劑的粘性。相反，在此壓力內(nèi)達(dá)到200℃的短期局部的溫度峰即所說(shuō)的閃點(diǎn)卻沒(méi)有問(wèn)題。在此壓力下材料停留的時(shí)間為約5-180秒，優(yōu)選10-90秒，可根據(jù)粒劑大小而定。
而純的截短側(cè)耳素可以很好地耐受這種溫度，可在室溫下存放甚至幾個(gè)月而沒(méi)有任何可測(cè)得的活性物質(zhì)的損失，但是在壓力下及與飼料中的動(dòng)物或植物纖維密切接觸后以及高溫下，它們分解的相對(duì)較快。似乎是與纖維的接觸催化了分解過(guò)程。甚至在技術(shù)可能的范圍內(nèi)將高溫、高壓階段控制的非常短，壓制過(guò)程后立即將制成的飼料粒冷卻至室溫，仍然有1/4-1/3的活性成分丟失。盡管降解產(chǎn)物對(duì)對(duì)所治療的動(dòng)物并無(wú)不利影響，但不可避免的活性物質(zhì)的損失必然導(dǎo)致相當(dāng)可觀的制成物成本的增加。
此外，申請(qǐng)人也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在飼料粒中還保存完好的截短側(cè)耳素與如純的活性物質(zhì)相比貯存穩(wěn)定性更差。制成飼料粒中的活性成分甚至在室溫下仍繼續(xù)降解。三個(gè)月后，活性成分含量已經(jīng)降低至少于60％?，F(xiàn)今，這種相對(duì)的不穩(wěn)定性也意味著飼料粒中的活性物質(zhì)的準(zhǔn)確給藥劑量?jī)H僅維持在飼料粒制成后約4-6周這一段時(shí)期內(nèi)。因此，現(xiàn)今的牧場(chǎng)主不得不只用剛剛制成的飼料粒。他們不能長(zhǎng)期貯存大量的飼料粒，所以不得不大約每4-6周向飼料廠發(fā)出新的產(chǎn)品訂單來(lái)確保有新的含有確實(shí)有效抗生素含量的飼料的供應(yīng)。盡管這在技術(shù)上可行，但實(shí)際上它需要精密的后勤計(jì)劃，且使飼料廠不得不重復(fù)履行不適合他們生產(chǎn)安排的小額訂單，且引起不便的等候時(shí)間，尤其是引起飼料粒成本額外的增加。
因此，鑒于上述原因，在截短側(cè)耳素穩(wěn)定性方面做了很多努力，使其在飼料粒制備過(guò)程中能夠耐受高溫高壓而無(wú)活性物質(zhì)的損失，且制成的飼料粒具有適于實(shí)際應(yīng)用的長(zhǎng)期貯存穩(wěn)定性。
這種穩(wěn)定性嘗試失敗的例子包括(1)通過(guò)壓制成顆?？s小活性成分的表面積，嘗試了各種大小的顆粒；(2)用各種各樣的保護(hù)層密封上述活性成分顆粒，如明膠或各種糖及包衣；(3)用各種如纖維素、淀粉、硅酸或沸石的多孔物質(zhì)將活性成分包裹，有或無(wú)額外的保護(hù)層；以及(4)活性物質(zhì)的基本的大環(huán)結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾。盡管在一些情況下化學(xué)修飾改進(jìn)了化合物本身的穩(wěn)定性，但同時(shí)也使活性喪失。
然而，這些嘗試一個(gè)也沒(méi)有做到在壓制飼料粒時(shí)能夠減少活性成分的損失或者在貯存穩(wěn)定性上有較大的改進(jìn)。然而，申請(qǐng)人現(xiàn)在已經(jīng)取得了令人驚奇的成功，使得使用者可將飼料粒以這樣一種形式方便地給藥，即其中的活性成分不再出現(xiàn)上述缺點(diǎn)。令人驚訝地是，目前可能使截短側(cè)耳素穩(wěn)定，這些截短側(cè)耳素不僅可以抵御飼料粒制備過(guò)程中的破壞作用，而且也可在極長(zhǎng)的期間內(nèi)保存。
盡管在下文中參照萬(wàn)尼菌素的具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但是，同樣也可適用于Tiamutin/泰妙菌素和其他具有如本文開(kāi)頭所示的式I基本的大環(huán)結(jié)構(gòu)的截短側(cè)耳素衍生物。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選如下式I的截短側(cè)耳素，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽 其中R1為乙基或乙烯基；(A)碳原子1和2之間為單鍵，Ra和Rb為H，T為如下a-i基團(tuán)中任意一個(gè)a)-CH2-OH；
c)-(CH2-X)m-(CH2)n-N(R2)(R3)，其中X為-O-、-S-、-NH-或 m為0或1；n為2-5的整數(shù)；R2和R3相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基，或者與它們所連接的氮原子一起形成含有-S-、-O-或-N(R4)-(其中R4為C1-6烷基或C1-6羥烷基)的雜部分的五元或六元雜環(huán)，且Y和Z相互獨(dú)立，分別為-O-或-S-；d)-CH2-S-(CH2)k-N(R5)(R6)，其中k為2-5的整數(shù)；R5和R6相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基；e)-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基，或者為飽和的含有一個(gè)或兩個(gè)選自-S-和-NH-的雜原子的五元雜環(huán)；f)-CH2-S-C(CH2)l-R8，其中l(wèi)為0或1，且R8為 其中K為H、C1-6烷基磺?；?、-NH2、-CHO、-N(R9)(R10)、-S-(CH2)q-N(R9)(R10)或-C(G)-NHR11，G為氧或硫，R9和R10相互獨(dú)立，分別為H、C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基；C1-6羥烷基、C1-6二羥烷基或未取代的或C1-6烷基磺?；〈腃1-6烷?；换騌9和R10與它們所連接的氮原子一起形成未取代的或取代的哌嗪基，其中第二個(gè)氮原子可由選自C1-6烷基、C1-6羥烷基和C1-6二羥烷基的取代基取代；R11為C1-6烷基或C1-6烷基羰基；Q為H、-NH2、-CF3、C1-6烷基、吡啶基或-N(R9)(R10)，R9和R10如上所述；g)-CH3、-CH2Cl、CH2Br、-CH2SCN、-CH2-NH2、-CH2-N3、-CO-OH、-CH2-OCOCH3或
