用在痤瘡治療或預防中的肉毒桿菌毒素的制作方法

專利名稱：用在痤瘡治療或預防中的肉毒桿菌毒素的制作方法
技術領域：
本發明涉及尋常痤瘡的治療或預防方法，特別是肉毒桿菌毒素治療或預防痤瘡的用途。
背景技術：
尋常痤瘡盡管不至于威脅生命，但尋常痤瘡也可以為患病個體帶來顯著的問題。根據它的嚴重性和其他因素，頑固性痤瘡能夠傷害人們的心理，能夠給患者增加顯著的經濟與情緒負擔。盡管最近在痤瘡療法中已取得一定的成功，但治療失敗仍然是普遍的，尤其在成年婦女中。盡管很多成人“因成長而不再具有”這種疾病，不過有一些人盡管持續治療，但在大多數成年期繼續患病。不幸的是，目前使用的大多數有效的痤瘡藥物療法是全身給藥，這種治療是致畸性的，這對很多婦女而言是一個重要的問題。關于更加局部化的和有效，并且還應具有最少的副作用的痤瘡治療仍然沒有滿足需要。
痤瘡最常見于青春期，受到若干因素的影響。病理學焦點集中在毛囊皮脂腺上，包括皮脂腺、毛囊(毛孔)和毛發。促進粉刺(白頭或黑頭)生成的因素包括如下(1)皮脂產生增加，(2)炎性介質引起真皮和毛囊發炎，(3)毛囊上部區域角化過度和阻塞，和(4)瘡皰丙酸桿菌在毛囊內移生。
青春期是以循環中的雄激素水平增加為標志的，特別是硫酸脫氫表雄甾酮(DHEAS)。增加了的雄激素水平被認為可導致皮脂腺擴大，增加皮脂產生。盡管大多數痤瘡患者具有正常的激素水平，不過有理由推斷皮脂產生的增加在痤瘡中扮演重要角色。例如，在皮脂產生的速率和痤瘡的嚴重性之間存在相互關系。另外，痤瘡患者通常產生亞油酸缺乏的皮脂，這是異常角化作用和毛囊阻塞的潛在原因。
響應于增加的皮脂水平，瘡皰丙酸桿菌—一種革蘭氏陽性、厭氧性類白喉桿菌——經常在皮脂毛囊內移生。瘡皰丙酸桿菌使痤瘡惡化是因為它充當嗜中性白細胞(白細胞的一種類型，也稱多形核白細胞或PMN)的化學趨化劑。嗜中性白細胞攝取瘡皰丙酸桿菌，與此同時釋放各種破壞毛囊壁的水解酶。所釋放的毛囊內容物然后侵入真皮，導致炎性反應，表現為膿皰、紅斑樣丘疹或結節。在另一途徑中，瘡皰丙酸桿菌可以水解甘油三酯為游離脂肪酸，這也增加炎癥和毛囊阻塞。瘡皰丙酸桿菌還可以活化免疫系統的補體成分，這也引起毛囊阻塞。
毛囊襯有鱗狀上皮，這層細胞與皮膚表面相延續。在有痤瘡傾向的個體中，細胞從該襯層脫落經常受阻，這也許是由于細胞內粘連水平增加，促進了細胞的保留。所保留的細胞能夠阻塞毛囊，導致粉刺。這種脫落受抑制的確切原因是未知的，但是它可能涉及表皮分化中的異常或異常的皮脂組成(例如亞油酸缺乏)。
也已經證明，增加了的皮脂水平能夠刺激角化細胞，導致白介素-1的釋放，這繼而能夠導致毛囊角化過度。
在這些并不互相排斥的導致痤瘡的途徑中，最終共有的途徑是毛囊阻塞。
目前的痤瘡療法目前所用的痤瘡療法針對痤瘡級聯的各個方面。最常用的療法可能是局部用過氧化苯甲酰，它具有抗菌效果，并且也可以減少游離脂肪酸，導致炎癥和毛囊阻塞的減少。
局部和全身用抗生素已經用于定向瘡皰丙酸桿菌。為此已經使用的抗生素包括紅霉素、四環素、克林霉素和多西環素。可以預測，抗生素的長期使用經常引起耐藥性瘡皰丙酸桿菌菌株的形成。
局部和全身用視黃醛衍生物(維生素A衍生物)已經用于使毛囊角化作用恢復正常，減少毛囊阻塞和破裂。全身用異維A酸(AccutaneTM)對痤瘡是非常有效的，不幸的是它具有嚴重的副作用，最主要是致畸性。局部用視黃醛衍生物包括維A酸(Retin-ATM)，它的化學結構與異維A酸相似。
本領域在治療痤瘡中的現狀例如總結在下列兩篇綜述文章中D.Krowchuk，″Managing Acne in Adolescents，″PediatricDermatology，vol.47，pp.841-857(2000)；和B.Johnson et al.，″Use of Systemic Agents in the Treatment of Acne Vulgaris，″American Family Physician，vol.62，pp.1823-1830，1835-1836(2000)。
