具有固體纖維蛋白原和固體凝血酶的載體的制作方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：具有固體纖維蛋白原和固體凝血酶的載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種易于使用的可吸收組合物，用于組織粘合、組織封口和止血，主要由一種涂敷有固體固定的人體組合成分纖維蛋白膠人體纖維蛋白原和人體凝血酶的載體組成。這種固定組合物可以直接涂敷到例如傷口表面。在與血液、體液或生理鹽水接觸時(shí)，這種系統(tǒng)機(jī)制就會(huì)模仿階式凝結(jié)的最后階段，其中，凝血酶催化纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，并催化XIII因子的活化從而生成XIIIa。XIIIa因子一經(jīng)形成，就可以通過(guò)共價(jià)交聯(lián)穩(wěn)定所述纖維蛋白凝塊。
象一種兩組分粘合劑一樣，傷口表面和載體通過(guò)聚合作用被粘合在一起。在此過(guò)程中，它持續(xù)大約3-5分鐘，本發(fā)明所述組合物優(yōu)選是壓在所述傷口區(qū)域之上。本發(fā)明所述組合物的成分應(yīng)用約4-6個(gè)月之后，因酶促而退化。
現(xiàn)有技術(shù)商用纖維蛋白膠水，它們模仿所述階式凝結(jié)的最后步驟，含有一種高度濃縮的纖維蛋白原溶液，在應(yīng)用到所述存在的外科傷口之前與一種凝血酶溶液進(jìn)行混合。這些混合物含有一種纖維蛋白溶解抑制劑，例如，抑酞酶或ε-氨基正己酸，以防止所述纖維蛋白凝塊被纖維蛋白溶酶血纖維蛋白酶過(guò)早地溶解。這些兩組分纖維蛋白膠水在許多外科手術(shù)中是有用的，但是，如果所述流血是嚴(yán)重情形時(shí)，在實(shí)現(xiàn)止血之前，它們就可能會(huì)被沖走。這種兩組分纖維蛋白膠水還需要一些包括融化或溶解的預(yù)備步驟。因此，它們是相當(dāng)不實(shí)用的且是難以起作用的，還需要經(jīng)驗(yàn)才能成功地使用這些纖維蛋白膠水。
在最近十年來(lái)，大量的纖維蛋白密封劑正成為大量適應(yīng)癥中外科手術(shù)中的備選方法。但是，在采用纖維蛋白膠水的大部分試驗(yàn)中，需要另外采用一種膠原棉網(wǎng)，以提高止血性能和粘合性能，說(shuō)明它們存在著不足和被外科醫(yī)生使用時(shí)存在著限制。
膠原自從上世紀(jì)六十年代就已經(jīng)被用作止血試劑。膠原是所有哺乳動(dòng)物中最為常見(jiàn)的結(jié)構(gòu)蛋白。大約300kDa(原膠原)的單體蛋白質(zhì)在特定位置進(jìn)行共價(jià)交聯(lián)。所述成熟蛋白質(zhì)因而是不溶的，它形成具有高抗拉強(qiáng)度的特征原纖維。大量的膠原子類(lèi)已經(jīng)被分開(kāi)，其中最為常見(jiàn)為膠原I類(lèi)，它是皮膚、腱、骨和角膜中主要膠原。膠原是一種纖維狀蛋白質(zhì)，由一種長(zhǎng)度大約為290nm的三螺旋組成。這些三螺旋中的五個(gè)(原膠原分子)進(jìn)行交錯(cuò)排列，形成一種直徑大約為3.6nm的微纖維。這些微纖維具有極性和非極性片斷，它們?nèi)菀椎剡M(jìn)行纖維間和纖維內(nèi)的相互作用。微纖維可以被包裝到一個(gè)四角網(wǎng)格中，以形成具有直徑約30nm的亞原纖維。這些亞原纖維接著可裝配成膠原纖維，它是結(jié)締組織的基本單位，它具有數(shù)百nm的直徑，因而在光學(xué)顯微鏡下可以看到一個(gè)細(xì)線(xiàn)。
膠原可以用作一種用于密封傷口的材料，可能地與一種含有纖維蛋白膠水的涂料一起使用。纖維蛋白膠水，即纖維蛋白原、凝血酶和抑肽酶的組合物，許多年來(lái)已經(jīng)成功地用于治療粘合組織和神經(jīng)和用于密封存在少量流血的表面。所述纖維蛋白膠水的一種缺點(diǎn)是，對(duì)于大量流血情形，所述膠水在纖維蛋白有效聚合發(fā)生之前，就常常被沖走。為了克服這個(gè)問(wèn)題，外科醫(yī)生開(kāi)始用手涂敷所述液體纖維蛋白膠水到可吸收載體如膠原棉網(wǎng)之上。
盡管這些結(jié)合應(yīng)用具有給人印象深刻的成功，但是，這種方法不能廣泛地應(yīng)用，這是由于它存在著一些缺點(diǎn)。其制備是相對(duì)麻煩的，所述方法需要經(jīng)驗(yàn)和熟練技術(shù)人員，且所述制備方法對(duì)于緊急情況不是很有效，制備時(shí)間在10-15分鐘之間。這些因素刺激著一種改進(jìn)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，從而導(dǎo)致開(kāi)發(fā)出一種覆蓋有一種固體纖維蛋白原、固體凝血酶和固體抑肽酶涂層的固定組合物，如EP 0 059 265中所述。
在EP 0 059 265中所公開(kāi)的膠原載體的作用，主要是載體作用，它可吸收所涂敷的凝結(jié)液并賦予機(jī)械穩(wěn)定性。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)生產(chǎn)出一種產(chǎn)品，其商標(biāo)為T(mén)achoComb，它結(jié)合了纖維蛋白膠水的止血作用和作為載體膠原的優(yōu)點(diǎn)。TachoComb是一種易于使用且易于適用固定的膠原藥膏組合物，它涂敷有下述活性纖維蛋白膠水成分人體纖維蛋白原、牛凝血酶和牛抑肽酶。
TachoComb自1990年早期就已經(jīng)由Nycomed Pharma出售，并已經(jīng)在歐洲的多于2500病人中用于臨床實(shí)驗(yàn)。所述產(chǎn)品還在日本臨床日程大量各種適應(yīng)癥如肝和肺切除術(shù)、膽道外科、脾臟、腎臟和胰的外科、ENT外科、婦科外科和血管外科，用于700多病人中。TachoComb已經(jīng)發(fā)現(xiàn)是有效且安全的。
在進(jìn)行的臨床過(guò)程中，還沒(méi)有與應(yīng)用TachoComb有關(guān)的臨床并發(fā)癥的報(bào)導(dǎo)。但是，反抑肽酶的抗體發(fā)生在三例日本研究中。
臨床使用數(shù)千個(gè)TachoComb藥膏這么多年中，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)總數(shù)僅為37件自發(fā)性不良藥物反應(yīng)(ADR)。這些ADR中的16例，理論上可能與對(duì)TachoComb成分起反應(yīng)有關(guān)(發(fā)熱、熱病、嗜曙紅細(xì)胞增多、延長(zhǎng)的原凝血酶時(shí)間、超敏反應(yīng)、免疫反應(yīng)或過(guò)敏反應(yīng))。一例ADR(免疫反應(yīng))明顯與采用TachoComb治療有關(guān)。
在W097/37694(Immuno France S.A.)的對(duì)比例4中，描述了采用一種膠原產(chǎn)品或TachoComb，當(dāng)采用TachoComb時(shí)沒(méi)有止血作用導(dǎo)致流血至死，與之形成對(duì)比，當(dāng)使用一種WO97/37694制備的不含有凝血酶的膠原產(chǎn)品時(shí)，在5分鐘內(nèi)止血。
在W096/40033中，用于TachoComb中的牛凝血酶的缺點(diǎn)著重在于，使用牛或其它種類(lèi)凝血酶可能會(huì)引起有害的病毒污染和可能的牛疾病傳播，如牛海綿狀腦炎。
詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及一種固體組合物，主要由一種載體組成，所述載體具有至少下述一種物理性質(zhì)彈性模量范圍為5-100N/cm，如10-50N/cm；密度為1-10mg/cm3，如2-7mg/cm3；腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，和均勻分散并固定在所述載體上的b)固體纖維蛋白原、和c)固體凝血酶。
所述組合物可以具有上述提及物理性質(zhì)中的二種、三種或全部。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中，所述載體物質(zhì)是按照DK PA 2001 00135以及Nycomed Pharma AS于2002年1月25日申請(qǐng)的要求所述申請(qǐng)優(yōu)選權(quán)的申請(qǐng)名稱(chēng)為“一種制備膠原海綿的方法、一種用于提取部分膠原泡沫的裝置和一種延長(zhǎng)的膠原海綿”中所述方法制備的。在本文中，術(shù)語(yǔ)“腔直徑”應(yīng)該理解為在一個(gè)腔中最大的直線(xiàn)壁與壁間距離，即一個(gè)腔的最大對(duì)角直線(xiàn)距離。所述腔可為多邊形狀，如八角形。因此，當(dāng)所述載體在被切割時(shí)，所述腔可以被分開(kāi)并可被切成洞穴。所述固體纖維蛋白原和所述固體凝血酶被固定到所述載體上，其大部分是存在于所述洞穴中，從而實(shí)現(xiàn)所述固體凝血酶和所述固體纖維蛋白原的充分均勻分散。由于這種固定作用，就可以將顯著數(shù)量的纖維蛋白原和凝血酶引入到所述載體之上，與那些凝血酶和纖維蛋白原的液體組合物例如是滴加或噴射到所述物質(zhì)上的情形形成對(duì)比。
涂層載體的制備一種涂敷載體的制備主要有下列過(guò)程組成-制備一種所述活性成分的懸浮液-均勻分散所述懸浮液到所述載體上-干燥所述涂敷載體為一種固體組合物/固定所述活性成分到所述載體上。
一種具有纖維蛋白原和凝血酶的懸浮液的制備，包括-提供一種纖維蛋白原和一種醇如乙醇的混合物，-提供一種凝血酶和一種醇如乙醇的凝血酶混合物，-混合所述纖維蛋白原混合物和所述凝血酶混合物，從而得到所述懸浮液。
在提供所述混合物步驟，所述混合物可以進(jìn)行均化或篩分，以得到一種含有纖維蛋白原和凝血酶顆粒的混合物，所述顆粒的FolkWard平均直徑為25-100μm。所述溫度在0-12℃之間。
所述載體可為一種膠原載體，如一種膠原海綿。所述膠原海綿可以滿(mǎn)足至少一個(gè)和優(yōu)選多數(shù)的下述標(biāo)準(zhǔn)-pH值在5.0-6.0之間，-乳酸含量至多為5％，-銨含量至多為0.5％，-可溶蛋白含量至多為0.5％，白蛋白計(jì)，-硫酸鹽灰分含量至多為1.0％，-重金屬含量至多為20ppm，-微生物純度至多為103CFU/g，-膠原含量為75-100％，-密度為1-10mg/cm3，-彈性模量范圍為5-100N/cm。
