一種含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液以及用其涂敷載體的方法

專利名稱：一種含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液以及用其涂敷載體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有纖維蛋白原、凝血酶、醇和任意性的抑肽酶的懸浮液。本發(fā)明還涉及一種用于制備這類懸浮液的方法，和一種采用這類懸浮液涂敷載體的方法。所述載體可為一種膠原載體，如膠原海綿。本發(fā)明還涉及一種載體涂層的干燥方法，特別是采用本發(fā)明懸浮液涂敷的膠原載體，從而得到具有活性物質(zhì)固態(tài)地固定到所述載體上的涂層膠原載體。
所述涂層膠原載體可以用作一種即可使用的可吸收組合物，用于組織粘合、組織封口和止血，它主要由一種涂敷有固態(tài)固定的成分纖維蛋白膠纖維蛋白原和凝血酶的載體組成。這種固定組合物可以直接涂敷到例如傷口表面。在與血液、體液或生理鹽水接觸時(shí)，這種系統(tǒng)機(jī)制就會(huì)模仿階式凝結(jié)的最后階段，其中，凝血酶催化纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，并催化XIII因子的活化從而生成XIIIa。XIIIa因子一經(jīng)形成，就可以通過(guò)共價(jià)交聯(lián)穩(wěn)定所述纖維蛋白凝塊。
象一種兩組分粘合劑一樣，傷口表面和載體通過(guò)聚合作用被粘合在一起。在此過(guò)程中，它持續(xù)大約3-5分鐘，本發(fā)明所述組合物優(yōu)選是壓在所述傷口區(qū)域之上。本發(fā)明所述組合物的成分在應(yīng)用約4-6個(gè)月之后，因酶促而退化。
背景技術(shù)：
商用纖維蛋白膠水，它們模仿所述階式凝結(jié)的最后步驟，含有一種高度濃縮的纖維蛋白原溶液，在應(yīng)用到所述存在的外科傷口之前與一種凝血酶溶液進(jìn)行混合。這些混合物含有一種纖維蛋白溶解抑制劑，例如，抑酞酶或ε-氨基正己酸，以防止所述纖維蛋白凝塊被纖維蛋白溶酶血纖維蛋白酶過(guò)早地溶解。這些兩組分纖維蛋白膠水在許多外科手術(shù)中是有用的，但是，如果所述流血是嚴(yán)重情形時(shí)，在實(shí)現(xiàn)止血之前，它們就可能會(huì)被沖走。這種兩組分纖維蛋白膠水還需要一些包括融化或溶解的預(yù)備步驟。因此，它們是相當(dāng)不實(shí)用的且是難以起作用的，還需要經(jīng)驗(yàn)才能成功地使用這些纖維蛋白膠水。
在最近十年來(lái)，大量的跡象表明，大量的纖維蛋白密封劑正成為外科手術(shù)中的備選方法。但是，在采用纖維蛋白膠水的大部分試驗(yàn)中，需要另外采用一種膠原棉網(wǎng)，以提高止血性能和粘合性能，說(shuō)明它們存在著不足和被外科醫(yī)生使用時(shí)存在著限制。
膠原自從上世紀(jì)六十年代就已經(jīng)被用作止血試劑。膠原是所有哺乳動(dòng)物中最為常見(jiàn)的結(jié)構(gòu)蛋白。大約300kDa(原膠原)的單體蛋白質(zhì)在特定位置進(jìn)行共價(jià)交聯(lián)。所述成熟蛋白質(zhì)因而是不溶的，它形成具有高抗拉強(qiáng)度的特征原纖維。大量的膠原子類已經(jīng)被分開(kāi)，其中最為常見(jiàn)為膠原1，它是皮膚、腱、骨和角膜中主要膠原。膠原是一種纖維狀蛋白質(zhì)，由一種長(zhǎng)度大約為290nm的三螺旋組成。這些三螺旋中的五個(gè)(原膠原分子)進(jìn)行交錯(cuò)排列，形成一種直徑大約為3.6nm的微纖維。這些微纖維具有極性和非極性片斷，它們可以容易地進(jìn)行纖維間和纖維內(nèi)的相互作用。微纖維可以被包裝到一個(gè)四角網(wǎng)格中，以形成具有直徑約30nm的亞原纖維。這些亞原纖維接著可裝配成膠原纖維，它是結(jié)締組織的基本單位，它具有數(shù)百nm的直徑，因而在光學(xué)顯微鏡下可以看到一個(gè)細(xì)線。
膠原可以用作一種用于密封傷口的材料，可能地與一種含有纖維蛋白膠水的涂料一起使用。纖維蛋白膠水，即纖維蛋白原、凝血酶和抑肽酶的組合物，許多年來(lái)已經(jīng)成功地用于治療粘合組織和神經(jīng)和用于密封存在少量流血的表面。所述纖維蛋白膠水的一種缺點(diǎn)是，對(duì)于大量流血情形，所述膠水在纖維蛋白有效聚合發(fā)生之前，就常常被沖走。為了克服這個(gè)問(wèn)題，外科醫(yī)生開(kāi)始用手涂敷所述液體纖維蛋白膠水到可吸收載體如膠原棉網(wǎng)之上。
盡管這些結(jié)合應(yīng)用具有給人印象深刻的成功，但是，這種方法不能廣泛地應(yīng)用，這是由于它存在著一些缺點(diǎn)。其制備是相對(duì)麻煩的，所述方法需要經(jīng)驗(yàn)和熟練技術(shù)人員，且所述制備方法對(duì)于緊急情況不是很有效，制備時(shí)間在10-15分鐘之間。這些因素刺激著一種改進(jìn)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，從而導(dǎo)致開(kāi)發(fā)出一種覆蓋有一種固體纖維蛋白原、固體凝血酶和固體抑肽酶涂層的固定組合物，如EP 0 059 265中所述。
在EP 0 059 265中所公開(kāi)的膠原載體的作用，主要是載體作用，它可吸收所涂敷的凝結(jié)液并賦予機(jī)械穩(wěn)定性。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)生產(chǎn)出一種產(chǎn)品，其商標(biāo)為TachoComb，它結(jié)合了纖維蛋白膠水的止血作用和作為載體膠原的優(yōu)點(diǎn)。TachoComb是一種即可使用且易于適用固定的膠原藥膏組合物，它涂敷有下述活性纖維蛋白膠水成分人體纖維蛋白原、牛凝血酶和牛抑肽酶。
TachoComb自1990年早期就已經(jīng)由Nycomed Pharma出售，并已經(jīng)在歐洲的2500多病人中用于臨床實(shí)驗(yàn)。所述產(chǎn)品還在日本臨床應(yīng)用于大量各種適應(yīng)癥如肝和肺切除術(shù)、膽道外科、脾臟、腎臟和胰的外科、ENT外科、婦科外科和血管外科，用于700多病人中。TachoComb已經(jīng)發(fā)現(xiàn)是有效且安全的。
在進(jìn)行的臨床過(guò)程中，還沒(méi)有與應(yīng)用TachoComb有關(guān)的臨床并發(fā)癥的報(bào)導(dǎo)。
在WO97/37694(Immuno France S.A.)的對(duì)比例4中，描述了采用一種膠原產(chǎn)品或TachoComb，當(dāng)采用TachoComb時(shí)沒(méi)有止血作用導(dǎo)致流血至死，與之形成對(duì)比，當(dāng)使用一種WO97/37694制備的不含有凝血酶的膠原產(chǎn)品時(shí)，在5分鐘內(nèi)止血。
在WO96/40033中，用于TachoComb中的牛凝血酶的缺點(diǎn)著重在于，使用?；蚱渌N類凝血酶可能會(huì)引起有害的病毒污染和可能的牛疾病傳播，如牛海綿狀腦炎。
US6,177,126B1公開(kāi)了一種用于生產(chǎn)用于密封和治療傷口的材料的裝置和方法。所述裝置含有一種容器，在其底部具有兩個(gè)可以相對(duì)移動(dòng)的穿孔板，從而可允許存在于所述容器中的懸浮液能夠滴加入一種載體上，所述載體在所述容器底部移動(dòng)經(jīng)過(guò)所述容器。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種改進(jìn)的懸浮液，例如它適合用作一種膠原載體的涂層，其目的是提供一種即可使用的可吸收的用于組織粘合、組織封口和止血的組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于制備這類懸浮液的方法。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種改進(jìn)的涂敷一種載體如膠原載體的方法，是采用含有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液進(jìn)行的。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種干燥涂敷到載體上的所述懸浮液的濕涂層的方法，其目的是保證所述涂層令人滿意地固定到所述載體之上。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種具有一種纖維蛋白原和凝血酶涂層的涂層膠原海綿，所述涂層膠原海綿一旦與血液、體液或生理鹽水接觸，它就能有效地模擬所述階式凝結(jié)的最后階段。另外，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有上述涂層的涂層膠原海綿，它具有充分固定到所述膠原海綿上的涂層，即當(dāng)它在經(jīng)受機(jī)械碰撞時(shí)具有令人滿意的低涂層磨損。
在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液，所述懸浮液是通過(guò)這樣一種方法得到的，所述方法包括-提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，-提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，-混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，-所述懸浮液含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒，所述顆粒的FolkWard平均直徑為25-100μm，如35-80μm，40-78μm，40-75μm，45-60μm，47-55μm，或60-100μm，60-80μm，65-75μm，優(yōu)選是在+/-5μm之內(nèi)，如在+/-4μm之內(nèi)，如在+/-3.5μm之內(nèi)，如在+/-2μm之內(nèi)，如在+/-1.5μm之內(nèi)，如在+/-1μm之內(nèi)，如在+/-0.8μm之內(nèi)，如在+/-0.6μm之內(nèi)，如在+/-0.5μm之內(nèi)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這類懸浮液，當(dāng)其被涂敷到一種載體如膠原載體上時(shí)，它在用于組織粘合、組織封口和止血的即可使用的可吸收組合物中是有效的。所述組合物任意性地含有抑肽酶，它可添加到所述纖維蛋白原混合物中作為一種濃縮的水溶液。核黃素也可作為著色劑加入，這樣所述組合物當(dāng)其涂敷到一種載體上并干燥時(shí)就可容易地被識(shí)別。
