專利名稱：喜樹堿配糖體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及喜樹堿配糖體制備方法，屬于天然藥物結(jié)構(gòu)修飾研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
喜樹(Camptotheca acuminata)是珙桐科(Nyssacea)喬木，為我國特有植物。分布于江西、浙江、湖南、湖北、四川、貴州、廣西、廣東等地。其根、莖、皮、葉、果實，可供藥用，從喜樹中提取的生物堿——喜樹堿及其衍生物，具有抗癌活性。
由于喜樹堿(CPT)的毒副作用很大，如脫發(fā)、膀胱炎、骨髓抑制、中度白細(xì)胞下降、血小板減少、惡心、嘔吐、腹瀉、貧血等，這些毒性反應(yīng)使喜樹堿在臨床癌癥治療中受到限制，近年來，美國、日本、英國、加拿大等國家都積極投入到喜樹堿的研究開發(fā)中，合成了數(shù)百個喜樹堿衍生物進行篩選。例如CPT-11，TPT，GG211，DX-8951，NB-506，9-amino-CPT等。其中CPT-11和TPT已經(jīng)上市，其它幾種正處于臨床階段。這些藥物保持了喜樹堿的抗癌活性，還提高了喜樹堿的溶解度，減少了毒副作用。
如上所述，以降低毒性和提高抗癌活性為目標(biāo)進行的喜樹堿結(jié)構(gòu)修飾，國內(nèi)外有關(guān)這方面的研究報道很多，有些新喜樹堿的類似物已經(jīng)申請專利并進入臨床研究階段，但這些研究大多采用小分子官能團對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，從天然產(chǎn)物中尋找活性官能團對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾的報到很少?？紤]到天然產(chǎn)物中存在相當(dāng)一部分具有解毒功能的化合物，以這些化合物作為官能團對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，所得喜樹堿衍生物在體內(nèi)代謝可以考慮能夠降低喜樹堿的毒性。本發(fā)明選用具有解毒功能的天然單體糖類作為活性官能團對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，得到喜樹堿配糖體。在保持喜樹堿原有抗癌活性基礎(chǔ)上，增加藥物在體液中的溶解度，提高生物利用度，而且喜樹堿配糖體大部分可經(jīng)尿排出體外，降低藥物毒性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于采用了具有解毒功能的天然單體糖類為活性官能團，對喜樹堿進行化學(xué)修飾，合成喜樹堿配糖體，提高喜樹堿在癌癥治療中的生物利用度和降低其毒性。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是a選擇活性較高的乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10—羥基喜樹堿的酚羥基進行取代反應(yīng)，生成乙?；矘鋲A配糖體。
b采用硅膠柱層析方法分離純化乙?；矘鋲A配糖體。
c乙酰化喜樹堿配糖體脫去乙?；上矘鋲A配糖體。
d采用制備高效液相層析和溶劑結(jié)晶法得到純喜樹堿配糖體。
本發(fā)明的優(yōu)點是1、本發(fā)明采用具有解毒功能的天然單體糖類化合物對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，合成喜樹堿配糖體，提高喜樹堿在癌癥治療中的生物利用度并且降低其毒性。喜樹堿配糖體有望成為新一代高效低毒的抗癌新藥。
2本發(fā)明的制備工藝路線簡單、反應(yīng)條件溫和、周期短。
具體實施例方式
下面對本發(fā)明的實施例作進一步詳細(xì)描述喜樹堿配糖體的制備方法a選擇活性較高的乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10—羥基喜樹堿的酚羥基進行取代反應(yīng)，生成乙酰化喜樹堿配糖體。
b采用硅膠柱層析方法分離純化乙酰化喜樹堿配糖體。
c乙?；矘鋲A配糖體脫去乙?；上矘鋲A配糖體。
d采用制備高效液相層析和溶劑結(jié)晶法得到純喜樹堿配糖體。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，采用天然單體糖類化合物對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，與10-羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到所選糖的類型的影響，所選擇的乙酰鹵糖包括四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、七-O-乙酰-1-溴-麥芽糖、七-O-乙酰-1-溴-乳糖；所選擇的乙酰鹵糖醛酸酯包括三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10—羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到反應(yīng)所用溶劑的影響，所選擇溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10—羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到所用催化劑的影響，所選擇的催化劑包括氫氧化鉀、氫氧化鈉、氧化銀、高氯酸銀、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銀、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、陽離子交換樹脂。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，硅膠柱層析方法分離純化乙酰化喜樹堿配糖體時，采用的洗脫液是氯仿-甲醇系統(tǒng)。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，乙?；矘鋲A配糖體去乙?；磻?yīng)程度，受到反應(yīng)所用溶劑的影響，所選擇溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，乙酰化喜樹堿配糖體去乙?；磻?yīng)程度，受到去乙?；噭┑挠绊懀x選擇的去乙?；噭┌溲趸c、氫氧化鉀、硫化鈉、甲醇鈉。
