專利名稱：治療或預防產胰島素細胞的移植排斥反應的制作方法
技術領域：
本發明涉及治療或預防產胰島素細胞移植排斥反應的方法，尤其是涉及治療或預防胰島移植排斥反應的方法。
I型糖尿病是由胰腺胰島內的產胰島素的β細胞的進行性的自身免疫性損害而引起。目前，每天多次胰島素注射或胰島素泵治療，仍然是大多數糖尿病患者選擇的治療方法。強化胰島素治療能夠減少繼發的并發癥的發病率，但是效果并不是絕對的，而且還增加了患者嚴重低血糖發作的機會。
在糖尿病患者中，用胰島移植替代患病的腺組織，相比胰腺器官移植明顯是更安全的方法，對于I型糖尿病患者，盡管強化了胰島素治療，但是仍不能完全控制葡萄糖水平，研究應用胰島移植作為該類患者的治療方法已經超過10年。
胰島移植的大部分操作方法已經在腎移植中實施，受者接受一個免疫抑制治療方案，包括抗淋巴細胞球蛋白進行抗體誘導，以及環孢素、硫唑嘌呤和糖皮質激素進行終生治療，參見Brendel等人，International IsletTransplant Registry Report，Giessen，Germany，1999，第1-20頁。
然而，由于排斥反應、自身免疫反應的重建、原發性無功能(PNF)，以及常規免疫抑制藥物的致糖尿病性，即使應用免疫抑制治療方案，胰島的植活(engraftment)仍困難。尤其，前炎性介質對胰島的功能有害，并且可以導致早期胰島的喪失或移植的原發性無功能，所述介質由激活的肝內巨噬細胞和內皮細胞產生，而后輸入到胰島。
因此，在非人的靈長類動物(狒狒、恒河猴和獼猴)中，為了達到胰島素自主再生，據估計每公斤體重的受體需要超過10,000胰島等同物(IEQ)，參考Kenyon等，Diabetes，48，第8132-8137頁，1999；對于人，則參考Shapiro等，The New England J.of Med.，343(4)，第230-238頁，2000。
Yamasaki和同事們已經報告在雄性大鼠延長了胰島的同種異體移植的存活時間，最多達到20天，他們在移植前和移植當天給予FTY720，并用鏈脲佐霉素使血糖升高，Cell Transplantation，Vol.7，No.4，第403-406頁(1998)。
Kenyon和同事們在人和幾個糖尿病動物模型(包括嚙齒動物、狗、獼猴、恒河猴和狒狒)中，應用包含有抗CD154的免疫抑制治療方案，證明胰島的移植導致高血糖癥的消失和長期獨立的胰島素產生(Kenyon等，Diabetes，48，第8132-8137頁，1999)。
Shapiro和同事們最近報告，曾經有嚴重低血糖癥和不穩定代謝病史的I型糖尿病患者，給予無糖皮質激素的免疫抑制治療方案(包括雷帕霉素(即西羅莫司)、他克羅姆和達昔單抗(即IL-2受體的人源化抗體)，并實施胰島移植獲得了良好的效果。七個接受胰島同種異體移植的患者，全部變成胰島素獨立型。所報告的患者，最長跟蹤到移植后17個月，參考Shapiro等，NEJM343230-238(2000)。
然而，人們仍需要改進治療方法，以達到改善產胰島素細胞的植活，如改善生活質量的胰腺胰島的植活。
同時給予胰島移植受體加速淋巴細胞歸巢劑(“ALH”)和一個或多種與ALH具有不同作用機理的免疫抑制劑，可以有效地治療或預防胰腺胰島細胞的移植排斥反應，尤其是延長I型糖尿病移植患者的胰島素獨立性。
在具體的實施方案中，本發明包括在產胰島素細胞移植受體中治療或預防產胰島素細胞移植排斥反應的方法，該方法包括同時給予所述受體有效劑量的加速淋巴細胞歸巢劑(ALH)和一種或更多種選自下面的化合物，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑和可溶性人補體抑制劑。本發明的聯合給藥治療方法優選無糖皮質激素。