由于所述組合物的物理性質(zhì)，尤其是在一種醇中相當(dāng)大顆粒的沉降性能，所述懸浮液沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)液體粘度量度是可行的。因此，一種用來(lái)提供粘度量度的備用方法已經(jīng)被實(shí)行。所以，所述懸浮液可以具有這樣的粘度，當(dāng)其僅受重力影響時(shí)，可使得在25-75秒內(nèi)有90-120ml的懸浮液流出一個(gè)具有下述特征的容器的底部孔口—一個(gè)內(nèi)徑為40-50mm且內(nèi)高度為55-65mm的圓筒形部件，和—一個(gè)高度為17-23mm的圓錐形底部部件，所述底部孔口位于所述圓錐形部件的下端，呈圓錐形孔道，其直徑為2-3mm。
對(duì)于由鋼材制成的容器來(lái)說(shuō)，所述容器和所述孔口具有下述尺寸—所述圓筒形部件的內(nèi)徑46mm—所述圓筒形部件的內(nèi)高度60mm—所述圓錐底部的內(nèi)高度20.5mm—所述底部孔口的內(nèi)徑2.6mm，—連接到所述底部孔口通道的長(zhǎng)度9mm，或者對(duì)于由塑料材料制成的容器來(lái)說(shuō)，所述容器和所述孔口具有下述尺寸—所述圓筒形部件的內(nèi)徑50mm—所述圓筒形部件的內(nèi)高度41mm—所述圓錐底部的內(nèi)高度24mm—所述底部孔口的內(nèi)徑2.5mm，—連接到所述底部孔口通道的長(zhǎng)度小于5mm，上述懸浮液的流出時(shí)間為25-60秒，如25-50秒，30-50秒，32-44秒，34-38秒。
在下述與本發(fā)明第二個(gè)方面所述方法有關(guān)所公開(kāi)的懸浮液的參數(shù)和特征，也可適用于本發(fā)明第一個(gè)方面的所述懸浮液。
在第二個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種制備一種具有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液的方法，包括—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，這樣得到一種含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒的懸浮液，所述顆粒的Folk Ward平均直徑為25-100μm。在上述與本發(fā)明第一個(gè)方面所述懸浮液有關(guān)所公開(kāi)的懸浮液的參數(shù)和特征，也可適用于本發(fā)明第二個(gè)方面的所述方法。
在提供所述纖維蛋白原混合物的步驟時(shí)，所述纖維蛋白原可以通過(guò)一種合適方法如篩分而進(jìn)行預(yù)微粉化，從而得到具有Folk Ward平均直徑為25-100μm的顆粒。所述微粉化纖維蛋白原，例如，可以被攪拌到所述醇中，以得到所述纖維蛋白原混合物。在提供所述混合物步驟時(shí)，所述纖維蛋白原也可直接在一種醇中進(jìn)行均化，優(yōu)選是在0-12℃之間的溫度進(jìn)行，如在2-8℃之間進(jìn)行。所述溫度在均化過(guò)程中可以降低?；旌纤隼w維蛋白原混合物和所述凝血酶的步驟，可以在攪拌所述懸浮液的同時(shí)進(jìn)行，這樣，所述攪拌也可在0-12℃之間的溫度進(jìn)行，如在2-8℃之間進(jìn)行。
所述凝血酶可以包括人體凝血酶、牛凝血酶或重組凝血酶，而且所述纖維蛋白原可以包括人體纖維蛋白原或重組纖維蛋白原。所述醇可為一種有機(jī)醇，如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇，如一種無(wú)水有機(jī)醇，一種無(wú)水乙醇、一種無(wú)水丙醇或一種無(wú)水異丙醇。人體纖維蛋白原可以一種固體凍干形式供應(yīng)。
在第三個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種采用一種具有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液涂敷一種載體的方法，包括—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，這樣得到一種含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒的懸浮液，所述顆粒的Folk Ward平均直徑為25-100μm，所述涂敷方法包括—在鄰近所述載體位置提供所述含有纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液，—將所述懸浮液涂敷到所述載體的涂層表面上。
所述載體可為一種膠原載體，如一種膠原海綿。所述膠原海綿可以滿足至少一個(gè)和優(yōu)選多個(gè)的下述標(biāo)準(zhǔn)-pH值在5.0-6.0之間，-乳酸含量至多為5％，-銨含量至多為0.5％，-可溶蛋白含量至多為0.5％，以白蛋白計(jì)，-硫酸鹽灰分含量至多為1.0％，-重金屬含量至多為20ppm，-微生物純度至多為103CFU/g，-膠原含量為75-100％，-密度為1-10mg/cm3，-彈性模量范圍為5-100N/cm。
所述膠原海綿可由下述方法制備得到，包括以下步驟—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm或平均對(duì)角直徑為3mm的部分。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“腔直徑”應(yīng)該理解為在一個(gè)腔中最大的直線壁與壁間距離，即一個(gè)腔的最大對(duì)角直線距離。所述腔可為多邊形狀，如八角形。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，大于0.75mm但小于4mm的腔直徑或至多為3mm的腔直徑，可以使得所述膠原海綿特別適合用于被一種含有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液所涂敷。還發(fā)現(xiàn)，由上述方法制備得到的涂層膠原海綿，是空氣和液體密封的，在此意義上，一旦所述涂層膠原海綿被涂敷到一個(gè)傷口上，則它就不會(huì)允許空氣或液體滲入到所述膠原海綿中。
所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，可在室溫0-12℃下進(jìn)行，如1-10℃，如2-8℃。而且，所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，也可在相對(duì)濕度為75-99％如85-95％的環(huán)境大氣中進(jìn)行。優(yōu)選地，將0.08-0.12ml體積的懸浮液，涂敷到每cm2涂層表面的載體之上。為了保證最終涂層載體在其整個(gè)表面上的均勻功效，所述懸浮液優(yōu)選是均勻分散在一個(gè)給定寬度的涂層表面上，使得單位面積所述涂層表面上的纖維蛋白原質(zhì)量至多為25％，如至多為20％，如至多15％，如至多10％。
一個(gè)含有至少一個(gè)噴嘴的涂藥器，可用來(lái)涂敷所述懸浮液到所述載體上，這樣，在當(dāng)所述載體與所述噴嘴相互作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，所述噴嘴涂藥器迫使所述懸浮液流過(guò)所述噴嘴。所述涂藥器可以包括或設(shè)置一個(gè)傳送帶、一個(gè)攪拌裝置連接到一個(gè)泵或一個(gè)泵系統(tǒng)或其它供給裝置上、和一種噴嘴或噴嘴系統(tǒng)(它能橫斷地例如以直角移動(dòng)到所述傳送帶)。根據(jù)所述介質(zhì)的具體性質(zhì)，所述噴嘴和噴嘴系統(tǒng)可以具有不同形狀和尺寸。所述噴嘴或噴嘴系統(tǒng)，可以經(jīng)由管道連接到所述供給裝置上。所述供給裝置可以提升所述涂敷介質(zhì)從所述攪拌裝置到所述噴嘴系統(tǒng)中。在所述涂敷過(guò)程中，所述噴嘴系統(tǒng)可以橫移過(guò)所述載體。在其待料位置，它可固定在所述傳送帶的一側(cè)。所述涂敷過(guò)程可以通過(guò)一個(gè)擋光板感覺(jué)載體在所述傳送帶上的存在而起動(dòng)，類似地，它可被一個(gè)擋光板信號(hào)所停止。這類涂藥器具有一個(gè)相對(duì)小的死體積，而且它易于控制，包括易于清潔。而且，它具有在任意時(shí)間中斷所述涂敷過(guò)程的能力，所以，它可適用于相對(duì)寬范圍的粘度，而且它能得到均勻的涂層。
可選擇地或附加地，一種具有多個(gè)單獨(dú)出口的容器，也可用于涂敷所述懸浮液到所述載體上，這樣，所述懸浮液就受迫從所述容器經(jīng)過(guò)所述出口流到所述載體之上。后一種類型的涂藥器，呈一種在其底部含有可移動(dòng)板容器形式，公開(kāi)在US6177126B1中，因此其全部?jī)?nèi)容按照引用并入本文中。由于US6177126B1具有更為均勻的分散，所以采用這些裝置中的一種用于本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中。所述載體和所述涂藥器，優(yōu)選地可彼此相對(duì)在運(yùn)送方向上進(jìn)行移動(dòng)，同時(shí)所述懸浮液被涂敷到所述載體上，這樣，所述移動(dòng)速率可能在0.025-0.05m/s之間，如0.03-0.04m/s。經(jīng)過(guò)所述涂藥器涂敷到所述載體上的懸浮液的流率，為400-600ml/min，如470-550ml/min，如495-505ml/min。
