專利名稱：甲硝唑結腸定位緩釋制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗厭氧菌藥物甲硝唑的緩釋制劑，特別是結腸定位緩釋制劑。
背景技術：
甲硝唑為一對大多數厭氧菌具有強大的抗菌作用的抗菌藥物。廣泛應用于感染的治療。目前，國內外已上市的甲硝唑藥物制劑有多種，主要有普通的片劑、膠囊劑、注射液和普通緩釋制劑(美國上市，商品名為Flagyl ER，專利號為WO9520383)。近年來，臨床上有用甲硝唑治療結腸炎的報道，結腸炎是一種多發的難以治愈的疾病，目前主要采用保守療法同時使用抗菌素或抗炎激素。在治療結腸炎應用中，普通甲硝唑口服制劑由于在胃內吸收，難以到達結腸部位，對結腸炎的治療無法取得滿意的效果。
本發明采用結腸定位給藥技術，將甲硝唑制成結腸定位緩釋制劑，使藥物能夠直接作用于病灶部位，解決了臨床應用的難題。
發明內容
根據不同給藥體系的釋藥機理，結腸靶向給藥系統主要可分為三大類A、PH依賴型釋藥系統如5-ASA結腸腸溶片。此類釋藥系統的生物個體差異偏大，研究證明約有90％的靶向定位可靠性。
B、時滯釋藥系統如5-ASA結腸定位給藥時控微丸。藥物在小腸段保留時間通常為3-4h，基于此點設計出時滯型結腸靶向系統，確保藥物在離開胃部3-4h后開始釋放，但由于胃排空時間極不規則，因此用藥個體差異大。
C、菌群觸發釋藥系統利用結腸菌群產生的酶作用于包裹材料或阻釋劑(如瓜爾膠)而引起釋藥，如阿苯達唑結腸片。但甲硝唑不宜制備成此類釋藥方式，因甲硝唑對厭氧菌的強大殺滅作用，使釋放出的甲硝唑殺滅了大量的細菌，由菌而產生的酶便消失了，沒有了這些酶的作用，后續的給藥便無法釋出了。
本發明采用A系統將甲硝唑制成結腸定位緩釋制劑，這種緩釋制劑可以是緩釋片劑或緩釋膠囊劑，其原理是先將藥物制備成在結腸介質中符合緩釋特征的片芯、顆粒或微丸，再外包在胃液、小腸中均不溶的樹脂膜。藥物口服后，在胃和小腸段，由于PH依賴型樹脂的保護，盡管藥物在胃和小腸的運轉時間有較大個體差異，都可保證藥物在胃和小腸中不釋放，從而保證把藥物定量輸送到結腸中；當藥物到達升結腸時，樹脂在1h左右被溶解，此時藥芯開始按緩釋規則釋放藥物。藥物在結腸中的運轉是一個緩慢的過程，其平均結腸運轉時間約20h左右，由于藥物被制成緩釋形式，從而可確保藥物較平穩地輸送到整個結腸系統(升結腸、橫結腸和降結腸)。按此原理制成的甲硝唑結腸靶向緩釋劑，對治療結腸炎的專一性更高，更大的提高了療效，而副作用大大降低。且一日只需給藥一次，生物順應性提高，且用量降低。
本發明的緩釋制劑的主要制備方法有兩種1、先按照常規骨架緩釋片的制備方法，采用阻釋劑與甲硝唑混合后制成緩釋顆粒，壓成骨架緩釋片后，再外包PH依賴型腸溶樹脂；或將緩釋顆粒裝入結腸專用空心膠囊中。
2、先按微丸制備法，將甲硝唑制成微丸，先包一層緩釋衣層，達到符合要求的緩釋效果后，再包一層PH依賴型結腸溶樹脂。
本發明可選用的阻釋劑包括a、纖維素類如羥丙甲纖維素、乙基纖維素、甲基纖維素、醋酸纖維素等。
b、藻酸鹽類如藻酸鈉等。
c、樹脂類如各種聚丙烯酸樹脂，羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯，CAP等。
d、融蝕性輔料如氫化植物油、蜂蠟、石蠟，樹膠，果膠等。