在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中，所述膠原載體是按照DK PA 200100135所述方法制備的。三個(gè)實(shí)施例中的膠原載體的物理性質(zhì)如下
所述懸浮液的均勻分散，既可以采用如US5942278和US6177126所述的下滴裝置，也可以采用一種含有至少一個(gè)可用來(lái)涂敷所述懸浮液到所述載體上的噴嘴的涂藥器來(lái)實(shí)現(xiàn)。在當(dāng)所述載體與所述噴嘴相互作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，所述噴嘴涂藥器迫使所述懸浮液流過(guò)所述噴嘴。所述涂藥器可以包括或設(shè)置一個(gè)傳送帶、一個(gè)攪拌裝置連接到一個(gè)泵或一個(gè)泵系統(tǒng)或其它供給裝置上、和一種噴嘴或噴嘴系統(tǒng)(它能橫斷地例如以直角移動(dòng)到所述傳送帶。
根據(jù)所述介質(zhì)的具體性質(zhì)，所述噴嘴和噴嘴系統(tǒng)可以具有不同形狀和尺寸。所述噴嘴或噴嘴系統(tǒng)，可以經(jīng)由管道連接到所述供給裝置上。所述供給裝置可以提升所述涂敷介質(zhì)從所述攪拌裝置到所述噴嘴系統(tǒng)中。在所述涂敷過(guò)程中，所述噴嘴系統(tǒng)可以橫移過(guò)所述載體。在其待料位置，它可固定在所述傳送帶的一側(cè)。所述涂敷過(guò)程可以通過(guò)一個(gè)擋光板感覺(jué)載體在所述傳送帶上的存在而起動(dòng)，類(lèi)似地，它可被一個(gè)擋光板信號(hào)所停止。這類(lèi)涂藥器具有一個(gè)相對(duì)小的死體積，而且它易于控制，包括易于清潔。而且，它具有在任意時(shí)間中斷所述涂敷過(guò)程的能力，所以，它可適用于相對(duì)寬范圍的粘度，而且它能得到均勻的涂層。
這兩種系統(tǒng)都能涂敷0.08-0.12ml懸浮液體積/cm2載體。
一個(gè)重要步驟是一種纖維蛋白原、凝血酶和醇的懸浮液的干燥步驟，應(yīng)用作載體涂層表面的濕涂層。一種方法的一個(gè)實(shí)施例，包括使所述涂敷載體經(jīng)受低于1000mbar壓力的步驟，從而在所述載體上得到一種干燥的涂層表面，并固定所述干燥涂層到所述涂層表面上。通過(guò)在所述干燥步驟中施加真空和采用所述真空，可以保持低溫(2-10℃)和高的相對(duì)濕度(80-95％)，同時(shí)可以保持所述載體的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)，特別是膠原如膠原海綿以及纖維蛋白原和凝血酶形式的載體。
所述術(shù)語(yǔ)“主要由......組成”是表示所述三種成分對(duì)于本發(fā)明都是重要和必需的。但是，無(wú)關(guān)緊要的添加劑如鈣離子和顏色標(biāo)記如核黃素也可存在于所述組合物之中。所述組合物還可以含有其它有用的成分，如一種或多種藥物活性物質(zhì)，例如，它們可選自由抗菌的或抗真菌的抗生素、和抗腫瘤試劑組成的組。
盡管所述載體物質(zhì)優(yōu)選為膠原海綿，它含有源自哺乳動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因或重組體來(lái)源的膠原I物質(zhì)，它可以通過(guò)其它類(lèi)型的膠原，即膠原I、II、III、IV、VII和X制備得到。但是，所述載體可為一種生物可降解聚合物如聚透明質(zhì)酸、多羥基酸如乳酸、葡糖酸、羥基丁酸、纖維素或膠質(zhì)，也是可以正視的。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述組合物含有一種載體，它具有一個(gè)或多個(gè)活性側(cè)面，其中纖維蛋白原存在數(shù)量為2-10mg/cm2如4.3-6.7mg/cm2，優(yōu)選約為5.5mg/cm2，凝血酶存在數(shù)量為1.0-5.5IU/cm2，優(yōu)選約為2.0IU/cm2。所述纖維蛋白原和/或凝血酶優(yōu)選為人體的，例如通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法自一種天然來(lái)源經(jīng)純化得到的，或者轉(zhuǎn)基因的或重組的人體纖維蛋白原和/或凝血酶，它們可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備得到。
現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品如TachoComb、Beriplast和TissueSeal都含有抑肽酶或相似的抗纖維蛋白溶解試劑。抑肽酶僅可由一種牛來(lái)源提供。本發(fā)明人的一個(gè)目的就是，開(kāi)發(fā)一種具有改進(jìn)載體物質(zhì)和僅有人體的、重組的或轉(zhuǎn)基因起源成分的組合物。因此，開(kāi)發(fā)是針對(duì)所述載體物質(zhì)進(jìn)行的，并研究是否可以用人體凝血酶替代牛的凝血酶從而避免所述抑肽酶。本發(fā)明人通過(guò)一個(gè)兩步驟方法努力達(dá)到這個(gè)目的。
首先，TachoComb H已經(jīng)開(kāi)發(fā)出來(lái)，作為T(mén)achoComb與例如被人體凝血酶替代的所述牛凝血酶的后續(xù)產(chǎn)物。采用TachoComb H的臨床實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)在適應(yīng)癥止血、組織粘合和組織封口范圍內(nèi)針對(duì)大量的治療證實(shí)的(階段IIIa)臨床試驗(yàn)進(jìn)行。在這些研究中得到的未公開(kāi)結(jié)果證實(shí)了TachoComb H在控制血液和漏氣的功效和安全性，從而可以在外科的止血、組織粘合和組織封口中用作輔助治療以實(shí)現(xiàn)縫合。特別地，TachoComb H在達(dá)到局部止血的功效，以得到控制的止血時(shí)間的明顯減少表示，已經(jīng)在血管和相似的肝外科中得到令人信服的說(shuō)明。
而且，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，TachoComb H可以減少肺部缺陷的大小，從而可以更快速地解決漏氣，它對(duì)于密封嚴(yán)重肺部滲漏和肺氣腫都是有用的。
但是，TachoComb和TachoComb H兩者都含有抑肽酶作為所述產(chǎn)品的一個(gè)成分部分。抑肽酶已經(jīng)被認(rèn)為是抑制所述纖維蛋白原成分中少量血纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化為血纖維蛋白溶酶和防止所述纖維蛋白凝塊特別是在高纖維蛋白溶解條件下的過(guò)早溶解所必需的。
本發(fā)明為了測(cè)試抑肽酶是必需的這種假設(shè)，設(shè)計(jì)了新的實(shí)驗(yàn)。生物體外實(shí)驗(yàn)表明了在所述凝塊中抑肽酶的抗纖維蛋白溶解保護(hù)作用，沒(méi)有抑肽酶的TachoComb(TachoComb S)在非常短時(shí)間內(nèi)沒(méi)有溶解。因此，設(shè)計(jì)了受迫動(dòng)物樣式，TachoComb S與TachoComb H相比，證明具有相似的功效。在所有樣式中，TachoComb H或S，都是分別地用作止血手段。
為了研究本發(fā)明TachoComb S相對(duì)于TachoComb H優(yōu)選實(shí)施方式的功效和組織病理學(xué)方案，進(jìn)行四組廣泛的實(shí)驗(yàn)系列。TachoCombS或TachoComb H是應(yīng)用到狗、豬或兔的器官肝、脾、胰腺或腦/腦膜上。所述實(shí)驗(yàn)是以一種類(lèi)似正常外科條件、嚴(yán)重受迫條件和高纖維蛋白溶解條件的方式進(jìn)行設(shè)計(jì)的。
在這四組研究中得到的結(jié)果，沒(méi)有給出任何有關(guān)TachoComb S和TachoComb H之間的不同。兩種產(chǎn)品對(duì)于止血和傷口密封功效表現(xiàn)相似，包括嚴(yán)重受迫條件象由局部r-tPA應(yīng)用所引發(fā)的提高的器官內(nèi)部壓力或高纖維蛋白溶解情形。
可以得出結(jié)論，設(shè)計(jì)用來(lái)評(píng)價(jià)抑肽酶作為T(mén)achoComb H一個(gè)成分的整體必要性的前臨床程序，已經(jīng)證明TachoComb H和TachoComb S具有相似的功效。兩種產(chǎn)品都已經(jīng)成功地在所有實(shí)驗(yàn)條件下用作止血、組織粘合和組織封口的手段。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，沒(méi)有不希望的組織反應(yīng)。因此，抑肽酶可以從本發(fā)明所述組合物中除去。
本發(fā)明所述組合物預(yù)期可以臨床發(fā)揮與其前體相似的止血、組織粘合和組織封口性能，預(yù)期具有相同或更令人滿(mǎn)意的安全分布。抑肽酶(它目前僅能自牛來(lái)源中得到)的缺少，增加了對(duì)抗超敏反應(yīng)的安全性。在這點(diǎn)上，需要提及的是，對(duì)抗抑肽酶的抗體發(fā)生在三例日本研究之中。對(duì)于沒(méi)有抑肽酶的組合物沒(méi)有預(yù)期到這類(lèi)免疫反應(yīng)。