在第四個(gè)方面本發(fā)明涉及一種干燥一種涂敷到載體的涂層表面作為一種濕涂層的纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液的方法，所述方法包括使所述涂層載體經(jīng)過(guò)低于1000mbar的壓力，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，進(jìn)而固定所述干燥涂層到所述涂層表面上。在所述干燥過(guò)程中，通過(guò)采用真空和使用所述真空，可以保持低溫(2-10℃)和高的相對(duì)濕度(80-95％)，這樣，所述載體特別是呈膠原形式如膠原海綿以及所述纖維蛋白原和凝血酶的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)，就可以得到保持。
所述懸浮液可以通過(guò)下述步驟得到—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，和所述載體可為一種膠原海綿，它業(yè)已經(jīng)由包括以下步驟的方法制備得到—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm或平均對(duì)角直徑為3mm的部分。
和所述涂層可通過(guò)下述步驟涂敷到所述膠原海綿上—在鄰近所述載體位置提供所述含有纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液，—將所述懸浮液涂敷到所述載體的涂層表面上。
所述用于制備所述膠原海綿和用于制備所述懸浮液的方法，公開(kāi)在上述與本發(fā)明第二個(gè)方面和第三個(gè)方面有關(guān)的方法中。
在干燥過(guò)程中，所述涂層載體要在0-12℃的溫度如1-10℃，2-8℃，和/或在周圍大氣的75-99％如85-95％的相對(duì)濕度下經(jīng)受所述壓力。在干燥過(guò)程中，氣流可流過(guò)所述涂層載體，從而將蒸汽輸送遠(yuǎn)離所述涂層載體。
為了完成所述干燥，所述涂層載體優(yōu)選是在所述條件下保持至少1小時(shí)的時(shí)間，如至少2小時(shí)，如至少4小時(shí)。
由于收縮，所述干燥涂層表面的面積小于所述濕涂層表面的面積。在本發(fā)明的方法中，所述干燥涂層表面的面積至少為所述濕涂層表面面積大小的75％，如至少80％。
當(dāng)所述涂層載體在貯存時(shí)，為了保持所述活性成分的穩(wěn)定，所述載體和所述干燥涂層表面一起，優(yōu)選地，具有不超過(guò)12％重量的水分，如不超過(guò)8％重量。
與本發(fā)明其它方面有關(guān)所討論的所有的所述懸浮液和所述膠原海綿的參數(shù)和特征，包括制備方法，也可適用于本發(fā)明的第四個(gè)方面所述方法。
在第五個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種具有一種纖維蛋白原和凝血酶涂層的涂層膠原海綿，其中所述涂層膠原海綿是通過(guò)一種包括以下步驟的方法制備得到的—提供一種由包括下述步驟的方法得到的膠原海綿—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，
—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm或平均對(duì)角直徑為3mm的部分，—涂敷一種纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液到所述膠原海綿的一個(gè)涂層表面上，和—使所述涂層載體經(jīng)受低于1000mbar壓力的步驟，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，并固定所述干燥涂層到所述涂層表面上，所述涂層膠原海綿具有至少一個(gè)下述性質(zhì)—所述懸浮液均勻分散在所述涂層表面的一個(gè)給定寬度上，使得單位面積所述涂層表面的纖維蛋白原質(zhì)量至多為25％，—在所述涂層材料樣品在一種Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，所述涂層的磨損低于2.0mg/cm2。
當(dāng)其應(yīng)用于組織粘合、組織封口或止血時(shí)，所述懸浮液在所述涂層表面上的均勻分散，可以提高所述涂層表面的功效。所述涂層的低磨損，可以保證所述涂層膠原海綿能夠被外科醫(yī)生和/或被外科設(shè)備傳送、抓取和其它處理，但不會(huì)損失所述干燥的懸浮液即所述涂層。所述纖維蛋白原配方可占所述涂層膠原海綿總重量的大約60-90％。所述配方通常含有約50-60％重量的下述物質(zhì)鹽、氨基酸和白蛋白。纖維蛋白原單獨(dú)通常占所述配方的40-50％。
優(yōu)選地，所述懸浮液具有20-80mg/ml的水分，如24-32mg/ml。所述懸浮液的凝血酶含量可為20-40I.U./ml，如24-33I.U./ml。平均地，在涂層之后，在所述涂層表面上的所述凝血酶含量可為2-4I.U./cm2，如2.3-3.3I.U./cm2。在所述涂層表面的任意位置上，所述凝血酶含量不超過(guò)5I.U./cm2是受人歡迎的，或者，在所述涂層表面的任意位置，它不超過(guò)3.8I.U./cm2。
所述涂層載體的微生物純度，優(yōu)選地至多為4CFU/cm2，如至多2.25CFU/cm2。
在又一個(gè)獨(dú)立的方面，本發(fā)明涉及上述提及的涂層膠原海綿在組織粘合、組織封口和止血的用途。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1-7描述了不同種涂層載體和用于涂敷它們的設(shè)備，如實(shí)施例VIII中所述。
圖8為圖示說(shuō)明從制備一種懸浮液到包裝涂層膠原海綿的一系列過(guò)程的流程圖。
圖9為用于獲得所述懸浮液粘度量度的裝置的示意圖。
圖10和11含有一個(gè)圖示說(shuō)明一種用于獲得膠原海綿方法的流程圖。
附加詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明所述方法和產(chǎn)品的優(yōu)選實(shí)施方式，將在下面進(jìn)行描述，參見(jiàn)圖8。
一種含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液，可以采用本發(fā)明所述用于制備一種懸浮液的方法制備得到，如下所述將纖維蛋白原在2-8℃的100％乙醇中進(jìn)行均化，得到一種纖維蛋白原和醇的混合物，所述混合物占最終懸浮液體積的大約80％體積。接著，加入核黃素。所述混合物隨后在一個(gè)密閉容器中進(jìn)行攪拌，直到對(duì)其作進(jìn)一步的處理。
人體或牛的凝血酶用水進(jìn)行溶解以用于注射。所述溶液添加到35倍數(shù)量的0-8℃的100％乙醇中。將這樣得到的凝血酶懸浮液在0-8℃進(jìn)行均化80-100秒。
在所述纖維蛋白原和凝血酶混合物進(jìn)行混合之前，向所述纖維蛋白原混合物中加入一種抑肽酶溶液和用于注射的水。接著，所述凝血酶混合物加入到所述纖維蛋白原混合物中。懸浮液的最終體積是通過(guò)添加在2-8℃的100％乙醇而制備得到的。
含有上述步驟的方法，在下文中稱作“I組方法”。
作為一種替代方案，一種所述用來(lái)制備本發(fā)明含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液的方法，包括以下步驟所述纖維蛋白原混合物，是通過(guò)在攪拌作用下添加顆粒尺寸為35-80μm Folk Ward平均直徑預(yù)微粉化纖維蛋白原和核黃素到在2-8℃的94-97％乙醇中得到的。經(jīng)此得到的核黃素和乙醇的混合物，占最終懸浮液體積的70-80％。所述纖維蛋白原混合物還在一個(gè)密閉容器中進(jìn)行攪拌，直到對(duì)其作進(jìn)一步的處理。
所述凝血酶混合物，是通過(guò)添加凝血酶到在-30℃的94-97％乙醇中而得到的。備用地，所述凝血酶混合物是通過(guò)溶解凝血酶在用于注射的水中，隨后將所得到的凝血酶溶液緩慢地添加到17-35倍數(shù)量的-30℃的100％乙醇中而得到的。所述懸浮液進(jìn)行均化80-100秒。
一種IKA的UltraTurrax設(shè)備可用作一種均化設(shè)備。
將所述凝血酶混合物添加到含有纖維蛋白原和核黃素的混合物中。加入一種在2-8℃的94-97％乙醇。
含有上述步驟的方法，在下文中稱作“II組方法”。
上述的I組和II組方法，都可導(dǎo)致本發(fā)明的懸浮液，優(yōu)選是具有下述特征—乙醇濃度94-97％—在圖9左側(cè)所示裝置上測(cè)量得到的流出時(shí)間31.5-48秒—沉降性能固體顆粒體積占總體積的百分比自起始后5分鐘大于85％自起始后24小時(shí)50-80％—顆粒尺寸35-80μm Folk Ward平均直徑。
在本發(fā)明所述干燥方法的一種實(shí)施方式中，在對(duì)以膠原海綿形式的載體進(jìn)行涂敷之前，膠原海綿條帶在2-8℃和80-91％相對(duì)濕度條件下培養(yǎng)2-30小時(shí)。所述用于涂敷所述懸浮液到所述膠原海綿上的涂藥器，如上所述。所述膠原海綿條帶一旦涂敷之后，就在2-8℃和80-90％相對(duì)濕度條件下培養(yǎng)8-60分鐘。所述涂層膠原條帶，在一個(gè)真空干燥室內(nèi)于2-8℃的氣溫和80-90％相對(duì)濕度條件下進(jìn)行干燥。一路氣流以1.2-40m3/h的空氣流量，通過(guò)吸氣閥流過(guò)所述膠原條帶。根據(jù)大氣壓，施加30-60mbar的真空，即絕對(duì)壓力大約為970mbar，所述涂層膠原條帶干燥2-5小時(shí)。
所述懸浮液粘度的量度，是通過(guò)使用一種如圖9所示的裝置進(jìn)行的，如上所述。如圖9左側(cè)所示裝置，是由鋼制成的，所述容器和所述底部孔口具有下述尺寸—所述圓筒形部件的內(nèi)徑46mm—所述圓筒形部件的內(nèi)高度60mm—所述圓錐底部的內(nèi)高度20.5mm—所述底部孔口的內(nèi)徑2.6mm，—連接到所述底部孔口通道的長(zhǎng)度9mm。
圖9右側(cè)所示裝置，是由塑料材料制成的，所述容器和所述孔口具有下述尺寸—所述圓筒形部件的內(nèi)徑50mm—所述圓筒形部件的內(nèi)高度41mm—所述圓錐底部的內(nèi)高度24mm—所述底部孔口的內(nèi)徑2.5mm，—連接到所述底部孔口通道的長(zhǎng)度小于5mm。
纖維蛋白原原料
凝血酶原料