在本發明優選的聯合給藥中，包括ALH劑、IL-2受體的抗體和大環內酯類的免疫抑制劑。任選這樣的治療方法中還包括可溶性人補體抑制劑。
本發明聯合用藥的治療方法促進了植活、延長了胰島素獨立性，以及延長了同種異體移植物或異種移植物的產胰島素細胞的存活時間。本發明治療方法的特別優點為促進了單一供體的移植，通過有效減少需提供給患者的、具有產胰島素功能的細胞群的移植細胞的數量，使單一供體移植與多供體移植相比，具有更少的臨床挑戰性。例如，本發明的治療方法能夠將所需的胰島等同物(IEQ)的數量減少到每個受體5,000mg/kg或更少。
“胰島素獨立性”是指通過靜脈血糖耐受試驗測定內生胰島素水平，研究對象在正常葡萄糖耐受范圍內。
“產胰島素細胞”是指胰島(包括同源和異源)和其他適合的分泌胰島素的細胞或細胞系，如胰島素分泌細胞衍生或克隆的干細胞。
除了上面所述，另外本發明也提供1.游離或藥學上可接受的鹽形式的ALH劑與一種或更多種選自下面的化合物聯合在治療或預防產胰島素細胞移植的排斥反應中的用途，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶人的補體抑制劑。
2.藥物聯合，該聯合包括a)游離或藥學上可接受的鹽形式的ALH；b)一種或更多種選自下面的化合物，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶人的補體抑制劑。
術語“藥物聯合”在此尤指不固定的聯合，如各活性成分作為獨立的藥物沒有特別限制地同時地、并發地或相繼地給予患者，以提供患者體內治療學上有效水平的各成分。每一種活性成分以藥物組合物形式給藥，如將活性成分與一種或更多種藥學上可接受的稀釋劑或載體一起配制。
3.如上所述的藥物組合物在上述治療方法中的用途。
4.游離形式或藥學上可接受的鹽形式的ALH劑與一種或更多種選自下面的化合物聯合在制備用于治療或預防產胰島素細胞移植受體的產胰島素細胞移植排斥反應的藥物中的用途，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶人的補體抑制劑。
ALH劑優選與大環內酯類的免疫抑制劑聯合用藥，可任選包括可溶性人補體抑制劑；另外，ALH劑也可與大環內酯類的免疫抑制劑以及IL-2受體的抗體一起聯合用藥，并可任選包括可溶性人補體抑制劑。
本發明的ALH劑為鞘氨醇激酶磷酸化的化合物，在S1P受體該類化合物為磷酸化形式的有效的激動劑，調節淋巴細胞運輸，如多球殼素的合成類似物或ISP-1，子囊菌Isaria sinclairii的自然代謝物。ALH劑的實例包括2-氨基丙烷-1，3-二醇類化合物，如游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I的化合物 其中R1為具有12至22個碳原子的可任選取代的直鏈或支鏈碳鏈，該碳鏈可任選被任選取代的亞苯基間隔，R2為H或下式的殘基 其中，R6為H或被1、2或3個鹵素原子任選取代的C1-4烷基，R7為H或被鹵素原子任選取代的C1-4烷基，R3為H或C1-4烷基；且R4和R5每一個獨立為H、被鹵素任選取代的C1-4烷基或酰基。
若R1碳鏈為被取代的，則優選取代基為鹵素、硝基、氨基、羥基或羧基。若碳鏈被任選取代的亞苯基間隔，則優選該碳鏈是未取代的。若所述亞苯基部分是取代的，則優選取代基為鹵素、硝基、氨基、甲氧基、羥基或羧基。酰基可以為R-CO-殘基，其中R為C1-6烷基、C3-6環烷基、苯基或苯基-C1-4烷基。
優選如下定義的式I化合物，其中R1為直鏈或支鏈的、優選直鏈的13至20個碳原子的烷基，被硝基、鹵素、氨基、羥基或羧基任選取代，更優選如下定義的式I化合物，R1為直鏈或支鏈的C6-14烷基取代的苯基烷基，所述C6-14烷基由鹵素任選取代，并且所述烷基部分為羥基任選取代的C1-6烷基。更優選如下定義的式I化合物，R1為苯基-C1-6烷基，在苯環上由一個直鏈或支鏈的、優選直鏈的C6-14烷基取代。所述C6-14烷基鏈可以位于鄰位、間位或對位，優選位于對位。