h)-N(R15)(R16)，其中R15和R16相同或不同，選自H，未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基的基團(tuán)；未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)；未取代或取代的雜環(huán)；以及未取代或取代的芳基基團(tuán)；或者R15和R16與它們所連接的氮原子一起形成一個(gè)不含有其他雜原子或含有選自-N-、-O-和-S-雜原子的三元至八元環(huán)；或者R15為上述基團(tuán)之一，且R16為-SO2R17、-C(O)R18、-O-R19或N(R19)(R20)；R17選自未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)，未取代或取代的芳基基團(tuán)，未取代或取代的C1-6烷基氨基基團(tuán)以及未取代或取代的芳基氨基基團(tuán)；R18選自H，未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)以及未取代或取代的芳基基團(tuán)；R19和R20相同或不同，選自未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基的基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)以及未取代或取代的芳基基團(tuán)，或者R19和R20與它們所連接的氮原子一起形成一個(gè)任選含有選自-N-、-O-和-S-雜原子的三元至八元環(huán)狀基團(tuán)；(B)碳原子1和2之間為雙鍵，且Ra和Rb為H，T為如下基團(tuán)ii)-CH2-CO-R12，其中R12為未取代或取代的含氮的五元或六元雜環(huán)，未取代或取代芳基基團(tuán)或-CH2-R13基團(tuán)，R13為鹵素或-SR14，且R14為氨基-C1-6烷基，或者未取代或取代的含氮的五元或六元雜環(huán)或者未取代或取代的芳基基團(tuán)，上述雜環(huán)或芳基基團(tuán)的取代基為選自1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)OH、CN、NO2、N3、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、二-N-C1-6烷基氨基、C1-6?；被?、C1-6酰基羰基氨基、C1-6酰氧基、C1-6氨基甲?；?、一-N-和二-N-C1-6烷基氨基甲酰基、C1-6酸基羰基、C1-6烷基磺?；?、C1-6烷基亞硫酰基和苯甲基；(C)碳原子1和2之間為單鍵，Ra為H、OH或F，且Rb為H；或者Ra為H且Rb為F，T為如下基團(tuán)kk)-CH2-CO-R12，其中R12如基團(tuán)i所定義。
通過(guò)已知的方法，式I的游離化合物可被轉(zhuǎn)換成它的酸加成鹽，反之亦然。在酸加成鹽中，最優(yōu)選鹽酸鹽。同樣通過(guò)本身已知的方法，可制備季銨鹽。
除非另外說(shuō)明，取代基的定義是以普通化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的內(nèi)容為基礎(chǔ)的。在上式I的上下文中，根據(jù)碳原子的數(shù)目，烷基本身或作為其他取代基的一部分為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基等?！胞u素”為氟、氯、溴或碘；優(yōu)選氟、氯或碘且更優(yōu)選氯。
優(yōu)選含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(優(yōu)選硫和氮)的飽和或未飽和的五元或六元雜環(huán)。更優(yōu)選含有1、2或3個(gè)氮原子而沒(méi)有其他雜原子的這種雜環(huán)的亞基團(tuán)。其中，尤其優(yōu)選那些僅含有一個(gè)氮原子作為雜原子的未飽和的五元或六元雜環(huán)，如吡啶、吡咯及5，6-二氫-3H-吡咯。適當(dāng)?shù)暮袃蓚€(gè)氮原子的未飽和的五元或六元雜環(huán)為如咪唑、噠嗪和嘧啶。這種環(huán)上也可有一個(gè)或多個(gè)苯環(huán)與其稠合。苯并咪唑、喹啉、異喹啉和2，3-二氮雜萘為典型示例。適當(dāng)?shù)暮腥齻€(gè)氮原子的五元或六元雜環(huán)為如1，2，4-三唑。另外優(yōu)選含有一個(gè)氮原子和一個(gè)硫原子的雜環(huán)基團(tuán)。包括如各種噻唑、4，5-二氫噻唑和苯并噻唑。1，3，4-噻二唑是含有兩個(gè)氮原子和一個(gè)硫原子的雜環(huán)的典型示例。除非特別說(shuō)明，芳基或芳基基團(tuán)(尤其是苯基或萘基)可以是未取代的或者可以攜帶多達(dá)4個(gè)選自下列的相同或不同取代基OH、硝基、氨基、氰基、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、一-N-C1-6烷基氨基、二-N-C1-6烷基氨基、C1-6酸基、C1-6酰氨基、C1-6?；驶被?、C1-6氨基甲?；?、一-N-和二-N-C1-6烷基氨基甲?；?、C1-6?；趸驶?、C1-6烷基磺?；1-6烷基亞硫?；推S基。除非特別說(shuō)明，適當(dāng)?shù)娜〈c條環(huán)的取代基相同，同樣，雜環(huán)基也可由相同或不同的基團(tuán)取代一次或多次。尤其優(yōu)選的雜環(huán)基為3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶-2-基、1，3，4-噻唑-2-基、苯并噻唑-2-基、2H-1，2，4-三唑-3-基、氮雜雙環(huán)庚基、氮雜雙環(huán)辛基及哌啶基。
本發(fā)明尤其涉及如下定義的式I化合物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基，碳原子1和2之間為單鍵，且Ra和
Rb為氫或鹵素，優(yōu)選氫，T如式I所定義。
特別優(yōu)選如下定義的式I的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-(CH2)k-N(R5)(R6)，其中k為2-5的整數(shù)；且R5和R6相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基。其中，最優(yōu)選T為-CH2-S-(CH2)2-N(C2H5)(C2H5)的截短側(cè)耳素衍生物。