下面的實(shí)施例I-VI將舉例說(shuō)明用于制備本發(fā)明具有一種纖維蛋白原和凝血酶涂層的涂層膠原海綿的各種不同步驟。所述步驟包括制備本發(fā)明懸浮液的方法，得到如下所述的實(shí)施方式和本發(fā)明的懸浮液。而且，本發(fā)明所述用于涂敷的方法和本發(fā)明用于干燥的方法，也得到應(yīng)用。
實(shí)施例I在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方B和人體凝血酶配方B。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用II組方法，得到最終懸浮液體積為3500ml纖維蛋白原混合物-2800ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)-492.5g人體纖維蛋白原配方B
-493.5mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存20小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-100ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-12.27g人體凝血酶配方B所述凝血酶混合物在-30℃貯存18小時(shí)。懸浮液-157ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為94％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為3500ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度94.3％2.由圖9左側(cè)所示鋼裝置測(cè)量得到的流出時(shí)間36.5秒3.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積98％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積64％的測(cè)試體積。
4.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)56.4+/-1.3μm呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度5.2℃-絕對(duì)濕度4.8g水/kg空氣
-培養(yǎng)時(shí)間18.5小時(shí)。
采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為5.2℃和絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣的條件下培養(yǎng)15分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5.2℃，絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣-空氣流過(guò)吸氣閥的流量23m3/小時(shí)-真空59mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)。
當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.2mg/cm2。
實(shí)施例II在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方C和人體凝血酶配方C。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用II組方法，得到最終懸浮液體積為3500ml纖維蛋白原混合物-2252ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)
-370.7g人體纖維蛋白原配方C-493.5mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存20小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-188ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-12小瓶人體凝血酶配方C/12ml用于注射的水，所述凝血酶混合物在-30℃貯存18小時(shí)。懸浮液-164.5ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為94％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為3500ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度94.1％2.由圖9左側(cè)所示鋼裝置測(cè)量得到的流出時(shí)間32.8秒3.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積94％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積71％的測(cè)試體積。
4.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)49.2+/-0.93μm。
呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度4.8℃-相對(duì)濕度90.3％
-培養(yǎng)時(shí)間22.25小時(shí)采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為4.9℃和絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣的條件下培養(yǎng)13分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5.2℃，絕對(duì)濕度為4.9g水/kg空氣-空氣流過(guò)吸氣閥的流量25m3/小時(shí)-真空60mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)。
當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.2mg/cm2。
實(shí)施例III在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方B和人體凝血酶配方B、和抑肽酶。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用II組方法，得到最終懸浮液體積為1000ml纖維蛋白原混合物-820ml乙醇(在2-8℃時(shí)為100％)，39.4ml用于注射的水，
和10.6ml抑肽酶-90.67g微粉化的人體纖維蛋白原配方C-141mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存20小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-50ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-3.75g人體凝血酶配方B所述凝血酶混合物在-30℃貯存16小時(shí)。懸浮液將全部體積的凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
將在2-8℃時(shí)為100％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為1000ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度95％2.由圖9右側(cè)所示塑料裝置測(cè)量得到的流出時(shí)間35秒3.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積89％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積76％的測(cè)試體積。
4.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)74.4+/-3.5μm。
呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將16個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度5.0℃
-相對(duì)濕度85％-培養(yǎng)時(shí)間17小時(shí)采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為5℃和相對(duì)濕度為85％的條件下培養(yǎng)35分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5℃，相對(duì)濕度為85％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量1.2m3/小時(shí)-真空35mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)。
當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.2mg/cm2。
實(shí)施例IV在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方C和人體凝血酶配方C。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用II組方法，得到最終懸浮液體積為780ml纖維蛋白原混合物
-700ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)-84.42g人體纖維蛋白原配方C-110mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存20小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-35ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-0.54g人體凝血酶配方C所述凝血酶混合物在-30℃貯存16小時(shí)。
