專利名稱：降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(hdl)和低密度脂蛋白(ldl ...的制作方法
技術領域：
本發明涉及治療或者預防動物，尤其是人的心血管疾病及其基礎病(underlying condition)的方法，所述心血管疾病及其基礎病包括動脈粥樣硬化，脂血異常疾病或者失調。
背景技術：
雖然近年來科學技術的進步促進了人生命質量的提高和人壽命的延長，但是動脈粥樣硬化的預防還是沒有充分解決，所述動脈粥樣硬化是心血管疾病(“CVD”)的根本原因。動脈粥樣硬化是一種衰退過程，源于遺傳(基因)因素和諸如飲食和生活方式的環境因素的相互影響。到目前為止的研究顯示，通過在血管中形成動脈粥樣斑塊，根據斑塊在動脈樹中的位置，最終阻斷對心肌的血液供應或者對腦或四肢的血液供應，膽固醇可能在動脈粥樣硬化中起作用(1，2)。有關綜述顯示個體總血清膽固醇降低1％使冠狀動脈事件的危險性降低2％(3)。統計上，在美國，平均血清膽固醇減少10％(例如，從6.0mmol/L到5.3mmol/L)每年可以防止100,000人的死亡(4)。因此，與總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的高濃度相關的高脂血癥是重要的危險因素。
研究也顯示高密度脂蛋白(HDL)膽固醇的低血漿濃度是動脈粥樣硬化進展的重要危險因素(5)，而高水平具有保護性。
脂蛋白是脂類和蛋白的復合物，由非共價鍵保持彼此結合。每種類型的脂蛋白具有特征性的質量，化學組成，密度和生理作用。不管密度或顆粒大小是多少，循環脂類由膽固醇酯和甘油三酯的核心與磷脂、游離膽固醇和載脂蛋白的包膜組成。載脂蛋白參與脂蛋白的裝配和分泌，提供結構完整性，激活脂蛋白修飾的酶，并且是大量受體和膜蛋白的配體。在血漿中發現的脂蛋白類型包括HDL、LDL、中密度脂蛋白(IDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)。
每種類型的脂蛋白具有特征性的載脂蛋白的組成或比例。HDL中最主要的載脂蛋白是載脂蛋白-AI(apo-AI)，其占蛋白質量的大約70％，apo-AII占另外的20％。apo-AI和apo-AII的比例可以確定HDL的功能和抗粥樣化的特征。循環HDL顆粒由具有200到400千道爾頓分子量和7到10nm直徑的盤狀和球形顆粒的非均勻組合物組成。
HDL是一種主要類型的脂蛋白，所述脂蛋白用于轉運血漿中的脂類，而且HDL在機體內具有多種功能，包括膽固醇逆轉運、提供膽汁酸合成的膽固醇分子底物、轉運凝集素(clusterin)、轉運對氧磷酶(paraoxonase)、防止脂蛋白氧化以及由腎上腺細胞選擇性攝取膽固醇。與HDL相關的主要脂類包括膽固醇，膽固醇酯，甘油三酯，磷脂和脂肪酸。
為了更好地理解HDL是如何抗粥樣化的，簡要解釋一下動脈粥樣硬化的過程是必要的。動脈粥樣硬化的過程開始于LDL被捕捉在血管壁內。這種LDL的氧化引起單核細胞和被覆血管壁的內皮細胞的結合。這些單核細胞被激活并且遷移到內皮間隙，在內皮間隙單核細胞轉化成巨噬細胞從而導致LDL的進一步氧化。氧化的LDL被在巨噬細胞上的清道夫受體吸收，引起泡沫細胞的形成。通過動脈平滑肌細胞的增殖和遷移產生纖維帽(fibrou cap)，因此產生動脈粥樣硬化斑塊。
HDL對于轉運肝以外組織的膽固醇到肝是非常重要的，在肝中膽固醇以游離膽固醇的形式或者以膽汁酸的形式分泌到膽汁中，所述膽汁酸是由膽固醇形成的。這個過程需要幾個步驟。第一步是在肝臟和腸中形成新生的或者前-βHDL顆粒。多余的膽固醇經由ABCAI轉運蛋白的作用遷移穿過細胞膜進入新生的HDL中。卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)將膽固醇轉化為膽固醇酯，隨后將新生的HDL轉化為成熟的HDL。然后，酯化的膽固醇由膽固醇酯轉移蛋白(CETP)從HDL轉移到含有載脂蛋白-B的脂蛋白，所述脂蛋白被肝臟中的大量受體吸收。1新生的HDL由肝甘油三酯脂肪酶和磷脂轉移蛋白再生，并且繼續這個循環。除了從周圍細胞除去的膽固醇，HDL還接受來自LDL和紅細胞膜的膽固醇。其它膽固醇逆轉運的機制可以包括在缺乏膽固醇的膜和HDL或者其它受體分子之間被動擴散膽固醇。