同樣優(yōu)選如下定義的式I的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基或者飽和的含有一個(gè)或兩個(gè)選自-S-和-NH-的雜原子的五元雜環(huán)。其中，優(yōu)選T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7的截短側(cè)耳素衍生物，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基，更優(yōu)選T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-CH(NH2)-CH(CH3)2的截短側(cè)耳素衍生物。
因此，在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選化合物泰妙菌素和萬(wàn)尼菌素，鑒于其廣譜活性，最優(yōu)選萬(wàn)尼菌素。如上所述，兩種藥物已在商業(yè)上應(yīng)用。這兩種優(yōu)選藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
文獻(xiàn)中已詳細(xì)描述式I化合物，如下僅供參考其中R1和A如式I所定義，T如基團(tuán)a中定義的式I化合物由Kavanagh等分離得到并在Proc.Natl.Acad.Soc.37，570-574(1951)描述。該化合物基本上代表了在此討論的這類物質(zhì)，即截短側(cè)耳素。在美國(guó)專利4 247 542中指出稍后發(fā)現(xiàn)的截短側(cè)耳素的結(jié)構(gòu)特征在于，上述式I中的Y為-CH2-OH。同一美國(guó)專利也描述了R1為乙烯基，碳原子1和2之間為單鍵，Ra和Rb為H，且T為-CH2-β，D-吡喃木糖基的式I化合物。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)b的式I化合物在美國(guó)專利4 129 721中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)c的式I化合物在美國(guó)專利4 148 890中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)d的式I化合物在美國(guó)專利-3 919 290中描述，包括已經(jīng)特別提及幾次的泰妙菌素，其商品名為Tiamutin。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)e的式I化合物在歐洲專利0 153 277中描述，包括已經(jīng)特別提及幾次且也已經(jīng)從WO 98/01127中了解的萬(wàn)尼菌素。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)f的式I化合物在美國(guó)專利-4 428 953中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)g的式I化合物在美國(guó)專利-3 979 423中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)h的式I化合物在WO97/25309中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)I的式I化合物在WO01/14310中描述。
其中R1和A如式I所定義，T定義為基團(tuán)k的式I化合物在WO01/14310中描述。
可以理解，在這些參考文獻(xiàn)中特別提及的每個(gè)實(shí)施例均包括在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中。
文獻(xiàn)中公開(kāi)了一系列將藥物(包括泰妙菌素)加入動(dòng)物飼料的試驗(yàn)，但是這些試驗(yàn)不能解決本發(fā)明提出的技術(shù)問(wèn)題。如下簡(jiǎn)要討論一下某些參考資料歐洲專利0 165 577涉及含有鋅桿菌肽的飼料添加劑，當(dāng)與飼料混合后或制粒時(shí)，鋅桿菌肽增強(qiáng)了穩(wěn)定性并可能延長(zhǎng)存放時(shí)間。通過(guò)給含有鋅桿菌肽的飼料添加劑提供聚合包衣使穩(wěn)定性獲得改進(jìn)，如多糖、聚丙烯酸鹽、脂肪、脂肪類化合物或石蠟被用作鋅桿菌肽的聚合包衣。
1991.04.26的Derwent Publication XP002197610[JP 03 101619 ASDS BIOTECH CORP]涉及一種由沸石載體和泰妙菌素組成的無(wú)苦味的顆粒形式的獸藥。
1988.02.13的Derwent Publication XP002198060[JP 63 033330 ANIPPON KAYAKU KK]涉及泰妙菌素的口服抗菌藥給藥形式，以聚丙烯酸鈉為基礎(chǔ)，可使活性成分吸收量增強(qiáng)。給藥形式包括粉末，其也可壓制成顆?；蚱瑒┎⑴c動(dòng)物飼料混合。
歐洲專利0 707 798描述了含有藥用活性物質(zhì)的飼料的制備方法。該方法的特征在于，將藥用活性物質(zhì)單獨(dú)或以在適當(dāng)?shù)纳w倫凝膠形式的制劑中的混合物以可噴霧凝膠形式噴霧于以物理方法制備的飼料上。
歐洲專利申請(qǐng)EP-0 658 313描述了由芯和包衣制備的顆粒。芯由如植物的有機(jī)物質(zhì)或者無(wú)機(jī)物質(zhì)制備而成，且直徑為100-800μ。包衣由含有活性成分的水溶性聚合物制備而成，其中的聚合物可溶于水、尤其胃液。將活性成分摻入包衣內(nèi)或與其粘附。在生產(chǎn)過(guò)程中，首先制備芯。芯的表面用酸處理，然后噴上活性成分的水溶液。目的是制備能夠毫無(wú)困難地與動(dòng)物飼料混合的細(xì)顆粒。但是，與本發(fā)明相反，在該參考文獻(xiàn)中所描述的顆粒不能使活性成分具有顯著的穩(wěn)定性，因此不適合于含有截短側(cè)耳素衍生物的動(dòng)物飼料粒的制備。不僅如此，還與本發(fā)明不同的是，活性成分在胃內(nèi)釋放。
申請(qǐng)人現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，可通過(guò)已知的方法將截短側(cè)耳素衍生物包于微球中；可將這些微球摻入干動(dòng)物飼料中并在高溫高壓下壓制成飼料粒，隨后烘干，而無(wú)現(xiàn)有技術(shù)中的不可避免的活性物質(zhì)的損失。而且，新獲得的飼料粒中活性物質(zhì)具有很高的穩(wěn)定性，所以最終飼料的貯存穩(wěn)定性極高。在室溫下，這種飼料?？沙掷m(xù)存放幾個(gè)月，也就是說(shuō)，活性成分的含量基本上是不變的。