在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種用于止血、組織封口和組織粘合的組合物，它含有一種具有至少一種下述發(fā)生的彈性載體彈性模量范圍為5-100N/cm，如10-50N/cm；密度為1-10mg/cm3，如2-7mg/cm3；腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，它還含有固體纖維蛋白原和固體凝血酶且不含有任何抗纖維蛋白溶解試劑如抑肽酶、ε-氨基正己酸、或α2-抗纖維蛋白溶酶，所述固體纖維蛋白原和固體凝血酶以這樣方式被固定在所述載體上，使得所述涂層物質(zhì)在Vibrofix混合器中以約1000rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，所述磨損低于1.0mg/cm2，而且，當(dāng)所述涂層載體物質(zhì)被插入到一種內(nèi)窺鏡檢查設(shè)置和隨后移去時(shí)，所述物質(zhì)基本沒(méi)有變化，并且具有低于20％的涂層物質(zhì)脫落物，表明所述載體的彈性和所述固體纖維蛋白原和固體凝血酶的固體粘合性，而且所述物質(zhì)是充分空氣密封和液體密封的，并具有至少1.25的彈性系數(shù)，它由一個(gè)包括固定所述涂層載體到一個(gè)橡膠片上、通過(guò)三次施加壓力使所述橡膠伸展、和在第三次測(cè)量所述涂層載體在橡膠片伸展最高點(diǎn)的面積和將所述涂層載體的膨脹面積與所述涂層面積的起始面積進(jìn)行比較的實(shí)驗(yàn)測(cè)量得到的。
本發(fā)明優(yōu)選組合物，其中所述纖維蛋白原和凝血酶是人體例如自一種天然來(lái)源經(jīng)純化得到的或轉(zhuǎn)基因的或重組的人體纖維蛋白原和凝血酶，是唯一有效的非牛纖維蛋白密封劑，它具有一種固定組成的活性成分涂敷在一種彈性載體之上，并具有多種優(yōu)點(diǎn)易于使用，不需要消耗時(shí)間用于融化或制備手續(xù)易于直接應(yīng)用到大部分組織和器官表面上可用于內(nèi)窺鏡檢查應(yīng)用對(duì)于止血不存在溢出或被沖出所述目標(biāo)區(qū)域的問(wèn)題結(jié)合了纖維蛋白凝結(jié)的粘合作用和所述彈性載體機(jī)械支撐作用高度彈性和承受巨大拉伸和壓縮作用在3-5分鐘內(nèi)有效的止血和組織封口有利的安全分布即沒(méi)有牛成分生物可降解性?xún)H遺留很小的組織傷痕可在+2～+8℃之間貯存，它將具有預(yù)期的保存期36個(gè)月，或者在室溫保存期間可多達(dá)至少2年。
開(kāi)發(fā)本發(fā)明所述優(yōu)選組合物的原因，是源自希望能夠除去最后的牛成分，從而防止所有至少理論上的疾病從牛傳播到人體的危險(xiǎn)，包括可傳播的海綿狀腦病(TSEs)。所述活性成分纖維蛋白原和凝血酶是人體起源的，而牛抑肽酶，所述纖維蛋白溶解酶血纖維蛋白溶酶，已經(jīng)被除去。這樣，本發(fā)明所述不含有牛成分的優(yōu)選組合物的優(yōu)點(diǎn)在于經(jīng)由牛物質(zhì)傳播疾病包括牛海綿狀腦病(BSE)的危險(xiǎn)，就被排除。
與其它纖維蛋白膠水相似，本發(fā)明所述組合物通過(guò)再制造所述階式血液凝結(jié)的最后步驟而起作用。一種纖維蛋白原和凝血酶的混合物，在所述彈性載體上形成一種固定的固體層。在與流體接觸時(shí)，例如，流血表面、體液或生理鹽水，所述層中的成分溶解并擴(kuò)散到所述傷口的空腔中，并開(kāi)始進(jìn)行反應(yīng)。
所述聚合反應(yīng)在傷口表面和載體藥膏之間形成一種強(qiáng)烈的粘合作用。在用于粘合所需要的時(shí)間即3-5分鐘內(nèi)，本發(fā)明所述組合物優(yōu)選地應(yīng)該輕輕地加壓到所述傷口表面之上。所述載體藥膏提供了機(jī)械支撐作用，它能夠允許所述傷口壓塞。當(dāng)傷口大量地流血時(shí)所述藥膏能夠適當(dāng)?shù)乇３炙瞿Y(jié)成分，并防止可能的再流血。作用機(jī)理包括通過(guò)脫離縮氨酸由凝血酶將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。纖維蛋白單體自發(fā)地聚合為纖維蛋白股，形成一種粘性的彈性凝塊，它粘合所述載體藥膏到所述傷口表面之上。所述纖維蛋白間質(zhì)隨后充當(dāng)纖維蛋白破裂(fibrinoblast)遷移的腳手架(圖8)。
象兩組分粘合劑一樣，傷口表面和載體通過(guò)聚合作用粘合在一起。所述載體藥膏的機(jī)械穩(wěn)定性為纖維蛋白凝塊的止血作用增加一個(gè)壓塞作用。而且，所述活性物質(zhì)僅存在于所述載體面向傷口區(qū)域的表面，由于所述壓塞作用和輕微壓力，它們將不會(huì)擴(kuò)散流過(guò)所述載體。因此，與使用大多數(shù)纖維蛋白膠水的情形比，在使用本發(fā)明所述組合物時(shí)，被本發(fā)明所述組合物覆蓋的傷口區(qū)域與其它器官或其部分之間，不存在粘合作用。
與氰基丙烯酸鹽粘合劑和膠質(zhì)-間苯二酚-甲醛(GRF)膠水不同，它們對(duì)于軟組織是高度組織有毒的，本發(fā)明所述固體組合物是生理退化的，在應(yīng)用之后的數(shù)周或數(shù)月內(nèi)，它可被組織所替代，主要是經(jīng)由兩種機(jī)理1.所述纖維蛋白凝塊部分被纖維蛋白溶解作用所退化，部分被細(xì)胞的吞噬作用所退化。
2.所述載體是一層一層地由吸收的肉芽組織所退化，并轉(zhuǎn)化為一種由內(nèi)生的結(jié)締組織組成的假包膜(pseudocapsule)。
本發(fā)明所述組合物可用于止血、組織粘合和組織封口，，特別地，可用于腸胃系統(tǒng)如食管、胃、小腸、大腸、直腸中、在軟組織器官如肝、脾、胰腺、腎、肺、腎上腺、甲狀腺和淋巴結(jié)上的外科干涉、心血管外科、包括在氣管、支氣管或肺上的胸外科、在耳朵、鼻和包括牙外科的咽喉(ENT)區(qū)域的外科干涉、婦科、泌尿道、骨科(例如松質(zhì)切除術(shù))、和緊急外科、神經(jīng)外科、淋巴腺的、膽汁的、和腦脊髓(CSF)管狀器官、和在胸和肺外科過(guò)程中的漏氣。因此，本發(fā)明還涉及所述組合物用于上述目的的用途。
應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，本發(fā)明所述組合物是充分空氣密封和流體密封的，這是所述產(chǎn)品對(duì)于治療淋巴腺的、膽汁的、和腦脊髓(CSF)管狀器官和在胸和肺外科過(guò)程中的漏氣特別有效的原因。而且，由于所述產(chǎn)品是充分流體密封的，所以，它對(duì)于高度流血器官如肝和脾的外科和例如腸胃管道中的外科是非常有用的。
當(dāng)流血時(shí)，或者淋巴腺的、膽汁的、空氣或滲漏采用常規(guī)方法不能得到控制時(shí)，或者這些方法產(chǎn)生不利結(jié)果時(shí)，可以應(yīng)用本發(fā)明所述產(chǎn)品。
所述載體優(yōu)選為一種膠原海綿、棉網(wǎng)或藥膏，這些術(shù)語(yǔ)是在本發(fā)明說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)是以相同含義進(jìn)行使用。所述成分膠原、纖維蛋白原和凝血酶優(yōu)選是哺乳動(dòng)物起源。優(yōu)選地，所述固體成分是人體起源的。所述膠原、纖維蛋白原和凝血酶可以從一種天然來(lái)源或重組的或轉(zhuǎn)基基因的人體纖維蛋白原和/或凝血酶純化而得到。
本發(fā)明優(yōu)選的膠原來(lái)源是馬。為了防止由于馬病毒污染而引起的病毒傳播，這些馬病毒可借助于所述膠原藥膏使人體致病，合適選擇來(lái)源材料和采用制備方法滅活可能的致病試劑，作為預(yù)防措施是非常重要的。




實(shí)施例實(shí)施例I-IV下面將舉例說(shuō)明用于制備具有不同纖維蛋白原和凝血酶原料的涂層膠原海綿的不同步驟。
纖維蛋白原原料

凝血酶原料

實(shí)施例I在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方B和人體凝血酶配方B。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，得到最終懸浮液體積為3500ml纖維蛋白原混合物-2800ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)-492.5g人體纖維蛋白原配方B-493.5mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存8-16小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-100ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-12.27g人體凝血酶配方B所述凝血酶混合物在-30℃貯存8-16小時(shí)。
懸浮液
-157ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為94％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為3500ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度94.3％2.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積98％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積64％的測(cè)試體積。
3.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)56.4+/-1.3μm呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度5.2℃-絕對(duì)濕度4.8g水/kg空氣-培養(yǎng)時(shí)間18.5小時(shí)所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為5.2℃和絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣的條件下培養(yǎng)15分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5.2℃，絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣-空氣流過(guò)吸氣閥的流量23m3/小時(shí)-真空59mbar
-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)其在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.2mg/cm2。