HDL不僅通過其膽固醇逆轉運的作用還可能通過阻止LDL氧化的方式預防動脈粥樣硬化的發展。幾種HDL-相關的酶參與這個過程。對氧磷酶(PON1)，LCAT和血小板活化因子乙酰水解酶(PAFAH)都通過水解在LDL氧化過程中生成的磷脂氫過氧化物參與這個過程，并且協同作用以預防氧化的脂類在LDL中的聚集。這些酶使HDL具有抗氧化和抗炎特性。
CETP是由肝臟和脂肪組織分泌的一種血漿脂轉移蛋白，其介導中性脂類和磷脂的轉移和交換(6)。CETP與VLDL、IDL和LDL的甘油三酯交換HDL的膽固醇酯。因為這些脂蛋白的分解代謝比HDL快，所以CETP促進了HDL膽固醇酯的清除。這個過程引起HDL大小和蛋白含量的降低。因此，通過將膽固醇從外周移動回到肝進行處理，CETP無疑在膽固醇逆轉運中具有重要作用。
已證明，CETP的抑制可有效地調整血漿HDL/LDL的比例(7)，因為膽固醇酯從HDL到LDL的移動具有降低HDL的作用。這些作用的證據由本領域的很多技術人員描述(8，9，10)。其它的CETP抑制劑由研究者們詳細描述(11-19)。
此外，有很多專利和公布的申請公開了多種據說可用于抑制CETP作用的化合物。這些文獻包括美國專利5,519,001，其描述了一種來自狒狒Apo C-1的36個氨基酸的肽；WO公開物98/35937；歐洲專利申請796,846，其描述了2-芳基取代的吡啶；歐洲專利申請818,448，其描述了四氫哇啉衍生物；歐洲專利申請818,197，其描述了具有稠雜環的吡啶；PCT/US99/27946(公開物WO 00/38725)描述了一種包括已知的CETP抑制劑與回腸膽汁酸轉移抑制劑的聯合治療；美國專利5,932,587，其描述了雜環稠合的吡啶；美國專利5,948,435描述了大的脂質體。
上述的參考文獻顯示了目的在于發展安全有效的脂類調節化合物的持續的和正在進行的工作。本發明的一個目的就是消除或者緩解本領域已知的安全和有效性方面的缺點和不足。
發明概述本發明提供了一種用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL通過這種給藥方式進行控制。
本發明進一步包括用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白和低密度脂蛋白之間轉移的組合物，所述組合物包括一種或者多種具有下式的化合物
其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及這些結構的所有的鹽；以及藥用的或者食品級的載體。
本發明進一步提供了一種用于治療或者預防動物心血管疾病及其基礎病，包括動脈粥樣硬化，高血脂病，低α-脂蛋白血癥和高膽固醇血癥的方法，所述方法包括降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉移，所述降低通過給動物施用一種或者多種具有上述式的甾醇和/或甾烷醇(stanol)衍生物得以實現。
人們已經發現本發明的化合物可以令人驚奇地有效降低膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在HDL和LDL之間的轉移。尤其是，這樣引起血清HDL水平的升高。直到目前為止，還沒有人認識到這些化合物對于CETP-介導的膽固醇轉移的調節效果。本發明的目的就是提供一種優良的方法以在體內控制和調節周圍組織，細胞，膜和細胞外區域的脂類含量和組成。本發明的另一個目的是提供用于這種方法的化合物。
下面將更詳細地描述這些效果和其它主要優點。
本發明通過下列非限制性附圖進行說明，其中圖1是本發明的一種優選化合物的化學結構植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸(也指FM-VP4)及其鈉鹽；圖2顯示了在脫氧膽酸鹽，TP2或者FM-VP4(本發明的一種化合物)存在或者不存在的條件下，CETP介導的[3H]CE從LDL向HDL的轉移，其中CETP是純化的。數據顯示為平均值+/-標準偏差(n＝4)；與對照值相比，*p＞0.05；ND＝低于分析的可檢測范圍；圖3顯示了在脫氧膽酸鹽，TP2或者FM-VP4(本發明的一種化合物)存在或者不存在的條件下，CETP介導的[3H]CE從LDL向HDL的轉移，其中CETP來自人血漿來源。數據顯示為平均值+/-標準偏差(n＝4)；與對照值相比，*p＞0.05；ND＝低于分析的可檢測范圍；和圖4顯示了在高濃度的本發明的化合物(FM-VP4)存在的條件下，CETP介導的[3H]CE從LDL向HDL的轉移，并且比較了純化的和人血漿來源的CETP。數據顯示為平均值+/-標準偏差(n＝4)；與FM-VP4相比，*p＞0.05。