微球中所包含的活性物質(zhì)不僅使穩(wěn)定性有了不曾預(yù)料的提高，而且與純活性物質(zhì)的相比，更有利于微球不形成粉塵，不形成團(tuán)塊，具有顯著的流動(dòng)性并保護(hù)活性物質(zhì)免于不必要的外界影響。因此，例如可避免在操作中無(wú)意間吸入或接觸皮膚和眼睛。由于活性物質(zhì)包含于微球內(nèi)，所以，萬(wàn)一人誤服用了，可簡(jiǎn)單安全地處理而不需要采用特別的防護(hù)措施。因?yàn)槲⑶蚧旧蠈?duì)設(shè)備的表面不具有粘合性，并且既不形成團(tuán)塊或硬結(jié)也不以任何方式粘結(jié)，所以在飼料生產(chǎn)廠中，可以毫無(wú)技術(shù)困難地清洗所用的設(shè)備；簡(jiǎn)單的真空清洗通常足夠了。
而且，使用這些微球還具有另外的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)口服給予抗生素時(shí)，在敏感病人中發(fā)現(xiàn)治療過(guò)程加重了食欲衰退。那么醫(yī)生可以根據(jù)情況的嚴(yán)重程度，換成其他的不通過(guò)胃的給藥形式，如針劑或栓劑。在動(dòng)物中，在個(gè)別情況下發(fā)現(xiàn)了相同現(xiàn)象。食欲衰退表現(xiàn)為拒絕吃足夠量的飼料。而且，飼料的代謝較差，也不出現(xiàn)所希望的體重增加。因?yàn)檫@些動(dòng)物吃的飼料更少，所以，口服治療也無(wú)效。對(duì)于動(dòng)物，也不能選擇變換成栓劑，而且針劑具有上述的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的就是要解決這些問(wèn)題。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)口服應(yīng)用微球時(shí)，未發(fā)現(xiàn)所說(shuō)的過(guò)敏及伴發(fā)的拒絕進(jìn)食，因此推測(cè)與微球的基質(zhì)的抗酸性有關(guān)。
生物利用率的研究顯示，微球可以完好無(wú)損的通過(guò)胃，活性成分僅在堿性環(huán)境的腸腔內(nèi)釋放。在小豬中進(jìn)行下列對(duì)比飼料試驗(yàn)用a)含有游離的鹽酸萬(wàn)尼菌素的飼料?；蛘呱逃玫腅CONOR進(jìn)行，以及用b)根據(jù)實(shí)施例2所制備的飼料粒進(jìn)行，該飼料粒在微球中包裹有鹽酸萬(wàn)尼菌素，每小時(shí)抽取試驗(yàn)動(dòng)物的血樣并測(cè)定血漿內(nèi)萬(wàn)尼菌素的濃度，發(fā)現(xiàn)在a)的情況下，在給藥2-3小時(shí)后，活性成分的濃度迅速升高達(dá)到最高值。8-10小時(shí)后，曲線開(kāi)始回落并接近零。在用微球進(jìn)行處理的b)情況下，延遲約1-2小時(shí)后活性成分的濃度開(kāi)始增加，約3-4小時(shí)后達(dá)到最大值，約10-12小時(shí)后開(kāi)始回落至零。因此，盡管在b)情況下達(dá)到有效血漿濃度的時(shí)間稍微延遲，但是，這對(duì)治療并沒(méi)有不利影響。這種新的方法產(chǎn)生了有價(jià)值的給藥方式，該給藥方式對(duì)胃無(wú)刺激并且使口服治療更有效。如果需要，通過(guò)添加如碳酸氫鈉的添加劑，可使本發(fā)明的微球在胃的酸性環(huán)境中溶解并釋放活性物質(zhì)。然而，在多數(shù)情況下是不需要的。
在本發(fā)明的上下文中，微球可以理解為直徑微小、絕大部分的微粒平均大小約為1-5000μm的球形聚合基質(zhì)顆粒，通常為50-3000μm。截短側(cè)耳素衍生物包含于其中。因此，它們是極小的球體，其中包括緊密的聚合基質(zhì)，而所述活性成分以固體或液體形式高度分散于該結(jié)合基質(zhì)中，而不僅僅是被包衣。也可能描述為一種特殊的包囊形式。
本發(fā)明中制備微球的方法本身是已知的；同樣，用于制備膠囊的原料和所用的截短側(cè)耳素衍生物也是已知的。然而，以該種方式制備微球則是首創(chuàng)，因此，含有這些微球的飼料粒及其在動(dòng)物中抗感染性疾病的口服用法都是新的。
微球的制備可以以類似于如下提及的文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行Shigeru Goto等，Journal of Microencapsulation，1986，第3卷，第4期，第293-305頁(yè)；Shigeru Goto等，Journal of Microencapsulation，1986，第3卷，第4期，第305-316頁(yè)或者美國(guó)專利3 714 065(相應(yīng)于DE-2 105 039)。
本發(fā)明在微球的制備或截短側(cè)耳素的口服應(yīng)用方面涉及較少，而本發(fā)明的重點(diǎn)在新的飼料粒，該飼料粒含有在微球中穩(wěn)定存在的截短側(cè)耳素衍生物，因此在制備或儲(chǔ)存中無(wú)明顯的活性成分的喪失。本發(fā)明在于使飼料粒中的活性成分穩(wěn)定。本發(fā)明試圖幫助所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員解決現(xiàn)存的技術(shù)問(wèn)題，為其提供可在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)儲(chǔ)存含有截短側(cè)耳素的飼料粒并將這些飼料粒給予家庭養(yǎng)殖及生產(chǎn)性家畜的方法，同時(shí)不需要大量的人員、時(shí)間和后勤。最后，不僅在實(shí)踐中節(jié)省時(shí)間和金錢而且十分明顯地增加了安全性和可靠性。
在由有機(jī)相或有機(jī)-水相(第一相)和油相(第二相)組成的雙相系中，可以方便地制備微球。有機(jī)或有機(jī)-水相由適于形成微球的聚合成分的溶液或分散液、溶劑和待包裹的截短側(cè)耳素衍生物組成。油相為在適當(dāng)油中分散的單硬脂酸鋁、二硬脂酸鋁、三硬脂酸鋁、硬脂酸鈉、硬脂酸鈣或硬脂酸鎂的分散液，所述適當(dāng)?shù)挠蛢?yōu)選為液體石蠟或硅油。另外，也可用非離子性的，如失水三梨糖醇單油酸脂(Span-80)的分散劑或乳化劑。油相體積最好大于有機(jī)相體積幾倍。通過(guò)強(qiáng)勁的攪拌使兩相充分混合，甚至可在高壓或靜態(tài)攪拌器的幫助下達(dá)到均化。在此過(guò)程中形成微小的聚合微粒。微球中包含高分散形式的活性成分，且微球在反應(yīng)混合物中不溶解，所以可通過(guò)潷析或過(guò)濾分離、洗滌及干燥。