懸浮液-23.0ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為100％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為780ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度94％2.由圖9右側(cè)所示塑料裝置測(cè)量得到的流出時(shí)間33.5秒3.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積92％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積72％的測(cè)試體積。
4.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)60.5+/-0.5μm呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將8個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度6.0℃
-相對(duì)濕度85％-培養(yǎng)時(shí)間18.5小時(shí)采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為5℃和相對(duì)濕度為85％的條件下培養(yǎng)45分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5℃，相對(duì)濕度為85％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量1.2m3/小時(shí)-真空35mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.3mg/cm2。
實(shí)施例V在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方A和人體凝血酶配方A。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用I組方法，得到最終懸浮液體積為3120ml纖維蛋白原混合物
-2540ml乙醇(在2-8℃時(shí)為100％)-311.6g人體纖維蛋白原配方A-440mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存18小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。
凝血酶混合物-210ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-229g人體凝血酶配方A懸浮液-將用于注射的87.3ml水添加到所述纖維蛋白原混合物中。
將所述凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
將在2-8℃時(shí)為100％的乙醇加入到其中，達(dá)到最終的懸浮液體積。
懸浮液特征1.乙醇濃度97％2.由圖9左側(cè)所示鋼裝置測(cè)量得到的流出時(shí)間40.8秒3.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積95.6％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積63.5％的測(cè)試體積。
4.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)51.8+/-0.8μm呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度6.5℃-相對(duì)濕度90％
-培養(yǎng)時(shí)間22.5小時(shí)采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為6.5℃和相對(duì)濕度為90％的條件下培養(yǎng)10分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為6.5℃，相對(duì)濕度為90％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量21m3/小時(shí)-真空58mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.1mg/cm2。
實(shí)施例VI在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方A和牛凝血酶配方和抑肽酶。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，采用I組方法，得到最終懸浮液體積為16720ml纖維蛋白原混合物-13600ml乙醇(在2-8℃時(shí)為100％)
-1750.5g人體纖維蛋白原配方A-2361mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存21小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-420ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-1229g人體凝血酶配方A懸浮液-將162.3ml抑肽酶溶液添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將用于注射的304.7ml水添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將所述凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為100％的乙醇加入到其中，達(dá)到最終的懸浮液體積。
懸浮液特征1.乙醇濃度97％2.在圖9左側(cè)所示鋼裝置上測(cè)量得到的流出時(shí)間36.8秒3.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)58.6+/-0.6μm。
呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將288個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度6.5℃-相對(duì)濕度89％-培養(yǎng)時(shí)間25小時(shí)采用如US6177126B1所示的涂藥器，用所述懸浮液對(duì)所述膠原條帶進(jìn)行涂敷。
所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為6.5℃和相對(duì)濕度為89％的條件下培養(yǎng)10分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為6.5℃，相對(duì)濕度為89％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量22.5m3/小時(shí)-真空59mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)。
當(dāng)1×5cm2樣品在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.1mg/cm2。
實(shí)施例VII在一種含有人體纖維蛋白原、牛凝血酶和抑肽酶的涂層膠原海綿中，在生產(chǎn)室的環(huán)境條件例如在2-8℃的7小時(shí)涂敷過(guò)程期間，對(duì)所述涂層懸浮液的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。
在不同取樣時(shí)間，對(duì)每種活性成分進(jìn)行化驗(yàn)。所得結(jié)果如下述表I所示。
表I
所述結(jié)果表明所有三種成分都是具有令人滿意的穩(wěn)定性。
實(shí)施例VIII參考是針對(duì)圖1-7作出的，所述各種不同圖片表示
涂層Nycomed海綿(TachoComb S)與其它如TachoComb S同樣涂層的載體產(chǎn)品的比較所述層的粘合步驟1.不同載體的涂敷
每個(gè)面積為2×4.5cm2的載體，用TachoComb S涂層懸浮液進(jìn)行涂敷。涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2).對(duì)所述樣品進(jìn)行干燥。
2.對(duì)于每個(gè)涂層載體，制備一個(gè)1×4cm2的樣品。
3.所述層的粘合作用是按下述方法進(jìn)行測(cè)試的
方法說(shuō)明裝置分析天平(測(cè)量精度±0.5mg)帶有固定裝置的Vibrofix混合器具有毫米刻度的標(biāo)尺秒表、解剖刀、帶有塞子的內(nèi)徑為2cm試管步驟用來(lái)確定磨損的所述步驟和計(jì)算如上所述。
結(jié)果
評(píng)價(jià)除Nycomed膠原海綿之外的所有載體在涂敷之后不是彈性的。
所述樣品必須非常細(xì)心地進(jìn)行切割。如果使用剪刀進(jìn)行切割，則會(huì)有一些所述涂層植物可能會(huì)剝落，這是因?yàn)樗鰧幼陨硎莿傂缘?。Ethisorb藥膏顯示幾乎根據(jù)與所述涂層材料沒(méi)有關(guān)系。當(dāng)搖晃一會(huì)之后，所有涂層都剝落得象一塊“地毯”一樣。
Nycomed膠原海綿與其它載體材料之間的差別，已經(jīng)清楚地得到說(shuō)明。
潮濕涂層載體的彈性步驟1.不同載體的涂敷每個(gè)面積為2×4.5cm2的載體，用TachoComb S涂層懸浮液進(jìn)行涂敷。涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2)。對(duì)所述樣品進(jìn)行干燥。
2.對(duì)于每個(gè)涂層載體，制備一個(gè)約5-7cm2的樣品。