本項目可選用的在胃液、小腸中均不溶的緩(控)釋包衣材料包括HPMCP、CAP、蟲膠、EC、聚丙烯酸樹脂等。
本發明的緩釋制劑，其中的甲硝唑含量為每片50mg-1000mg，其余為緩釋材料、在胃液、小腸中均不溶的材料和藥物可接受的載體，片重在100mg-1500mg，或甲硝唑的含量按重量份計為50-1000，緩釋材料、在胃液、小腸中均不溶的材料和藥物可接受的載體為20-500。
以下是對本發明的緩釋制劑進行初步的釋放度和體內動力學實驗，以證明本發明的緩釋制劑的作用和效果。
實驗例一.甲硝唑結腸定位緩釋片(膠囊)、微丸的釋放度測定
方法按CP2000附錄X C第一法，轉速100轉/min，濃度37±0.5℃，UV法測定樣品在各時間點的吸收度，測定波長為277nm，按C6H9N3O3的吸收系數為377計算溶出量。
測定數據見附表。
其中介質一為人工胃液(0.1mole的鹽酸)。
介質二為人工腸液(PH6.8的磷酸鹽緩沖液)。
介質三為人工結腸液(PH7.8的磷酸鹽緩沖液，CP2000附錄規定)。
表一.甲硝唑結腸定位緩釋劑處方表 (單位g)
表二.釋放度測定數據表(％) 由上表釋放度數據可看出，本發明所及產品滿足了結腸定位緩釋的要求，其中片劑和微丸更優，而膠囊由于購買的結腸專用膠囊殼的原因，在PH6.8時有少量數物釋出，但90％以上的藥物也達到了結腸定位緩釋的目的。實驗例二.甲硝唑定位結腸緩釋片的藥代動力學特征1.藥物口服后體內分布情況1.1方法1.1.1給藥及測定樣品制備將藥物經口服給予家兔20mg/kg，在給藥后不同時間1，3，4，6，12，16共6個時間點分別處死受試家兔，取胃、小腸、盲腸和升結腸、橫結腸、降結腸段，用蒸餾水洗出各段的內容物進行勻漿后，用蒸餾水定容到一定體積，取其中一定比例離心，收集上清液，減壓濃縮至干后，用流動相溶解，用0.5um的微孔濾膜過濾，濾液用HPLC法測定，計算出各部位甲硝唑的分布總量。1.1.2色譜條件ODS C18柱(5μ 4.6mm×25cm)；流動相為甲醇∶水＝40∶60；流速1.0ml/min，檢測器波長315nm；進樣體積20ul。每批樣品的測定中，均需要同時用空白血清做3個濃度(2.3、5.2、8.1)的標準曲線。樣品濃度(y)計算是根據本批標準曲線的a，b值，將樣品色譜峰面積(x)代入回歸方程y＝bx+a計算而得。1.2結果表三.甲硝唑定位緩釋片(片三)口服給藥后胃腸道各段分布情況(mg)時間(h)胃小腸 盲腸升結腸 橫結腸 降結腸1 - - - - - -3 - - - - - -4 - - 0.32±0.12 0.12±.05 - -6 - - 0.54±0.08 5.24±1.17 1.15±0.32 -12 - - 0.10±0.06 3.17±1.04 6.34±2.17 0.68±0.1216 - - - 1.32±0.25 2.17±1.06 4.87±1.87表四.甲硝唑定位緩釋微丸口服給藥后胃腸道各段分布情況(mg)時間(h)胃小腸盲腸升結腸 橫結腸 降結腸1 - - - - - -3 - - - - - -4 - - 0.41±0.16 0.23±0.11 - -6 -- 0.67±0.08 6.27±2.45 2.14±1.06 -12-- 0.41±0.06 3.62±1.71 8.17±3.42 1.52±0.7116-- - 1.22±1.07 3.25±2.12 5.97±2.66表五.