兩相的攪拌對(duì)于形成微球也很重要。通常而言，可使用具有螺旋槳形狀的攪拌棒的攪拌裝置，轉(zhuǎn)速至少約為100-1500rpm，以保證兩相間充分的混合并迅速形成微球。當(dāng)然，也可使用靜態(tài)混合器。
制備微球的詳細(xì)步驟如下(a)制備適于形成微球的聚合物溶液，聚合物選自紫膠和以纖維素、丙烯酸或甲基丙烯酸、馬來(lái)酐、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇為基礎(chǔ)的聚合物，這可通過(guò)在對(duì)石蠟油或硅油有低親和力且介電常數(shù)約為10-40的有機(jī)溶劑中溶解紫膠或聚合物進(jìn)行，適當(dāng)時(shí)，可加水；(b)在攪拌下將截短側(cè)耳素衍生物摻入到紫膠或聚合物溶液中，形成不與石蠟油或硅油相混溶的第一相有機(jī)相；(c)在強(qiáng)勁攪拌(如使用靜態(tài)攪拌器或高壓均化器)下，將第一相摻入第二相(由石蠟油或硅油組成的油相)，并繼續(xù)攪拌所得混合物直到溶劑蒸發(fā)或去除后形成含有截短側(cè)耳素衍生物的微球；(d)分離，并且如果適合，可洗滌和干燥微球。
在制藥工業(yè)中，紫膠被熟知，可用于制備天然味的糖衣片劑的糖衣。
對(duì)纖維素基的聚合物來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)脑蠟橐宜徉彵蕉姿崂w維素或N，N-二-正丁基羥基丙基醚乙酸纖維素。
丙烯酸或甲基丙烯酸基的聚合物所用的原料為如甲基丙烯酸酯/甲基丙烯酸共聚物、2-甲基-5-乙烯基-吡啶/甲基丙烯酸酯/甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯/甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯/馬來(lái)酐共聚物或者甲基丙烯酸甲酯/馬來(lái)酐共聚物。
對(duì)馬來(lái)酐基的聚合物來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)脑蠟橐蚁┘谆?馬來(lái)酐共聚物或者苯乙烯/馬來(lái)酐共聚物。在本發(fā)明的上下文中，特別優(yōu)選丙烯酸或甲基丙烯酸基的聚合物作為微球的外殼。最好使用商用產(chǎn)品進(jìn)行制備。這些產(chǎn)品為丙烯酸和丙烯酸酯聚合的產(chǎn)物，其中含有少量季銨基團(tuán)。來(lái)自德國(guó)Darmstadt的Rhm的EudragitE、L或S的商業(yè)產(chǎn)品非常適合。EudragitE是甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯及中性的甲基丙烯酸酯的陽(yáng)離子型聚合物。EudragitL和S是甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的陰離子型聚合物。
對(duì)聚乙烯吡咯烷酮基的聚合物來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)脑蠟榫垡蚁┻量┩橥?br> 對(duì)聚乙烯醇基的聚合物來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)脑蠟榫垡蚁┐急旧怼?br> 使用相當(dāng)大量的油相，使有機(jī)相/油相的體積比約為1/20-5/10。
通常而言，在室溫或略高的溫度下即約20℃-45℃溫度下進(jìn)行操作。然而，室溫是完全足夠的。
對(duì)第一相有機(jī)相來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑為與油相盡可能不相混溶且易揮發(fā)的溶劑。這些溶劑的介電常數(shù)在10-40為最適合。在下表中示例了許多這種溶劑。
溶劑 介電常數(shù)溶劑介電常數(shù)甲醇 32.6苯酚9.8乙醇 24.3丙酮20.7
異丙醇 18.7 乙酸9.7丁醇 17.1 酸酐20.7苯甲醇 13.1 硝基甲烷35.9乙二醇 37.7 乙二胺 14.2丙二醇 35.0 酸溶纖劑16可用單一溶劑或這些溶劑的混合物，如丙酮-乙醇混合物(1∶1)。加入少量的水可達(dá)到較佳效果，即約1-5份體積的水配10-50份體積的有機(jī)溶劑。優(yōu)選丙酮-水混合物(約30∶1)。
已經(jīng)證實(shí)，在使用前向第二相(油相)中加入單硬脂酸鋁、二硬脂酸鋁或優(yōu)選三硬脂酸鋁、硬脂酸鈉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或其他如失水三梨糖醇單油酸脂(Span-80)非離子型的乳化劑或分散劑是有利的，強(qiáng)勁攪拌使分散液均勻。這種添加方式尤其促進(jìn)了大小均勻的微球的快速形成。結(jié)果所形成的微球預(yù)防了在制備過(guò)程中彼此的聚結(jié)。當(dāng)含有聚合物的截短側(cè)耳素衍生物的第一相由丙酮-水混合物制備而成并且在800-1000rpm的轉(zhuǎn)速攪拌下將兩相混合時(shí)，那么可得到50-1000μm大小均勻的微球。截短側(cè)耳素和硬脂酸鹽的重量比優(yōu)選為0.5/1-10/1，更優(yōu)選約1∶1。
可用乙醚、石油醚或正己烷、甲基環(huán)戊烷或者優(yōu)選環(huán)己烷洗滌微球。在真空、室溫下極其溫和地去除溶劑。不言而喻，溶劑去除后剩余物應(yīng)盡可能地低。
通過(guò)上述方法所獲得的微球有相對(duì)堅(jiān)固的聚合外殼。為了獲得較大的柔軟性，可向有機(jī)相內(nèi)加入約3-10％的增塑劑，基于聚合物重量計(jì)。適當(dāng)?shù)脑鏊軇槿拙?；乙酰化的單甘油酯；甘油；如PEG400或PEG600的聚乙二醇；如鄰苯二甲酸二乙酯或鄰苯二甲酸二丁酯的鄰苯二甲酸酯；如檸檬酸三乙酯、檸檬酸乙酰三乙酯、檸檬酸三丁酯或檸檬酸乙酰三丁酯的檸檬酸酯；以及如蓖麻油、菜籽油或葵花籽油的植物油?？墒褂眉s4-10％的檸檬酸三乙酯。然而，通常不必添加增塑劑，因?yàn)橐寻l(fā)現(xiàn)增塑劑的比例越高，最終飼料粒的貯存穩(wěn)定性越差。因此，增塑劑的添加在穩(wěn)定性的改善上起反作用，但也不意味著，不能加入增塑劑，尤其是相對(duì)少量的增塑劑。增塑劑降低了玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。所以，根據(jù)本發(fā)明人的經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)玻璃化轉(zhuǎn)變溫度低于約100-150℃時(shí)，在飼料粒的制備中活性成分不再受到保護(hù)。