在更好地理解多種原因之后，痤瘡療法也取得一定進展。大多數治療致力于使角蛋白產生恢復正常(例如通過視黃醛衍生物的使用)，或者致力于控制細菌移生。就發明人所知，現有技術中沒有治療涉及影響汗腺產生或角化細胞運動，二者都是引起痤瘡的毛囊阻塞的因素。
肉毒桿菌毒素和藥理學肉毒桿菌是一種厭氧菌，產生七種具有相似神經毒性的毒素，但是它們在抗原性上是不同的血清型A至G。這些毒素是有力的神經麻痹劑，抑制神經肌肉接合處和神經腺體接合處的乙酰膽堿的釋放。參見M.F.Brin，″Botulinum toxinChemistry，Pharmacology，Toxicity，and Immunology，″Muscle and Nerve Supp.6，pp.S146-S168(1997)；和I.Kinkelin et al.，″Effective Treatmentof Frontal Hyperhidrosis with botulinum toxin A，″Brit.J.Dermatol.，vol.143，pp.824-827(2000)。
乙酰膽堿的合成和貯存都不受肉毒桿菌毒素的影響。因此，它的效果是暫時的。肉毒桿菌毒素穿透內含體膜，進入細胞質，在那里阻滯乙酰膽堿的分泌。肉毒桿菌毒素還似乎具有抗炎效果。肉毒桿菌毒素對腺體功能的效果研究已經觀察到它的效果發生在副交感膽堿能神經的突觸前膜。
肉毒桿菌毒素A(由Allergan銷售的Botox(Irvine，California)和由Ipsen Limited銷售的Dysport(Maidenhead，Berkshire，United Kingdom))已經用于某些治療目的，既作用于神經腺體接合處也作用于神經肌肉接合處。它的暫時性神經肌肉阻滯作用已經見于大量以前的應用，包括治療斜視、偏頭痛、弛緩不能、半面痙攣、皺縮和痙攣性發音困難。注射劑已被證實對這些用途而言是安全有效的，僅有微小的副作用，例如局部腫脹和附近肌肉的瞬間虛弱。肉毒桿菌毒素A和B據報道在使用它們的患者中可被良好地耐受。
皮內用肉毒桿菌毒素A已經成為主要的療法，用于腋下、手掌、腹腔叢和前額多汗(發汗過多)，以及用于味覺性發汗(弗萊氏綜合征)。還已經顯示它是黑利氏病手術的有效替代選擇，該疾病是一種良性家族性天皰瘡，主要影響腹股溝和腋窩(高濕性部位)。
研究已經發現肉毒桿菌毒素A在人類組織中沒有長期效果。組織學研究已經發現作為療法的結果，沒有神經纖維變性，也沒有汗腺萎縮。在接受肉毒桿菌毒素A注射的患者中不到5％見到抗肉毒桿菌毒素A抗體。也沒有報道響應于肉毒桿菌毒素A注射的過敏情況。
肉毒桿菌毒素B(由Elan Pharmaceuticals銷售的MyoblocTM和NeuroBlocTM(Dublin，Ireland))已被FDA批準用于治療頸肌張力障礙患者。
全部七種肉毒桿菌毒素血清型(A至G)在商業上都可從Metabiologics，Inc.(Madison，Wisconsin)獲得。
神經肌肉接合處阻滯第一次報道的肉毒桿菌毒素A的臨床應用是20世紀70年代它在斜視治療中的應用。注射小外眼肌導致肌肉重新排列，校直球狀體，在有些情況下提高視力校正。隨后，肉毒桿菌毒素A已經在治療學上用于若干其他目的，既有功能性的也有美容性的。它已被證實有效治療局灶性張力障礙、痙攣性張力障礙、瞼痙攣、半面痙攣、斜頸和頸肌張力障礙。最近它也已用在面部整形手術中，尤其是治療皺縮(皺紋)1990年報道了肉毒桿菌毒素A在能動與不能動的腦癱患者中的應用，也就是說通過向不同的肌肉群注射以治療痙攣性雙側癱瘓。例如，針對肉毒桿菌毒素A對四肢張力障礙和痙攣狀態的效果所進行的雙盲、安慰劑對照的研究已經發現顯著的主觀以及客觀益處。
