一種從白芷中提取的香豆素類有效成份在制備治療高血壓藥物的應用及其提取方法

專利名稱：一種從白芷中提取的香豆素類有效成份在制備治療高血壓藥物的應用及其提取方法
技術領域：
本發明屬于一種從白芷中提取的香豆素類有效部位在制備治療高血壓藥物的應用及其提取方法。
白芷為傘形科植物，白芷Angelica clahurica(Fisch ex Hoffm.)Benth.et Hook.f或抗白芷的干燥根。有報道白芷中主要含揮發油成分、香豆素類化合物和微量元素等。1977年版《中藥大辭典》中報道白芷中含白當歸素(Byak-angelicin)、白當歸醚(Byak-angelicol)，氧化前胡素(Oxpeucedanine)、歐前胡素乙(Imperatorin)、異歐前胡素乙(Isoimperatorin)、珊瑚菜素(phellopterin)、花椒毒素(Xanthotoxin)、白芷毒素(Angelicotoxin)、東莨菪素(Scopoletin)、異白當歸腦(Isobyakangelicol或Anhydrobyakangelicin)和新白當歸腦(Neobyakangelicol)、別異前胡屬乙(Alloisoimperatorin)、5-甲基-8-羥基補骨脂素(5-Methyl-8-hydroxypsoralen)、7-去甲基軟木花椒素(7-demethylsuberosin)、5-(2-羥基-3-甲氧基-3-甲基丁氧基)補骨脂素[5-(2-Hydroxy-3-methoxy-3-methylbutoxy)psoralen]、叔-0-甲基白當昆素(Tert-omethyl byakangelicin)、仲-o-乙酰基白當歸素(Sec-o-acetylbyakangeliein)、8-羥左右-7-異戊-2-烯基香豆精(8-Hydroxy-7-isopent-2-ene-coumarins)、Knidlin、Cedrelopsin，Sen-byakangelicol。此外還有胡蘿卜甙、香柑內酯、氧化前胡素，水合氧化前胡素；另外白芷和杭白芷中含有無機元素Ca、Cu、Fe、Zn、Mn、Ni、Mg、Co、Cr、Mo、Na、P等，其中以Na、Mg、Fe、Ca、P含量較高。《中國藥典》2000年版中記載白芷性溫，味辛，歸胃，大腸，肺經。具有散風除濕，通竅止痛，消腫排膿的功效。用于感冒頭痛，眉棱骨痛，鼻塞，鼻淵，牙痛，白帶，瘡瘍腫痛等病癥。
本發明的內容可以簡述為提供從中藥白芷中提香豆素類有效成份的提取方法和利用提取香豆素類有效成份在制備高血壓藥物的應用。提取的過程為取白芷藥材飲片，粉碎，過篩，置于萃取釜中，加溫裝置正常工作后，打開壓縮泵加壓到20～35MP，溫度40～50℃，加攜帶劑，以40～50kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力為5～10MP，溫度為30～50℃，提取3h后，分取提取物，揮干攜帶劑，得到白芷的超臨界香豆素類有效部位提取物。
作為優選的提取方式可以為取白芷藥材飲片，粉碎，過20目篩，稱取藥粉2kg，置5L萃取釜中，待制冷裝置與萃取釜和分離釜，加溫裝置正常工作后，打開壓縮泵加壓到30MP，溫度30℃，加攜帶劑100ml，以45kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力和溫度分別為5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，揮干攜帶劑，得白芷的超臨界總有效部位提取物。
將所提取的中藥白芷有效部位進行進一步的分析，有效成份包括歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脫水比克白芷素、別歐前胡素等中的任何一種或數種的組合。
所述的通過提取的白芷香豆素類有效部位是用于制備調節和治療高血壓疾病藥物的用途。
所述的治療高血壓疾病藥物的應用是特別在于治療原發性和繼發性高血壓病的舒張壓和收縮壓疾病藥物的應用。
所提取的中藥白芷香豆素類有效部位及成分可以單獨或與其他中藥提取物或有效部位或有效成分的組合使用，用于制備對高血壓及其并發癥的預防和治療的藥物。
所述的其他中藥提取物可以優選山楂提取物、川芎提取物、葛根提取物、當歸提取物、三七提取物和丹參提取物的任何一種或多種的組合。