甲硝唑普通片口服給藥后胃腸道各段分布情況(mg)時間(h)胃 小腸盲腸升結腸 橫結腸 降結腸1 13.1±2.65 5.62±1.32 - - - -3 8.03±2.44 4.87±0.21 1.48±0.31 - - -4 3.71±0.72 3.25±0.43 0.71±0.21 0.64±0.18 - -6 2.19±0.36 1.79±0.83 0.54±0.11 1.27±0.29 0.36±0.08 -12 1.75±0.27 0.87±0.16 0.21±0.33 0.49±0.15 - -16 0.46±0.15 0.69±0.21 0.13±0.04 0.38±0.09 - -2.藥物口服后的藥代動力學參數2.1方法2.1.1給藥及采樣將藥物經口服給予家兔20mg/kg，在給藥后不同時間采集血液，分離制成血清，取血清0.2ml于5ml離心管中，加入水、磷酸鹽緩沖液和5％異丙醇的氯仿溶液，于混合器上混合萃取5分鐘，離心后吸取有機層，用0.5um有機膜過濾，濾出液滴入尖底試管中，水浴內通空氣吹干，殘渣以0.5ml流動相溶解，用HPLC進行定量分析。2.1.2色譜條件ODS C18柱(5μ 4.6mm×25cm)；流動相為甲醇∶水＝40∶60；流速1.0ml/min，檢測器波長315nm；進樣體積20ul。每批樣品的測定中，均需要同時用空白血清做3個濃度(2.3、5.2、8.1)的標準曲線。樣品濃度(y)計算是根據本批標準曲線的a，b值，將樣品色譜峰面積(x)代入回歸方程y＝bx
+a計算而得。
2.2結果甲硝唑結腸定位緩釋片和微丸以及普通片的藥代動力學參數測定結果如下參數 片三 微丸 普通片Lag time(h) 6.1±1.24 5.8±1.06 0.5±0.21Ka0.63±0.220.71±0.181.62±0.36Ke0.61±0.140.65±0.170.64±0.11Tmax10.34±3.53 8.26±2.190.81 ±0.28Cmax(ug/ml) 0.48±0.160.59±0.1114.3±3.46AUC(mg·h·L-1) 3.73±1.124.52±1.7437.6±10.28從以上結果來看，用結腸定位的緩釋系統制成的甲硝唑片劑和微丸劑可以使藥物釋放到結腸各部位，并且使結腸各段均有一段藥物濃度較高的時間，從而使藥物作用面更廣，無論哪段結腸發生炎癥均可得到有效的治療。同時由于藥物在胃腸道釋放較少，使藥物被血液循環吸收的量較少，避免了不必要的不良反應。因為有文獻報道(南通醫學院學報1991，11(2)172)甲硝唑可以通過血腦屏障進入腦部引起腦炎綜合癥等精神神經毒性反應。普通片口服后主要在胃和小腸吸收，藥物到達結腸的比例較小，只有通過血液循環輸送，因此結腸炎發病部位藥物濃度不夠，不能達到有效的治療目的。
通過藥代動力學參數來看，藥物進入血液循環速度減慢，血峰濃度低，因此對避免全身性副作用有利，而普通片進入血液循環較快，峰濃度高，生物利用度高，會產生一定的副作用。
實施例1甲硝唑緩釋片芯的制備處方甲硝唑600g 乙基纖維素150g羥丙甲纖維素(4000cps)200g 磷酸氫鈣140g糊精80g 微粉硅膠10g