American Academy of Ophthalmology、American Academy ofNeurology、American Academy of Otolaryngology和NationalInstitutes of Health都已發布過支持肉毒桿菌毒素A對多種臨床病癥的治療功效的報告。已經采用肉毒桿菌毒素A治療的病癥有瞼痙攣、斜視、頸肌張力障礙、痙攣性斜頸、皺縮、半面痙攣、面部痙攣、痙攣性發音困難、局灶性手張力障礙、功能亢進性面部皺紋、弗萊氏綜合征、多汗癥、成人痙攣狀態、腦癱痙攣狀態的附助治療、口下頜張力障礙和其他張力障礙。
神經腺體接合處阻滯肉毒桿菌毒素A作為抗膽堿能劑對神經腺體接合處的效果研究尚不及對神經肌肉接合處研究的那么廣泛。檢查皮內肉毒桿菌毒素對局灶性多汗癥的效果的研究發現，在3至7天內，注射部位的發汗完全消失。沒有報道不利效果，在隨后五個月內也不存在多汗癥的臨床復發。一般參見I.Kinkelin et al.，″Effective Treatment of FrontalHyperhidrosis with botulinum toxin A，″Brit.J.Dermatol.，vol.143，pp.824-827(2000)。
味覺性發汗是另一種神經腺體功能障礙，肉毒桿菌毒素A已被證實對其有效。味覺性發汗(或弗萊氏綜合征)是一種無能性障礙，在進食期間頰部皮膚大量出汗。該綜合征經常發生在腮腺切除術后，可能是由于再生中的副交感神經纖維的錯誤指示，使面部汗腺衰弱。皮內肉毒桿菌毒素A據報道顯著減少或預防發汗達六個月以上，在任何患者中都沒有面部虛弱的臨床證據。
注射到下頜下腺中的肉毒桿菌毒素A已報道顯著減少由刺激舌神經所致的唾液分泌。所減少的唾液分泌是暫時性的，并且似乎對腺泡細胞沒有直接毒性。參見D.Suskind et al.，″Clinical study ofbotulinum A toxin in the treatment of sialorrhea in childrenwith cerebral palsy，″Laryngoscope，vol.112，pp.73-81(2002)。
犬研究也已顯示一種受副交感控制的現象，血管舒縮性鼻溢對局部用肉毒桿菌毒素A有反應。
肉毒桿菌毒素A對神經肌肉接合處的作用的持續時間似乎可達約三個月，而在腺體水平上持續效果可能更長。肉毒桿菌毒素A已經使味覺性發汗患者產生無汗癥達12個月以上。作用持續時間差異的原因是不確定的。假說包括神經肌肉突觸中SNAP-25(被肉毒桿菌毒素裂解的蛋白質)的重新合成速率更高、肌肉纖維的軸索萌芽與連續性重新分布的面積比腺體組織更高。
就發明人所知，以前尚沒有提示肉毒桿菌毒素可能用于痤瘡的治療或預防。

發明內容
我們已經發現，肉毒桿菌毒素可以用于抑制引起痤瘡的事件級聯。利用肉毒桿菌毒素A所進行的初步研究結果是戲劇性的。不希望受此理論所限，據信肉毒桿菌毒素通過副交感效應達到這種結果，抑制汗腺活動，刺激角化細胞運動。有關的抗炎和抗雄激素效果也可能有助于此。根據需要，治療可以定期反復進行，以抑制痤瘡的復發，通常間隔在約3個月與6個月之間，優選約每4個月一次。
不希望受此理論所限，我們相信肉毒桿菌毒素通過至少三種不同的途徑抑制痤瘡的形成。第一，肉毒桿菌毒素抑制汗腺發汗。通過減少瘡皰丙酸桿菌的生長，減少出汗可以在臨床上改善痤瘡。因而，肉毒桿菌毒素減少出汗的能力引起痤瘡減少。第二，毛囊因角化細胞而阻塞是各種引起痤瘡的途徑中最終的共有途徑。角化細胞運動受大劑量煙堿乙酰膽堿受體刺激的抑制。通過抑制乙酰膽堿的釋放，肉毒桿菌毒素可以間接增加角化細胞的移行，從而減少毛囊阻塞。第三，雄激素在青春期的大量釋放是已知的痤瘡誘因，研究已經顯示雄激素增加乙酰膽堿受體的數量。有趣的是，雄激素受體見于毛囊皮脂腺導管角化細胞上，它們對毛囊阻塞而言是重要的。因而我們相信，在青春期雄激素增加毛囊皮脂腺角化細胞上的乙酰膽堿受體數量，通過增加了的乙酰膽堿刺激引起角化細胞運動的進一步抑制。通過抑制乙酰膽堿的釋放，肉毒桿菌毒素減少毛囊皮脂腺角化細胞上的乙酰膽堿受體數量，從而通過減少了的乙酰膽堿刺激增加角化細胞運動。另外，肉毒桿菌毒素可能具有抗炎效果。
具體實施例方式