實(shí)施例II在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方C和人體凝血酶配方C。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，得到最終懸浮液體積為3500ml纖維蛋白原混合物-2252ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)-370.7g人體纖維蛋白原配方C-493.5mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存8-16小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-188ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-12小瓶人體凝血酶配方C(10650I.U/瓶)/12ml水，用于注射所述凝血酶混合物在-30℃貯存8-16小時(shí)。
懸浮液-164.5ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為94％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為3500ml。
懸浮液特征
1.乙醇濃度94.1％2.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積94％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積71％的測(cè)試體積。
3.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)49.2+/-0.93μm呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度4.8℃-相對(duì)濕度90.3％-培養(yǎng)時(shí)間22.25小時(shí)所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為4.9℃和絕對(duì)濕度為4.8g水/kg空氣的條件下培養(yǎng)13分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5.2℃，絕對(duì)濕度為4.9g水/kg空氣-空氣流過(guò)吸氣閥的流量25m3/小時(shí)-真空60mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)其在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.2mg/cm2。
實(shí)施例III
在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方C和人體凝血酶配方C。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，得到最終懸浮液體積為780ml纖維蛋白原混合物-700ml乙醇(在2-8℃時(shí)為94％)-84.42g人體纖維蛋白原配方C-110mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存8-16小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-35ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-0.54g人體凝血酶配方C所述凝血酶混合物在-30℃貯存8-16小時(shí)。
懸浮液-23.0ml凝血酶混合物添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為100％的乙醇加入到其中，使所述最終懸浮液體積為780ml。
懸浮液特征1.乙醇濃度94％2.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積92％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積72％的測(cè)試體積。
3.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)60.5+/-0.5μm。
呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度6.0℃-相對(duì)濕度85％-培養(yǎng)時(shí)間18.5小時(shí)所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥所述涂層條帶在溫度為5℃和相對(duì)濕度為85％的條件下培養(yǎng)45分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為5℃，相對(duì)濕度為85％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量1.2m3/小時(shí)-真空35mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)其在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.3mg/cm2。
實(shí)施例IV在本實(shí)施例，所述懸浮液含有人體纖維蛋白原配方A和人體凝血酶配方A。
通過(guò)適用下述數(shù)量和參數(shù)，得到最終懸浮液體積為3120ml纖維蛋白原混合物-2540ml乙醇(在2-8℃時(shí)為100％)
-311.6g人體纖維蛋白原配方A-440mg核黃素所述纖維蛋白原混合物2-8℃貯存8-16小時(shí)，同時(shí)進(jìn)行攪拌。凝血酶混合物-210ml乙醇(在-30℃時(shí)為100％)-229g人體凝血酶配方A懸浮液-將用于注射的87.3ml水添加到所述纖維蛋白原混合物中。
-將在2-8℃時(shí)為94％的乙醇加入到其中，達(dá)到最終的懸浮液體積。
懸浮液特征1.乙醇濃度97％2.沉降性能a)在開(kāi)始5分鐘后沉降體積95.6％的測(cè)試體積，b)在開(kāi)始24小時(shí)后沉降體積63.5％的測(cè)試體積。
3.顆粒尺寸(Folk Ward平均直徑)51.8+/-0.8μm。
呈膠原條帶形式的載體，采用所述懸浮液進(jìn)行涂敷。首先，將48個(gè)膠原海綿條帶在一個(gè)冷卻室中于下述條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)-溫度6.5℃-相對(duì)濕度90％-培養(yǎng)時(shí)間22.5小時(shí)所述涂層膠原海綿條帶按下述方法進(jìn)行干燥
所述涂層條帶在溫度為6.5℃和相對(duì)濕度為90％的條件下培養(yǎng)10分鐘。
所述涂層條帶接著在一個(gè)真空干燥室中于下述干燥條件下進(jìn)行干燥-空氣條件溫度為6.5℃，相對(duì)濕度為90％-空氣流過(guò)吸氣閥的流量21m3/小時(shí)-真空58mbar-干燥時(shí)間4小時(shí)當(dāng)其在Vibrofix混合器上以800-1200rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，在所述膠原海綿條帶上所得到的涂層的磨損大約為0.1mg/cm2。
實(shí)施例1抑肽酶作為T(mén)achoComb的一種成分在與生物體內(nèi)狀況相似的沖洗條件下進(jìn)行所述抗纖維蛋白溶解活性的生物體外研究。
本研究的目的是通過(guò)采用生物體外測(cè)試模型說(shuō)明抑肽酶作為T(mén)achoComb H的一種成分在高纖維蛋白溶解條件下的功效。
TachoComb S是一種白色涂層海綿狀藥膏。泡沫干燥膠原藥膏用來(lái)作為所述活性固體成分的載體。所述藥膏的尺寸為9.5×4.8×0.5cm。所述活性側(cè)面是黃色的。1cm2的TachoComb S藥膏(厚度為0.5cm)由下述物質(zhì)組成馬源的膠原2.1mg涂敷有
人體纖維蛋白原5.5mg人體凝血酶2.0I.U.
核黃素(黃色，作為涂層區(qū)域的標(biāo)記)16.5μg在生物體內(nèi)的尋找劑量試驗(yàn)，已經(jīng)證實(shí)上述的凝血酶和纖維蛋白原濃度，可以導(dǎo)致最大的粘合強(qiáng)度(參見(jiàn)實(shí)施例3)。
含有人體凝血酶、人體纖維蛋白原和抑肽酶的TachoComb H，與含有人體凝血酶和人體纖維蛋白原作為活性成分的TachoComb S進(jìn)行比較。
兩種測(cè)試模型用開(kāi)發(fā)用來(lái)定量確定在高纖維蛋白溶解條件下的功效，它們可以認(rèn)為對(duì)應(yīng)于外科條件，而且它們可允許進(jìn)行說(shuō)明顯著效果所需要的大量試驗(yàn)。
在測(cè)試模型1中，所述測(cè)試樣品應(yīng)用到一種合成織物上用作粘合表面。在所述織物上切割一個(gè)規(guī)定的小孔，以模擬例如血管的穿孔。所述密封通過(guò)所述小孔朝向兩種不同的纖維蛋白溶解溶液(培養(yǎng)溶液)。這些溶液中的一種另外含有所述抗纖維蛋白溶解成分α2-抗血纖維蛋白溶酶成分。
培養(yǎng)溶液組合物所有物質(zhì)稀釋在緩沖液1中50mM Trometamol，100mM NaCl，2.5mM CaCl2，2mg/ml BSA(不含蛋白酸)，0.5mg/ml Na-疊氮化物/ml)培養(yǎng)溶液I(1μmol血纖維蛋白溶酶原，1nmol組織血纖維蛋白溶酶原活化劑(tPA)，1μmolar α2-抗血纖維蛋白溶酶)49μl緩沖液1，pH7.4
51μl血纖維蛋白溶酶原溶液(濃度4.9μmol Coachrom人體血纖維蛋白溶酶原活性)50μl tPA溶液(50nmol)100μlα2-抗血纖維蛋白溶酶溶液(2.5μmol)培養(yǎng)溶液II(1μmol血纖維蛋白溶酶原，1nmol組織血纖維蛋白溶酶原活化劑)149μl緩沖液1，pH7.4，51μl血纖維蛋白溶酶原溶液(濃度4.9μmol Coachrom人體血纖維蛋白溶酶原活性)50μl tPA溶液(50nmol)所述培養(yǎng)溶液在2小時(shí)期間內(nèi)放回原處，以模擬沖洗效果。在這種場(chǎng)合粘合得到控制。在所述樣品上施加50mbar的壓力。記錄在壓力≤50mbar所述樣品脫離的時(shí)間。