優選R2至R5每一個都為H。
若式I的化合物分子中有一個或更多個不對稱中心，則本發明包含各種旋光異構體，還包含外消旋物、非對映異構體和它們的混合物。
式(I)化合物的藥學上可接受的鹽形式的實例包括無機酸鹽類，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽和硫酸鹽；有機酸鹽類，如乙酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、甲磺酸鹽以及苯磺酸鹽，或者適當時還包括金屬鹽類，如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鋁鹽；與胺如三乙胺形成的鹽以及二元氨基酸如賴氨酸形成的鹽。本發明方法中的化合物和鹽包含水合物和溶劑合物形式。
優選的式I化合物為2-氨基-2-十四烷基-1，3-丙二醇。特別優選發明中所用的ALH化合物為FTY720，即2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]丙烷-1，3-二醇，包括游離形式或藥用鹽形式，如鹽酸鹽，如下圖所示 其中R2為H，或它的相應的磷酸鹽，其中R2為 包括游離形式或藥學上可接受的鹽形式。
本發明的ALH化合物、其取代基和變體以及制備所述化合物的方法可在如下文獻中找到U.S.專利5,604229和6,004,565、EP-A-1,002,792和WO 02/18395A，將所有這些文獻的全部內容并入此文作參考。
FTY720是一個新的免疫調節劑，可以增加淋巴細胞對歸巢趨化因子的反應性。原初細胞是隱蔽的；血的CD4和CD8 T細胞以及B細胞被刺激，進入淋巴結(LN)和淋巴集結(PP)，細胞滲入移植器官內受到抑制。然而，FTY720不削弱淋巴系統內的淋巴細胞激活、擴展和記憶，因此不抑制全身感染的免疫性。
本發明的抗IL-2受體的抗體，優選為對IL-2受體即CD25有高度親和力的抗體。適合的抗體包括天然的或重組的抗體，包括重組嵌合的抗體和人源化抗體，以及包含一個天然抗體(即Fv)結合的結構域的重組單鏈多肽，如巴利昔單抗(SimulectTM)，是一個嵌合抗體，包含有鼠的單克隆抗體CHI-621的可變域和人的IgG1域，參見EP 449,769，其相關內容并入此處作參考，或達昔單抗(ZenapaxR)，參見WO 90/07,861，其相關內容并入此處作參考。特別優選的抗體為巴利昔單抗。
“大環內酯類免疫抑制”指雷帕霉素(即西羅莫司)和它的免疫抑制衍生物。尤其重要的是雷帕霉素衍生物，該類衍生物在40位上被取代(依據所用命名法的不同或者為42位或43位)，如在U.S專利5,258,389和WO94/09010所描述的40-O-取代的雷帕霉素衍生物，尤其是40-O-烷基化的雷帕霉素衍生物，其中40-O-取代基可為羥烷基化的，如40-O-(2-羥乙基)雷帕霉素，即依維莫司，或在分子的40位和/或其他位置被取代的衍生物，如在28位和/或16位被取代的衍生物，包括它們的差向異構體，以及其他任選氫化的衍生物，如在WO 95/14023和99/15530中所公布的，如ABT578，或rapalogs，如在WO 98/02441和WO 01/14387中所公布的，如AP23573。尤其優選40-O-(2-羥乙基)雷帕霉素。