白芷香豆類素有效部位中含有與鈣通道阻滯劑維拉帕米類似作用的活性成分。白芷香豆素類有效部位可使受體調控性鈣通道具有較強的非競爭性抑制作用；對主動脈條收縮有明顯抑制作用表明其對電壓調控性鈣通道有抑制作用。白芷有效部位能起到降低動脈血管阻力的作用。對自發性高血壓有明顯的慢性降低作用，對腎性高血壓有明顯的急性降低作用。


圖1是白芷有效部位的HPLC色譜圖。
圖2是白芷有效部位(a)、維拉帕米(b)和異歐前胡素(c)在血管細胞膜色譜柱篩選色譜圖。
圖3是白芷有效部位對NE引起的家兔離體主動脈條理收縮作用實驗的收縮率的量效曲線。
圖4是白芷有效部位對SHR收縮壓慢性降壓作用血壓曲線。
圖5是白芷有效部位對SHR舒張壓慢性降壓作用血壓曲線。
色譜篩選條件以兔主動脈細胞膜固定相裝柱(50mm×2mm，I.D.)；流動相50mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)；流速0.5ml/min；檢測波長236nm；柱溫37℃。
色譜分析條件 色譜柱LiChrosorb ODS C18(150×4.6mm，5μm)；流動相甲醇-水(65∶35)；流速1ml/min；檢測波長302nm。
有效部位的超臨界萃取制備取白芷藥材飲片，粉碎，過20目篩，稱取藥粉450g，置1L萃取釜中，待制冷裝置與萃取釜和分離釜，加溫裝置正常工作后，打開壓縮泵加壓到30MP，溫度30℃，加攜帶劑100ml，以45kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力和溫度分別為5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，揮干攜帶劑，得白芷的超臨界總有效部位提取物，置于冰箱中備用。
HPLC法指紋圖譜分析如圖1所示，在色譜分析條件下，白芷總有效部位提取物的HPLC指紋圖中有6個共有峰(圖1中1～6號峰，圖1中波峰4為歐前胡素，波峰6為異歐前胡素。)，作為白芷總有效部位定性鑒別的指標峰。同時，用面積歸一化法以歐前胡素為標準進行測定，其中有效部位含量大于80％。篩選方法 分別取白芷總有效部位、維拉帕米(VP)和歐前胡素樣品適量，加吡啶100μl使溶解，離心5min(6000r/min)，吸取上清液5μl進樣測定，以VP為陽性對照藥，記錄CMC篩選色譜圖，如圖2所示，曲線a為白芷總有效部位的色譜，曲線a為維拉帕米的色譜，曲線a為異歐前胡素的色譜，波峰1為香豆素類成分，波峰2、4為異歐前胡素，波峰3為維拉帕米。篩選結果 在CMC篩選條件下，白芷總有效部位中含有與維拉帕米(VP)作用相似的有效成分，其中異歐前胡素與血管細胞膜及膜受體的作用強度大于陽性對照藥。實施例2 白芷有效部位的離體藥理學實驗研究2.1家兔離體主動脈條實驗取健康家兔，頸總動脈放血處死，開胸暴露心臟，分離主動脈，剪取靠近心臟處下腔動脈，置于經氧飽和的Tyrode’s營養液中，清除血管壁表面的結締組織，用剪刀將主動脈剪成寬3mm、長15mm的螺旋形條片，兩端分別穿線結扎，下端固定在容積為10ml的浴槽底部通氣鉤上，上端連在張力換能器上，張力換能器與自動臺式平衡記錄儀相連。浴槽中持續、均勻地通入O2，動脈條加負荷1g，浴槽溫度37℃±0.5℃，pH7.4±0.1。標本平衡時，每隔30min更換浴槽內Tyrode’s營養液(37℃)一次；每次加藥后，均用Tyrode’s營養液沖洗3次。主動脈條的收縮經張力換能器轉化后描記于記錄儀上。以維拉帕米(VP)作為陽性對照藥進行比較。
2.2對NE所致主動脈收縮作用的影響標本平衡1-2h后，以累積給藥法向浴管中加入去甲腎上腺素(NE)，連續記錄標本對NE的量效反應曲線；然后用營養液沖洗標本，待血管張力恢復基線水平，先后分別向浴管內加入白芷有效部位不同劑量組，重測NE對血管平滑肌收縮的量效曲線；同法測量陽性藥(VP)量效曲線；將結果繪制成量效曲線如圖3所示。實驗表明，不同劑量白芷有效部位使主動脈對NE收縮作用的量效曲線右移，最大抑制效應降低。