實施例1“病例指標”是一名處于生命后二十年的高加索婦女，她自從青春期就患有嚴重的囊性痤瘡。在皮內肉毒桿菌毒素A注射之后，痤瘡完全消除。另一名健康婦女試用若干在先的藥物治療痤瘡，包括安體舒通和三個療程的異維A酸，沒有消除。
在最初的肉毒桿菌毒素A注射之后，她的前額完全痊愈，而以前遍布深度的囊性損傷。
她現在接受肉毒桿菌毒素A注射，在前額、下頜和頰/鼻唇皺褶部位，大約每六個月一次。約六個月后，囊腫開始復發。它們在注射后約一周消除。注射部位彼此間距大約1.5cm，每一注射位點的劑量為約2.5U。
她的身體檢查現在顯示她是皮膚白皙光滑的吸引人的金發美女。她的面神經是完整的，她的額肌僅有輕微至中等的虛弱。她表示肉毒桿菌毒素A注射和所致痤瘡的消除已對她的生活產生突出的影響，既有社會上的也有心理上的。
皮膚病學家已經確認這名患者的病癥有實質性改善。
實施例2一名高加索婦女在她生命的前三十年出現嚴重的囊性痤瘡，始于青春期，并且對傳統治療沒有反應。她已經因痤瘡而留下嚴重的疤痕。肉毒桿菌毒素A的注射是在背部進行的。在一周內，注射區域痤瘡有實質性減少，一個月后，丘疹和膿皰有顯著減少。在注射結束時可以見到明顯的界線，在周圍存在活動的損傷，始于距離注射地帶約1cm。總計使用了86單位的肉毒桿菌毒素A，每一注射位點2.5單位，注射部位彼此間隔約2-3cm。
皮膚病學家已經確認這名患者的病癥有實質性改善。改善持續約五個月，之后恢復瘙癢和丘疹。
實施例3一名20歲高加索男性自從青春期患有嚴重的囊性痤瘡，遍及他的面、頸、胸和背部。他以前接受過兩個療程的異維A酸以及多個療程的全身與局部用抗生素治療，都沒有消除他的痤瘡。他的唯一其他顯著的醫學問題是克隆氏結腸炎。向他的背部注射總計162U肉毒桿菌毒素A，存在痤瘡的其他部位則沒有注射。一周后經過治療的部位有實質性清除，三周后幾乎完全清除。相反，未經治療的部位(即面、頸和胸)則沒有改善。
皮膚病學家已經確認這名患者的病癥有實質性改善。在隨訪觀察期間清除效果持續五個月。
盡管在初步實驗中接受肉毒桿菌毒素治療測試的患者數量很少，只有三名，不過這些患者100％見到戲劇性的改善，他們都患有對常規治療沒有響應的頑固性痤瘡。隨后還進行了小規模的臨床研究，下面報道結果。
實施例4進行小規模的臨床研究，以檢查真皮內肉毒桿菌毒素A(BotoxTM)注射在成人尋常痤瘡損傷的預防或減少中的臨床益處。直至本申請的提交之日，本研究仍在進行，但是取得了一些初步結果。用在本研究中的方案如下該研究是一項開放標記的、預測性的、單中心的、引導性研究。有十五名受試者參與該研究。全部得到受試者的同意。
合格標準合格標準如下準入標準1、男性或女性。
2、由最初的問卷調查確定健康狀況一般良好。
3、愿意接受臨床檢查和面與背部照相。
4、診斷為頑固性痤瘡(對常規療法無響應，包括全身用抗生素)。
5、妊娠測試陰性(女性)。
6、參加研究的15名受試者至少有10名患有前額或背部囊性痤瘡(至少一半必須在前額)。
7、高達5名受試者患有前額或背部非囊性炎性痤瘡(至少3名必須在前額)。
8、個體必須愿意充當無治療對照組。15名受試者中有3名被安排在無治療組(至少2名來自囊性組，1名來自非囊性組)。
9、能夠理解研究的要求，簽署知情同意書。
10、在每次面部檢查之前，愿意除去面部化妝不少于30分鐘。
排除標準1、在基線之前已經開始用雌激素或避孕丸治療12周或以下的女性。
2、患有任何可能干擾痤瘡診斷或評價的皮膚病的受試者。
3、最近參加調查性藥物研究或者已經在基線訪問30天內參加過一次的受試者。
4、患有失控性代謝疾病的個體，例如糖尿病、高血壓、甲狀腺機能亢進或甲狀腺機能減退，這是由健康問卷調查來確定的。
5、已知妊娠的、哺乳的或者計劃在后面六(6)個月內懷孕的婦女，這是由最初的問卷來確定的。
6、對肉毒桿菌毒素A有變態反應或過敏的個體。
7、有對治療的合作性差、無順應性歷史或者在以前的臨床研究中不可靠歷史的個體。
8、有重癥肌無力或Eaton Lambert病歷史的個體。
9、在最近1.5個月內抗生素使用有變化的個體。
