新的石榴葉提取物及其醫藥用途的制作方法

專利名稱：新的石榴葉提取物及其醫藥用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的石榴葉提取物及其醫藥用途。更具體講，本發明涉及石榴葉的有機溶劑或有機溶劑與水混合物的提取物，其中該提取物中含有至少50重量％的鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。本發明還涉及所述石榴葉提取物在預防和/或治療與高血脂有關疾病或癥狀中的用途。
背景技術：
石榴葉為石榴的葉。近年來對石榴葉的研究有廣泛報道，具體講，在《光明中醫》，2000，15(2)，27-9；《資源開發與市場，1999，15(4)，208-209，及《醫藥與保健》，1998，(4)，50中報道石榴葉與生姜配伍內服可治療急性胃腸炎、外用清熱消腫治療皮膚紅腫潰爛、石榴葉制成保健茶有助于眼睛及胃的保健，促進新陳代謝；在《中藥藥理與臨床》，1998，14(1)35-36，《時珍國醫國藥》，1998，9(4)，327及《山東中醫藥大學學報》，1999，23(5)，380-1中報道石榴葉水浸劑顯著提高胃蛋白酶活性，增強膽汁分泌和小腸運動，可降低血清TC，TG，升高HDL，體外實驗能抑制氧自由基的產生，靜脈注射能顯著提高大鼠腦膜血流量。但石榴葉水浸劑在調節血脂的作用強度上達不到有效的預防和/或治療目的。
發明目的本發明的目的在于尋找并開發能有效預防和/或調節血脂的物質。
本發明人經研究現已發現在石榴葉中通過用有機溶劑或有機溶劑與水的混溶劑提取得到的含鞣質提取物出人意料地顯示出良好的調節血脂作用。其中該石榴葉提取物含至少50重量％鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。
因此，本發明第一方面涉及石榴葉提取物，其含有至少50重量％的鞣質酸和/或至少5.6重量％鞣花酸。
本發明再一方面涉及石榴葉提取物，其特征在于該提取物是通過用有機溶劑或有機溶劑與水的混合物提取石榴葉得到的。
本發明還涉及藥物組合物，其包括石榴葉提取物及藥用載體或賦形劑，其中石榴葉提取物含至少50重量％鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。
本發明還涉及用于預防和/或治療血脂升高或與血脂升高有關疾病或癥狀的產品，其包括石榴葉提取物及藥用載體或賦形劑，其中石榴葉提取物含至少50重量％鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。
本發明還涉及石榴葉提取物在制備用于預防和/或治療與血脂升高有關疾病或癥狀的產品中用途。
本發明還涉及預防和/或治療與血脂升高有關疾病和/或癥狀或有血脂升高風險的患者的方法，其包括給予需要的宿主預防和/或治療有效量的石榴葉提取物，其中該石榴葉提取物含至少50重量％鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。
本發明進一步涉及鞣花酸在制備用于預防和/或治療與血脂升高有關疾病或癥狀的產品中的用途。
本發明還涉及用于預防和/或治療血脂升高或與血脂升高疾病或癥狀的產品，其包括一定量的鞣花酸和適宜的載體或賦形劑。
發明詳述本發明中所用術語“有機溶劑”是指直鏈或支鏈的低級C1-4醇如甲醇，乙醇，異丙醇，丙醇或丁醇；C1-4酯如甲酸甲酯，乙酸甲酯或乙酸乙酯；己烷；或丙酮等。
本發明中所用術語“調節血酯”是指調節與血脂有關的指標如總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白的任意一項或二項或三項或所有四項。
本發明中所用術語“宿主”是指哺乳動物，如人類。
根據本發明，本發明的石榴葉提取物含有至少5.6重量％鞣花酸。
根據本發明，本發明的石榴葉提取物可如下制備1)將粉碎的石榴葉用有機溶劑與水的混溶劑如75％乙醇在加熱或回流下提取，2)濃縮1)中提取液至浸膏；
3)加水至浸膏中并在冷卻下放置24小時；4)將3)中放置后得到的濾液通過大孔吸附樹脂，然后用水及有機溶劑與水混溶劑如95％乙醇洗脫；5)減壓蒸發(80℃)洗脫液，真空干燥得呈膏狀的石榴葉提取物。
根據本發明，本發明的石榴葉提取物優選含有50-90重量％的鞣質，更優選53-70重量％鞣質。
根據本發明，本發明石榴葉提取物中鞣質含量的測定可采用中華人民共和國藥典2000年版附錄XB中所記載的方法測定。
根據本發明，本發明的石榴葉提取物可單獨給藥或以其它適宜的給藥途徑給藥。舉例講，本發明的石榴葉提取物可通過口服或非腸道途徑如皮下，肌內，靜脈等給藥。口服給藥的劑型包括片劑，膠囊，溶液，混懸液等；非腸道給藥的劑型包括注射劑，凍干粉針劑或滴注等。
下面的實施例是對本發明的進一步詳細描述，但其不意味著對本發明任何限制。