2.3對高K+去極化所致主動脈收縮作用的影響標本平衡1～2h后，加入1mol/LKCl 1ml使主動脈收縮達穩態，以單次給藥法向浴管內加入不同濃度的白芷有效部位或陽性藥(VP)，記錄主動脈條收縮張力見表2-1。實驗表明，不同劑量白芷有效部位對高K+去極化所致主動脈收縮的最大抑制率為22.5％，而電壓調控性鈣通道特異性抑制劑VP在濃度1mg/ml時最大抑制率為95.5％。
表2-1 白芷有效部位對高K+去極化所致主動脈收縮的影響組 別 濃度(mg/ml) 平均抑制率(％)空白組 - -白芷有效部位組 0.154.62白芷有效部位組 0.5 14.0白芷有效部位組 1.5 22.5維拉帕米組 1.0 95.32.4對NE依內鈣、依外鈣收縮收縮成分的影響標本平衡1-2h后，加入NE使血管收縮反應達穩態，以無鈣營養液沖洗，平衡后加入同劑量NE引起血管收縮，達穩態時加Ca2+恢復正常Ca2+濃度，此時血管將一步收縮至最大值。再以無鈣液沖洗，平衡后加入不同濃度白芷有效部位或VP，記錄各藥對NE兩種收縮成分的影響見表2-2。實驗表明，白芷有效部位對NE引起主動脈依內鈣、依外鈣收縮具有劑量依賴性抑制作用。同時表明其阻斷外鈣內流作用強于VP。表2-2 白芷有效部位對NE引起主動脈依內鈣和依外鈣收縮的影響濃度 無Ca2+液 正常Ca2+液組別(mg/ml) 無Ca2+液正常Ca2+液最大收縮 平均 最大收縮 平均(％) 抑制率(％) (％) 抑制率(％)空白組 - 40.9±2.5 -59.1±2.9 -白芷有效部位0.45 35.4±1.113.4 54.0±2.9 38.3白芷有效部位2.25 17.6±2.156.9 22.7±2.0 61.6白芷有效部位4.50 1.43±0.996.5 10.0±2.1 83.1維拉帕米組 0.205.7±1.890.6 41.8±2.6 28.32.5小結白芷有效部位使NE引起家兔離體主動脈收縮作用的量效曲線非平行右移，最大反應降低，表明其對受體調控性鈣通道有非競爭性抑制作用；對高K+去極化所致的主動脈收縮具有抑制作用，表明其對電壓調控性鈣通道有抑制作用。提示白芷有效部位對NE引起主動脈條的作用是抑制細胞內鈣釋放、外鈣內流的結果，達到降低動脈血管阻力的作用。實施例3 白芷有效部位對SHR的慢性降壓作用受試藥物取一定量的白芷有效部位提取物，以0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)分別配成2.5，5，10mg/ml的藥液。硝苯地平片西安博華制藥有限責任公司生產，批號0003007，每片10mg，研碎，以0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)配成濃度為0.5mg/ml的藥液。
動物自發性高血壓大鼠(SHR)，6周齡，體重180±30g，購自中國醫科院阜外醫院動物實驗科，合格證號醫動字第01-3080號。將動物飼養在室溫26±3℃，每日人工照明12h，按性別分籠飼養，自由飲水，顆粒飼料喂養。
方法選SHR40只，雌雄兼用，于室溫28℃以上，用HEM-80F型容積阻抗法血壓計間接測定大鼠尾動脈血壓。訓練1周后進行實驗。
藥前連續測血壓5天，每天1次，每次測3～5個數據，取均值。按藥前5天血壓均值將SHR分層隨機分為5組，每組8只(1)對照組0.5％CMC；(2)硝苯地平組5mg/kg；(3)～(5)白芷有效部位組100、50、25mg/kg組。各組均灌胃給藥，每日1次，容積10ml/kg，連續20d，隔天測定當日藥前及藥后2h血壓。停藥后，連續測定8d恢復期血壓。
3.1對SHR收縮壓的慢性降低作用如圖4所示，藥前5天各組收縮壓基本平穩，維持在20.8～21.6kPa。對照組在整個給藥期收縮壓波動較小。白芷有效部位100、50mg/kg組及硝苯地平組收縮壓從給藥后d1到d15呈鋸齒狀緩慢下降，從d15藥后至d19藥后收縮壓維持在15.6～16.9kPa之間。停藥后收縮壓逐漸恢復，4～6d基本恢復至藥前水平。白芷有效部位25mg/kg組收縮壓從給藥后d1到d9亦呈鋸齒狀緩慢下降，d11至d19維持在18.2～19.5kPa之間。停藥6d基本恢復至藥前水平。