適合的可溶補體抑制劑包括如C3/C5抑制劑，如可溶的I型補體受體(CR1)，TP-10，該補體受體為重組蛋白，即是對補體系統有效的一個系統性抑制劑，因為它通過全部三種激活途徑(傳統途徑、替代途徑和凝集素途徑)阻止C3和C5的激活；然后激活C3，使補體依賴的效應器機制中的大部分募集。具體地說，TP-10與C3b和C4b結合，激活補體系統片段，在補體級聯中阻止這些片段與其他蛋白的相互作用，隨后形成多分子酶復合體，產生具有生物學活性的補體的蛋白片段。TP-10也在C3b和C4b酶促降解成為無活性形式的反應中作為協同因子。
TP-10是修飾過的CR1分子，無跨膜結構域和胞質結構域，如在WO89/09220中公布的，其相關內容并入此處作為參考。在無血清的培養基中，由中國倉鼠卵巢細胞(CHO)表達TP-10，在抗CR1親和柱上并經HPLC使其純化。Bennett等在Diabetes 2000中報道了給予胰導移植受體TP-10。
適合本發明應用的其他可溶補體受體抑制劑的實施方案包括TP-20，該抑制劑為補體和選擇蛋白聯合抑制劑，整合在一個分子內的sCR1(可溶的補體受體-1)和sLex(唾酸Lewis x)糖；以及TP-18，插入選擇蛋白-(受體)-阻滯糖類中的CR1的衍生物。
依據如實例中所用的ALH劑、宿主、給藥方式、需治療的病情嚴重性和在聯合用藥中另外選擇的治療劑的不同，在實施本發明方法中，所需的治療劑的日劑量將不同。
此文中所用的術語“共同用藥”或“聯合用藥”等指將所選擇的治療劑給藥予單一移植受體，也包括以不一定相同的給藥途徑在同一時間內給藥的治療方案。
優選在外科手術前給予ALH劑，如FTY720。通常而言，該化合物的給藥開始于移植手術之前(即“0天”)，例如開始于前1天，此后不一定繼續給藥。該化合物可如通過口服或注射給藥。
對于ALH劑、如式I的化合物(如FTY720)而言，優選的日劑量范圍大約為每天0.03-2.5mg/kg，尤其是每天0.1-2.5mg/kg，如每天以單劑量或分劑量給予0.5-2.5mg/kg。口服給藥時，患者的適合的日劑量為0.25-100mg。在口服給藥的適合的單位劑型中，包括大約0.125-10mg式I化合物，以及一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體。另外，游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I化合物也可以每周給藥兩次或三次，如以上述劑量。ALH劑，如式I的化合物，可以以任何通常的途徑給藥，尤其是胃腸內給藥，如口服，諸如以飲用溶液、片劑或膠囊形式，或腸胃外給藥，諸如以可注射溶液或懸浮液形式。包括式I化合物的藥物組合物可以以常規方式制備，如在U.S.專利5,604,229中所描述的方法。
抗IL-2受體抗體，如巴利昔單抗，優選兩個劑量的給藥方案，首次給藥在第0天(即移植當天)，第二次給藥大約在第4天。可任選在大約第4天后再給藥，如每周給藥一次持續2-4周。對包括人的靈長類動物而言，每次給藥通常大約1-50mg，優選大約5-20mg。
大環內酯類的免疫抑制劑，如40-O-2-(羥乙基)-雷帕霉素，優選每天給藥，在移植當天或前一天(即第-1天)開始給藥，移植后以不確定的方式繼續給藥。對包括人和非人的靈長類動物而言，合適的劑量為每天0.25-7mg，更優選每天0.5-5mg。該化合物可以口服給藥或經皮下注射給藥。
可溶補體受體，如TP-10，可以大約5-15mg/kg的單劑量給藥，優選大約10mg/kg，在大約30分鐘內靜脈輸注。
最優選，本發明涉及無糖皮質激素的聯合治療用于產胰島素細胞移植，如胰島細胞移植，包括聯合給予ALH劑(例如尤其是式I的化合物，如2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]丙烷-1，3-二醇，包括游離形式或藥學上可接受的鹽形式，優選其鹽酸鹽形式)與一種或多種巴利昔單抗、40-O-(2-羥乙基)-雷帕霉素和人的可溶的重組補體抑制劑sCR1(“TP10”)。