經(jīng)常由飼料廠生產(chǎn)飼料粒。通常以粉狀谷物為基質(zhì)。在此基質(zhì)中，加入如油和植物以及動(dòng)物蛋白的額外成分。所有成分在研磨或混合設(shè)備中充分混合，用水噴灑或蒸汽處理并且在高溫下通過(guò)直徑約2-15mm的圓形噴嘴擠壓，即壓制。在壓制過(guò)程中，濕潤(rùn)原料被壓實(shí)，且以相對(duì)硬的棒狀形式離開(kāi)噴嘴，在噴嘴出口處用切割裝置切成所需要長(zhǎng)度的塊，如約5-25mm長(zhǎng)度。獲得的還是溫?zé)岬娘暳狭Ｔ诒贿\(yùn)輸走的過(guò)程中在空氣中干燥，或者放到傳送帶上通過(guò)加熱室在約80-120℃下干燥。制成的飼料粒為棒狀或圓柱狀；它們有相對(duì)光滑的表面并易于傾倒而無(wú)破碎或粉塵形成。它們通常的密度約為1.2g/cm3。
通常，根據(jù)本發(fā)明，制備穩(wěn)定化的飼料粒的方法并不與不添加藥物的常用飼料粒的制備方法完全相同。但是，不管是何種方法，在壓制過(guò)程前均需將微球和粉末狀均化的有機(jī)飼料成分充分混合在一起，用約5-10％重量的水或蒸汽濕潤(rùn)并在約60-80℃(優(yōu)選65-75℃)的高溫下壓制成飼料粒。當(dāng)飼料粒首先和相對(duì)小部分的其余飼料成分充分混合后，由此獲得一個(gè)所謂的含有相當(dāng)大的比例的微球的預(yù)混合料時(shí)，則最有利于達(dá)到良好的均化作用。然后，將一部分預(yù)混合料與其余的飼料原料混合形成另外的混合物，在最后一步，將這部分混合物用另外的飼料原料稀釋成最終濃度。該稀釋使飼料粒內(nèi)包裹的活性成分分布特別均勻。
將飼料粒冷卻到室溫并且裝入紙袋或其他適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)貯存或運(yùn)送到最終的消費(fèi)者。無(wú)需特別的預(yù)防措施，因?yàn)轱暳狭ＹA存時(shí)非常穩(wěn)定并且所含有的活性成分在一層包衣中，從而防止了外界對(duì)活性成分的影響。無(wú)活性成分能夠成功地溢出這些貯存的飼料粒的外面。
在壓制成飼料粒的前后對(duì)活性成分的量的測(cè)定表明，使用造粒制備的微球令人驚奇地沒(méi)有導(dǎo)致任何可測(cè)得的活性成分的損失。
實(shí)施例的實(shí)施實(shí)施例1甲基丙烯酸樹(shù)脂包裹的鹽酸萬(wàn)尼菌素的制備成分 重量鹽酸萬(wàn)尼菌素(活性物質(zhì)) 12.5g賦形劑EudragitL 100* 37.5g單硬脂酸鋁 11.25g水 9.4g丙酮 303.1ml輕質(zhì)液體石蠟 1250ml總重 1351.94g*Eudragit是Rhm的商業(yè)產(chǎn)品。它由甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸(2-二甲基氨基乙基)酯和甲基丙烯酸甲酯共聚物制備而成。
步驟1在室溫、攪拌(800rpm/5分鐘/磁力攪拌器)下，在玻璃燒杯內(nèi)將Eudragit分散于100ml丙酮中。在相同條件下繼續(xù)攪拌分散液并加入水。10分鐘后，聚合物完全溶解。逐份加入本活性物質(zhì)萬(wàn)尼菌素同時(shí)繼續(xù)攪拌。再過(guò)10分鐘后，得到清澈的溶液。
步驟2在帶有3刃螺旋攪棒(1000rpm)的2升反應(yīng)器中，在室溫下將單硬脂酸鋁分散于輕質(zhì)液體石蠟中。10分鐘后分散液均勻。
步驟3在室溫下，將在步驟1中所獲得的溶液加入步驟2所獲得的分散液中，同時(shí)繼續(xù)攪拌(1000rpm)。在室溫下將所形成的乳液進(jìn)一步攪拌(800rpm)24小時(shí)。(或者，也可首先將乳液在1小時(shí)內(nèi)、在200mbar的壓力下加熱至40℃，然后維持2個(gè)小時(shí))。在兩種情況下，都形成包裹了活性物質(zhì)的微球，即由甲基丙烯酸樹(shù)脂制備而成的微球。
步驟4停止攪拌后，微球下沉到反應(yīng)器的底部，盡可能完全地倒出上層的石蠟和單硬脂酸鋁。用環(huán)己烷洗滌微球幾次(3次/瓷漏斗/織物過(guò)濾膜)并且在真空中去除過(guò)量的環(huán)己烷。
實(shí)施例2用于豬飼養(yǎng)的飼料粒的制備(小豬飼料)將80g的活性物質(zhì)(萬(wàn)尼菌素)加入3920g常用的粉末狀均質(zhì)的小豬干飼料中并用螺旋攪拌器充分混合。通過(guò)這種方法得到4000g的預(yù)混合料。在100升螺旋混合器中將4000g的預(yù)混合料加入到另外的36kg常用的粉末狀均質(zhì)的小豬干飼料中，以同樣方式充分混合。然后，將所得到的40kg的部分混合物混合入另外的360kg常用的粉末狀均質(zhì)的小豬干飼料中，轉(zhuǎn)入擠壓機(jī)中并在68-72℃、10-100kbar壓力下壓制成約10mm長(zhǎng)、6mm寬的棒狀飼料粒。在壓制過(guò)程中，使用蒸汽(2bar，136℃)。在擠壓機(jī)加熱部分的保留時(shí)間約為75秒。將制成的粒以每袋25kg裝入各袋內(nèi)。
實(shí)施例3由游離活性成分、商用包衣的活性成分或者微球包裹活性成分組成的飼料混合物的穩(wěn)定性試驗(yàn)根據(jù)制備實(shí)施例2，將不同預(yù)處理但相同含量的活性成分制備三種小豬飼料粒A、B和C。A型飼料粒包括商用ECONOR50％(活性成分為萬(wàn)尼菌素)，其活性成分用羥丙基甲基纖維素(HPMC)包裹。B型飼料粒包括單一活性成分鹽酸萬(wàn)尼菌素，C型飼料粒包括根據(jù)制備實(shí)施例1所制備的含有鹽酸萬(wàn)尼菌素的微球。
對(duì)于穩(wěn)定性的測(cè)定，依照制備實(shí)施例2制備三種飼料粒，并在制備完成后立即取出第一批樣品，每種各50g。取A型樣品、B型的樣品各9個(gè)，對(duì)于C型需制備三種不同批次的飼料粒，彼此在飼料原料的成分上稍微不同。同樣，從每個(gè)批次中取9個(gè)樣品。立即檢驗(yàn)所有樣品并通過(guò)分析確定未降解的萬(wàn)尼菌素的含量。將剩余飼料粒等分為兩份，轉(zhuǎn)入兩個(gè)氣候變化的箱內(nèi)用于長(zhǎng)期研究。箱(I)為25℃，相對(duì)濕度為60％，模擬室溫下的正常貯存。箱(II)為40℃高溫，75％高的相對(duì)濕度，模擬長(zhǎng)期貯存的情況。