實施例1石榴葉提取物的制備取4.3公斤石榴葉水浸一液，晾干后炒20分鐘，粉碎炒后的石榴葉，然后加入12-16倍量的70％乙醇，回流提取3次，每次1小時。濃縮合并的提取液到比重為1.12-1.13(20℃)浸膏，加水至濃度為0.5克生藥(指石榴葉)/ml，所得混懸液在4℃環境中放置24小時，過濾，濾液通過D101樹脂柱(石榴葉的總重量與樹脂的體積比為40-44mg/ml樹脂)，先用水洗脫至柱體積的2倍，再用95％乙醇洗脫至柱體積的2倍，合并水洗脫液和95％乙醇洗脫液，減壓濃縮，然后真空干燥得干燥的浸膏狀320克石榴葉提取物。用中國藥典2000年版附錄XB記錄的皮粉法測得所得石榴葉提取物中總鞣質含量為55％，用中國藥典附錄VID中記載的高效液相色譜法測得石榴葉提取物中鞣花酸含量為6.3％。
實施例2本發明實施例1的石榴葉提取物(今后簡稱提取物A)在家兔模型上對血脂升高的預防材料與方法試驗動物雄性日本大耳白兔。體重(2.21±0.2)kg(預防作用)。(1.81±0.14)kg(調脂作用)。購自中國醫學科學院阜外醫院動物科。合格證號京動管字第003號。試劑與受試物提取物A，0.32g/粒。用時以蒸餾水配制成所需濃度。總膽固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)試劑盒，購自北京中生生物高技術分司。批號20010401。家兔高脂飼料，購自中國醫學科學院實驗動物研究所。測試儀器7060型(HITACHI)全自動生化分析儀。試驗方法取家兔用正常飼料喂養觀察3天，耳緣靜脈采血，分離血清，測TC，TG。根據TC和TG均勻分為4組，每組6只。然后飼以高脂料7天，同時灌胃口服不同劑量的提取物A。于藥后第7，14，21天耳緣靜脈采血，分離血清，測TC，TG，HDL和LDL。并計算VLDL[＝TC-LDL]和TC/HDL。觀察提取物A對血脂的影響。提取物A不同劑量分別為75mg/kg及37.5mg/kg。對照組給等體積蒸餾水。結果見表1至表6。由表1至6中數據可看到本發明提取物A對家兔的血脂升高有顯著預防作用。
實施例3本發明提取物A在家兔血脂升高模型上對血脂的影響試驗動物，試劑與受試物及測試儀器同實施例1。
實驗方法取家兔用正常飼料喂養觀察3天，分別給予高脂料7天，耳緣靜脈采血，分離血清，測TC，TG。根據TC和TG均勻分為6組，每組6只(試驗分兩次進行，每次每組3只)。然后繼續飼以高脂料，同時灌胃口服不同劑量的提取物A。于提取物A后第14天耳緣靜脈采血，分離血清，測TC，TG，HDL和LDL。并計算VLDL[＝TC-LDL]和TC/HDL。觀察提取物A對血脂的影響。提取物A不同劑量為75mg/kg，37.5mg/kg及18.8mg/kg。對照組給等體積蒸餾水。給予提取物A體積2mL/kg。數據處理所得數據由Excel軟件處理，組間t檢驗。結果見表7和8。由表7和8中數據可看到本發明提取物A對家兔的高血脂有顯著的降低作用。結果表1 給藥后1周家兔TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物 劑量 TC TG LDLmg/kg mg/dL mmoL/L mg/dL對照組 128.41±49.56 1.14±0.74 67.11±22.29提取物A 75 74.99±32.72* 1.27±1.12 35.17±22.29*與對照組相比，*P＜0.05。n＝6表2 給藥后1周家兔HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量HDL VLDLTC/HDLmg/kg mg/dL mg/dL對照組 8.13±3.81 70.33±61.2918.45±10.89TPM-16 75 15.33±5.67*36.88±18.255.25±2.15*TPM-16 37.513.15±7.64 68.52±30.0315.26±5.02與對照組相比，*P＜0.05。n＝6表3 給藥后2周家兔TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物 劑量TC TG LDLmg/kg mg/dL mmoL/L mg/dL對照組 382.89±278.19 1.47±0.78 290.26±251.24TPM-16 75 106.65±44.73* 0.53±0.28* 54.52±17.88*TPM-16 37.5212.73±150.38 0.83±0.59 166.84±161.84與對照組相比，*P＜0.05.n＝6表4 給藥后2周家兔HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量HDL VLDL TC/HDLmg/kg mg/dL mg/dL對照組 13.77±6.36 77.04±34.35 36.73±28.72TPM-16 75 18.84±10.8738.36±33.85*6.59±3.17*TPM-16 37.517.46±9.24 45.10±21.47*14.32±12.04與對照組相比，*P＜0.05。