本發明的優選實施方案下列詳細描述的提供是為了幫助本領域技術人員實施本發明。然而，這種詳細描述不應該理解為過度的限制本發明的范圍。本領域的普通技術人員可以進行此處描述的這些實施方案的修改和改變，只要不背離本發明的精神和范圍。
根據本發明，提供了一種方法用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉移，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL通過這種給藥方式進行控制。
術語“治療有效的”目的在于鑒定化合物的給藥量，從而實現如下目的a)抑制CETP-介導的CE在HDL和LDL之間的轉移；以及因此b)提高HDL的水平；以及c)預防，降低，消除或者改善血脂異常癥或者失調；或者d)預防，降低，消除或者改善高膽固醇血癥，低α-脂蛋白血癥，中毒性休克綜合征或者動脈粥樣硬化損傷的發展；或者e)預防，降低，消除或者改善具有下列特征的任意狀況、疾病或者失調它們以血漿中缺乏HDL或者具有過量的LDL，VLDL，Lp(a)，β-VLDL，IDL或者剩余脂蛋白作為其基礎，或者因此而惡化。
在一種優選的方式中，所述方法進一步包括周期性分析血漿LDL水平(通過本領域已知的和廣泛采用的技術進行)以及調整待給藥化合物的量和/或濃度、或如果需要調整給藥方法的步驟。
利用本文描述的方法，血清HDL的水平得以提高，選自LDL，VLDL和IDL的致動脈粥樣化的脂蛋白的水平被有效控制。血漿脂蛋白的調解和控制可用于預防，降低，消除或者改善大量疾病和失調，所述疾病和失調包括但不限于心血管疾病及其基礎病，包括動脈粥樣硬化，血脂異常病或者失調，高膽固醇血癥，和低α-脂蛋白血癥，動脈粥樣硬化損傷和中毒性休克綜合征的發展。很多其它疾病也可通過本發明的方法得以改進，所述其它疾病以血漿中缺乏HDL或者具有過量的LDL，VLDL或者IDL作為其基礎，或者因此而惡化。
下面將更加詳細的描述化合物的成分。應該注意到，在整個公開中，術語“化合物”、“衍生物”、“結構”和“類似物”可以彼此互換應用以描述上述結構，所述結構與甾醇或者甾烷醇(stanol)以及抗壞血酸相連，并且已經發現可以有效抑制CETP-介導的CE在HDL和LDL之間的轉移。
甾醇/甾烷醇(stanol)此處所用的術語“甾醇”包括所有沒有限制的甾醇，例如谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇(包括二氫菜子甾醇)，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇(chalinosterol)，多孔甾醇(poriferasterol)，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經甾醇(nervisterol)，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇(stellasterol)，菠菜甾醇，軟骨甾醇(chondrillasterol)，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇(fecosterol)，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。術語“甾烷醇(stanol)”是指飽和的或者氫化的甾醇，包括所有的天然或者合成的形式及其衍生物，以及異構體。應該理解對于甾醇和甾烷醇(stanol)的修飾，即包括側鏈的修飾，也包括在本發明的范圍內。例如，本發明的范圍無疑包括24β-乙基膽甾烷醇(ethylchlostanol)，24-α-乙基-22-脫氫膽甾烷醇(dehydrochol)。也應該理解，當在整個說明書中出現疑問時，除非另有說明，術語“甾醇”包括甾醇及甾烷醇(stanol)。