以一個(gè)月的間隔，從每個(gè)箱室中的每個(gè)型號(hào)和批次的飼料粒中取出3個(gè)各50g的樣品，并測(cè)定未降解的萬(wàn)尼菌素的含量。
如下表1和2列出不同氣候條件下所測(cè)定的平均值及其標(biāo)準(zhǔn)差。
表125℃/相對(duì)濕度60％數(shù)據(jù)[萬(wàn)尼菌素％/(標(biāo)準(zhǔn)差)]
表240℃/相對(duì)濕度75％數(shù)據(jù)[萬(wàn)尼菌素％/(標(biāo)準(zhǔn)差)]
上表十分清楚地表明，存在于A、B和C型飼料粒中的萬(wàn)尼菌素的穩(wěn)定性是不同的。純?nèi)f尼菌素(B型)明顯地降解最快，且在造粒過(guò)程中已經(jīng)損失約21％。在通常的室溫下兩個(gè)月后，B型中的萬(wàn)尼菌素含量降至少于50％，且在40℃高溫下甚至降至少于20％。A型用HPMC對(duì)萬(wàn)尼菌素進(jìn)行包衣，萬(wàn)尼菌素的降解確實(shí)少一些，但是依然相當(dāng)大。在造粒過(guò)程中1％的活性成分的損失可以忽視，但是，在25℃下貯存兩個(gè)月后，則造成約30％的顯著損失，在40℃下甚至達(dá)到約76％。相反，活性成分包含于微球中的C型飼料粒的活性成分損失明顯減少。在25℃下兩個(gè)月后，僅損失約1％，在40℃高溫下僅損失約11％。在C型的情況下甚至6個(gè)月后，幾乎80％的活性成分依然存在，而在另兩種情況下活性成分的含量降至10％以下。
人們無(wú)法預(yù)料飼料粒中的活性成分的穩(wěn)定性顯著增加，尤其是因?yàn)樵谖磯褐频娘暳现袚饺胛⑶虿⒉荒墚a(chǎn)生任何穩(wěn)定作用。在未壓制的飼料中，未保護(hù)的萬(wàn)尼菌素和微球內(nèi)萬(wàn)尼菌素表現(xiàn)形式完全相同且損失完全相同。
備注在本申請(qǐng)?zhí)峤粫r(shí)，上述試驗(yàn)仍在進(jìn)行中；另外的數(shù)據(jù)將在未來(lái)幾個(gè)月得到。
權(quán)利要求
1.穩(wěn)定的下式I的截短側(cè)耳素衍生物， 其中R1是乙基或乙烯基，在碳原子1和2之間或者為雙鍵或者為單鍵，Ra和Rb相互獨(dú)立，分別為氫或鹵素，且T為短鏈或長(zhǎng)鏈的有機(jī)基團(tuán)；其中式I化合物包裹在微球內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中在式I中R1為乙基或乙烯基；(A)碳原子1和2之間為單鍵，Ra和Rb為H，T為如下a-i基團(tuán)中任意一個(gè)a)-CH2-OH； c)-(CH2-X)m-(CH2)n-N(R2)(R3)，其中X為-O-、-S-、-NH-或 m為0或1；n為2-5的整數(shù)；R2和R3相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基，或者與它們所連接的氮原子一起形成含有-S-、-O-或-N(R4)-的雜部分的五元或六元雜環(huán)，在-N(R4)中，R4為C1-6烷基或C1-6羥烷基，且Y和Z相互獨(dú)立，分別為-O-或-S-；d)-CH2-S-(CH2)k-N(R5)(R6)，其中k為2-5的整數(shù)；R5和R6相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基；e)-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基或者為飽和的含有一個(gè)或兩個(gè)選自-S-和-NH-的雜原子的五元雜環(huán)；f)-CH2-S-C(CH2)l-R8，其中l(wèi)為0或1，且R8為 其中K為H、C1-6烷基磺?；?NH2、-CHO、-N(R9)(R10)、-S-(CH2)q-N(R9)(R10)或-C(G)-NHR11，G為氧或硫，R9和R10相互獨(dú)立，分別為H、C1-6烷基、C1-6烷基磺?；籆1-6羥烷基、C1-6二羥烷基，未取代的或C1-6烷基磺?；〈腃1-6烷?；?；或R9和R10與它們所連接的氮原子一起形成未取代的或取代的哌嗪基，其中第二個(gè)氮原子可由選自C1-6烷基、C1-6羥烷基和C1-6二羥烷基的取代基取代；R11為C1-6烷基或C1-6烷基羰基；Q為H、-NH2、-CF3、C1-6烷基、吡啶基或-N(R9)(R10)，R9和R10如上所述；g)-CH3、-CH2Cl、CH2Br、-CH2SCN、-CH2-NH2、-CH2-N3、-CO-OH、-CH2-OCOCH3或 h)-N(R15)(R16)，其中R15和R16相同或不同，選自H，未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基；未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)；未取代或取代的雜環(huán)；以及未取代或取代的芳基基團(tuán)；或者R15和R16與它們所連接的氮原子一起形成一個(gè)不含有其他雜原子或含有選自-N-、-O-和-S-的雜原子的三元至八元環(huán)；或者R15為上述基團(tuán)之一，且R16為-SO2R17、-C(O)R18、-O-R19或N(R19)(R20)；R17選自未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)，未取代或取代的芳基基團(tuán)，未取代或取代的C1-6烷基氨基基團(tuán)以及未取代或取代的芳基氨基基團(tuán)；R18選自H，未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)以及未取代或取代的芳基基團(tuán)；R19和R20相同或不同，選自未取代或取代的直鏈或支鏈飽和或未飽和的C1-6烴基基團(tuán)，未取代或取代的飽和或未飽和的C3-8環(huán)烷基基團(tuán)，未取代或取代的雜環(huán)以及未取代或取代的芳基基團(tuán)，或者R19和R20與它們所連接的氮原子一起形成一個(gè)任選還含有選自-N-、-O-和-S-的雜原子的三元至八元環(huán)狀基團(tuán)；(B)碳原子1和2之間為雙鍵，且Ra和Rb為H，T為如下基團(tuán)ii)-CH2-CO-R12，其中R12為未取代或取代的含氮的五元或六元雜環(huán)，未取代或取代的芳基基團(tuán)或-CH2-R13基團(tuán)，其中R13為鹵素或-SR14，且R14為氨基-C1-6烷基，或者為未取代或取代的含氮的五元或六元雜環(huán)或者未取代或取代的芳基基團(tuán)，上述雜環(huán)或芳基基團(tuán)的取代基為1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)OH、CN、NO2、N3、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、二-N-C1-6烷基氨基、C1-6?