測(cè)試模型2是用來(lái)說(shuō)明受傷的腸組織的所述纖維蛋白溶解效果。測(cè)試樣品應(yīng)用到作為粘合表面的豬腸(體外)。在所述腸上切割一個(gè)規(guī)定的穿孔，以保證所述培養(yǎng)溶液能與所述纖維蛋白凝塊進(jìn)行接觸，并模擬沖洗效果。所述培養(yǎng)溶液在記錄時(shí)間內(nèi)變化，在此期間在所述樣品上施加50mbar的壓力。記錄在壓力≤50mbar所述樣品脫離的時(shí)間。
結(jié)果表明在含有抑肽酶的TachoComb H和不含抑肽酶的TachoComb S之間具有相當(dāng)大的差別。
在采用含有組織血纖維蛋白溶酶原活化劑、血纖維蛋白溶酶原和α2-抗血纖維蛋白溶酶的培養(yǎng)溶液的測(cè)試模型1中，所述纖維蛋白溶解時(shí)間，對(duì)于TachoComb H來(lái)說(shuō)為41.2±7.3小時(shí)，而對(duì)于TachoCombS來(lái)說(shuō)為12.8±2.8小時(shí)。
在采用僅含有組織血纖維蛋白溶酶原活化劑和血纖維蛋白溶酶原的培養(yǎng)溶液的測(cè)試模型1中，所述纖維蛋白溶解時(shí)間，對(duì)于TachoComb H來(lái)說(shuō)為31.6±5.3小時(shí)，而對(duì)于TachoComb S來(lái)說(shuō)為8.3±1.8小時(shí)。
在測(cè)試模型2中，脫離時(shí)間對(duì)于TachoComb H來(lái)說(shuō)為78.4±16.3小時(shí)，而對(duì)于TachoComb S來(lái)說(shuō)為6.5±1.8小時(shí)。
在所述測(cè)試樣品中仍能觀察到一些纖維蛋白。但是，在壓力下所述樣品從所述腸表面脫離下來(lái)，因?yàn)樵诶w維蛋白凝塊和腸表面之間的粘合強(qiáng)度已經(jīng)變差。
在兩種模型中，抑肽酶作為一種TachoComb H活性成分的抗纖維蛋白溶解效果，已經(jīng)得到非常清楚的說(shuō)明。
在測(cè)試模型1中，由于抑肽酶作為一種TachoComb H活性成分的抗纖維蛋白溶解時(shí)間延長(zhǎng)，是含有α2-抗血纖維蛋白溶酶的培養(yǎng)溶液I的320％，是不含有α2-抗血纖維蛋白溶酶的培養(yǎng)溶液II的380％。
測(cè)試模型1還表明了添加的α2-抗血纖維蛋白溶酶的抗纖維蛋白溶解效果，纖維蛋白溶解時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)于TachoComb H來(lái)說(shuō)從31.6小時(shí)延長(zhǎng)到41.2小時(shí)(130％)，而對(duì)于TachoComb S來(lái)說(shuō)，則從8.3小時(shí)延長(zhǎng)到12.8小時(shí)(154％)。
實(shí)施例2涂層Nycomed海綿(TachoComb S)與其它如TachoComb S同樣涂層的載體產(chǎn)品的比較所述層的粘合步驟1.不同載體的涂敷

每個(gè)面積為2×4.5cm2的載體，用TachoComb S涂層懸浮液進(jìn)行涂敷。涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2).對(duì)所述樣品進(jìn)行干燥。
2.對(duì)于每個(gè)涂層載體，制備一個(gè)1×4cm2的樣品。
3.所述層的粘合作用是按下述方法進(jìn)行測(cè)試的
方法說(shuō)明裝置分析天平(測(cè)量精度0.5mg)帶有固定裝置的Vibrofix混合器具有毫米刻度的標(biāo)尺秒表、解剖刀、帶有塞子的內(nèi)徑為2cm試管步驟使用解剖刀從所述涂層載體上切割下4×1cm2的涂層面積。
所述樣品放入帶有塞子的平穩(wěn)試管中。接著，在Vibrofix混合器上搖晃(頻率約為1000rpm)2分鐘。
移去所述薄片，稱(chēng)量涂層材料的殘余質(zhì)量。
計(jì)算磨損(mg/cm2)＝(殘余重量(mg)-皮重(mg))/4cm2結(jié)果

評(píng)價(jià)除Nycomed膠原海綿之外的所有載體在涂敷之后不是彈性的。
所述樣品必須非常細(xì)心地進(jìn)行切割。如果使用剪刀進(jìn)行切割，則會(huì)有一些所述涂層植物可能會(huì)剝落，這是因?yàn)樗鰧幼陨硎莿傂缘摹thisorb藥膏顯示幾乎根據(jù)與所述涂層材料沒(méi)有關(guān)系。當(dāng)搖晃一會(huì)之后，所有涂層都剝落得象一塊“地毯”一樣。
Nycomed膠原海綿與其它載體材料之間的差別，已經(jīng)清楚地得到說(shuō)明。
潮濕涂層載體的彈性1.不同載體的涂敷每個(gè)面積為2×4.5cm2的載體，用TachoComb S涂層懸浮液進(jìn)行涂敷。涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2)。對(duì)所述樣品進(jìn)行干燥。
2.對(duì)于每個(gè)涂層載體，制備一個(gè)約5-7cm2的樣品。
3.所述樣品進(jìn)行濕潤(rùn)，并放到一種固定在一種如下述標(biāo)題“步驟”中詳細(xì)描述的特定裝置上的彈性橡膠薄片上。接著施加壓力到所述橡膠薄片上，使之?dāng)U展。在經(jīng)過(guò)二次擴(kuò)展和放松之后，所述薄片進(jìn)行第三次擴(kuò)展。在其最高擴(kuò)展點(diǎn)時(shí)測(cè)量其所述載體的面積。
方法說(shuō)明裝置/化學(xué)品蠕動(dòng)泵(IKA PA-SF)壓力緩沖瓶(3個(gè)出口)
VDO壓力計(jì)(0-250mbar)玻璃漏斗(孔道130mm，孔道215mm)硅樹(shù)脂管道和夾子、橡膠手套(Semper med)、解剖刀、具有毫米刻度的標(biāo)尺、剪刀生理鹽水步驟下述裝置經(jīng)由硅樹(shù)脂管道空氣密封地連接到所述壓力緩沖瓶的三個(gè)出口之上a)蠕動(dòng)泵b)壓力計(jì)c)玻璃漏斗/孔道2從橡膠手套上切割下一個(gè)約8×8cm2的雙重薄片。該薄片空氣密封地固定到所述玻璃漏斗/孔道1上。
使用解剖刀從所述涂層載體上切割下約5-7cm2的涂層面積。
測(cè)量所述樣品的面積(起始面積)。所述樣品的涂層用鹽水進(jìn)行濕潤(rùn)，并放在所述橡膠薄片之上。接著用手將它壓放在所述橡膠薄片上約1分鐘。
使用所述蠕動(dòng)泵，所述橡膠薄片在約70mbar的壓力下進(jìn)行擴(kuò)展。在放松所述橡膠薄片之后，重量進(jìn)行二次。在第三次擴(kuò)展時(shí)，在橡膠薄片擴(kuò)展的最大處測(cè)量所述涂層載體的面積(長(zhǎng)度和寬度)。
計(jì)算“彈性”系數(shù)＝載體在第三擴(kuò)展時(shí)的面積/樣品的起始面積結(jié)果

評(píng)價(jià)所述濕潤(rùn)膠原海綿Nycomed(TachoComb S)的彈性，是所述產(chǎn)品的一個(gè)重要特征。彈性對(duì)于胸和腹部外科是非常重要的。在粘合之后，所述載體應(yīng)該能夠允許進(jìn)行例如肺或腸的擴(kuò)展和放松運(yùn)動(dòng)。特別地，Ethisorb表現(xiàn)出根本沒(méi)有彈性。它立即從所述涂層上脫離下來(lái)。涂層WillosponSpezial和Opraskin在測(cè)試過(guò)程中表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)缺陷。
涂層載體在內(nèi)窺鏡檢查外科中的使用步驟1.不同載體的涂敷采用TachoComb S涂層懸浮液，對(duì)每種載體涂敷2×4cm2的面積。
所述涂層懸浮液的數(shù)量對(duì)應(yīng)于TachoComb規(guī)格(5.5mg纖維蛋白原/cm2)。干燥所述樣品。
2.所述涂層載體樣品用于內(nèi)窺鏡外科的處理和由于這種處理引起的涂層損失，采用一種數(shù)字光電裝置記錄下來(lái)。
方法說(shuō)明裝置內(nèi)窺平臺(tái)(Endodock)內(nèi)窺鏡檢查工具，設(shè)計(jì)用于在內(nèi)窺鏡檢查外科中使用TachoComb(參見(jiàn)圖7)。數(shù)字光電裝置。
研究載體列表

步驟自每種載體取得的圖片系列1.圖片未涂層的和涂層的載體樣品的記錄2.圖片所述涂層樣品插入到所述內(nèi)窺鏡裝置中(Endodock)。
所述樣品必須用手壓平才能使之圍繞一個(gè)導(dǎo)向“栓”進(jìn)行纏繞。接著所述樣品細(xì)心地插入到直徑為10mm的不銹鋼管中。
所述樣品記錄部分地插入到所述Endodock管中。
3.圖片仔細(xì)地推出所述樣品。之后，展開(kāi)所述樣品。
由于這種處理而從從所述載體上脫離的涂層，聚集在所述載體周?chē)?。記錄在插入所述?nèi)窺鏡裝置之后的展開(kāi)樣品和由于這種處理引起的涂層損失。
評(píng)價(jià)在內(nèi)窺鏡外科中的TachoComb S(涂層的馬膠原海綿/Nycomed)是所述產(chǎn)品最為苛求的應(yīng)用。TachoComb S被插入到一種內(nèi)窺鏡裝置中。這種裝置的管道其直徑通常為10-13mm。為了被插入到所述管道中，TachoComb S要被壓平并接著圍繞一個(gè)導(dǎo)向“栓”進(jìn)行纏繞，然后仔細(xì)地插入到所述管道中。因此，所述涂層與所述載體和在其自身內(nèi)的連接，必須是很強(qiáng)的，而且，所述產(chǎn)品必須保持足夠的彈性，使之在干燥條件下能夠彎曲和被卷起。當(dāng)運(yùn)到所述外科位置時(shí)，TachoComb S被仔細(xì)地從所述管道中推出來(lái)。接著，它必須展開(kāi)并放置在所述傷口表面。這經(jīng)常需要進(jìn)行一些調(diào)節(jié)。因此，所述層與所述載體的粘合作用應(yīng)該足夠地強(qiáng)大以承受這種處理。
結(jié)果結(jié)果可從附圖1-6看出。涂層材料脫落物的評(píng)價(jià)如下所示