根據本發明，用于形成衍生物的甾醇和甾烷醇(stanol)可以自多種天然來源。例如，它們可以得自植物(包括水生植物)油的加工過程，諸如玉米油和其它的植物油，麥芽油，大豆提取物，水稻提取物，米糠，菜籽油，向日葵油，芝麻油和魚(以及其它海產來源)油。它們也可來自真菌，例如麥角甾醇，或者動物，例如膽固醇。因此，本發明不限于任何一種甾醇來源。美國專利4,420,427講述了利用諸如甲醇的溶劑從植物油殘渣制備甾醇。或者，植物甾醇和植物甾烷醇(phytostanol)可以得自描述在美國專利5,770,749的松漿油瀝青或者松漿油皂、森林開發的副產物，所述文獻引入本文作為參考。
在一種優選的形式中，本發明的衍生物以天然來源或者合成的β-谷甾醇，菜油甾烷醇(campestanol)，谷甾烷醇(sitostanol)和菜油甾醇的形式形成，并且這樣形成的每種衍生物可以在以不同比例運送之前混合成組合物。在另一種優選的形式中，本發明的衍生物以天然來源的或者合成的谷甾烷醇(sitostanol)的形式或者以天然來源的或者合成的谷甾烷醇(sitostanol)的形式或者以天然來源的或者合成的菜油甾烷醇(campestanol)或者其混合物的形式形成。
在一種最優選的形式中，甾醇為其飽和的形式并且為谷甾烷醇(sitostanol)。
R2R2包括抗壞血酸或者其任意的衍生物。在本發明的范圍內實現的是制備一種新的結構或者化合物，其中甾醇或者甾烷醇(stanol)部分化學連接到抗壞血酸上。這種結合有益于并且加強了這種新的結構的兩個部分。原來溶解性較差的植物甾醇部分作為新衍生物的一部分，變得非常容易溶于水和非水介質，諸如油和脂肪中。因此，甾醇的給藥無需任何進一步改進以調整其運送就可進行。
R3R3可以是氫原子或者可以將母體化合物轉化為鹽。在選擇合適的鹽中最重要的考慮是，它們是可藥用的、保健的，或者可用于食品，飲料中。這樣的鹽必須具有可接受的陰離子或者陽離子。在本發明的范圍內，合適的酸加成鹽包括那些物質，其來自無機酸，諸如氫氯酸，氫溴酸，磷酸，偏磷酸，硝酸，磺酸和硫酸；以及有機酸，諸如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，檸檬酸，乙磺酸，富馬酸，葡糖酸，醛糖酸(glyconic)，羥基乙酸，異硫羰酸，乳酸，乳糖酸，馬來酸，蘋果酸，甲磺酸，琥珀酸，甲苯磺酸和酒石酸。
合適的堿鹽包括銨鹽，或者任意的金屬鹽，堿土金屬鹽或者堿金屬鹽。優選地，R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。最優選地，R3為鈉。
在本發明的一種最優選的形式中，化合物為上述的結構1，甾烷醇(stanol)為谷甾烷醇(sitostanol)并且R3為鈉。
衍生物的形成本發明的酯及其鹽的形成描述于PCT/CA00/00730中，其全文引入本文作為參考。
與膽固醇轉運調節劑的組合在另一個實施方案中，本發明的衍生物與一種或者多種調節膽固醇轉運的藥劑或者化合物可以在給藥前混合、共給藥或者在一個時間間隔內分別給藥。這種組合的原則依據如下的事實隨著CETP提高HDL的水平，從周圍組織轉移到肝臟中的膽固醇的量可以提高。這可能引起肝臟中LDL受體的下調和含apo B的顆粒的產量的提高。本發明的CETP-抑制劑和抑制腸再吸收膽固醇的化合物的組合通過保持遠離肝臟的的化學組分梯度解決了這個問題，從而阻止肝脂蛋白的合成增加。調節膽固醇吸收的合適的化合物包括但不限于膽汁酸螯合物，膽汁酸轉運蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇(phytostanol)，ABC轉運蛋白的調節劑，PPAR(α和γ)的調節劑和依替米貝(ezetimibe)。
這些膽固醇吸收抑制劑和本發明的甾醇衍生物的組合是協同起作用的，產生并維持了調節脂類的有益效果。
作用機制雖然本發明的化合物對于CETP的精確的作用機制還不確定，但是存在兩種可能的解釋。這些化合物可能生理上阻斷CETP和脂蛋白的結合從而防止CE的轉移。或者，本發明的化合物可以與CE競爭接近-COOH末端的26個氨基酸的疏水結合位點，所述的競爭方式類似于TP2單克隆抗體的競爭性結合。對任何一種方式而言，效果都是相同的。
使用方法可以多種不同的方式實現抑制CETP介導的CE在HDL和LDL之間轉移的需要效果。這些化合物可以利用任何適用于藥物，保健食品，食品，飲料等的常規方式進行給藥。
