專利名稱：一種治療急性腦出血的藥物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種治療急性腦出血的藥物，具體涉及一種以中草藥為原料制備的中成藥，本發明還涉及該藥物的制備方法。
西醫對本病的治療目前仍以控制血壓、脫水、降顱壓，止血劑應用等對癥治療為主，對部分出血量大的病人或具有腦干壓迫，腦疝，腦積水跡象者還需及時手術清除血腫。中醫對腦出血急性期雖有安宮牛黃丸，至寶丹，蘇合香丸，參附湯等治療方法，但臨床用藥極不方便。近年來，有學者將原來用于冠心病和缺血性中風的復方丹參注射液用于急性腦出血的治療，在促進患者意識恢復、血腫吸收和降低死亡率方面明顯優于單用西藥治療組，說明活血化瘀法對急性腦出血具有確切的治療作用。此外，在安宮牛黃丸基礎上研制而成的清開靈注射液和醒腦靜注射液，均采用了靜脈給藥方法。由于使用方便，適應了臨床急救的需要，所以在臨床上得到了廣泛應用。但由于這些藥物都僅僅針對腦出血復雜病機的某一環節進行治療，故臨床效果并不能盡如人意，所以臨床迫切需要一種針對急性腦出血復雜病機，療效確切，方便安全，質量穩定的急救用藥。
本發明的另一目的在于提供該藥物的制備方法。
本發明提供的一種治療急性腦出血的藥物，是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃80～120 蒲黃130～180梔子135～180 冰片0.8～1.5。
上述用于治療急性腦出血的藥物，可以制成藥劑學上所說的多種劑型，如注射液、膠囊、片劑或散劑。
將上述重量配比的原料制成本發明藥物的方法，包括以下步驟(1)大黃粉碎成粗粒，加5～12倍量70～80％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.12，攪拌加入4％明膠溶液至無沉淀產生，再加乙醇使含醇量達75～85％，冷藏24～72小時，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35，真空干燥，得大黃干燥提取物；(2)蒲黃、梔子壓碎后，加6～10倍量80～90％乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.12，冷藏24～72小時，濾過，濾液用等量乙酸乙酯萃取4～8次，減壓回收乙酸乙酯至稠膏狀，真空干燥，得蒲梔干燥提取物；(3)取上述兩干燥提取物，加注射用水溶解，加活性炭，充分攪拌，加熱煮沸，放冷，濾過；(4)冰片與泊洛沙姆研勻，攪拌加入上述濾液中使溶解，加入氯化鈉，調pH值至7.0～8.0，濾過，濾液補加注射用水，再調pH值至7.0～8.0，然后用微孔濾膜濾過，濾液灌裝于處理好的輸液瓶中，熱壓滅菌，制得注射液。
本發明組方合理，嚴謹科學，方中大黃，苦、寒，歸脾、胃、大腸、肝、心經。功能清熱瀉火，不僅寒能清熱，而且能瀉下泄熱，對腑氣不通，大便秘結，高熱不退，甚則神昏譫語者起到釜低抽薪之功。邪熱得祛，血熱得涼，則血熱妄行之出血可止。同時，大黃具有較好的活血祛瘀作用，在清熱止血之同時，使腦竅之瘀血得散，故有止血而不留瘀的優點，用為君藥。蒲黃，甘、平，歸心、肝、心包經。生用既可行血祛瘀，又能收斂止血，與大黃一樣具有止血而不留瘀的特點，適用于各種出血證。梔子苦、寒，主歸心、肝、肺、胃，三焦經，可清心瀉火除煩，又能清熱利濕，其性寒涼，入血分，能清熱涼血止血，故可用治血熱迫血妄行之證，與蒲黃合用共助君藥大黃以加強清熱，涼血，止血之功，共為臣藥。冰片，辛、苦，微寒，歸心、脾、肺經。功似麝香而性涼，具開竅醒神之功，可治療身熱神昏等癥，助臣藥梔子以加強醒神開竅之功，用為佐藥。諸藥合用，共奏清熱化瘀，醒腦開竅之功，使邪熱得清，瘀血得祛，出血得止，腦竅得開，故中風神昏之證可愈。
臨床試驗結果表明，本發明藥物對急性腦出血具有良好的治療作用，能明顯改善腦出血所致的偏癱體征，縮小腦內血腫面積，減輕腦水腫和神經細胞的繼發性損害；減少死亡率，提高存活質量，改善神經功能缺損，明顯減少腦組織的含水量，提高腦內超氧化物歧化酶的活性，抑制脂質過氧化反應的發生，并有利尿作用；有效縮短血液的凝血時間和出血的止血時間；對神經元細胞有明顯的保護作用，量效關系明顯。
下面結合實施例及主要藥效學試驗對本發明作進一步的說明。