本發明的治療方法可任選包括聯合給予其他免疫調節藥物或抗炎劑，所述藥物的實例可包括鈣調磷酸酶抑制劑(如環孢菌素或子囊霉素)和它們的免疫抑制類似物，如環孢菌素A，FK-506；環磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；布列奎鈉；來氟米特；咪唑立賓；麥考酚酸；麥考酚酸酯；15-脫氧精胍菌素或類似物；免疫抑制單克隆抗體，如白細胞受體的單克隆抗體，如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD40、CD45或CD58或它們的配體的單克隆抗體；其他免疫調節化合物，如CTLA4-Ig或同系物或突變體，如LEA29Y，或LFA-1抑制劑。
本發明的方法可以用于預防或治療產胰島素細胞同種異體移植或異種移植的排斥反應。
實施例用FTY 720、依維莫司、巴利昔單抗和TP10抑制獼猴體內同種異體移植的胰島的排斥反應治療劑FTY720用于給藥的該化合物按如下方法制備，將一個膠囊(每膠囊1mg)中的該化合物倒入60mL的干凈玻璃研缽中，加入30mL的無菌水，與膠囊內容物混合，直到粉末成為均勻的混懸液。FTY720用注射器和鼻飼管口服給藥。
巴利昔單抗以一個包裝的形式獲得該物質，其中一個小瓶中含有20mg的粉末，另一小瓶中含有5mL的稀釋液。可根據生產商的使用說明進行配制，用于靜脈給藥。
依維莫司在一個密閉安瓿內的該化合物的濃液為20mg/ml。取1ml該液的化合物與8.5ml的溶媒(50％Cremophor和50％乙醇)混合后，最終濃度為2.1mg/ml(pH6.0)，該混合物在2小時內用完。
TP 10可得到50mg的多劑量瓶(無配制要求)。
(a)供體動物的胰切除術供體動物為體重超過4kg的成年獼猴，雌雄均可。在胰切除術前，先進行空腹血糖分析和精氨酸刺激試驗，保證具有正常的胰腺分泌功能。在精氨酸刺激試驗中，將0.07mg/kg的精氨酸靜脈注射，分別在-5、-1、注射精氨酸后的2、3、4和5分鐘采集血液。采集血漿并冰凍保存于-80℃。血漿胰島素和C-肽水平確保在正常范圍內。
在用0.5-2％的異氟烷全身麻醉的情況下，進行胰切除術采集胰腺。同時也采集淋巴結和脾，進行供體的淋巴細胞分離并深度低溫保藏。器官和組織采集后，給供體靜脈注射150mg/kg的戊巴比妥鈉，進行安樂死，通過視覺觀察確保心臟停止。
(b)胰島分離胰島分離采用改進的人的胰島分離的自動化方法進行，如Ricordi等，在Diabetes，38，(Suppl.1)140-142，1989；Kenyon等，在Diabetes，48，第8132-8137頁，1999；以及Ranuncoli等，在CellTransDlantation2000中所描述的方法。
根據國際標準{Ricordi，Gray，等1990 13/id}評估胰島的質量，包括測定胰島的產量、純度和活力。將獲得胰島的數量以胰島等同物(IEQ)報告，該數量為粒子的直徑均在150μm時存在的胰島的數量。為此，計數不同體積大小的各類別(50-100μm、100-150μm、150-200μm等)的雙硫腙(DTZ)陽性胰島的數量，并將數據輸入計算機程序，該程序將其轉變為IEQ。依據制備物中存在的DTZ陽性粒子的百分比評估純度，依據FDA/PI染色評估活力。通過評定靜止培養基內葡萄糖刺激的胰島素釋放，來測定體外功能(參考Ranuncoli等，Cell Transplantation，2000)。