不限制上述的一般性，本發明的衍生物可與多種載體或者佐劑混合，有助于直接給藥或者有助于將本發明的組合物摻入食品，飲料，保健食品或者藥物中。為了了解遞送衍生物的各種可能的載體，提供了如下的例舉。為了獲得需要的CETP抑制效果所必需的化合物的量或者劑量當然將依據多種因素進行確定，諸如，選擇的具體化合物、給藥方式、和預防，降低，消除或者改善血脂異常疾病或者失調的方式。
1)藥用劑型在本發明的范圍內可以設想本發明的化合物可以包含在多種常規藥物制劑和劑型內，諸如用于口腔含服(bucally)或者舌下含服的片劑(普通的和包衣的)，膠囊(硬的和軟的，明膠，帶有或者不帶有其它的包衣)，粉末，顆粒(包括泡騰顆粒)，丸劑，微顆粒，溶液(諸如膠束，糖漿，酏劑和滴劑)，錠劑，軟錠劑，針劑，乳劑，微乳劑，軟膏劑，乳膏，栓劑，凝膠劑，經皮貼劑和改良的釋放劑型連同常規賦形劑和/或稀釋劑和穩定劑。
適合于上述合適劑型的本發明衍生物可以給藥給包括人類的動物，給藥方式可以為口服，通過注射(靜脈內，皮下，腹膜內，皮內，或者肌內)，局部或者其它方式。
優選地，本發明的化合物以磷脂系統，諸如脂質體和其它水合脂類相的形式由生理包含轉運。這種包含是指不必形成共價鍵而捕捉分子，廣泛用于提高活性成分的溶解性和隨后的分解。
包括脂質體的水合脂類系統可利用多種脂類和脂類混合物進行制備，所述脂類和脂類混合物包括磷脂，諸如磷脂酰膽堿(卵磷脂)，磷酸甘油二酯和鞘脂類，糖脂等等。脂類可以優選與帶電荷物質聯合使用，所述帶電荷物質為，諸如帶電荷的磷脂，脂肪酸，及其鉀鹽和鈉鹽，目的在于穩定產生的脂類系統。形成脂質體的典型加工過程如下所述1)將本發明的脂類以及化合物分散在有機溶劑中(諸如，氯仿，二氯甲烷，醚，乙醇或者其它的醇，或者其混合物中)。可以加入帶電的種類以減少隨后在脂質體形成過程中的聚集。也可加入抗氧化劑(諸如，棕櫚酸抗壞血酸酯，α-生育酚，丁基化羥基甲苯和丁基化羥基甲苯醚)以保護任何可能存在的不飽和脂類；2)過濾混合物去除少量的不溶性組分；3)在保證不出現組分分相的條件下(壓力，溫度)去除溶劑；4)通過暴露于含溶解的溶質的水相介質對“干燥的”脂類混合物進行水合作用，所述溶解的溶質包括緩沖鹽，鰲合劑，冷凍保護劑等等；和5)通過合適的技術，諸如均勻化，擠壓等，降低脂質體的粒度并且改良形成片層的狀態。
本領域技術人員公知的用活性成分產生和負載水合脂類的任何方法都可以用于本發明的范圍內。例如，制備脂質體的合適方法描述在參考文獻20和21中，這兩個參考文獻都引入本文作為參考。這些方法的變體描述在美國專利5,096,629中，該文獻也引入本文作為參考。
美國專利4,508,703(也引入本文作為參考)描述了一種制備脂質體的方法，通過將兩性的脂類組分和疏水的組分溶解形成溶液，并隨后在氣流中霧化溶液產生粉末狀混合物，由此制得脂質體。
在其它的優選形式中，本發明的化合物可以環糊精復合物的形式給藥。環糊精是一類環狀寡糖分子，包括吡喃型葡萄糖亞基并且具有環形圓柱體立體構型。常用的這類分子包括含有六個(α-環糊精)，七個(β-環糊精)和八個(γ-環糊精)吡喃型葡萄糖分子的分子，其中極性(親水)的羥基朝向結構的外側，并且非極性(親脂)骨架碳原子和醚的氧原子排列在環形的內腔內。這個空腔能夠通過以非共價方式的結合來容納(裝下)活性成分(客體分子，這里指本發明的衍生物)的親脂部分從而形成包含復合物。
環糊精分子的外部羥基取代基可被修飾從而形成具有對于水介質的改良溶解性及其它需要的改良特征的衍生物，所述其它需要的改良特征為諸如降低的毒性等。這種衍生物的例子為烷基化衍生物，諸如，2，6-二甲基-β-環糊精；羥烷基化衍生物，諸如羥基丙基-β-環糊精；分支的衍生物，諸如二葡糖基-β-環糊精；磺烷基衍生物，諸如磺基丁基醚-β-環糊精；以及羧甲基化衍生物，諸如羧甲基-β-環糊精。本領域技術人員公知的其它類型的化學修飾也包括在本發明的范圍內。
環糊精復合物通常賦予客體分子(這里指本發明的衍生物)改良的溶解性，分散性，穩定性(化學的，物理的和微生物的)，生物利用率和降低的毒性的特性。