由于Ethisorb是一種非常剛性的載體，所述涂層的粘合作用是非常差的。因此，涂層的Ethisorb在這種研究過(guò)程中會(huì)損失幾乎全部的涂層。對(duì)涂層的膠原海綿Nycomed相比，所有其它研究的載體具有一個(gè)有待涂敷的平坦表面。這樣，所述涂層就象一張“平坦地毯”躺在所述載體上。這將會(huì)導(dǎo)致所述干燥涂層載體具有相當(dāng)多的非彈性結(jié)構(gòu)。彎曲或卷起經(jīng)常會(huì)使所述涂層自身斷裂。
在所述涂層載體插入到所述內(nèi)窺鏡裝置和所述樣品隨后的展開(kāi)之后，除了膠原海綿Nycomed之外，所有載體損失了相當(dāng)數(shù)量的涂層，這樣，留下有很大面積沒(méi)有涂層材料。
Nycomed膠原海綿的結(jié)構(gòu)和質(zhì)地是TachoComb S在干燥或濕潤(rùn)條件時(shí)彈性的基礎(chǔ)。Nycomed膠原海綿是泡沫狀的，在其內(nèi)具有多邊腔室。在所述表面上，這些腔室被切割成洞穴。這些洞穴使所述涂層表面變大。在涂敷過(guò)程中，所述涂層懸浮液均勻地分散到所述結(jié)構(gòu)表面上。在干燥過(guò)程中，所述含有纖維蛋白原和凝血酶的溶液被固定到所述洞穴中。這樣，TachoComb S就可被切割為希望的尺寸，它可被插入到內(nèi)窺鏡裝置中且僅有少量的涂層材料損失或者根本沒(méi)有損失。
干燥TachoComb S的高彈性，相對(duì)于所有其它研究的涂層載體來(lái)說(shuō)，是一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例3活性成分的尋找劑量試驗(yàn)活性成分的劑量已經(jīng)被兩種不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ退l(fā)現(xiàn)，在其中，對(duì)粘合強(qiáng)度進(jìn)行了測(cè)量在鼠肝上的抗張強(qiáng)度、在鼠腎中對(duì)抗提高組織壓力的粘合強(qiáng)度。
A.在鼠肝上的抗張強(qiáng)度為了制備一種滲漏出血，在麻醉鼠肝的左圓形突出部位制造一個(gè)1×1cm和約1mm深的傷口。所述傷口用1×1cm的TachoComb S碎片進(jìn)行密封，它與一個(gè)彈簧秤相連。測(cè)量在它被扯開(kāi)時(shí)的張力。
B.在鼠腎中對(duì)抗提高組織壓力的粘合強(qiáng)度通過(guò)切割約其質(zhì)量的1/4，在麻醉鼠的左腎上制造一個(gè)平滑水平的強(qiáng)烈流血的傷口。所述傷口用TachoComb測(cè)試薄片進(jìn)行密封。通過(guò)封閉靜脈排放和泵入一種等壓檸檬酸鹽溶液(pH7.2)到所述腎中，提高組織壓力。測(cè)量在TachoComb S開(kāi)始脫離時(shí)的壓力。
表1含有不同數(shù)量纖維蛋白原的TachoComb S的粘合強(qiáng)度

表2含有不同數(shù)量凝血酶的TachoComb S的粘合強(qiáng)度

所得結(jié)果表明，在幾種變化間存在相當(dāng)大的差別。對(duì)于人體凝血酶來(lái)說(shuō)，最佳范圍為0.9-10I.U./cm2，具有恒定的人體纖維蛋白原含量約為5mg/cm2。對(duì)于人體纖維蛋白原來(lái)說(shuō)，最佳范圍為2.9-7.2mg/cm2，具有恒定的人體凝血酶含量約為2I.U./cm2。
這些生物體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)，纖維蛋白原濃度(4.3-6.7mg/cm2)和凝血酶濃度(1.5-2.5IU/cm2)，它們用于其它TachoComb配方(TachoComb和TachoComb H)中，對(duì)于TachoComb S來(lái)說(shuō)，兩者都會(huì)導(dǎo)致最大的粘合強(qiáng)度。
實(shí)施例4TachoComb S在密封狗的脾和肝損傷的功效本研究的目的是比較TachoComb H(含有抑肽酶)與TachoCombS(不含抑肽酶)在犬模型的脾和肝損傷的止血功效。選用切口和穿刺(0.5cm深)的脾，來(lái)模擬滲漏出血。對(duì)前部肝圓形突出部的尖端進(jìn)行切除術(shù)，以模擬一種強(qiáng)烈流血傷口(2-3cm2)。將一種TachoComb H或TachoComb S藥膏作為僅有的止血手段涂敷到所述傷口上(在同一條狗的脾和肝上使用同一批)。在外科手術(shù)之后48小時(shí)，進(jìn)行驗(yàn)尸，因?yàn)樵谂R床實(shí)踐中這是非?？赡苤亓餮钠陂g。
兩種產(chǎn)品都能實(shí)現(xiàn)實(shí)例止血。在48小時(shí)驗(yàn)尸時(shí)，沒(méi)有觀察到第二次出血，無(wú)論是粗略觀察還是組織檢查。
也是組織學(xué)上的，當(dāng)在評(píng)價(jià)覆蓋有各自藥膏的脾和肝的切口對(duì)于止血和治療傷口時(shí)，在涂敷TachoComb H或TachoComb S的狗之間不存在差別。在外科手術(shù)之后也沒(méi)有觀察到第二次出血。
血球計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)表明，對(duì)于兩個(gè)治療組在外科手術(shù)后48小時(shí)具有溫和提高的白血球計(jì)數(shù)，具有相似的結(jié)果。在各組之間或與任意其它評(píng)價(jià)參數(shù)有關(guān)的時(shí)間之間，也不存在差別。而且，凝結(jié)試驗(yàn)表明，對(duì)于存在或缺乏抑肽酶也不存在差別。血液纖維蛋白原含量的上升，在兩種治療組于外科手術(shù)后48小時(shí)是明顯的。白血球計(jì)數(shù)和血液纖維蛋白原含量的上升，可以歸因于一種對(duì)于所述外科損傷的炎癥反應(yīng)，它們不可認(rèn)為是TachoComb H或S的毒副作用。
可以得出結(jié)論，TachoComb S(不含抑肽酶)在治療狗的滲漏出血和強(qiáng)烈流血的軟組織傷口時(shí)，具有與TachoComb H(含有抑肽酶)相同的功效。在所選用條件下，所述凝塊的穩(wěn)定性不受抑肽酶存在或缺乏與否的影響。
實(shí)施例5
再吸收的TachoComb S和TachoComb H的對(duì)比止血、傷口密封效果和抵抗力在豬身上的試驗(yàn)研究研究目的本試驗(yàn)是設(shè)計(jì)用來(lái)評(píng)估止血棉網(wǎng)在豬身上引起的脾損傷的即時(shí)功效和短期抵抗力。
材料和方法在本研究中使用24條母豬。2組止血棉網(wǎng)隨機(jī)地進(jìn)行測(cè)試含有抑肽酶的TachoComb H和不含抑肽酶的TachoComb S。
在外科手術(shù)期間，所述動(dòng)物接受到一個(gè)棉網(wǎng)，直接封閉一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的2×3cm損傷(它是通過(guò)外科在所述脾的腹部形成的)。
所述棉網(wǎng)的即時(shí)和止血效果，是通過(guò)計(jì)數(shù)水泡的數(shù)目并測(cè)量停止出血所需要的時(shí)間來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)的。TachoComb H和S的粘合作用是明顯的。
在72小時(shí)之后，通過(guò)提高脾內(nèi)壓力(夾住靜脈管道)，研究?jī)煞N材料的短期表現(xiàn)和抵抗力。
當(dāng)所述壓力達(dá)到基本穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，使用一種腎上腺I(mǎi)V丸藥(0.02mg或0.04mg)，以提高動(dòng)脈壓力，與鹽酸多巴酚丁胺浸液聯(lián)合，或者不聯(lián)合。
借助于這些藥理學(xué)物質(zhì)，所述TachoComb H和S修補(bǔ)的損傷，的出血壓力破裂，可以引證用于每個(gè)動(dòng)物。
結(jié)果在治療脾損傷外科手術(shù)期間，對(duì)于止血效果，沒(méi)有檢測(cè)到差別。
在72小時(shí)后，在第二次觀察時(shí)，兩種棉網(wǎng)的肉眼外觀是相同的。
在兩組試驗(yàn)組間，劇烈壓力數(shù)值和破裂抵抗力沒(méi)有明顯的不同。
所述材料沒(méi)有發(fā)生破裂。在使用TachoComb S的4個(gè)動(dòng)物中觀察到損傷流血，而在使用TachoComb H觀察到2個(gè)動(dòng)物(在組4中具有一個(gè)附加的水泡)。
組織檢查表明，抑肽酶可以對(duì)所述棉網(wǎng)結(jié)構(gòu)發(fā)揮保護(hù)作用，抑肽酶似乎通過(guò)降低所述棉網(wǎng)的退化而改進(jìn)了微觀式樣。沒(méi)有觀察到特定的細(xì)胞的式樣。
結(jié)論在24條豬的標(biāo)準(zhǔn)化脾損傷，對(duì)TachoComb的2種配方S和H進(jìn)行研究。
兩種材料對(duì)于功效、對(duì)所述損傷的粘合和對(duì)所述軟組織柔順性表現(xiàn)相似。它們的功效是令人難忘的。
在外科手術(shù)的第72小時(shí)，對(duì)它們的耐生物降低性和蛋白質(zhì)水解性，進(jìn)行研究，是通過(guò)提高脾內(nèi)壓力(通過(guò)機(jī)械方法和藥理方法)和記錄所述TachoComb H和S棉網(wǎng)的局部抵抗力而進(jìn)行的。所述2種材料的抵抗力，沒(méi)有觀察到明顯不同。
但是，組織病理學(xué)研究表明，TachoCombS的蛋白質(zhì)水解退化較TachoComb H是略微更顯著的。
使用TachoComb S或TachoComb H作為唯一的止血手段，以密封劇烈流血的豬脾損傷(表面損傷2cm×3cm，3-5mm深；n＝12/組)。在72小時(shí)后，通過(guò)結(jié)扎脾內(nèi)壓力脾靜脈提高脾內(nèi)壓力。此后，通過(guò)注射腎上腺素再提高所述脾內(nèi)壓力。觀察所述豬在所述藥膏下的再流血或血液水泡的發(fā)生。在驗(yàn)尸之后，進(jìn)行樣品(用TachoComb H和S密封的損傷位置)的組織病理學(xué)研究。