操作原輔料先過80目篩(必要時粉碎)，按處方量稱取甲硝唑、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、磷酸氫鈣和糊精，于混合機中混合10分鐘，加入70％的乙醇適量，制成合適軟材后，用20目篩制粒，濕粒50-60℃熱風干燥后，加入SiO2混勻，18目篩整粒。
將此顆粒用壓片機壓成規格為每片含甲硝唑400mg(200mg)的片芯。
實施例2甲硝唑緩釋片芯的制備二處方甲硝唑600g 乙基纖維素100g羥丙甲纖維素(4000cps)150g 磷酸氫鈣80g糊精260g 微粉硅膠10g操作同例1完全相同。
實施例3甲硝唑緩釋片芯的制備三處方甲硝唑600g 基纖維素90g羥丙甲纖維素(4000cps)110g 磷酸氫鈣90g微粉硅膠10g操作同例相同，壓片規格為每片含甲硝唑400mg/片和200mg/片的片芯。
實施例4甲硝唑緩釋片芯的制備四處方甲硝唑600g 藻酸鈉130g磷酸氫鈣100g 糊精60g微粉硅膠10g操作及壓片，與例3相同。
實施例5甲硝唑緩釋片芯的制備五處方甲硝唑600g 聚丙烯酸樹脂(II，III)粉末80g磷酸氫鈣100g 糊精110g微粉硅膠10g操作壓片，同例4。
實施例6甲硝唑緩釋片的制備六處方甲硝唑600g 氫化蓖麻油180g微粉硅膠10g 硬脂酸鎂10g操作將氫化蓖麻油于水浴上加熱使熔化完全，保溫下加入已粉碎過80目篩的甲硝唑，保溫下攪拌混合3～5分鐘，移去加熱的水浴，室溫下邊攪拌邊冷卻，冷至常溫后過20目篩，若有不能通過20目篩的大粒，則粉碎使完全通過；加入微粉硅膠和硬脂酸鎂后充分混勻。
壓片壓成規格為每片含甲硝唑為200mg和400mg的片芯。
實施例7甲硝唑緩釋微丸的制備將3000g甲硝唑、450g蔗糖、300g糊精粉碎后過120目篩，混合均勻。
取混合粉500g置包衣造粒機(BZJ-360M，北京天民公司)中，用3％PVP乙醇液制備40-50目母粒，熱風溫度40℃，粘合劑噴液速度5ml/分鐘。母粒于50-60℃干燥后過篩。
將上制40-50目母粒置包衣造粒機中，邊加混合粉邊噴粘合劑，直到制成20-24目的微丸，干燥后過篩。
將上制20-40目微丸稱重后置高效包衣機中，按薄膜包衣法包緩釋衣層，使增重(按20-24目丸芯計)達到10-15％即可。所制微丸40℃熱風干燥4~6h后，裝入空芯膠囊中即得結腸定位緩釋微丸膠囊。
緩釋包衣液將國產聚丙烯酸II號樹脂和III號樹脂按1∶1比例混合，用95％乙醇配成5％(w/v)的濃度，每1000ml包衣液加入2ml PEG 400作為致孔劑，2ml鄰苯二甲酸二丁酯作為增塑劑即可。
實施例8甲硝唑結腸定位緩釋片的制備將例1-例6所制片芯置高效包衣機中，按薄膜包衣法，包裹PH依賴型樹脂，熱風40℃，噴液速度為5ml/分鐘，轉速40轉/分，包衣增重(片芯計)3～4％)即可得到與實施例1-6對應的結腸定位緩釋片。
結腸溶PH依賴型樹脂包衣液的配制稱取50g聚丙烯酸樹脂(Eudragit S-100)，倒入1000ml 95％的乙醇中，再加3ml鄰苯二甲酸二丁酯作為增塑劑，攪拌使全溶后，備用。
實施例9甲硝唑結腸定位緩釋膠囊的制備將例1-例6所制緩釋顆粒定量裝入結腸用空芯膠囊中，規格200mg/粒，而得到與實施例1-6對應的結腸定位緩釋膠囊。
權利要求
1.一種甲硝唑緩釋組合物，其特征在于，該組合物由甲硝唑、緩釋材料、在胃液、小腸中均不溶的材料以及藥物可接受的載體組成，其中甲硝唑的重量份為50-1000，緩釋材料、在胃液、小腸中均不溶的材料和藥物可接受的載體合計重量份為20-500。