(b)受體動物的同種異體移植受體動物選自體重大于1.5kg的年輕獼猴，雌雄均可。通過靜脈輸注150mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)使受體動物患有糖尿病，隨后靜脈輸注溶液(20mg/kg的0.9％NaCl，30分鐘)防止腎中毒副作用，如Theriault Thistlethwaite等，在1999，16/id所描述的方法。使用鏈脲佐霉素后的前48小時內，需頻繁檢測血糖水平，避免嚴重高血糖癥或伴有酮酸中毒的高血糖癥。此后，每天檢測血糖水平2-3次，如果需要可通過皮下注射或靜脈滴注Regular、NPH、Lente、Ultralente或Humalog胰島素糾正。通過每天測量血糖、所需胰島素的評估和精氨酸刺激后的陰性C肽值，來確定糖尿病的誘發。為了確定糖尿病已經被誘發，在免疫抑制開始前進行精氨酸刺激試驗。靜脈注射0.07mg/kg的精氨酸實施精氨酸刺激，分別在-5、-1以及精氨酸注射后的2、3、4、5分鐘采集血樣。采集血漿并冰凍保存在-80℃。用Cobas Mira葡萄糖分析儀測定血漿葡萄糖(Roche Diagnostic Systems，Montclair，NJ)。使用雙抗體方法(Diagnostic Products，Corp.，Los Angeles，CA)評定血漿胰島素和C肽水平。所觀察的低限，C肽為0.20ng/ml，胰島素為5uU/ml。這些測定中包括標準曲線和陰、陽性對照樣品。
使鎮靜并麻醉的受體動物仰臥于操作臺上，將腹部準備好(prepped)蓋以手術單僅暴露手術區。特別注意避免低溫，可用一個加熱燈和加熱墊。做一個小的中心線切口，將每公斤體重最少10,000個剛剛分離的胰島等同物懸浮在20ml移植介質中，通過一個24規格的靜脈導管注入腸系膜門靜脈的分支中。為了止血，可將血管結扎或用手指壓住。以常規方式合上腹壁。每天檢測血糖兩次，進行精氨酸刺激試驗用以記錄糖尿病狀況的逆轉。
將受體分為三組，每組各4個受體，分別給予不同的免疫抑制劑和一定量的胰島，治療方案如下所示組1FTY720+依維莫司+巴利昔單抗，10,000IEQ/每公斤體重組2FTY720+依維莫司+巴利昔單抗，5,000IEQ/每公斤體重組3FTY720+依維莫司+巴利昔單抗+TP10，5,000IEQ/每公斤體重上述各組的受體動物，在移植前和移植(第0天)后接受如下所詳述的治療從第-1天到第30天，口服FTY720 0.3mg/kg。
在第0天和第4天，靜脈注射巴利昔單抗10mg。
從第-1天到第30天，每天一次皮下注射依維莫司，波谷水平達到15-30ng/ml。推薦劑量為每天0.075mg/kg范圍內。
在第-1天靜脈注射TP10 40mg/kg，第0天和第1天各20mg/kg，第2天到第7天為17mg/kg。
藥物監控如下FTY720每周一次。依維莫司兩周一次。檢測SC5b-9作為TP10功效的證明。
受體動物的給藥在每天早晨的大約同一時間進行，如果適合可在下午給藥。移植后的頭4-5個小時，頻繁測定血糖水平，以防止低血糖發作。若發作需要，靜脈給予5-10％的葡萄糖進行治療。如果三次連續的空腹血糖水平超過150mg/dl，或三次餐后血糖水平超過200mg/dl，可懷疑出現排斥反應。如果這些水平連續出現3天，可確定為排斥反應。此后，通過足跟部的標簽進行標記，每天檢測2-3次空腹和餐后血糖(空腹血糖，餐后血糖)。通過每天血糖測量，以及移植后14天和30天的精氨酸刺激試驗(人胰島素和C肽)，來獲得血糖控制情況。同時也檢測移植后所需的外源胰島素。在移植后的頭14天，根據可變化的個體化的方案，通過皮下注射Regular、NPH、Lente、Ultralente或Humalog胰島素糾正血糖水平。移植后14天和1個月，以及此后的其他時間點進行精氨酸刺激試驗。