所述的喜樹堿配糖體的制備方法，在純化喜樹堿配糖體過程中，采用制備高效液相層析所用的流動相是甲醇-水系統(tǒng)，溶劑結(jié)晶法所選溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷、三氯甲烷。
實施例1喜樹堿葡萄糖甙，向反應(yīng)器中加入300毫升丙酮，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、10.0毫摩爾碳酸鉀，加熱回溜反應(yīng)4小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A葡萄糖甙，收率26.9％。
向反應(yīng)器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩爾乙酰化喜樹堿葡萄糖甙，在室溫攪拌下滴加60％甲醇鈉溶液1.0毫升，攪拌反應(yīng)50分鐘，加入5毫升水，過濾，真空濃縮濾液，用乙醇-乙酸乙酯-氯仿液重結(jié)晶，得到喜樹堿葡萄糖甙，收率92.3％。
實施例2喜樹堿甘露糖甙向反應(yīng)器中加入300毫升甲醇，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、10.0毫摩爾碳酸鈉，回溜反應(yīng)6小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A甘露糖甙，收率21.3％。
向反應(yīng)器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩爾乙?；矘鋲A甘露糖甙，在室溫攪拌下滴加50％甲醇鈉溶液1毫升，攪拌反應(yīng)50分鐘，加入5毫升水，過濾，真空濃縮濾液，用氯仿-甲醇液重結(jié)晶，得到喜樹堿甘露糖甙，收率90.4％。
實施例3喜樹堿半乳糖甙向反應(yīng)器中加入300毫升甲醇，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、10.0毫摩爾碳酸銀，回溜反應(yīng)4小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A半乳糖甙，收率23.0％。
向反應(yīng)器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩爾乙?；矘鋲A半乳糖甙，在室溫攪拌下滴加50％甲醇鈉溶液1.0毫升，攪拌反應(yīng)50分鐘，加入5毫升水，過濾，真空濃縮濾液，用丙酮-氯仿液重結(jié)晶，得到喜樹堿半乳糖甙，收率88.8％。
實施例4喜樹堿麥芽糖甙向反應(yīng)器中加入30毫升氯仿，先后加入3.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、6.0毫摩爾七-O-乙酰-1-溴-麥芽糖，滴加0.1當(dāng)量氫氧化鈉溶液，室溫攪拌2小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A麥芽糖甙，收率34.9％。
向反應(yīng)器中加入5毫升乙醇，然后加入0.06毫摩爾乙?；矘鋲A麥芽糖甙，在室溫攪拌下滴加2N氫氧化鉀溶液3.9毫升，反應(yīng)50分鐘，加入1N鹽酸6毫升，過濾，真空濃縮濾液，用制備高效液相色譜純化，進行甲醇-水梯度洗脫，得到喜樹堿麥芽糖甙，收率96.4％。
實施例5喜樹堿乳糖甙向反應(yīng)器中加入30毫升丙酮，先后加入3.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、6.0毫摩爾七-O-乙酰-1-溴-乳糖，滴加0.1當(dāng)量氫氧化鉀溶液，室溫攪拌2小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A乳糖甙，收率31.4％。
向反應(yīng)器中加入5毫升甲醇，然后加入0.06毫摩爾乙?；矘鋲A乳糖甙，在室溫攪拌下滴加2N氫氧化鉀溶液3.9毫升，反應(yīng)50分鐘，加入1N鹽酸6毫升，過濾，真空濃縮濾液，用制備高效液相色譜純化，進行甲醇-水梯度洗脫，得到喜樹堿乳糖甙，收率91.3％。
實施例6喜樹堿葡萄糖醛酸甙向反應(yīng)器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、適量陽離子交換樹脂，回溜反應(yīng)5小時，反應(yīng)完畢后，水泵真空過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A葡萄糖醛酸甙，收率15.3％。
向反應(yīng)器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩爾乙?；矘鋲A葡萄糖醛酸甙，在室溫攪拌下滴加0.7N氫氧化鈉溶液20毫升，反應(yīng)160分鐘，用1N鹽酸調(diào)PH6，真空濃縮反應(yīng)液，用制備高效液相色譜純化，進行甲醇-水梯度洗脫，得到喜樹堿葡萄糖醛酸甙，收率64.3％。
實施例7喜樹堿甘露糖醛酸甙向反應(yīng)器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、25.0毫摩爾碳酸氫鉀，回溜反應(yīng)6小時，反應(yīng)完畢后，真空水泵過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A甘露糖醛酸甙，收率11.4％。