表3-1白芷有效部位對SHR收縮壓(kPa)的影響(n＝8)收縮壓(kPa)天數 白芷白芷對照組硝苯地平100mg/kg 50mg/kg白芷25g/kg1 22.2±2.9 21.1±3.2 21.3±2.3 20.9±2.9 20.7±2.62 22.0±2.9 20.3±2.6 20.4±1.4 21.7±2.0 21.2±1.3藥 3 21.1±2.5 20.9±1.8 20.8±1.8 22.2±2.6 21.6±1.2前 4 21.1±1.7 20.5±1.7 21.2±1.3 20.7±2.9 20.4±1.45 21.6±2.1 21.3±2.2 20.0±1.8 21.4±2.2 21.1±1.6
x±s21.6±1.3 20.8±1.0 20.8±1.2 21.3±1.7 20.9±0.31 藥前 22.8±2.0 22.4±2.3 22.6±1.7 21.8±1.6 20.9±2.3藥后 22.0±2.0 18.6±2.3ΔΔ20.4±2.1ΔΔ19.1±2.9ΔΔ20.3±2.03 藥前 21.3±2.6 20.7±2.3 20.3±2.1 21.8±3.9 20.2±1.4藥后 21.2±3.4 18.5±2.5 18.7±3.0 19.1±3.1 18.8±1.75 藥前 22.9±1.3 20.2±3.0 19.4±1.3 19.4±1.6 19.5±2.3藥后 21.8±3.0 19.8±2.2 19.0±2.1 17.8±2.1 18.1±1.67 藥前 21.4±1.0 18.3±2.5 20.3±3.0 20.4±2.2 20.4±2.3藥后 20.5±2.0 17.6±2.1 17.4±2.6 18.1±2.9 19.0±1.49 藥前 21.2±2.0 19.4±2.1 19.4±2.1 18.6±2.1 19.8±2.2給藥后 20.4±1.2 17.2±3.1 16.5±1.8Δ18.1±1.0 17.7±0.9Δ藥11 藥前 21.2±0.9 19.1±3.2 25.1±3.5 19.1±3.1 19.1±1.4期藥后 22.6±1.8 17.0±2.5 16.5±2.0 16.1±1.8Δ18.8±1.613 藥前 20.3±1.0 15.6±1.3 18.1±1.7 17.6±2.2 19.6±1.6藥后 20.7±1.3 15.2±1.4 17.0±2.3 15.5±2.2 16.6±1.7ΔΔ15 藥前 21.1±1.7 16.9±1.8 17.4±1.8 17.8±2.6 19.5±12藥后 21.3±2.5 16.0±1.0 16.1±1.3 16.4±2.0 18.8±1.017 藥前 20.8±1.8 16.5±1.8 16.2±1.4 16.8±1.8 19.1±1.6藥后 20.7±0.9 17.0±2.1 16.2±1.6 17.0±0.9 19.2±1.019 藥前 21.4±1.0 16.1±1.8 15.9±0.9 16.1±2.0 18.3±1.0藥后 20.5±1.2 16.8±1.8 16.1±1.3 16.1±1.3 19.0±2.0121.2±1.4 17.3±2.5 16.5±1.3 18.1±2.1 19.0±1.0221.2±1.3 17.7±1.3 17.7±2.0 18.5±1.6 19.2±1.3停 321.8±1.6 17.9±1.6 18.8±3.1 18.1±1.4 20.1±1.8藥 420.4±1.2 20.0±2.3 19.8±1.7 18.3±1.6 20.0±1.4期 621.2±1.0 20.2±1.4 20.5±2.0 20.3±2.5 20.5±2.0821.1±1.8 20.8±1.6 21.1±20 21.8±1.4 21.3±1.6注t檢驗，與當日藥前血壓比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01表3-2 白芷有效部位對SHR收縮壓(kPa)的影響(n＝8)