3.所述樣品進(jìn)行濕潤(rùn)，并放到一種固定在一種如下述標(biāo)題“步驟”中詳細(xì)描述的特定裝置上的彈性橡膠薄片上。接著施加壓力到所述橡膠薄片上，使之?dāng)U展。在經(jīng)過(guò)二次擴(kuò)展和放松之后，所述薄片進(jìn)行第三次擴(kuò)展。在其最大擴(kuò)展點(diǎn)時(shí)測(cè)量其所述載體的面積。
方法說(shuō)明裝置/化學(xué)品蠕動(dòng)泵(IKA PA-SF)壓力緩沖瓶(3個(gè)出口)VDO壓力計(jì)(0-250mbar)玻璃漏斗(孔道1∶30mm，孔道2∶15mm)硅樹脂管道和夾子、橡膠手套(Semper med)、解剖刀、具有毫米刻度的標(biāo)尺、剪刀生理鹽水步驟下述裝置經(jīng)由硅樹脂管道空氣密封地連接到所述壓力緩沖瓶的三個(gè)出口之上a)蠕動(dòng)泵b)壓力計(jì)c)玻璃漏斗/孔道2從橡膠手套上切割下一個(gè)約8×8cm2的雙重薄片。該薄片空氣密封地固定到所述玻璃漏斗/孔道1上。
使用解剖刀從所述涂層載體上切割下約5-7cm2的涂層面積。
測(cè)量所述樣品的面積(起始面積)。所述樣品的涂層用鹽水進(jìn)行濕潤(rùn)，并放在所述橡膠薄片之上。接著用手將它壓放在所述橡膠薄片上約1分鐘。
使用所述蠕動(dòng)泵，所述橡膠薄片在約70mbar的壓力下進(jìn)行擴(kuò)展。在放松所述橡膠薄片之后，重量進(jìn)行二次。在第三次擴(kuò)展時(shí)，在橡膠薄片擴(kuò)展的最大位置測(cè)量所述涂層載體的面積(長(zhǎng)度和寬度)。
計(jì)算“彈性”系數(shù)＝載體在第三擴(kuò)展時(shí)的面積/樣品的起始面積結(jié)果
評(píng)價(jià)
所述濕潤(rùn)膠原海綿Nycomed(TachoComb)的彈性，是所述產(chǎn)品的一個(gè)重要特征。彈性對(duì)于胸和腹部外科是非常重要的。在粘合之后，所述載體應(yīng)該能夠允許進(jìn)行例如肺或腸的擴(kuò)展和放松運(yùn)動(dòng)。特別地，Ethisorb表現(xiàn)出根本沒(méi)有彈性。它立即從所述涂層上脫離下來(lái)。涂層WillosponSpezial和Opraskin在測(cè)試過(guò)程中表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)缺陷。
涂層載體在內(nèi)窺鏡檢查外科中的使用步驟1.不同載體的涂敷采用TachoComb S涂層懸浮液，對(duì)每種載體涂敷2×4cm2的面積。
所述涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2)。干燥所述樣品。
2.所述涂層載體樣品用于內(nèi)窺鏡外科的處理和由于這種處理引起的涂層損失，采用一種數(shù)字光電裝置記錄下來(lái)。
方法說(shuō)明裝置內(nèi)窺平臺(tái)(Endodock)內(nèi)窺鏡檢查工具，設(shè)計(jì)用于在內(nèi)窺鏡檢查外科中使用TachoComb(參見(jiàn)圖7)。數(shù)字光電裝置。
研究載體列表
步驟自每種載體取得的圖片系列1.圖片未涂層的和涂層的載體樣品的記錄2.圖片所述涂層樣品插入到所述內(nèi)窺鏡裝置中(Endodock)。
所述樣品必須用手壓平才能使之圍繞一個(gè)導(dǎo)向“栓”進(jìn)行纏繞。接著所述樣品細(xì)心地插入到直徑為10mm的鋼管中。
所述樣品記錄部分地插入到所述Endodock管中。
3.圖片仔細(xì)地推出所述樣品。之后，展開(kāi)所述樣品。
由于這種處理而從所述載體上脫離的涂層，聚集在所述載體周圍。記錄在插入所述內(nèi)窺鏡裝置之后的展開(kāi)樣品和由于這種處理引起的涂層損失。
評(píng)價(jià)在內(nèi)窺鏡外科中的TachoComb(涂層的馬膠原海綿/Nycomed)是所述產(chǎn)品最為苛求的應(yīng)用。TachoComb被插入到一種內(nèi)窺鏡裝置中。這種裝置的管道其直徑通常為10-13mm。為了被插入到所述管道中，TachoComb要被壓平并接著圍繞一個(gè)導(dǎo)向“栓”進(jìn)行纏繞，然后仔細(xì)地插入到所述管道中。因此，所述涂層與所述載體和在其自身內(nèi)的連接，必須是很強(qiáng)的，而且，所述產(chǎn)品必須保持足夠的彈性，使之在干燥條件下能夠彎曲和被卷起。當(dāng)運(yùn)到所述外科位置時(shí)，TachoComb被仔細(xì)地從所述管道中推出來(lái)。接著，它必須展開(kāi)并放置在所述傷口表面。這經(jīng)常需要進(jìn)行一些調(diào)節(jié)。因此，所述層與所述載體的粘合作用應(yīng)該足夠地強(qiáng)大以承受這種處理。
結(jié)果結(jié)果可從附圖1-6看出。涂層材料脫落物的評(píng)價(jià)如下所示
由于Ethisorb是一種非常剛性的載體，所述涂層的粘合作用是非常差的。因此，涂層的Ethisorb在這種研究過(guò)程中會(huì)損失幾乎全部的涂層。對(duì)涂層的膠原海綿Nycomed相比，所有其它研究的載體具有一個(gè)有待涂敷的平坦表面。這樣，所述涂層就象一張“平坦地毯”躺在所述載體上。這將會(huì)導(dǎo)致所述干燥涂層載體具有相當(dāng)多的非彈性結(jié)構(gòu)。彎曲或卷起經(jīng)常會(huì)使所述涂層自身斷裂。
在所述涂層載體插入到所述內(nèi)窺鏡裝置和所述樣品隨后的展開(kāi)之后，除了膠原海綿Nycomed之外，所有載體損失了相當(dāng)數(shù)量的涂層，這樣，留下有很大面積沒(méi)有涂層材料。
Nycomed膠原海綿的結(jié)構(gòu)和質(zhì)地是TachoComb在干燥或濕潤(rùn)條件時(shí)彈性的基礎(chǔ)。Nycomed膠原海綿是泡沫狀的，在其內(nèi)具有多邊腔室。在所述表面上，這些腔室被切割成洞穴。這些洞穴使所述涂層表面變大。在涂敷過(guò)程中，所述涂層懸浮液均勻地分散到所述結(jié)構(gòu)表面上。在干燥過(guò)程中，所述含有纖維蛋白原和凝血酶的溶液被固定到所述洞穴中。這樣，TachoComb就可被切割為希望的尺寸，它可被插入到內(nèi)窺鏡裝置中且僅有少量的涂層材料損失或者根本沒(méi)有損失。
干燥TachoComb的高彈性，相對(duì)于所有其它研究的涂層載體來(lái)說(shuō)，是一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)。
膠原海綿的制備本發(fā)明中所述膠原海綿可由圖10和11所圖示的方法制備得到，如下所述業(yè)已發(fā)現(xiàn)，采用一種纖維蛋白膠水制劑的膠原海綿的成功涂敷，取決于所述膠原海綿的質(zhì)地。因此，人們希望能夠提供一種用于制備具有一定質(zhì)地的膠原海綿的方法，特別是對(duì)于制備適合于用纖維蛋白膠水制劑涂敷的膠原海綿，從而得到一種用于治療和密封傷口的材料。人們還希望能夠提供一種用于制備較先有技術(shù)海綿具有改進(jìn)物理性質(zhì)的膠原海綿的方法，它具有改進(jìn)的濕度、彈性、密度和彈性模量。人們還希望能夠提供一種用于制備空氣和流體密封的膠原海綿，在這意義上，一旦所述膠原海綿應(yīng)用到一個(gè)傷口上，它就不會(huì)允許空氣或液體滲入到所述膠原海綿之中。
因此，所述制備膠原海綿的方法，可包括以下步驟—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm或具有平均對(duì)角直徑至多為3mm的部分。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“腔直徑”應(yīng)該理解為在一個(gè)腔中最大的直線壁與壁間距離，即一個(gè)腔的最大對(duì)角直線距離。所述腔可為多邊形狀，如八邊形。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，大于0.75mm但小于4mm的腔直徑或至多為3mm的腔直徑，可以使得所述膠原海綿特別適合用于被一種含有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液所涂敷。優(yōu)選地，所述膠原凝膠具有的干燥質(zhì)量范圍為2-20mg干燥質(zhì)量/g凝膠，如4-18mg，如5-13mg，如6-11mg/g凝膠。所述膠原凝膠的動(dòng)力學(xué)粘度優(yōu)選為2-20Ncm，如4-10Ncm，如6-8Ncm。所述膠原海綿優(yōu)選具有的水分不大于20％，如10-15％，如約18％。所述膠原海綿的彈性模量?jī)?yōu)選范圍為5-100N/cm，如10-50N/cm，所述海綿的密度優(yōu)選為1-10mg/cm3，如2-7mg/cm3。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，由上述方法制備得到的膠原海綿，是空氣和液體密封的，在此意義上，一旦所述涂層膠原海綿被涂敷到一個(gè)傷口上，則它就不會(huì)允許空氣或液體滲入到所述膠原海綿中。液體被吸收在所述海綿之中。這種效果主要是由于下述事實(shí)達(dá)到的所述混合空氣到所述膠原凝膠步驟提供了這樣一種膠原海綿，它是一種三維結(jié)構(gòu)，具有被膠原材料壁所分隔開(kāi)且基本全部密封的層疊腔室，與那些具有纖維結(jié)構(gòu)的已知膠原海綿不同。
所述膠原凝膠可包括不同類型的材料，如源自哺乳動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因的或重組來(lái)源的I型、II型或III型，但是所有其它類型的膠原也可采用。所述膠原可包括源自于選自由馬腱、人腱和牛腱所組成的組中腱的原料。另外地或替代地，所述膠原凝膠包括重組膠原原料。
所述海綿分離部分的膠原含量，優(yōu)選為所述海綿干燥質(zhì)量的50-100％，如75-100％，如80-100％，如85-100％，如90-100％，如92-100％，如92-98％，如93-97％，如94-96％。
所述制備膠原凝膠步驟，優(yōu)選包括以下步驟—將所述腱在-10℃至-30℃之間的溫度進(jìn)行貯存，并剝下所述腱，—從所述腱中去除異種蛋白，—降低所述腱中的微生物含量，—使所述腱腫脹，—均化所述腫脹的腱。
所述貯存、剝離、去除蛋白、降低微生物含量和腫脹步驟，目的是在于純化，而所述均化步驟目的是在于得到呈一種凝膠形式的膠原。