10、正在接受氨基苷、抗膽堿酯酶、硫酸鎂和其他干擾神經肌肉傳遞的藥物或產物的個體。
11、已經接受過或者接觸過肉毒桿菌毒素A治療的個體。
基于醫療歷史和研究前面試與檢查的發現，由研究人員決定允許加入研究的個體。預期每名受試者完成全部研究過程。
研究的進行方法訪問1一篩選未來的受試者完成一份健康/合格性問卷調查、照相發布表、保密協議和知情同意書。檢查有資格的人的面部和背部囊性或炎性痤瘡的存在。
如合格標準所述，十五名有資格的受試者加入研究，在1-3天內恢復至基線水平。
基于痤瘡的位置(前額或背部)，將受試者分入治療組。治療每名受試者的前額或背部，但不是二個部位都治療。在訪問1和2之間發生治療組的隨機化(在篩選全部個體和加入全部受試者之后)。
訪問2-基線受試者在資格訪問1-3天后返回診所。治療組和對照組的受試者都完成一份注射前問卷調查。
由經過培訓的臨床工作人員計數試驗部位的丘疹、膿皰、開放的粉刺、封閉的粉刺和囊腫。工作人員還評估損傷的紅斑和凸起，以及周圍皮膚的干性和油性。對試驗部位拍攝單一的交叉極化照片。
在注射之前將局部麻醉霜涂在試驗部位上。由研究人員在前額進行BotoxTM注射，相鄰注射點之間的距離為1.5至2cm。對照患者僅被注射鹽水。在距離眉毛1.5cm內沒有進行注射，以防止上瞼下垂。與治療皺紋的肉毒桿菌毒素注射相比，注射的皮內性質預期可減少肌肉虛弱的可能性。按相似的間隔進行背部注射，這依賴于個體的痤瘡分布。向每一區域注射大約2.5-3個小鼠單位的BotoxTM，另見M.Naumann etal.，″Focal HyperhidrosisEffective Treatment withIntracutaneous Botulism Toxin，″Arch.Dermatol.，vol.134，pp.301-304(1998)；和M.Naumann et al.，″Treatment of GustatorySweating with Botulism Toxin，″Ann.Neurol.，vol.42，pp.973-975(1997)。稀釋比為3個單位每0.05cc，等于1.66cc每100單位肉毒桿菌毒素A。前額的劑量上限為80單位，背部的劑量上限為125單位。受試者在接受注射后留在診所觀察30分鐘。繼續受試者目前的痤瘡治療方案。
給受試者一份未來訪問日歷。醫師給予每一受試者研究指導，并給他們一份書面副本，供在家里使用。
訪問3-7——進一步評價受試者在處置之后大約1、2、4、8和12周返回診所(分別為第3、4、5、6和7次訪問)。如基線所述在每次訪問時進行評價，但是沒有給以進一步注射。在每次訪問時，受試者完成一份問卷調查；由經過培訓的臨床工作人員進行痤瘡損傷計數，為紅斑和凸起分級，為周圍皮膚的干性和油性分級。在每一試驗部位重復拍攝單一的交叉極化照片。
觀察任何副反應。
如果受試者沒有能夠返回完成預定的檢查，那么由工作人員嘗試聯系該受試者，以確定他是否繼續遵守研究指導并繼續參與研究。對于受試者的情況要盡可能快地處理，或者由研究人員決定允許他錯過研究。錯失研究的受試者也記錄在案。
實施例5-9初步結果正如前面所提到的，本研究在本申請提交之日仍在進行中。下面報道來自已經完成的一部分研究的初步結果。
“背部”組5名受試者在12周后的結果總結在表1中。
表1——“背部”組(n＝5)

盡管這些初步結果的樣本數較小(n＝5)，不過在丘疹數量、紅斑病損程度和凸起病損程度上見到從基線到12周有統計學顯著的減少。在其他三項測量中見到較大的數字差異，這些差異就這種小型樣本而言不是統計學顯著的，但是隨著獲得另外的數據而可能變得有統計學顯著性膿皰的數量、開放粉刺的數量和囊腫的數量。同樣關于相同樣本大小的說明，這些初步結果提示了從這種特定治療所得在封閉粉刺、干性發生率和油性發生率上存在最小或者沒有差異。沒有報道副反應、毒性或者副作用。