本領域中有多種已知的方式產生環糊精復合物。例如可通過使用如下的基本方法產生復合物在加熱或者不加熱的條件下，將一種或者多種衍生物攪拌到環糊精水溶液或者混合的水-有機溶液中；將環糊精與本發明組合物在合適的裝置中在添加合適量的水、有機液體或者混合水-有機液體，加熱或者不加熱的條件下進行捏合，調漿或者混合；或者利用合適的混合裝置將環糊精和本發明的組合物進行物理混合。這樣形成的包含復合物的分離可以通過如下過程實現共沉淀，過濾和干燥；擠出/球化和干燥；濕物質的細分和干燥；噴霧干燥；冷凍干燥或者根據用于形成環糊精復合物的方法通過其他合適的技術進行。可以采用進一步的機械研磨分離的固體復合物的任選步驟。
這些環糊精復合物進一步提高了溶解性和溶解速率，并且提高了衍生物的穩定性。
最優選的是，本發明的化合物可以通過口服和靜脈內治療聯合的方式進行給藥。但是，每種情況下的精確輸送方式將依賴于給藥方案的目的，即所述輸送方式是否可以預防，降低，消除或者改善血脂異常病或者失調。在出現疾病和失調的情況下，輸送方式將依賴于失調的嚴重性，以及如上所述的個體的年齡，大小和性別。
2)食物/飲料/保健食品在本發明的另一個形式中，本發明的衍生物可以摻入食物，飲料和保健食品中，其包括但不限于下列物質1)乳制品-諸如，干酪，黃油，牛奶和其他的乳制飲料，涂抹食品和乳制混合物，冰激淋和酸奶；2)基于脂肪的產品-諸如，人造奶油，涂抹食品，蛋黃醬，起酥油，烹飪和油炸油和調味品；3)基于谷物的產物-包括谷粒(例如，面包和意大利面)而不管這些食物是否被烹飪，烘烤或者進行了其他的加工；4)甜食-諸如巧克力，糖果，口香糖，餐后甜點，非乳制澆頭(toppings)(例如，Cool WhipTM)，果汁冰糕，糖衣和其他的添加物；5)飲料-不管是酒精或者非酒精的，包括可樂和其它軟飲料，果汁飲料，食物添加劑和膳食替代飲料，諸如那些以商品名BoostTM和EnsureTM市售的飲料；和6)其它產品-包括蛋和蛋產品，加工的食物，諸如湯，預制備的意大利面醬，預制的食物等等。
本發明的衍生物可以通過諸如混合，灌輸，注射，摻合，分散，乳化，浸漬，噴灑和捏合的技術直接而不用進一步的修飾地摻入食物，保健食品或者飲料中。或者，在吸入前消費者可以將衍生物直接應用到食物上或者飲料中。這些是簡單經濟的遞送方式。
實施例本發明通過下列非限制性實施例進行描述實施例1目的確定本發明的一種化合物是否能夠改良CETP-介導的膽固醇酯(CE)在HDL和LDL之間的轉移，所述化合物為水溶性的植物甾烷醇抗壞血酸酯(植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸)，也稱為FM-VP4。
脂蛋白的分離利用密度梯度超速離心法將血漿分離成HDL和LDL，用溴化鈉調整血漿密度。
血漿脂類和蛋白的定量來自SigmaTM的酶分析試劑盒被用于確定總的脂蛋白甘油三酯，膽固醇和蛋白的濃度。
試驗設計包括補充和抑制CETP的試驗策略被用于顯示通過本發明的一種化合物抑制CETP-介導的CE在脂蛋白之間的轉移。為了確定植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸是否改進了CE的轉移，富含[3H]膽固醇油酸酯([3H]CE)的LDL與高濃度的植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸(10-100μM)在pH7.4的T150緩沖液中(50μMTris-HCl，150mM NaCl，0.02％疊氮化鈉，0.01％二鈉EDTA)共培養，所述緩沖液含有未標記的HDL+/-純化的(即純化的或者人血漿來源)CETP(1-2μg蛋白/ml)，在37℃培養90分鐘。培養后，LDL進行沉淀，確定在90分鐘的時間內轉移的CE的百分比。直接針對CETP的一種單克隆抗體-TP2(4μg蛋白/ml)，以及一種已知的表面活性劑-脫氧膽酸鹽(50μm)是與放射性標記的LDL共培養的附加處理組。TP2被用于保證CE轉移的測定是由CETP-介導的，并且脫氧膽酸鹽被用于闡明上述觀察到的植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸的效果不是非特異性的表面活性現象。
統計分析在存在不同處理組的條件下，CETP-介導的CE轉移活性的差別通過一種方式方差分析(PCANOAV；Human Systems Dynamics)進行確定。臨界差別由Neuman-Keuls posthoc試驗進行評價。如果p＜0.05差別被認為是顯著的。所有的數據表示為+/-標準偏差。