TachoComb S和TachoComb H發(fā)揮出相似的功效、對(duì)損傷的粘合性和對(duì)軟組織的柔順性。
實(shí)施例6再吸收的TachoComb S和TachoComb H的對(duì)比止血、傷口密封效果和抵抗力在豬身上急性胰腺炎模型的試驗(yàn)研究研究目的本試驗(yàn)是設(shè)計(jì)用來(lái)評(píng)估止血棉網(wǎng)在豬身上急性胰腺炎引起的脾損傷的即時(shí)功效和短期抵抗力。
材料和方法在本研究中使用20條母豬。2組止血棉網(wǎng)隨機(jī)地進(jìn)行測(cè)試含有抑肽酶的TachoComb H和不含抑肽酶的TachoComb S。
在外科手術(shù)期間，所述動(dòng)物接受到一個(gè)棉網(wǎng)，直接封閉一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的2×3cm損傷(它是通過(guò)外科在所述脾的腹部形成的)。
所述棉網(wǎng)的即時(shí)和止血效果，是通過(guò)計(jì)數(shù)水泡的數(shù)目并測(cè)量停止出血所需要的時(shí)間來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)的。TachoComb H和S的粘合作用是明顯的。
然后，使用一個(gè)消毒注射器，將膽囊刺破，收集膽汁，并將10ml膽汁注射流過(guò)所述Wirsung’s導(dǎo)管，以引發(fā)胰腺炎。在外科手術(shù)之前和之后每天對(duì)血液酶水平(脂肪酶和淀粉酶水平)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
將小片的Tachocomb H和S，放置在所述胰腺軟組織的其內(nèi)臟連接處。
在72小時(shí)之后，通過(guò)提高脾內(nèi)壓力(夾住靜脈管道和藥理學(xué)方法)，研究Tachocomb H和S的短期表現(xiàn)和酶退化抵抗力。
當(dāng)所述壓力達(dá)到基本穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，使用一種IV腎上腺素丸藥(0.02mg或0.04mg)，接著進(jìn)行去甲腎上腺素注入0.02-0.04mg/min，以提高動(dòng)脈壓力，與0.3-0.6mg/min的鹽酸多巴酚丁胺浸液聯(lián)合，或者不聯(lián)合。
借助于這些藥理學(xué)物質(zhì)，所述TachoComb H和S修補(bǔ)的損傷的出血壓力破裂，可以引證用于每個(gè)動(dòng)物。
結(jié)果兩種材料對(duì)于功效、對(duì)所述損傷的粘合和對(duì)所述軟組織柔順性表現(xiàn)相似。它們的功效是令人難忘的。
兩種材料在第3天于肉眼觀察下是未變化的，盡管所述酶條件是苛刻的，尤其是在第2天的血液中，在第4天在腹膜流體中仍是這樣。
在72小時(shí)時(shí)，在提高脾壓力后，兩種材料的抵抗力沒(méi)有觀察到不同。
在所述TachoComb S組中發(fā)生一個(gè)材料破裂。在使用TachoCombS的1個(gè)動(dòng)物中觀察到損傷流血，而在使用TachoComb H觀察到2個(gè)動(dòng)物(在所述TachoComb H組中具有一個(gè)水泡)。
組織病理學(xué)數(shù)據(jù)表明，TachoComb S與TachoComb H相比，在退化方面沒(méi)有明顯的不同。在所述脾臟上沒(méi)有觀察到特定細(xì)胞的式樣。即使在胰腺樣品上，與高濃度胰腺酶密切接觸的TachoComb H和S，也沒(méi)有表現(xiàn)出任何很大變化。
結(jié)論總之，關(guān)于它們對(duì)于提高胰腺酶環(huán)境的條件下破裂的抵抗力，在TachoComb S和TachoComb H之間沒(méi)有明顯的不同。
兩種TachoComb S和H棉網(wǎng)改性，也沒(méi)有檢測(cè)到具體的宏觀或微觀的證據(jù)。
在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化脾損傷模型中(表面損傷2cm×3cm，約3mm深；n＝10/組)，對(duì)于由在豬的Wirsung管道逆向注射膽汗和隨后結(jié)扎所述胰腺管道所引起的急性胰腺炎，研究TachoComb S和TachoComb H的止血功效。也將一小片TachoComb H和S涂敷到所述胰腺的胰腺管道結(jié)扎位置。在外科手術(shù)72小時(shí)后，通過(guò)結(jié)扎所述脾靜脈和增值腎上腺注射，提高脾內(nèi)壓力。
在所述脾上，TachoComb S和TachoComb H具有即時(shí)止血效果、對(duì)損傷的粘合性和抵抗提高的脾內(nèi)壓力，表現(xiàn)出相似的性能，而與胰腺酶水平的標(biāo)記提高沒(méi)有關(guān)系(與基準(zhǔn)水平相比，血液中淀粉酶和脂肪酸提高了20-100倍，腹膜流體中胰腺酶提高了10-100倍)。組織病理學(xué)數(shù)據(jù)表明，在TachoComb S和TachoComb H的退化方面沒(méi)有明顯的不同。在所述脾上也沒(méi)有觀察到特定的細(xì)胞樣式。即使是在經(jīng)過(guò)與高濃度胰腺酶的TachoComb H和S進(jìn)行密切接觸的樣品上，TachoComb H和S的粘合性和組織病理學(xué)也沒(méi)有表現(xiàn)出任何重要不同。
因此，在這種豬的高度受迫模型的急性胰腺炎中，TachoComb Sand TachoComb H之間，沒(méi)有表現(xiàn)出具體的宏觀或微觀差別。
實(shí)施例7再吸收的TachoComb H和TachoComb S的對(duì)比腦組織反應(yīng)和效力在正常凝結(jié)下和局部高纖維蛋白溶解過(guò)程中的兔模型的試驗(yàn)研究本研究的目的是比較神經(jīng)外科應(yīng)用之后TachoComb S和TachoComb H的功效。腦損傷的引發(fā)，是在兔身上于正常凝結(jié)條件下(腦組織反應(yīng)＝BTR，n＝12兔，合格的n＝10)和在高纖維蛋白溶解條件(HF)下，采用局部r-tPA應(yīng)用進(jìn)行的(n＝10兔)。對(duì)于每個(gè)半球制作三個(gè)腦皮層損傷(每個(gè)動(dòng)物共有6處損傷；鉆孔腦損傷深為3mm，直徑為4mm)。
BTR系列從每個(gè)半球的三個(gè)損傷中取出二個(gè)，分別采用TachoComb H或TachoComb S進(jìn)行治療，留下半球中的一個(gè)損傷作為空白對(duì)照。在采用TachoComb H或S密封所述損傷之后，在高度放大下采用鹽水連續(xù)低流速?zèng)_洗下測(cè)量流血時(shí)間。在所有損傷中都達(dá)到止血后，通過(guò)增值腎上腺素注射(0.01mg/kg腎上腺素)，引發(fā)動(dòng)脈高血壓，從而提高平均動(dòng)脈壓力(MPA)到至少120mmHg。在此過(guò)程中，觀察到流血連續(xù)進(jìn)行。在降低所述MAP到正常值后，所述皮膚再次閉合。驗(yàn)尸時(shí)間為3和7天(每組n＝5個(gè)兔)。在第3天驗(yàn)尸之前，在三個(gè)動(dòng)物中進(jìn)行磁共振成象。在驗(yàn)尸時(shí)，對(duì)所述損傷位置進(jìn)行粗略觀察，并取樣用于組織病理學(xué)研究。
HF系列在如所述BTR系列確定所述損傷之后，在所有損傷擇一地用TachoComb S或TachoComb H進(jìn)行密封之前，將r-tPA滴加到所述損傷之上(存在于0.5ml鹽水中的0.3mg r-tPA/每個(gè)損傷)。在高度放大和連續(xù)低鹽水沖洗下，測(cè)量流血時(shí)間。在第1天(n＝7)和第3天(n＝3)粗略觀察驗(yàn)尸。對(duì)在第3天取得的樣本進(jìn)行組織病理學(xué)研究，以進(jìn)行比較。
在整個(gè)研究過(guò)程中，在TachoComb S和TachoComb H之間沒(méi)有發(fā)明明顯的不同，無(wú)論是對(duì)于密封功效、忍耐提高的MAP和流血時(shí)間期間，還是對(duì)于組織病理學(xué)。在所有HF系列的動(dòng)物中，嚴(yán)重出血是明顯的，不僅是在所述損傷位置，而且在整個(gè)表面的皮膚之下位置。盡管是在這些苛刻條件下，但TachoComb S還是發(fā)揮出與TachoCombH相似的功效。
實(shí)施例8TachoComb H和TachoComb S的神經(jīng)外科應(yīng)用腦組織反應(yīng)和止血效力流體纖維蛋白密封劑大規(guī)模地用于神經(jīng)外科的止血。關(guān)于腦組織對(duì)于TachoComb反應(yīng)，還不存在全面的出版數(shù)據(jù)，而且，抗纖維蛋白溶解試劑(即抑肽酶)仍存在著爭(zhēng)議。
目的本研究設(shè)計(jì)集中于兩個(gè)主要問(wèn)題采用組織學(xué)方法和現(xiàn)代成象技術(shù)，對(duì)在TachoComb H(TCH)和TachoComb S(TCS)應(yīng)用到腦皮層損傷后的短期局部腦組織反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，與空白對(duì)照損傷(CL)進(jìn)行比較。
第二個(gè)目的是研究在正常凝結(jié)(BTR組)下和局部引發(fā)嚴(yán)重高纖維蛋白溶解(HF組)之后TachoComb H和S產(chǎn)品的止血功效，和評(píng)價(jià)抑肽酶是否會(huì)對(duì)制劑的止血質(zhì)量和粘合作用力存在影響。
材料和方法在一組22只小兔中，對(duì)每個(gè)半球制作三個(gè)皮層損傷。12個(gè)動(dòng)物歸為所述腦組織反應(yīng)(BTR)組，10個(gè)歸為所述纖維蛋白溶解(HF)組。
在所述BTR動(dòng)物中，所述損傷中的二個(gè)分另用TachoComb H和TachoComb S填充，而第三個(gè)則是空白作為對(duì)照。測(cè)量流血時(shí)間，并監(jiān)測(cè)由于引發(fā)的動(dòng)脈高血壓而引起的流血的發(fā)生。所述動(dòng)物在外科手術(shù)后第3天和第7殺死，并進(jìn)行組織學(xué)檢查。在第3天，就在安樂(lè)死之前，在三只BTR動(dòng)物中進(jìn)行磁共振成象。