(c)試驗前(pre-terming)血和組織樣品用氯胺酮(5-10mg/kg)使移植受體鎮靜，在0.5-2％異氟烷全身麻醉下把管子插進，采集試驗前血樣品。將猴子放置于仰臥位，腹股溝和腹部以消毒的方式準備并蓋以上述單僅暴露上述區。分離股靜脈、上腔靜脈或主動脈，放置一根導管，抽出80-160ml的血液。采集肝脾樣品，在液氮中冷凍，用于RNA分析。完成無菌取樣后，給動物靜脈注射戊巴比妥鈉150mg/kg使其安樂死。根據已知的方法采集尸體剖檢的樣品并固定。除了移植和器官樣品外，還將胰腺樣品驟凍用于胰島素提取。
評估移植器官的病理學。從組織學上評估常規H&E染色部分。在該模型中，聯合給予FTY720、依維莫司和巴利昔單抗可以防止同種異體胰島移植的排斥反應。
權利要求
1.藥物聯合，該聯合包括a)加速淋巴細胞歸巢劑(ALH)，包括其游離形式或藥學上可接受的鹽形式，和b)一種或更多種選自下面的化合物，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶性人補體抑制劑。
2.根據權利要求1的藥物聯合，該聯合包括a)游離形式或藥學上可接受的鹽形式的ALH劑，和b)IL-2受體的抗體和大環內酯類的免疫抑制劑，任選還包括可溶性人補體抑制劑。
3.根據權利要求1或2的藥物聯合，其中的ALH劑是游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I的化合物 其中R1為具有12至22個碳原子的任選取代的直鏈或支鏈碳鏈，該碳鏈可任選被任選取代的亞苯基間隔，R2為H或下式的殘基 其中，R6為H或任選被1、2或3個鹵素原子取代的C1-4烷基，R7為H或任選被鹵素原子任選取代的C1-4烷基，R3為H或C1-4烷基，和R4和R5每一個獨立為H、任選被鹵素取代的C1-4烷基或酰基。
4.據權利要求1或2的藥物聯合，其中的ALH劑是2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]丙烷-1，3-二醇，包括游離形式或藥用鹽形式。
5.根據權利要求1或2的藥物聯合，其中的IL-2受體的抗體是重組嵌合或人源化抗體。
6.根據權利要求1或2的藥物聯合，其中所述具有免疫抑制作用的大環內酯類是雷帕霉素或雷帕霉素衍生物，該衍生物在40位和/或28和/或16位被取代，包括它們的差向異構體，以及任選氫化的衍生物。
7.根據權利要求1或2的藥物聯合，其中所述具有免疫抑制作用的大環內酯類是40-O-(2-羥乙基)雷帕霉素。
8.根據權利要求1或2的藥物聯合，其中的可溶性人補體抑制劑是C3/C5抑制劑。
9.根據權利要求1或2的藥物聯合，該聯合用于治療或預防產胰島素細胞移植的排斥反應。
10.游離形式或藥學上可接受的鹽形式的ALH劑與一種或更多種選自下面的化合物的聯合在治療或預防產胰島素細胞移植排斥反應中的用途，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶性人補體抑制劑。
11.治療或預防產胰島素細胞移植排斥反應的方法，該方法包括聯合給予產胰島素細胞移植受體有效劑量的ALH劑與一種或更多種選自下面的化合物，所述化合物包括IL-2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶性人補體抑制劑。
全文摘要
本發明公開包括游離形式或藥學上可接受的鹽形式的加速淋巴細胞歸巢劑和一種或更多種選自下面的化合物的藥物聯合，該聯合用于治療或預防產胰島素細胞移植排斥反應，所述化合物包括IL－2受體的抗體、大環內酯類的免疫抑制劑以及可溶性人補體抑制劑。
文檔編號A61K31/137GK1524002SQ02809849
公開日2004年8月25日 申請日期2002年6月7日 優先權日2001年6月8日
發明者P·萊克, C·米隆, P 萊克 申請人:諾瓦提斯公司