2.權利要求1的組合物，其中的緩釋材料為a、纖維素類如羥丙甲纖維素、乙基纖維素、甲基纖維素、醋酸纖維素；b、藻酸鹽類如藻酸鈉；c、樹脂類如各種聚丙烯酸樹脂，羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯，CAP；d、融蝕性輔料如氫化植物油、降蠟、石蠟，樹膠，果膠。
3.權利要求1的組合物，其中在胃液、小腸中均不溶的材料為HPMCP、CAP、蟲膠、EC、聚丙烯酸樹脂。
4.權利要求1的組合物為片劑或膠囊。
5.權利要求2的組合物，其中的組合物中所用緩釋材料可以是其中一種，或一種以上的組合。
6.權利要求3的組合物，其中的組合物中所用在胃液、小腸中均不溶的材料可以是其中一種，或一種以上的組合。
7.權利要求1的組合物，其中的藥物可接受的載體包括粘合劑、稀釋劑、穩定劑、潤滑劑、潤濕劑，其中的粘合劑是聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素、淀粉漿、糖漿、糊精、膠漿，稀釋劑是乳糖、淀粉、蔗糖、預膠化淀粉、糊精、甘露醇、山梨醇、硫酸鈣、微晶纖維素，助流劑是微粉硅膠、滑石粉，潤滑劑是硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇、十二烷基硫酸鎂、十二烷基硫酸鈉，潤濕劑是乙醇、乙醇水溶液、水。
8.權利要求1的組合物，其中制造1500個含400mg甲硝唑或3000個200mg甲硝唑片劑的處方組成為片芯處方甲硝唑600g乙基纖維素150g羥丙甲纖維素(4000cps)200g磷酸氫鈣140g糊精80g微粉硅膠10g包衣處方聚丙烯酸樹脂(Eudragit S-100)50g95％的乙醇1000ml鄰苯二甲酸二丁酯3ml。
9.權利要求1的組合物，其特征在于，制造7500個400mg甲硝唑緩釋微丸的處方組成如下3000g甲硝唑、450g蔗糖、300g糊精、3％PVP乙醇液適量、1∶1的聚丙烯酸II號樹脂和III號樹脂用95％乙醇配成5％(w/v)包衣溶液適量、其中每1000ml包衣液加入2ml PEG 400作為致孔劑，2ml鄰苯二甲酸二丁酯作為增塑劑。
10.權利要求9的組合物的制備方法。其特征在于將3000g甲硝唑、450g蔗糖、300g糊精粉碎后過120目篩，混合均勻，取混合粉500g置包衣造粒機中，用3％PVP乙醇液制備40-50目母粒，熱風溫度40℃，粘合劑噴液速度5ml/分鐘，母粒于50-60℃干燥后過篩，將以上制造的40-50目母粒置包衣造粒機中，邊加混合粉邊噴粘合劑，直到制成20-24目的微丸，干燥后過篩，將以上制造20-40目微丸稱重后置高效包衣機中，按薄膜包衣法包緩釋衣層，使增重(按20-24目丸芯計)達到10-15％，所制微丸40℃熱風干燥4-6h后，裝入空芯膠囊中。
全文摘要
本發明涉及一種抗厭氧菌藥物甲硝唑的緩釋制劑，特別是結腸定位緩釋制劑，本發明的緩釋制劑采用結腸定位給藥技術，使藥物能夠直接在病灶部位緩慢釋放。
文檔編號A61K9/52GK1398587SQ0212554
公開日2003年2月26日 申請日期2002年7月19日 優先權日2002年7月19日
發明者柏俊, 孫備, 呂凌, 費勤志 申請人:安徽省藥物研究所