在所述HF動(dòng)物中，其中，預(yù)先用一種重組組織血纖維蛋白溶酶原活化劑(rt-PA)引發(fā)一種嚴(yán)重的局部高纖維蛋白溶解狀態(tài)，一個(gè)半球的所有三個(gè)損傷，都采用TachoComb H進(jìn)行治療，另一半球的都用TachoComb S治療。測(cè)量流血時(shí)間，并在第3天在三個(gè)動(dòng)物中進(jìn)行組織學(xué)檢查。
結(jié)果在正常凝結(jié)下(BTR動(dòng)物)，具有TCH和TCS的止血作用明顯快于不含止血試劑(p＜0.001)。已經(jīng)得到證實(shí)，兩種產(chǎn)品的流血時(shí)間沒(méi)有差別(p＝0.294)，但是，這些時(shí)間較空白損傷的時(shí)間(p＜0.001)始終都是更短的。
在引發(fā)的動(dòng)脈高血壓過(guò)程中，在24 TCH損傷中有1例發(fā)生流血，在24 TCS損傷中有3例發(fā)生流血，在24對(duì)照損傷中有19例發(fā)生流血。在嚴(yán)重提高的動(dòng)脈血壓(Chi square＝16.3；p＞0.001)過(guò)程中，所述止血試劑的存在始終都能防止再流血。相反，在動(dòng)脈血壓提高過(guò)程中，缺乏TCH或TCS則存在發(fā)生80％再流血的危險(xiǎn)。
在所述高纖維蛋白溶解組(HF動(dòng)物)的流血時(shí)間的統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)，兩種產(chǎn)品的流血時(shí)間之間沒(méi)有差別(符號(hào)等級(jí)試驗(yàn)p＝0.927和T試驗(yàn)p＝0.4102)。
最后，在99.73％(D＜3sdD＝ns)的安全期限內(nèi)，消除在兩種凝結(jié)狀態(tài)下相同產(chǎn)品的止血功效明顯的不同。
結(jié)論TachoComb H和TachoComb S沒(méi)有在所述腦組織中引發(fā)任何特殊的組織變化。兩種產(chǎn)品具有良好的腦軟組織生物適應(yīng)性，這是由于它們沒(méi)有引發(fā)較單獨(dú)的損傷更大的組織反應(yīng)。與所述組合物物產(chǎn)品相關(guān)的不利作用，在形態(tài)學(xué)上也是不明顯的。組織檢查也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兩種產(chǎn)品之間的任何不同，無(wú)論是在正常情形下還是在嚴(yán)重?cái)_亂凝結(jié)情形下。TachoComb H和S在正常凝結(jié)和高纖維蛋白溶解兩種情形之下，具有相同的止血效力。這是非常明顯的，即抑肽酶對(duì)于止血質(zhì)量和粘合作用力沒(méi)有影響，即使是在嚴(yán)重?cái)_亂的凝結(jié)情形下。
與文獻(xiàn)相比，TachoComb H和S能夠建立較氧化纖維素和膠原棉網(wǎng)更快的止血作用。
權(quán)利要求
1.一種固體組合物，主要由下述物質(zhì)組成a)一種載體，它具有至少下述一種物理性質(zhì)彈性模量范圍為5-100N/cm，密度為1-10mg/cm3，腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，和均勻分散并固定在所述載體之上的b)固體纖維蛋白原，和c)固體凝血酶。
2.權(quán)利要求1所述組合物，其中所述載體是一種生物可降解聚合物如聚透明質(zhì)酸、多羥基酸例如乳酸、葡糖酸、羥基丁酸、一種纖維素、膠質(zhì)、或膠原如膠原海綿例如主要由膠原I型纖維組成的膠原海綿。
3.權(quán)利要求2所述載體，其中所述載體是一種含有源自哺乳動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因或重組來(lái)源的膠原I型材料。
4.權(quán)利要求1-3任一所述組合物，其中所述載體具有一個(gè)或多個(gè)活性側(cè)面，其中，纖維蛋白原存在的數(shù)量為2-10mg/cm2，如4.3-6.7mg/cm2，優(yōu)選約5.5mg/cm2，和凝血酶存在數(shù)量為1.5-5.5IU/cm2，優(yōu)選約為2.0IU/cm2。
5.權(quán)利要求1-4任一所述組合物，其中，所述纖維蛋白原是人體的、從一種天然來(lái)源純化得到、或轉(zhuǎn)基因或重組的人體纖維蛋白原。
6.權(quán)利要求1-5任一所述組合物，其中所述纖維蛋白原是從一種天然來(lái)源純化得到的。
7.權(quán)利要求1-5任一所述組合物，其中所述纖維蛋白原轉(zhuǎn)基因的或重組的。
8.權(quán)利要求1-7任一所述組合物，其中所述凝血酶是人體的、從一種天然來(lái)源純化得到、或轉(zhuǎn)基因或重組的人體凝血酶。
9.權(quán)利要求1-8任一所述組合物，其中所述凝血酶是從一種天然來(lái)源純化得到的。
10.權(quán)利要求1-8任一所述組合物，其中所述凝血酶是轉(zhuǎn)基因的或重組的。
11.一種用于止血、組織封口和組織粘合的材料，它含有一種彈性載體，所述載體具有至少下述一種物理性質(zhì)彈性模量范圍為5-100N/cm，密度為1-10mg/cm3，腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，而且它還含有固體纖維蛋白原和固體凝血酶，但它不含有任何抗血纖維蛋白溶解試劑如抑肽酶、ε-氨基正己酸或α2-抗血纖維蛋白溶酶，所述固體纖維蛋白原和固體凝血酶以這樣一種方式固定到所述載體上，使得所述涂層物質(zhì)在Vibrofix混合器中以約1000rpm頻率搖晃2分鐘時(shí)，所述磨損低于1.0mg/cm2，而且，當(dāng)所述涂層載體物質(zhì)被插入到一種內(nèi)窺鏡檢查設(shè)置和隨后移去時(shí)，所述物質(zhì)基本沒(méi)有變化，并且具有低于20％的涂層物質(zhì)脫落物，作為所述載體彈性和所述固體纖維蛋白原和固體凝血酶的固體粘合性的標(biāo)記，而且所述物質(zhì)是充分空氣密封和液體密封的，并具有至少1.25的彈性系數(shù)，它由一個(gè)包括固定所述涂層載體到一個(gè)橡膠片上、通過(guò)三次施加壓力使所述橡膠伸展、和在第三次測(cè)量所述涂層載體在橡膠片伸展最大處的面積和將所述涂層載體的膨脹面積與所述涂層面積的起始面積進(jìn)行比較的實(shí)驗(yàn)測(cè)量得到的。
12.一種具有至少下述一種物理性質(zhì)的載體的用途，彈性模量范圍為5-100N/cm，密度為1-10mg/cm3，腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，和用于制備一種用于組織密封的產(chǎn)品所需要的充足數(shù)量的纖維蛋白原和充足數(shù)量的固體凝血酶。
13.一種具有至少下述一種物理性質(zhì)的載體的用途，彈性模量范圍為5-100N/cm，密度為1-10mg/cm3，腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，和用于制備一種用于止血的產(chǎn)品所需要的充足數(shù)量的纖維蛋白原和充足數(shù)量的固體凝血酶。
14.一種具有至少下述一種物理性質(zhì)的載體的用途，彈性模量范圍為5-100N/cm，密度為1-10mg/cm3，腔直徑大于0.75mm且小于4mm和/或具有腔平均直徑小于3mm，和用于制備一種用于組織密封的產(chǎn)品所需要的充足數(shù)量的纖維蛋白原和充足數(shù)量的固體凝血酶。
15.權(quán)利要求12-14任一所述用途，用于在腸胃系統(tǒng)如食管、胃、小腸、大腸、直腸中、在軟組織器官如肝、脾、胰腺、腎、肺、腎上腺、甲狀腺和淋巴結(jié)、心血管外科、包括在氣管、支氣管或肺上的胸外科、在耳朵、鼻和包括牙外科的咽喉(ENT)區(qū)域的外科干涉、婦科、泌尿道、骨科(例如松質(zhì)切除術(shù))、和緊急外科、神經(jīng)外科、淋巴腺的、膽汁的、和腦脊髓(CSF)管狀器官、和在胸和肺外科過(guò)程中的漏氣的外科干涉。
16.權(quán)利要求12-15任一所述用途，其中所述載體是一種生物可降解聚合物如聚透明質(zhì)酸、多羥基酸例如乳酸、葡糖酸、羥基丁酸、一種纖維素、膠質(zhì)、或膠原如膠原海綿例如主要由膠原I型纖維組成的膠原海綿。
17.權(quán)利要求12-16任一所述用途，其中所述載體具有一個(gè)或多個(gè)活性側(cè)面，其中，纖維蛋白原存在的數(shù)量為2-10mg/cm2，如4.3-6.7mg/cm2，優(yōu)選約5.5mg/cm2，和凝血酶存在數(shù)量為1.5-2.5IU/cm2，優(yōu)選約為2.0IU/cm2。
18.權(quán)利要求12-17任一所述用途，其中，所述纖維蛋白原是人體的、從一種天然來(lái)源純化得到、或轉(zhuǎn)基因或重組的人體纖維蛋白原。
19.權(quán)利要求12-18任一所述用途，其中所述纖維蛋白原是從一種天然來(lái)源純化得到的。
20.權(quán)利要求12-18任一所述用途，其中所述纖維蛋白原轉(zhuǎn)基因的或重組的。
21.權(quán)利要求12-20任一所述用途，其中所述凝血酶是人體的、從一種天然來(lái)源純化得到的、或轉(zhuǎn)基因或重組的人體凝血酶。
22.權(quán)利要求12-21任一所述用途，其中所述凝血酶是從一種天然來(lái)源純化得到的。
23.權(quán)利要求12-22任一所述用途，其中所述凝血酶是轉(zhuǎn)基因的或重組的。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種固體組合物，主要由a)一種載體，所述載體具有至少下述一種物理性質(zhì)彈性模量范圍為5－100N/cm，如10－50N/cm；密度為1－10mg/cm
文檔編號(hào)A61L15/32GK1507358SQ02804096
公開(kāi)日2004年6月23日 申請(qǐng)日期2002年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月25日
發(fā)明者達(dá)格瑪·施蒂默德, 達(dá)格瑪 施蒂默德 申請(qǐng)人:奈科明醫(yī)藥有限公司