n＝6表5 給藥后3周家兔TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物 劑量 TC TG LDLmg/k mg/dL mmoL/L mg/dL對照組470.39±312.93 1.29±0.77 350.64±248.38TPM-16 75 111.77±70.66* 0.51±0.41* 60.74±44.08*TPM-16 37.5 370.56±263.27 0.60±0.35* 204.52±142.59與對照組相比，*P＜0.05。n＝6表6 給藥后3周家兔HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量HDL VLDL TC/HDLmg/kg mg/dLmg/dL對照組 16.44±8.71 106.76±63.97 30.83±18.02TPM-16 75 23.52±11.93 34.59±19.62* 5.18±3.22**TPM-16637.521.61±5.62 94.44±71.48 18.18±14.70與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝6表7 給提取物A后2周家兔TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物 劑量TCTGLDLmg/kg mg/dL mmoL/Lmg/dL對照組 494.7±146.0 1.536±1.063 243.63±141.15提取物A75 314.21±90.09*1.541±1.07 104.64±39.88*提取物A37.5330.08±106.67* 1.507±0.989 168.58±107.98提取物A18.8431.45±151.7 1.688±1.152 135.43±55.83*與對照組相比，P＜0.05。n＝6表8 給提取物A后2周家兔HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量HDL VLDL TC/HDLmg/kg mg/dL mg/dL對照組 46.76±23.64 251±140.113.13±8.76提取物A75 93.61±33.59* 209.6±58.82 3.962±2.574*提取物A37.578.05±24.82* 161.5±112.3 4.766±2.694*提取物A18.868.8±32.57 296.0±115.6 8.023±4.90與對照組相比，*P＜0.05。n＝6實施例4本發明提取物A在大鼠模型上對大鼠血脂升高的預防作用材料與方法實驗動物。雄性Wistar大鼠，非近交系封閉群。體重(170.23±14.89)g(預防實驗)，(205.19±16.09)g(調脂試驗)。購自中國預防醫科院微生物流行病研究所。合格證號京動管字99(038)號。受試物與試劑。TPM-16膠囊。來源規格及批號同前。生化試劑來源及批號生產廠家同實施例1記載。測試儀器HITACHI7060全自動生化分析儀。試驗方法
取大鼠隨機分為7組，每組10只。正常飼料喂養觀察5天，第6天起給予高脂飼料10天，同時給不同劑量的提取物A。第10天給提取物A后1小時，眼眶靜脈叢采血，分離血清，測TC，TG，HDL和LDL。并計算VLDL[＝TC-LDL]和TC/HDL。提取物A不同劑量為75mg/kg及37.5mg/kg。模型對照組給等體積蒸餾水。正常對照組給普通飼料，并給等體積蒸餾水。結果見表9和表10，由表9和表10中數據可看到本發明提取物A對大鼠血脂升高有明顯預防作用。
實施例5本發明提取物A在大鼠高血脂模型上對大鼠高血脂的影響試驗動物、試劑與受試物及測試儀器用實施例4。
試驗方法取大鼠共70只，隨機分為7組，每組10只。給高脂料2周，第15天眼眶靜脈叢采血，分離血清，測TC，TG。根據TC和TG做組間均勻調整。同時給不同劑量的提取物A。分別于給藥后第7天和第14天眼眶靜脈叢采血，分離血清，測TC，TG，HDL和LDL。并計算VLDL[＝TC-LDL]和TC/HDL。提取物A劑量為150mg/kg及75mg/kg。模型對照組給等體積蒸餾水。正常對照組給普通飼料，并給等體積蒸餾水。給藥體積1mL/kg。給藥途徑口服灌胃。數據處理所得數據由Excel軟件處理，組間t檢驗。結果見表11-14。由表11-14中數據可見本發明提取物A為對大鼠的高血脂有明顯控制作用。表9 給提取物A后第10天大鼠TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物劑量 TC TG LDLmg/kg mg/dLmmoL/L mg/dL正常組 9107.27±17.91** 0.909±0.257 20.48±14.94*模型組 10 211.51±40.860.713±0.170 63.24±18.92提取物A 1075 168.33±22.35** 0.595±0.191*48.19±16.55*提取物A 1037.5 179.14±27.37* 0.928±0.154 49.31±16.83*與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。