結果圖2清楚地顯示兩種試驗濃度的植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸對于抑制純化的CETP-介導的CE在LDL和HDL之間轉移的效力。在100μM，化合物將CE的轉移減少至低于某個水平，所述水平利用所述分析方法是可以檢測到的。圖3證實利用人血漿的這些結果與純化的CETP相反。類似地，圖4證實了FM-VP4的效果是通過CETP調節機制，而不是由其它一些方式產生。
結論很明顯，化合物抑制了CETP-介導的CE在LDL到HDL之間的轉移。膽固醇酯在LDL和HDL之間的轉移僅在由CETP介導的時候才能發生。CE相反的轉移，即從HDL向LDL的轉移可以是CETP介導的或者由擴散的轉移產生。由于這個原因，這個研究只評估了從LDL向HDL的單向轉移以及對其抑制CETP活性，以保證結果確實反映了化合物對CETP的效果，即擴散變量被去除了。但是，CETP介導的CE從HDL(抗-動脈粥狀樣的脂蛋白)向LDL(動脈粥狀樣的脂蛋白)的轉移可通過施用本發明的化合物被合適的抑制。已知TP2可特異性地結合到CETP的與CE結合位點相同的位置，并且這些結果證實了CETP-介導的CE轉移的阻斷和抑制。
參考文獻1.Law等人，Br.Med.J.1994；308363-3662.Law等人，Br.Med.J.1994；308367-3733.Circulation 1990；811721-17334.Havel R.J.，Rapaport E..New England Journal ofMedicine，1995；3321491-14985.Barker and Rye Atherosclerosis 1996；1211-126.Thompson and Barker Current Opinions in Lipidology200011567-5707.Morton Current Opinions in Lipidology 1999；10321-3228.McCarthy Medicinal Res Revs 1993；13139-1599.Sitori Pharmac Ther 1995；67443-44710.Swenson等人，J.Biol.Chem 1989；2641431811.Barrett等人，J，Amer Chem Soc 1996；1887863-6312.Kuo等人，J，Amer Chem Soc 1995；11710629-3413.Pietzonkas等人，Bioorg Med Chem Lett 1996；61951-5414.Coval等人，Bioorg Med Chem Lett 1995；5605-61015.Lee等人，J.Antibiotics 1996；49693-9616.Bucsh等人，Lipids 1990；25216-22017.Morton和Zilversmit，J.Lipid Res.1982；35836-4718.Connolly等人，Biochem Biophys Res Comm 1996；22342-4719.Xia等人，Bioorg Med Chem Lett 1996；6919-2220.Liposome Drug Delivery Systems，Technomic PublishingCo.Inc.，Lancaster，PA 199321.Pharmaceutical TechnologyLiposomes as Drug DeliverySystems Parts I，II和III，分別發表于October 1992，November 1992和January 199權利要求
1.一種用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL由于這種給藥方式得以控制。
2.權利要求1的方法，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
3.權利要求1的方法，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
4.權利要求1的方法，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
5.權利要求1的方法，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