所述降低微生物含量步驟，優(yōu)選包括添加一種酸如一種有機(jī)酸，如乳酸到所述腱之中。而且，一種有機(jī)溶劑如一種醇如乙醇，優(yōu)選寺也可添加到所述腱之中。此外，所述腱的腫脹步驟，優(yōu)選地，包括添加乳酸至所述腱之中。所采用的乳酸為0.40-0.50％的乳酸，如0.45％的乳酸。
所述腱的腫脹步驟，可包括在4-25℃的溫度貯存所述腱，如在10-20℃的溫度，持續(xù)48-200小時(shí)，如100-200小時(shí)。
所述腫脹腱的均化步驟，優(yōu)選是這樣進(jìn)行的，以保證得到膠原凝膠片斷即纖維球狀物的顆粒尺寸具有的直徑為0.8-1.2cm，如大約1cm。而且，所述膠原凝膠的物理性質(zhì)，優(yōu)選地如上所述。舉例來(lái)說(shuō)，合適的性質(zhì)，可通過(guò)借助于齒條式盤磨機(jī)或充分均化設(shè)備，對(duì)所述腫脹腱實(shí)施所述均化步驟而達(dá)到。
所述混合空氣到所述膠原凝膠步驟，優(yōu)選包括以下步驟—借助于一個(gè)混合器，將室內(nèi)空氣混合到所述凝膠中，形成一種膠原泡沫，—將所述混合凝膠泡沫進(jìn)料到一種分餾通道中，—分離存在于所述分餾通道中的膠原凝膠和膠原泡沫。
從所述分餾通道中膠原泡沫分離出來(lái)的至少部分膠原凝膠，可引回到所述混合器中。在這種情形中，從所述分餾通道引回到所述混合器的膠原凝膠數(shù)量與引入到所述混合器中的新鮮膠原凝膠數(shù)量的比值，優(yōu)選是在0.1-0.5之間。所述分離膠原凝膠和膠原泡沫步驟，優(yōu)選包括以下步驟—分離出一部分選定的存在于所述分餾通道中的膠原泡沫，—將所述選定部分的膠原泡沫引出所述分餾通道，用于對(duì)其進(jìn)行干燥。
在所述方法的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，在所述分餾通道中保持15-40℃的溫度，如20-25℃。
在混合空氣到所述膠原凝膠之后，所述膠原泡沫可以進(jìn)行均化2-4分鐘的一段時(shí)間。
在所述干燥膠原泡沫步驟之前和在所述混合空氣到所述膠原凝膠步驟之前，一種中和劑可以添加到所述膠原泡沫之中，且所述膠原泡沫優(yōu)選是進(jìn)行中和的，以便使所述pH為6.5-8.5的膠原泡沫，達(dá)到通常為2.5-3.5的pH。可以采用一種含氨溶液的中和劑，所述膠原泡沫優(yōu)選是中和持續(xù)5-30小時(shí)，如10-20小時(shí)，如大約24小時(shí)。
在所述干燥膠原泡沫步驟之前，所述膠原泡沫，優(yōu)選地以這樣一種方式注入到一種干燥容器中，使得在填充時(shí)實(shí)質(zhì)上沒(méi)有空氣被帶入到所述泡沫中。
所述干燥步驟優(yōu)選包括在15-60℃之間的溫度，如20-40℃，進(jìn)行干燥，持續(xù)50-200小時(shí)，如100-150小時(shí)，得到一種干燥的膠原海綿。所述干燥步驟可在略微低于大氣壓的壓力中進(jìn)行，如壓力在700-900mbar之間，如大約800mbar。
由上述方法制得的膠原海綿，優(yōu)選具有至少一個(gè)下述標(biāo)準(zhǔn)-pH值在5.0-6.0之間，-乳酸含量至多為5％，-銨含量至多為0.5％，-可溶蛋白含量至多為0.5％，以白蛋白計(jì)，-硫酸鹽灰分含量至多為1.0％，-重金屬含量至多為20ppm，-微生物純度至少為103CFU/g，-膠原含量為75-100％，-密度為1-10mg/cm3，如2-7mg/cm3，-彈性模量范圍為5-100N/cm，如10-50N/cm。
所述分離膠原海綿部分步驟，可包括通過(guò)切割將所述膠原海綿分為多個(gè)部分。所得部分可成型為任意希望的形狀，如圓錐形、圓柱形(包括具有環(huán)形橫截面的圓柱形)、矩形、多角形、立方形和平坦薄片，或者，它們可通過(guò)一種適合的造粒方法等轉(zhuǎn)變?yōu)榱睢?br> 由上述可以明顯地看出，所述膠原海綿可由下述方法制備得到，包括以下步驟—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿塊中，分離出具有下述性質(zhì)的海綿部分—彈性模量范圍為5-100N/cm，—密度范圍為1-10mg/cm3，其腔室直徑大于0.75mm但小于4mm，或腔室直徑平均至多為3mm。
權(quán)利要求
1.一種含有纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液，所述懸浮液是通過(guò)一種包括下述步驟的方法制備得到的—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，所述懸浮液含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒，所述顆粒的FolkWard平均直徑為25-100μm。
2.權(quán)利要求1所述懸浮液，其中所述顆粒的Folk Ward平均直徑為35-80μm。
3.權(quán)利要求1或2所述懸浮液，其中所述懸浮液具有這樣的粘度，當(dāng)其僅受重力影響時(shí)，可使得在25-75秒內(nèi)有90-120ml體積的懸浮液流出一個(gè)具有下述特征的容器的底部孔口—一個(gè)內(nèi)徑為40-50mm且內(nèi)高度為55-65mm的圓筒形部件，和—一個(gè)高度為17-23mm的圓錐形底部部件，所述底部孔口位于所述圓錐形部件的下端，呈圓錐形孔道，其直徑為2-3mm。
4.權(quán)利要求3所述懸浮液，其中所述懸浮液體積是在30-50秒內(nèi)流出所述底部孔口。
5.權(quán)利要求1-4任一所述懸浮液，還含有抑肽酶。
6.一種制備具有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液的方法，包括—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，這樣得到一種含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒的懸浮液，所述顆粒的Folk Ward平均直徑為25-100μm。
7.權(quán)利要求6所述方法，其中，在所述提供纖維蛋白原混合物步驟時(shí)，所述纖維蛋白原進(jìn)行預(yù)微粉化處理，從而得到具有Folk Ward平均直徑為25-100μm的顆粒。
8.權(quán)利要求6或7所述方法，其中所述預(yù)微粉化纖維蛋白原是被攪拌到所述醇中，以得到所述纖維蛋白原混合物。
9.權(quán)利要求6-8任一所述方法，其中，在所述提供所述混合物步驟時(shí)，對(duì)所述混合物進(jìn)行均化。
10.權(quán)利要求9所述方法，其中所述混合物是在0-12℃之間的溫度進(jìn)行進(jìn)行均化。
11.權(quán)利要求10所述方法，其中所述混合物是在2-8℃之間的溫度進(jìn)行均化。
12.權(quán)利要求11所述方法，其中所述溫度在均化過(guò)程中是降低的。
13.權(quán)利要求6-12任一所述方法，其中，所述凝血酶包括至少下述中的一種人體凝血酶、牛凝血酶和重組凝血酶。
14.權(quán)利要求6-13任一所述方法，其中所述纖維蛋白原包括至少下述中的一種人體纖維蛋白原和重組纖維蛋白原。
15.權(quán)利要求6-14任一所述方法，其中所述懸浮液還含有抑肽酶。
16.權(quán)利要求6-15任一所述方法，其中所述醇為乙醇。
17.權(quán)利要求16所述方法，其中所述乙醇是一種無(wú)水乙醇。
18.權(quán)利要求6-17任一所述方法，其中，所述混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶的步驟，是在攪拌所述懸浮液的同時(shí)進(jìn)行的。
19.權(quán)利要求18所述方法，其中，所述攪拌是在0-12℃之間的溫度下進(jìn)行的。
20.權(quán)利要求19所述方法，其中，所述攪拌是在2-8℃之間的溫度下進(jìn)行的。
21.一種用來(lái)采用一種含有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液涂敷一種載體的方法，包括—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，這樣得到一種含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒的懸浮液，所述顆粒的Folk Ward平均直徑為25-100μm，所述涂敷方法包括—在鄰近所述載體位置提供所述含有纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液，—將所述懸浮液涂敷到所述載體的涂層表面上。
22.權(quán)利要求21所述方法，其中所述載體為一種膠原載體。
23.權(quán)利要求22所述方法，其中所述膠原載體為一種膠原海綿。
24.權(quán)利要求23所述方法，其中所述膠原海綿滿足下述標(biāo)準(zhǔn)中的至少一個(gè)-pH值在5.0-6.0之間，-乳酸含量至多為5％，-銨含量至多為0.5％，-可溶蛋白含量至多為0.5％，以白蛋白計(jì)，-硫酸鹽灰分含量至多為1.0％，-重金屬含量至多為20ppm，-微生物純度至少為103CFU/g，-膠原含量為75-100％，-密度為1-10mg/cm3，-彈性模量范圍為5-100N/cm。
25.權(quán)利要求23或24所述方法，其中所述載體為一種膠原海綿，而且，其中所述膠原海綿是由一種包括以下步驟的方法制備得到的制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm、或具有平均對(duì)角直徑為3mm腔室的海綿部分。
26.權(quán)利要求21-25任一所述方法，其中所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，是在室溫0-12℃下進(jìn)行的。
27.權(quán)利要求26所述方法，其中所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，是在室溫1-10℃下進(jìn)行的。
28.權(quán)利要求27所述方法，其中所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，是在室溫2-8℃下進(jìn)行的。
29.權(quán)利要求21-28任一所述方法，其中所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，是在相對(duì)濕度為75-99％的環(huán)境大氣中進(jìn)行的。