實施例10——劑量和毒性一項重要的考慮是恰當劑量的選擇。恰當的劑量將通過標準的劑量-響應研究和毒性研究加以確立。因為這種治療的目標區域與多汗癥相似，因此選擇相似的劑量進行最初的研究。例如參見M.Naumannetal.，″Focal HyperhidrosisEffective Treatment withIntracutaneous Botulism Toxin，″Arch.Dermatol.，vol.134，pp.301-4(1998)；和M.Naumann et al.，″Treatment of GustatorySweating with Botulism Toxin，″Ann.Neurol.vol.42，pp.973-975(1997)。似乎還沒有研究限定精確的多汗癥劑量-響應曲線，不過已經生成了一般性臨床指導。參見表2。測量在美國FDA的嚴格監管下制備的肉毒桿菌毒素A臨床制劑，以小鼠單位計。一個小鼠單位1U被定義為肉毒桿菌毒素A經腸胃外注射殺死一組18-20克重雌性Swiss-Weber小鼠中百分之五十的量(LD50)。肉毒桿菌毒素A的使用禁忌癥是非常少的(注意已有報道提示Botox單位的效力是Dysport單位的3-5倍。用在這里所報道的實驗中的肉毒桿菌毒素A是Botox；因此，在這兩種商業上可得到的肉毒桿菌毒素A制劑效力可能存在差異的程度上，用在本說明書和權利要求書中的“單位”可以參照Botox單位加以解釋)。
表2人肉毒桿菌毒素A預期劑量-響應劑量單位(U)1U＝LD50小鼠＝0.04ng臨床功效1-12U每kg體重，依賴于患者的響應，習慣上最大400U給藥不超過每90天—次；就有些患者而言更低或更高的劑量可能是適當的毒性口服3,000-250,000U(猴)腸胃外39U/kg(猴)假定猴LD50＝人LD50成人LD50＝3000U安全性因子毒性＝40U/kg基于如上所報道的初步結果，預期在大多數情況下皮內注射應當彼此間距約0.5或1cm至約10cm，優選約1.5至約3cm；每一注射部位的劑量應當是約1U至約10U或20U肉毒桿菌毒素A，優選約2至約3U。這些劑量可以基于個體對注射的響應而異。
肉毒桿菌毒素可以被皮內或皮下注射。作為替代選擇，肉毒桿菌毒素可以按相似的劑量肌內注射，特別是當需要同時削弱某些面部肌肉時，例如為了減少皺褶。
作為替代選擇，肉毒桿菌毒素可以作為局部或經皮的霜劑、凝膠劑、軟膏劑、洗劑、氣霧劑或噴霧劑、粉劑、糊劑、固定敷料或其他局部或經皮制劑而施用于皮膚，以提供相似的臨床功效。肉毒桿菌毒素的表面用藥可以特別有助于改善粉刺性痤瘡，這是痤瘡的炎性表現，局部用藥可以有助于增加吸收。這類局部給藥最好根據需要重新配制，然后貯存在冷卻條件下，因為它們的貨架壽命是有限的。通過調節pH至微酸性，例如約pH5.6，可以延長貨架壽命至數周或更長。局部用載體可以包括用在本領域局部藥物治療中的其他組分，例如本領域已知的消失性(vanishing)載體、保濕劑、潤膚劑、化學載體(例如DMSO)和緩沖劑。典型的活性成分濃度可以在5至200U每ml的數量級上，這依賴于吸收速率和毒素血清型。一般而言，濃度應當這樣調節，以便有效的給藥速率等價于肉毒桿菌毒素的有效注射。超聲裝置或電生理電流裝置、例如離子電滲療法的使用可以增強局部用毒素的吸收。本領域已知(盡管使用其他化合物治療其他病癥)局部用藥的藥物能夠到達并且在臨床上影響汗腺和皮脂腺。例如參見F.Marzulliet al.(Eds.)，″Dermatotoxicology and Pharmacology″inAdvanees in Modem Toxicology，vol 4，John Wiley and Sons，NewYork(1977)。
在目前商業上可得到的制備物中，肉毒桿菌毒素A是冷凍貯存的；而肉毒桿菌毒素B是在室溫下貯存的。
實施例11和12已經利用兩名痤瘡患者針對肉毒桿菌毒素A的局部用藥進行了初步試驗。另外將進行大規模的局部用藥試驗，以確認何種類型痤瘡對局部治療的響應良好。關于局部治療，重新配制肉毒桿菌毒素A，濃度為100單位每0.5ml溶劑。對于中背部治療，溶劑是1.4％聚乙烯醇水溶液，為中性眼用溶液，對于左背部治療，溶劑是無防腐劑的鹽水。將0.2ml或40U溶液施用于6cm×4cm，貼上TegadermTM達4小時，以避免干擾。結果列在下面。