；被1-6?；驶被1-6酰氧基、C1-6氨基甲酰基、一-N-和二-N-C1-6烷基氨基甲?；?、C1-6酸基羰基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基亞硫酰基和苯甲基；(C)碳原子1和2之間為單鍵，Ra為H、OH或F，且Rb為H；或者Ra為H且Rb為F，T為如下基團(tuán)kk)-CH2-CO-R12，其中R12如基團(tuán)i中所定義。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基，碳原子1和2之間為單鍵，且Ra和Rb為H或鹵素，T如式I中所定義。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-(CH2)k-N(R5)(R6)，其中k為2-5的整數(shù)；且R5和R6相互獨(dú)立，分別為C1-6烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，其中T為-CH2-S-(CH2)2-N(C2H5)(C2H5)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基或者飽和的含有選自-S-和-NH-的一個(gè)或兩個(gè)雜原子的五元雜環(huán)；包括生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及其季銨鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-R7，其中R7為-NH2取代的C1-6烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，包括其生理學(xué)上可接受的酸加成鹽及季銨鹽，其中R1為乙烯基；碳原子1和2之間為單鍵；Ra和Rb為H，且T為-CH2-S-C(CH3)2-CH2-NH-C(O)-CH(NH2)-CH(CH3)2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)的包裹在微球內(nèi)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，其中微球由適于形成微球的聚合物組成，所述聚合物選自紫膠和纖維素、丙烯酸或甲基丙烯酸、馬來(lái)酐、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇基的聚合物。
10.制備權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的含有截短側(cè)耳素衍生物的微球的方法，該方法包括(a)制備適于形成微球的基質(zhì)的聚合物溶液，所述聚合物選自紫膠和以纖維素、丙烯酸或甲基丙烯酸、馬來(lái)酐、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇為基礎(chǔ)的聚合物，這是通過(guò)在對(duì)石蠟油或硅油有低親和力且介電常數(shù)為約10-約40的有機(jī)溶劑中溶解紫膠或聚合物來(lái)進(jìn)行的，適當(dāng)時(shí)加水；(b)在攪拌下將截短側(cè)耳素衍生物摻入到紫膠或聚合物溶液中，形成與石蠟油或硅油不混溶的第一相有機(jī)相；(c)在強(qiáng)勁攪拌下將第一相摻入由石蠟油或硅油組成的第二相油相中，并繼續(xù)攪拌所得混合物直到溶劑蒸發(fā)或去除后形成含有截短側(cè)耳素衍生物的微球；(d)分離，并且如果適合，洗滌和干燥微球。
11.動(dòng)物飼料粒，該飼料粒除包括粉末狀的干植物和/或動(dòng)物基的飼料外，還包括根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的有效量的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物，并且加入或不加入添加劑，如蛋白、維生素和礦物質(zhì)。
12.用于治療家養(yǎng)動(dòng)物和生產(chǎn)性家畜的感染性疾病的方法中的根據(jù)權(quán)利要求11的動(dòng)物飼料粒。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的包裹在微球中的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物在制備用于治療家養(yǎng)動(dòng)物和生產(chǎn)性家畜的感染性疾病的動(dòng)物飼料粒中的用途。
14.制備含有根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物的動(dòng)物飼料粒的制備方法，該方法包括將根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的微球形式的穩(wěn)定的截短側(cè)耳素衍生物與粉末狀均化的有機(jī)飼料成分充分混合，用約5％-10％重量的水或蒸汽濕潤(rùn)并且在約60℃-80℃的高溫下壓制成棒狀，并將這些棒分成飼料粒。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)動(dòng)物飼料粒，該粒包括作為抗生素的穩(wěn)定形式即微球形式的截短側(cè)耳素衍生物。所述截短側(cè)耳素衍生物具有通式I，其中R1是乙基或乙烯基，在碳原子1和2之間或者為雙鍵或者為單鍵，Ra和Rb相互獨(dú)立，分別為氫或鹵素，且T為短鏈或長(zhǎng)鏈的有機(jī)基團(tuán)。
文檔編號(hào)A61K47/32GK1592608SQ02823305
公開(kāi)日2005年3月9日 申請(qǐng)日期2002年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月28日
發(fā)明者S·C·威蘭-貝格豪森, F·J·拉克齊, B·M·克龍－埃克哈特 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司