30.權(quán)利要求29所述方法，其中所述涂敷懸浮液到所述載體上的步驟，是在相對(duì)濕度為85-95％的環(huán)境大氣中進(jìn)行的。
31.權(quán)利要求21-30任一所述方法，其中，0.08-0.12ml體積的懸浮液被涂敷到每cm2涂層表面的載體之上。
32.權(quán)利要求21-31任一所述方法，其中所述懸浮液是均勻分散在涂層表面的一個(gè)給定寬度之上，使得單位面積所述涂層表面上的纖維蛋白原質(zhì)量至多為25％。
33.權(quán)利要求21-32任一所述方法，其中，一種含有至少一個(gè)噴嘴的涂藥器，是用來(lái)涂敷所述懸浮液到所述載體上，這樣，在當(dāng)所述載體與所述噴嘴相互作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，所述噴嘴涂藥器迫使所述懸浮液流過(guò)所述噴嘴。
34.權(quán)利要求21-32任一所述方法，其中，一種含有一個(gè)具有多個(gè)單獨(dú)出口的容器的涂藥器，是用來(lái)涂敷所述懸浮液到所述載體上，而且，其中所述懸浮液是受迫從所述容器經(jīng)過(guò)所述出口流到所述載體之上。
35.權(quán)利要求34所述方法，其中所述載體和所述涂藥器，是彼此相對(duì)在運(yùn)送方向上進(jìn)行移動(dòng)，同時(shí)所述懸浮液被涂敷到所述載體上。
36.權(quán)利要求35所述方法，其中，所述移動(dòng)速率是在0.025-0.05m/s之間。
37.權(quán)利要求36所述方法，其中，所述移動(dòng)速率是在0.03-0.04m/s之間。
38.權(quán)利要求34-37任一所述方法，其中，經(jīng)過(guò)所述涂藥器涂敷到所述載體上懸浮液的流率，為400-600ml/min。
39.權(quán)利要求38所述方法，其中，所述流率為470-550ml/min。
40.權(quán)利要求39所述方法，其中，所述流率為495-505ml/min。
41.一種干燥一種涂敷到載體的涂層表面作為一種濕涂層的纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液的方法，所述方法包括以下步驟使所述涂層載體經(jīng)過(guò)低于1000mbar的壓力，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，進(jìn)而固定所述干燥涂層到所述涂層表面上。
42.權(quán)利要求41所述方法，其中所述懸浮液是通過(guò)下述步驟得到—提供一種纖維蛋白原和一種醇的纖維蛋白原混合物，—提供一種凝血酶和一種醇的凝血酶混合物，—混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液，而且，其中所述載體為一種膠原海綿，它已經(jīng)由包括以下步驟的方法制備得到—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿塊中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm、或具有平均對(duì)角直徑為3mm腔室的海綿部分，和其中所述涂層是通過(guò)下述步驟涂敷到所述膠原海綿上—在鄰近所述載體位置提供所述含有纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液，—將所述懸浮液涂敷到所述載體的涂層表面上。
43.權(quán)利要求41或42所述方法，其中所述涂層載體是在0-12℃的溫度下經(jīng)受所述壓力。
44.權(quán)利要求43所述方法，其中所述涂層載體是在1-10℃的溫度下經(jīng)受所述壓力。
45.權(quán)利要求44所述方法，其中所述涂層載體是在2-8℃的溫度下經(jīng)受所述壓力。
46.權(quán)利要求41-45任一所述方法，其中所述涂層載體是在周圍大氣的75-99％的相對(duì)濕度下經(jīng)受所述壓力。
47.權(quán)利要求41-46任一所述方法，其中所述涂層載體是在周圍大氣的85-95％的相對(duì)濕度下經(jīng)受所述壓力。
48.權(quán)利要求41-47任一所述方法，其中，在干燥過(guò)程中，空氣氣流流過(guò)所述涂層載體。
49.權(quán)利要求43-48任一所述方法，其中，所述涂層載體是在所述濕度下保持至少1小時(shí)的時(shí)間。
50.權(quán)利要求43-48任一所述方法，其中，所述涂層載體是在所述濕度下保持至少2小時(shí)的時(shí)間。
51.權(quán)利要求43-48任一所述方法，其中，所述涂層載體是在所述濕度下保持至少4小時(shí)的時(shí)間。
52.權(quán)利要求41-51任一所述方法，其中，所述干燥涂層表面的面積至少為所述濕涂層表面面積大小的75％。
53.權(quán)利要求41-51任一所述方法，其中，所述干燥涂層表面的面積至少為所述濕涂層表面面積大小的80％。
54.權(quán)利要求41-53任一所述方法，其中，所述載體和所述干燥涂層表面，具有不超過(guò)12％重量的水分。
55.權(quán)利要求41-53任一所述方法，其中，所述載體和所述干燥涂層表面，具有不超過(guò)8％重量的水分。
56.權(quán)利要求41-55任一所述方法，其中，所述懸浮液還含有抑肽酶。
57.一種具有一種纖維蛋白原和凝血酶涂層的涂層膠原海綿，其中所述涂層膠原海綿是通過(guò)一種包括以下步驟的方法制備得到的—提供一種由包括下述步驟的方法得到的膠原海綿—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm、或具有平均對(duì)角直徑為3mm腔室的海綿部分，—涂敷一種纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液到所述膠原海綿的一個(gè)涂層表面上，和—使所述涂層載體經(jīng)受低于1000mbar壓力的步驟，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，并固定所述干燥涂層到所述涂層表面上，所述涂層膠原海綿具有至少一個(gè)下述性質(zhì)—所述懸浮液均勻分散在所述涂層表面的一個(gè)給定寬度上，使得單位面積所述涂層表面的纖維蛋白原質(zhì)量至多為25％，—在所述涂層材料1×5cm2樣品在一種Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，所述涂層的磨損低于2.0mg/cm2。
58.權(quán)利要求57所述涂層膠原海綿，其中，所述懸浮液具有20-80mg/ml的水分。
59.權(quán)利要求57所述涂層膠原海綿，其中所述懸浮液具有24-32mg/ml的水分。
60.權(quán)利要求57-59任一所述涂層膠原海綿，其中所述懸浮液的凝血酶含量為20-40I.U./ml。
61.權(quán)利要求57-59任一所述涂層膠原海綿，其中所述懸浮液的凝血酶含量為24-33I.U./ml。
62.權(quán)利要求57-61任一所述涂層膠原海綿，其中，所述涂層表面上的所述凝血酶含量平均為2-4I.U./cm2。
63.權(quán)利要求57-61任一所述涂層膠原海綿，其中，所述涂層表面上的所述凝血酶含量平均為2.3-3.3I.U./cm2。
64.權(quán)利要求57-63任一所述涂層膠原海綿，其中，在所述涂層表面的任意位置上，所述凝血酶含量不超過(guò)5I.U./cm2。
65.權(quán)利要求57-63任一所述涂層膠原海綿，其中，在所述涂層表面的任意位置上，所述凝血酶含量不超過(guò)3.8I.U./cm2。
66.權(quán)利要求57-65任一所述涂層膠原海綿，其中，所述涂層載體的微生物純度，至多為4CFU/cm2。
67.權(quán)利要求57-65任一所述涂層膠原海綿，其中，所述涂層載體的微生物純度，至多為2.25CFU/cm2。
68.一種涂層膠原海綿用于組織粘合、組織封口和止血的用途，所述膠原海綿具有一種纖維蛋白原和凝血酶的涂層，其中，所述涂層膠原海綿是通過(guò)一種包括以下步驟的方法制備得到的—提供一種由包括下述步驟的方法得到的膠原海綿—制備一種膠原凝膠，—混合空氣到所述膠原凝膠中，得到一種膠原泡沫，—干燥所述膠原泡沫，得到一種其中具有腔室的干燥載體塊，—從所述膠原海綿中，分離出部分具有腔室直徑大于0.75mm但小于4mm、或具有平均對(duì)角直徑為3mm腔室的海綿部分，—涂敷一種纖維蛋白原、凝血酶和一種醇的懸浮液到所述膠原海綿的一個(gè)涂層表面上，和—使所述涂層載體經(jīng)受低于1000mbar壓力的步驟，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，并固定所述干燥涂層到所述涂層表面上，所述涂層膠原海綿具有至少一個(gè)下述性質(zhì)—所述懸浮液均勻分散在所述涂層表面的一個(gè)給定寬度上，使得單位面積所述涂層表面的纖維蛋白原質(zhì)量至多為25％，—在所述涂層材料1x5cm2樣品在一種Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，所述涂層的磨損低于2.0mg/cm2。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有纖維蛋白原、凝血酶、醇和通過(guò)于乙醇中將纖維蛋白原與凝血酶而獲得任意性的抑肽酶的懸浮液。該懸浮液含有具有Folk Ward平均直徑為25－100μm的纖維蛋白原和凝血酶顆粒。該凝血酶可以是人體的、牛的或重組的凝血酶。纖維蛋白原可以是人體的或重組的纖維蛋白原。本發(fā)明公開(kāi)了一種利用該懸浮液涂敷諸如膠原海綿載體的方法。所述涂層膠原載體可以用作一種即可使用的可吸收組合物，用于組織粘合、組織封口和止血，其中該載體利用固態(tài)固定的成分纖維蛋白膠，即纖維蛋白原和凝血酶來(lái)涂敷。
文檔編號(hào)A61L24/08GK1487843SQ02804097
公開(kāi)日2004年4月7日 申請(qǐng)日期2002年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月25日
發(fā)明者阿爾佛雷德·肖費(fèi)勒, 阿爾佛雷德 肖費(fèi)勒 申請(qǐng)人:奈科明醫(yī)藥有限公司