表3

這些數據表明在肉毒桿菌毒素的局部用藥之后存在痤瘡改善的潛在趨勢。進一步的研究仍在進行中。由于這些針對局部用藥的最初實驗中的患者數量少，此時進行統計學分析沒有意義。肉毒桿菌毒素治療痤瘡的局部用藥最終可以證實是優選的用藥方法，因為容易施用，并且容易直接釋放藥物至患病區域，在那里存在炎癥或皮膚緊密接合處的其他破壞。
實施例13將進行進一步的II期臨床試驗，以確認皮內或局部肉毒桿菌毒素A注射能夠安全有效地預防或減少成人與青春期頑固性痤瘡的發病率。在II期試驗之后，將進行III期試驗，均按照適用的法律和條例進行。
本發明人推測，有可能有一部分以前出于其他原因(例如皺褶)已經用肉毒桿菌毒素治療過的患者也可能偶然作為一種副作用使痤瘡得到改善。不過，就發明人所知，以前沒有報道提示過這樣一種肉毒桿菌毒素治療副作用的存在，以前也沒有任何報道提示過在肉毒桿菌毒素給藥與痤瘡改善之間存在任何因果關系。
用在本說明書和權利要求書中的肉毒桿菌毒素的“有效量”是足以預防痤瘡或者抑制痤瘡形成或者減少痤瘡水平至臨床上顯著的程度的量。為此“顯著性”被確定在P＜0.05水平，或者這類其他統計學顯著性量度，這是本領域關于特定實驗測定類型所常用的。
盡管如上所報道的初步實驗使用肉毒桿菌毒素A，不過不希望受此理論所限，據信其他肉毒桿菌毒素血清型、即肉毒桿菌毒素B、C、D、D、E、F和G也可以用在本發明的方法中治療或預防痤瘡。恰當的劑量和毒性一般將是如上關于肉毒桿菌毒素A所述加以測定的。已有提示說肉毒桿菌毒素C可能具有兩種變體，一種具有神經毒性，另一種缺乏這類活性。在任何肉毒桿菌毒素血清型的這類變體確實存在的程度上，所有這類顯示抗痤瘡活性的變體的應用都被視為屬于本發明的范圍。
例如，如果患者對特定血清型產生免疫反應，可能需要改變所使用的血清型。劑量和作用持續時間可以因不同血清型而異，一般將按照如上關于血清型A所討論的實驗加以確定。為了減少產生免疫反應的可能性，應當使用關于每名患者的最小有效劑量，成功治療之間的時間應當盡可能長，并保證沒有實質性癥狀反復。
本說明書所引用的所有參考文獻的完整公開內容都結合在此作為參考。不過萬一有不可協調的沖突，應當對本說明書加以控制。
權利要求
1.抑制易患尋常痤瘡的人的尋常痤瘡的方法，所述方法包括對易患尋常痤瘡的人的一個或多個皮膚區域給以有效量的肉毒桿菌毒素A。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素A，其中相鄰注射部位間隔約0.5至10cm。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素A，其中相鄰注射部位間隔約1.5至3cm。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括將含有肉毒桿菌毒素A的組合物局部用藥于皮膚易感區域。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括肉毒桿菌毒素A的皮下注射。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括肉毒桿菌毒素A的肌內注射。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述方法是定期反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
8.如權利要求1所述的方法，其中所述方法是按約3個月至約6個月的間隔反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