收縮壓降低值(kPa) 白芷 白芷天數 對照組 硝苯地平5mg/kg 白芷100mg/kg 50mg/kg25mg/kg藥前 -1.2±2.1 -1.6±2.90.3±3.0 -0.4±1.80.0±2.21藥后 -0.4±2.32.2±3.11.6±2.2 2.2±3.30.6±2.0藥前 0.1±2.60.1±3.00.0±2.6 -0.4±4.00.9±1.73藥后 0.4±4.02.3±3.02.1±3.5 2.2±2.92.1±1.6藥前 1.4±2.00.8±3.41.4±2.0 2.0±2.91.4±2.35藥后 -0.3±3.11.2±2.3 1.7±2.0 3.5±2.7+2.9±1.6+藥前 0.1±1.82.5±2.2+1.2±3.0 1.0±2.30.5±2.37藥后 0.8±1.43.4±2.2+3.4±2.1+3.2±2.2+2.0±1.4藥前 0.4±3.01.4±2.51.4±2.5 2.7±2.71.3±2.5給 9藥后 1.0±1.33.8±3.84.3±2.6*3.4±2.3+3.2±1.0*藥藥前 0.6±1.81.7±3.02.7±3.6 2.3±2.72.0±1.4期 11藥后 -0.9±2.93.8±2.6*4.3±2.2*5.2±2.9*2.2±3.0+藥前 1.3±2.05.3±1.4*2.6±0.9 3.9±2.3+1.4±1.613藥后 0.8±2.15.6±2.2*3.8±2.6+5.8±3.4*3.0±1.8+藥前 0.5±1.64.0±2.7*3.4±2.2*3.6±1.7*1.4±1.215藥后 0.3±1.84.8±2.0*4.7±1.8*4.9±2.0*2.2±1.3+藥前 0.8±1.24.4±2.5*4.6±1.8*4.7±1.8*2.0±1.617藥后 1.3±1.33.8±2.7+4.6±2.0*4.4±2.0*1.7±1.3藥前 0.0±1.74.7±1.8*4.8±1.6*5.3±2.1*2.6±1.2*19藥后 0.9±2.04.0±2.1*4.7±1.6*5.2±1.8*2.1±1.81 0.4±2.13.5±2.7+4.3±1.2*3.4±1.7*2.0±0.9停 2 0.4±1.63.1±1.8*3.1±2.7+2.9±2.5+1.7±1.43 0.3±1.73.0±1.8*2.0±3.4 3.4±1.7*0.8±1.8藥 4 1.2±2.30.8±3.00.6±1.4 3.0±2.2 0.9±1.76 0.4±1.80.6±1.70.3±2.3 1.0±3.00.4±2.0期 8 0.4±1.60.0±1.7-0.3±1.7 -0.4±1.4 -0.3±1.6注t檢驗，與對照組比較，+P＜0.05，*P＜0.01；從表3-1和表3-2可看出，藥前5天各組收縮壓變化較小，維持在20.8～21.6kPa。對照組在給藥期收縮壓波動不大。各給藥組藥后收縮壓趨于下降，白芷100，50和25mg/kg組收縮壓降低值分別從給藥d5或d7開始，與對照組比較差異顯著(P＜0.05)；100，50mg/kg劑量組至d9或d11藥后差異更加明顯(P＜0.01)，此后基本維持在同一水平。將當日給藥前后收縮壓進行比較，藥后有降低趨勢，在給藥1～9d較明顯，d1藥后與藥前比較，差異顯著。硝苯地平組收縮壓從給藥d7開始與對照組比較，降低值差異顯著，給藥d11至停藥3d維持在同一降壓水平；當日給藥前后比較，僅在給藥d1差異顯著。給藥20天后上述4組收縮壓分別平均下降了4.7±1.6、5.2±1.8、2.1±1.8、4.0±2.1kPa。白芷大、中劑量組及硝苯地平組于停藥后1～3d與對照期比較仍差異顯著。各劑量組收縮壓均于停藥后4～6d恢復至對照期水平。
3.2對SHR舒張壓的慢性降低作用圖5可見，藥前5天各組舒張壓變化不大。對照組舒張壓在給藥后無明顯變化。白芷有效部位100、50mg/kg組及硝苯地平組舒張壓均在給藥后呈鋸齒狀緩慢下降，給藥d13到d19基本維持在9.1～10.4kPa之間，波動較小。白芷有效部位25mg/kg組舒張壓降低幅度較小。各給藥組停藥后4～6d內恢復。
從表3-3～表3-4可看出，藥前5天各組舒張壓變化不大，維持在12.5～13kPa。對照組舒張壓在整個給藥期變化較小。白芷有效部位100和50mg/kg組舒張壓從給藥d7或d11開始，與對照組比較降低值差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)，從給藥d11至給藥d20基本維持在同一水平。但與對照組比較，主要為每日藥后2h舒張壓的降低值與對照組的同時間舒張壓降低值比較差異顯著(P＜0.05或＜0.01)。白芷有效部位25mg/kg組僅在給藥d3藥前及13d藥后降低值與對照組比較差異顯著(P＜0.05)。硝苯地平組降壓效果基本同白芷有效部位100mg/kg。各給藥組的舒張壓當日給藥前后進行比較，均有降低趨勢。給藥19d后上述4組降低幅度分別為2.9±1.2、2.2±1.6、3.0±2.1、1.6±1.2kPa。各給藥組舒張壓停藥后4～6d內恢復。