表10 給藥后第10天大鼠HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物劑量HDL VLDLTC/HDLmg/kg mg/dLmg/dL正常組 9 50.69±16.16 86.69±10.93** 2.778±0.364**對照組 1038.95±6.82 145.12±50.69 4.664±1.093提取物A 1075 44.15±9.22 113.9±17.65* 3.555±0.818*提取物A 1037.547.23±10.63 131.82±15.65 3.725±0.620*與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。表11 給藥后1周大鼠TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物劑量TC TG LDLmg/kg mg/dLmmoL/L mg/dL模型組179.83±32.851.14±0.591 87.53±32.16TPM-16150 171.55±18.511.217±0.66084.52±21.59TPM-1675 150.94±9.78*0.791±0.28291.38±26.35正常組124.64±6.28** 0.705±0.45841.29±20.54**與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝10表12 給藥后1周大鼠HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量 HDL VLDLTC/HDLmg/kgmg/dLmg/dL對照組78.91±56.62 92.3±32.97 3.405±1.069TPM-16 150 61.97±28.39 87.03±31.713.290±1.408TPM-16 75 79.21±25.24*59.56±25.782.179±1.018*正常組61.13±9.01 83.34±22.532.085±0.367**與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝10表13 給藥后2周大鼠TC，TG，LDL變化(x±s)藥 物 劑量 TCTG LDLmg/kgmg/dL mmoL/L mg/dL模型組 177.64±23.26 2.339±0.91864.17±12.56TPM-16 150 155.72±20.61*1.337±0.857* 86.08±34.74*TPM-16 75 156.66±20.61*1.063±0.482* 92.15±20.05**正常組 122.26±10.31** 1.262±0.602* 60.53±13.35與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝10表14 給藥后2周大鼠HDL，VLDL，TC/HDL變化(x±s)藥 物 劑量 HDL VLDLTC/HDLmg/kg mg/dL mg/dL模型組43.29±12.48 113.47±23.25 4.475±1.752TPM-16 15051.11±21.99 69.64±42.47* 3.139±0.758*TPM-16 75 50.07±11.93 64.50±14.37** 3.285±0.871正常組52.45±17.31 61.73±9.02** 2.611±1.016**與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝10
權利要求
1.石榴葉提取物，其含有至少50重量％的鞣質和/或至少5.6重量％鞣花酸。
2.有機溶劑或有機溶劑與水混合物的石榴葉提取物，其含有至少50重量％鞣質。
3.權利要求1或2的提取物，其中所述石榴葉提取物含50-90重量％鞣質。
4.權利要求1或2或3的提取物，其中所述石榴葉提取物含53-70重量％鞣質。
5.權利要求1-4任一項的提取物，其中所述石榴葉提取物含至少5.6重量％鞣花酸。
6.權利要求2的提取物，其中所述有機溶劑選自直鏈或支鏈的低級C1-C4醇、C1-4酯，己烷或丙酮。
7.權利要求6的提取物，其中C1-C4醇為乙醇。
8.藥物組合物，其包括權利要求1-7任一項所要求的石榴葉提取物及藥用載體。
9.權利要求1-7任一項要求的石榴葉提取物在制備用于預防和/或降低哺乳動物血脂升高的產品中用途。
10.鞣花酸在制備用于預防和/或治療血脂升高或與血脂升高有關疾病或癥狀的產品中用途。
全文摘要
本發明涉及新的石榴葉提取物及其醫藥用途。更具體講，本發明涉及石榴葉的有機溶劑或有機溶劑與水混合物的提取物，其中該提取物中含有至少50重量％先鞣質或至少5.6重量％鞣花酸，本發明還涉及所述石榴葉提取物在預防和/或治療與高血脂有關疾病或癥狀中的用途。
文檔編號A61P3/06GK1465366SQ0212245
公開日2004年1月7日 申請日期2002年6月4日 優先權日2002年6月4日
發明者邢東明, 洪孟學 申請人:養生堂有限公司