受試藥物 本發明注射液，58.1％生藥/100ml/瓶。
劑量設定本發明注射液成人臨床擬用法用量靜脈滴注，100ml/次，1次/日。若以每日注射ml，成人以70kg計算，則依“實驗動物與人體表面積比等效量換算比率”可算出各動物的等效劑量。
小鼠的等效量為7.553(58.1×0.026×50)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設定為3.7765g/kg、7.553g/kg、15.106g/kg。
大鼠的等效量為5.229(58.1×0.018×5)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設定為2.6145g/kg、5.229g/kg、10.458g/kg。
兔的等效量為2.771(58.1×0.07÷1.5)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設定為1.355g/kg、2.711g/kg、5.422g/kg。
給藥途徑包括iv與ip，與擬推薦的臨床用藥途徑一致。
試驗對照 空白對照組，給等體積的生理鹽水。
數據處理所有實驗數據以x±s表示。計量數據由SPSS10.0統計軟件進行方差分析及組間檢驗。
實驗動物清潔級ICR小鼠，體重18-20g，雌雄各半，動物證編號SCXK11-00-0008，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供；日本大耳白兔，體重2.0-2.5kg，雌雄不限，動物許可證編號京動許字第004號，中國農業科學院中國獸藥監查所實驗動物中心提供；SPF級Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重250-300g，雄性，動物許可證編號SCXK11-00-0008，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。
飼養條件動物進入清潔級動物實驗室后，大鼠每籠放養5只，飼養3天后使用；小鼠每籠10只，飼養3天后使用；兔每籠1只，由專人飼養管理。動物室光照充足，通風和空調設備良好，室溫控制在23-25℃，相對濕度為50-70％。實驗室按常規定期消毒。
陽性對照藥尼莫地平注射液(ND)。選藥依據，此藥系腦出血急性期臨床常用藥。規格100mg/50ml，批號0009039，山東新華制藥股份有公司生產。用法與用量，靜脈注射或滴注，2mg/次，大鼠按臨床用量換算為30μg/kg。
材料與方法一、試劑超氧化物歧化酶(SOD)、脂質過氧化(LPO)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。
二、實驗方法及使用儀器1、家兔急性腦出血模型的建立實驗動物均在術前1天耳靜脈采血1ml，4℃存放，造模家兔在2％利多卡因局麻下于手術當日稱取150mg自體血凝塊裝入20號穿刺針內，仿照Levine’s方法，行右側腦內血塊埋藏術。手術部分為冠狀縫前0.1cm，矢狀逢右側旁開0.6cm，深1.4cm。
2、實驗分組60只家兔隨機分為六組(1)假手術對照組10只，不造模。
(2)模型組10只，造模7日。
(3)陽性藥尼莫地平注射液(ND)組，造模7日。
(4)本發明注射液大劑量組10只，造模7日。
(5)本發明注射液中劑量組10只，造模7日。
(6)本發明注射液小劑量組10只，造模7日。
手術后立即開始給藥，陽性藥ND 15ug/kg，iv；本發明注射液三組按相應劑量給予不同濃度的藥液，iv；正常組及模型組則按相應容量的生理鹽水，iv。連續給藥六天。如不能正常進食，則每日灌一次濃奶粉20毫升。
3、標本處理所有家兔均于照模后7日殺檢，迅速取腦。造模各組兔腦沿縱裂均勻切為左右兩半球，再經血腫正中冠狀切開，分為左右前后4個部分，假手術組家兔腦也切成相應4部分，作組織檢查，與含水量及SOD、LOP含量測定。
三、觀察指標及檢測指標1、動物一般情況、體重、及死亡數2、動物神經功能缺損分級變化動物神經功能缺損分級方案參照Bederson及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組方案修訂0級正常I級一側肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行或有偏行(行進打偏半徑超過1米)；II級一側肢體明顯無力，頭部輕度向另側歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5-0.75米左右。