9.如權利要求1所述的方法，其中所述方法是按約4個月的間隔反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
10.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素A，其中在每一部位注射約1U至約20U的肉毒桿菌毒素A。
11.如權利要求1所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素A，其中在每一部位注射約2U至約3U的肉毒桿菌毒素A。
12.如權利要求1所述的方法，另外包括通過所述對易患尋常痤瘡并且還含有至少一個皺褶的一個或多個皮膚區域給以有效量的肉毒桿菌毒素A，以抑制至少一個皺褶。
13.抑制易患尋常痤瘡的人的尋常痤瘡的方法，所述方法包括對易患尋常痤瘡的人的一個或多個皮膚區域給以有效量的肉毒桿菌毒素。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素，其中相鄰注射部位間隔約0.5至10cm。
15.如權利要求13所述的方法，其中所述給藥包括在多個皮膚部位的皮內注射肉毒桿菌毒素，其中相鄰注射部位間隔約1.5至3cm。
16.如權利要求13所述的方法，其中所述給藥包括將含有肉毒桿菌毒素的組合物局部用藥于皮膚易感區域。
17.如權利要求13所述的方法，其中所述給藥包括肉毒桿菌毒素的皮下注射。
18.如權利要求13所述的方法，其中所述給藥包括肉毒桿菌毒素的肌內注射。
19.如權利要求13所述的方法，其中所述方法是定期反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
20.如權利要求13所述的方法，其中所述方法是按約3個月至約6個月的間隔反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
21.如權利要求13所述的方法，其中所述方法是按約4個月的間隔反復進行的，以抑制尋常痤瘡的復發。
22.如權利要求13所述的方法，另外包括通過所述對易患尋常痤瘡并且還含有至少一個皺褶的一個或多個皮膚區域給以有效量的肉毒桿菌毒素，以抑制至少一個皺褶。
23.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素B。
24.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素C。
25.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素D。
26.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素E。
27.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素F。
28.如權利要求13所述的方法，其中該肉毒桿菌毒素包括肉毒桿菌毒素G。
29.如權利要求13所述的方法，另外包括通過所述對易患尋常痤瘡并且還含有至少一個皺褶的一個或多個皮膚區域給以有效量的肉毒桿菌毒素，以抑制至少一個皺褶；其中該肉毒桿菌毒素選自肉毒桿菌毒素B、肉毒桿菌毒素C、肉毒桿菌毒素D、肉毒桿菌毒素E、肉毒桿菌毒素F和肉毒桿菌毒素G。
全文摘要
肉毒桿菌毒素可以用于抑制引起痤瘡的事件級聯。初步研究結果是出人意料的。不希望受此理論所限，據信肉毒桿菌毒素通過副交感效應達到這種結果，抑制汗腺活動，刺激角化細胞運動，抗炎和可能的抗雄激素效果。肉毒桿菌毒素能夠在減少、甚至預防痤瘡形成中扮演重要角色。
文檔編號A61K38/00GK1543354SQ02816245
公開日2004年11月3日 申請日期2002年7月25日 優先權日2001年7月27日
發明者D·L·薩斯金德, A·H·蒂爾頓, M·L·凱爾, D L 薩斯金德, 凱爾, 蒂爾頓 申請人:路易斯安那州州立大學及農業機械學院管理委員會, 路易斯安那州州立大學及農業機械學院