6.權利要求1的方法，其中血清HDL的水平由于這種給藥方式而得以提高。
7.權利要求1的方法，其中選自LDL，VLDL和IDL的致動脈粥樣化的脂蛋白得以控制。
8.權利要求1的方法，如果需要，所述方法另外包括周期性分析血漿LDL水平和調整待給藥的化合物的量的步驟。
9.權利要求1的方法，其中化合物通過口服給藥。
10.權利要求1的方法，其中化合物通過靜脈內給藥。
11.權利要求1的方法，其中化合物與一種或者多種調節膽固醇轉運的藥劑可以在給藥前混合、共給藥或者在一個時間間隔內分別給藥。
12.權利要求11的方法，其中藥劑選自膽汁酸鰲合物，膽汁酸轉運蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇，ABC轉運蛋白的調節劑，PPAR的調節劑(α和γ)以及依替米貝。
13.一種用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白和低密度脂蛋白之間轉移的組合物，所述組合物包括一種或者多種具有下式結構的化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有這些結構的鹽；以及一種藥用載體。
14.權利要求13的組合物，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
15.權利要求13的組合物，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
16.權利要求13的組合物，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
17.權利要求13的組合物，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
18.權利要求13的組合物，其中化合物為結構1，甾烷醇為谷甾烷醇。
19.權利要求13的組合物，所述組合物另外包括一種或者多種調節膽固醇轉運的藥劑或者化合物。
20.權利要求13的組合物，其中藥劑選自膽汁酸鰲合物，膽汁酸轉運蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇，ABC轉運蛋白的調節劑，PPAR的調節劑(α和γ)以及依替米貝。
21.一種用于治療或者預防動物心血管疾病及其基礎病，包括動脈粥樣硬化，異常脂血癥或者失調，高膽固醇血癥，和低α-脂蛋白血癥的方法，所述方法包括降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉移，所述降低通過給動物施用一種或者多種具有下式的甾醇和/或甾烷醇衍生物得以實現 其中R為甾醇和/或甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有的鹽。
22.權利要求21的方法，其中動物為人。
23.權利要求21的方法，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇的組和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
24.權利要求21的方法，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構體。
25.權利要求21的方法，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
26.權利要求21的方法，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
27.權利要求21的方法，其中化合物為結構1，甾烷醇為谷甾烷醇。
全文摘要
本發明提供了一種用于降低體內膽固醇酯轉移蛋白介導的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL由于這種給藥方式得以控制。
文檔編號A61P9/10GK1558766SQ02818943
公開日2004年12月29日 申請日期2002年9月26日 優先權日2001年9月26日
發明者海頓·P·普里查德, 基肖爾·M·瓦桑, M 瓦桑, 海頓 P 普里查德 申請人:福布斯梅迪泰克公司