III級一側偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV組一側偏癱，不能正臥，呈側臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯；或不能自主進食；神智迷朦，或抽搐頻繁(10分鐘內2次以上)；V級昏迷或死亡。
3、腦指數與腦組織含水量測定腦組織含水量測定按Gotoh等方法。
腦組織含水量＝(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100％腦指數＝腦濕重/體重×100％稱量采用電子天平(TA-1003，上海天平儀器廠)。腦組織經DF205型電熱鼓風干燥箱(北京西城醫用設備二廠)60℃7天烘至恒重(連續稱重3次無變化)，然后稱取腦干重。
4、超氧化歧化酶、過氧化脂質水平的測定超氧化歧化酶SOD采用放射免疫法測定；過氧化脂質LPO以TBA法(測MDA含量)測定，722光柵分光光度計測定。
實驗結果1、動物一般情況及死亡數家兔于造模術后均有不同程度的精神萎靡，左側肢體肌張力增高，肌力減弱，以前肢為顯著；蹦跳反射差，跛行，并向右側(腱側)偏轉；模型組家兔飲食及劑量組家兔大便比較通暢，排便量基本同正常組，小便色澤較清。
表1 本發明注射液對家兔急性腦出血后死亡數影響(x±s)死亡數組別 死亡率3日 7日假手術組(n＝10)0 0 0模型組(n＝14) 3 1 28.57尼莫地平組(n＝10) 0 0 0小劑量組(n＝13)2 0 15.38本發明中劑量組(n＝10)0 0 0大劑量組(n＝10)0 0 02、神經功能缺損分級變化造模后第1天，模型組及治療組家兔神經功能缺損分級相似(組間比較p＞0.05)，與正常組比較均有極顯著的差異(P＜0.01)。第6天觀察，模型組家兔的神經功能缺損分組與第1天的分級差異無統計學意義(P＞0.05)，提示模型組的自然改善程度不顯著；陽性組及本發明注射液第6天家兔神經功能缺損分級均有改善，但陽性組與正常組之間尚有差異(P＜0.05)，本發明注射液治療組與第1天自身比較，均有顯著性差異(p＜0.01)，與正常組比較無顯著性差異(p＞0.05)，尢以本發明注射液大、中劑量治療組明顯，說明本發明注射液對家兔神經功能缺損分級的改善程度較大。
表3 本發明注射液對家兔神經功能缺損分析的影響神經功能缺損分級組別時間0IIIIIIIVV正常對照組 實驗1日 000 0 0 0實驗6日 000 0 0 0模型組 實驗1日 033 2 2 0實驗6日 024 2 2 0尼莫地平組 實驗1日 034 2 1 0實驗6日 044 2 0 0小劑量組實驗1日 035 1 1 0實驗6日 044 1 1 0本發明 中劑量組實驗1日 035 1 1 0實驗6日 043 2 1 0大劑量組實驗1日 053 1 1 0實驗6日 062 2 0 03、指數與腦組織含水量的變化造模后第7天，模型組腦指數與右腦組織含水量均顯著高于正常對照組，左腦含水量接近正常，提示模型組造模側腦水腫仍明顯。尼莫地平組及本發明注射液治療組腦指數仍高，但低于模型組，較模型組均顯著降低。尼莫地平組及本發明注射液大、中劑量治療組右腦組織含水量均較模型組顯著降低。提示陽性與本發明注射液均有減輕腦水腫的作用(見表4)。
表4 本發明注射液對急性腦出血家兔腦指數與腦組織含水量的影響(x±s，n＝10)腦含水量(％)組別 腦指數左腦 右腦對照組0.273±0.020*77.17±0.73 77.27±0.90**模型組0.386±0.038 78.02±1.04 79.30±1.06尼莫地平組0.305±0.044*77.46±0.79 77.07±0.94**小劑量組0.333±0.048*77.54±0.92 78.68±0.84本發明 中劑量組0.301±0.043*77.40±0.61 78.02±1.00**大劑量組0.293±0.047*77.45±1.21 77.62±1.15**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01.4、腦組織病理學檢查肉眼觀察發現，模型組腦內血腫明顯，而各組治療腦內血腫縮小。