向反應(yīng)器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩爾乙?；矘鋲A甘露糖醛酸甙，在室溫攪拌下滴加0.7N氫氧化鈉溶液20毫升，反應(yīng)180分鐘，用1N鹽酸調(diào)PH6，真空濃縮反應(yīng)液，用制備高效液相色譜純化，進行甲醇-水梯度洗脫，得到喜樹堿甘露糖醛酸甙，收率62.8％。
實施例8喜樹堿半乳糖甙向反應(yīng)器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩爾10-羥基喜樹堿、32.0毫摩爾三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯、25.0毫摩爾碳酸氫鈉，回溜反應(yīng)6小時，反應(yīng)完畢后，真空水泵過濾，濾液濃縮，采用硅膠柱層析純化，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到乙?；矘鋲A半乳糖醛酸甙，收率9.8％。
向反應(yīng)器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩爾乙酰化喜樹堿半乳糖醛酸甙，在室溫攪拌下滴加0.7N氫氧化鈉溶液1毫升，反應(yīng)180分鐘，用1N鹽酸調(diào)PH6，真空濃縮反應(yīng)液，用制備高效液相色譜純化，進行甲醇-水梯度洗脫，得到喜樹堿半乳糖醛酸甙，收率60.3％。
權(quán)利要求
1喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于采用具有解毒功能的天然單體糖類化合物對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，喜樹堿配糖體的制備過程包括以下幾步a選擇活性較高的乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10-羥基喜樹堿的酚羥基進行取代反應(yīng)，生成乙?；矘鋲A配糖體。b采用硅膠柱層析方法分離純化乙?；矘鋲A配糖體。C乙酰化喜樹堿配糖體脫去乙酰基，生成喜樹堿配糖體。d采用制備高效液相層析和溶劑結(jié)晶法得到純喜樹堿配糖體。
2權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于采用天然單體糖類化合物對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，與10-羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到糖的類型的影響，所選擇的乙酰鹵糖包括四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、七-O-乙酰-1-溴-麥芽糖、七-O-乙酰-1-溴-乳糖；所選擇的乙酰鹵糖醛酸酯包括三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯。
3權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10-羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到反應(yīng)所用溶劑的影響，所選擇溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
4權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于乙酰鹵糖和乙酰鹵糖醛酸酯與10-羥基喜樹堿進行取代反應(yīng)的程度受到所用催化劑的影響，所選擇的催化劑包括氫氧化鉀、氫氧化鈉、氧化銀、高氯酸銀、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銀、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、陽離子交換樹脂。
5權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于硅膠柱層析方法分離純化乙?；矘鋲A配糖體時，采用的洗脫液是氯仿-甲醇系統(tǒng)。
6權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于乙?；矘鋲A配糖體去乙?；磻?yīng)程度，受到反應(yīng)所用溶劑的影響，所選擇溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
7權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于乙?；矘鋲A配糖體去乙?；磻?yīng)程度，受到去乙?；噭┑挠绊?，所選選擇的去乙?；噭┌溲趸c、氫氧化鉀、硫化鈉、甲醇鈉。
8權(quán)利要求1所述的喜樹堿配糖體的制備方法，其特征在于在純化喜樹堿配糖體過程中，采用制備高效液相層析所用的流動相是甲醇-水系統(tǒng)，溶劑結(jié)晶法所選溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷、三氯甲烷。
全文摘要
喜樹堿配糖體的制備方法，本發(fā)明的主要特點是采用具有解毒功能的天然單體糖類化合物對喜樹堿進行結(jié)構(gòu)修飾，合成喜樹堿配糖體，提高喜樹堿在癌癥治療中的生物利用度并且降低其毒性。喜樹堿配糖體的制備過程包括以下幾步a乙酰鹵糖的C
文檔編號A61P35/00GK1500797SQ0214485
公開日2004年6月2日 申請日期2002年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月14日
發(fā)明者祖元剛, 李慶勇, 付玉杰, 張寶友, 楊逢建 申請人:東北林業(yè)大學(xué), 祖元剛