光學顯微鏡下觀察(見附圖
)模型對照組血腫明顯，可見陳舊性的血凝塊，血腫中有少量膠質細胞、單核細胞浸潤；血腫周圍腦組織水腫，組織疏松本發明注射液小劑量組血腫部分被吸收，血腫縮小，血腫部分有較多的膠質細胞、單核細胞浸潤，并取代血腫。本發明注射液中劑量組血腫大部分被吸收，血腫明顯縮小，可見小的瘢痕；腦組織水腫明顯減輕。本發明注射液大劑量組和尼莫地平組病變類似，血腫大部分被吸收，有早期的膠質細胞瘢痕形成。5、組織超氧化物岐化酶、過氧化脂質水平的變化造模后7天觀察，模型組家兔腦組織LPO含量均較正常組顯著增高，SOD含量顯著降低。陽性藥組及本發明注射液大、中劑量組與模型組比較，LPO含量均降低；陽性藥組及本發明注射液組SOD含量均增高。提示本發明注射液能升高組織SOD含量，降低LPO水平，從而減輕腦組織脂質過氧化反應。見表5。
表5 本發明注射液對急性腦出血家兔腦組織中SOD、LPO含量的影響(x±s)組別 LPO(nmol/100mg.Pro)SOD(U/mg.Pro)對照組354.67±106.59 17.36±3.50*模型組378.86±205.80 13.12±4.45尼莫地平組316.81±94.4920.61±2.83**小劑量組360.06±189.36 19.39±4.71**本發明中劑量組153.09±48.39**20.31±3.65**大劑量組181.77±44.39**24.19±6.65**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.0權利要求
1.一種治療急性腦出血的藥物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃80～120 蒲黃130～180梔子135～180 冰片0.8～1.5。
2.根據權利要求1所述的治療急性腦出血的藥物，其特征在于所述的藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型。
3.根據權利要求2所述的治療急性腦出血的藥物，其特征在于所述的藥劑是注射液。
4.權利要求3所述的治療急性腦出血的藥物的制備方法，包括以下步驟(1)大黃粉碎成粗粒，加5～12倍量70～80％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.12，攪拌加入4％明膠溶液至無沉淀產生，再加乙醇使含醇量達75～85％，冷藏24～72小時，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35，真空干燥，得大黃干燥提取物；(2)蒲黃、梔子壓碎后，加6～10倍量80～90％乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.12，冷藏24～72小時，濾過，濾液用等量乙酸乙酯萃取4～8次，減壓回收乙酸乙酯至稠膏狀，真空干燥，得蒲梔干燥提取物；(3)取上述兩干燥提取物，加注射用水溶解，加活性炭，充分攪拌，加熱煮沸，放冷，濾過；(4)冰片與泊洛沙姆研勻，攪拌加入上述濾液中使溶解，加入氯化鈉，調pH值至7.0～8.0，濾過，濾液補加注射用水，再調pH值至7.0～8.0，然后用微孔濾膜濾過，濾液灌裝于處理好的輸液瓶中，熱壓滅菌，制得注射液。
全文摘要
本發明公開了一種治療急性腦出血的藥物，它以大黃、蒲黃、梔子和冰片為原料，根據每味中藥的不同特性，經過提取制成注射液。本發明藥物對急性腦出血具有良好的治療作用，能明顯改善腦出血所致的偏癱體征，縮小腦內血腫面積，減輕腦水腫和神經細胞的繼發性損害；減少死亡率，提高存活質量，改善神經功能缺損，明顯減少腦組織的含水量，提高腦內超氧化物歧化酶的活性，抑制脂質過氧化反應的發生，并有利尿作用；有效縮短血液的凝血時間和出血的止血時間；對神經元細胞有明顯的保護作用，量效關系明顯。
文檔編號A61P9/00GK1424080SQ0214969
公開日2003年6月18日 申請日期2002年12月20日 優先權日2002年12月20日
發明者張晴龍 申請人:張晴龍