3.3 小結本實施例通過白芷有效部位對SHR血壓影響的觀察，表明白芷有效部位對SHR血壓有明顯的慢性降低作用。表3-3.白芷有效部位對SHR舒張壓的影響(n＝8)舒張壓(kPa)天數對照組 硝苯地平 白芷 白芷 白芷5mg/kg 100mg/kg 50mg/kg 25mg/kg112.8±1.013.4±3.513.1 ±2.311.8±1.7 12.8±1.8藥 213.9±2.612.1±1.713.4±2.5 12.5±1.6 13.0±2.0312.6±2.912.5±1.712.4±2.0 12.4±1.8 13.9±1.8前 413.0±1.313.0±1.012.0±2.0 12.0±2.0 12.6±1.2513.0±2.013.0±1.012.0±1.0 13.9±1.4 12.4±1.7X±s 13.0±0.912.9±1.212.5±1.0 12.5±1.2 13.0±0.9給藥13.8±1.613.0±1.014.3±1.8 13.8±1.3 12.6±2.3前藥 1藥12.4±0.9Δ11.2±2.1Δ13.3±2.2 11.2±1.8ΔΔ12.4±2.3期后藥13.9±2.112.0±1.712.4±2.2 13.4±1.0 12.0±1.7前3藥12.5±1.811.8±1.611.0±1.8 11.8±1.7Δ12.5±1.4后藥513.8±2.312.9±2.312.5±1.6 12.4±1.3 12.9±2.0前藥13.3±2.111.2±1.311.6±2.0 10.9±1.7 11.7±1.4后藥12.5±1.311.0±2.311.7±2.5 13.0±2.3 13.0±1.8前7藥13.0±2.6 9.9±0.510.3±1.7 11.0±1.8 12.0±1.4后藥12.6±1.711.6±1.812.1±1.8 11.6±1.8 12.0±1.7前9藥12.1±2.110.3±2.1 9.8±1.2ΔΔ11.0±1.2 10.9±1.3后藥12.6±2.011.3±0.811.3±2.7 12.0±3.1 11.8±1.2前11藥14.2±1.410.1±1.2Δ9.8±1.2 9.6±1.2 12.0±1.3后藥14.5±1.7 9.5±1.010.7±1.2 10.4±1.8 12.2±1.2前13藥13.4±2.1 9.4±0.9 9.9±1.6 9.8±2.1 10.9±1.0后藥12.6±2.210.3±0.910.5±1.6 10.7±1.4 12.5±1.2前15藥12.2±3.0 9.6±1.69.8±1.6 10.3±1.6 11.0±1.2后藥12.6±1.710.3±1.69.8±0.9 10.1±1.4 11.7±0.9前17藥12.0±1.0 9.8±1.010.1±1.3 10.1±1.4 11.3±1.2后藥13.0±1.310.1±1.09.8±0.8 10.7±1.3 11.6±2.0前19藥12.0±0.8 9.8±1.49.8±0.5 10.3±1.0 11.4±0.5后停 112.5±1.810.7±1.29.9±0.9 10.8±1.0 12.5±1.6212.6±1.811.0±1.3 10.4±1.7 11.3±1.0 11.4±1.6藥 312.6±1.010.4±0.8 11.0±1.8 10.3±1.2 12.7±1.8412.1±1.711.6±1.7 11.3±1.6 10.8±2.0 12.2±1.4后 611.7±1.312.1±1.0 12.4±1.0 11.3±1.3 12.9±1.3812.2±1.213.1±1.6 12.1±1.4 13.3±1.4 13.4±2.0注t檢驗，與當日藥前血壓比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01表3-4.白芷有效部位對SHR舒張壓的影響(n＝8)天數舒張壓降低值(kPa)
對照組 硝苯地5mg/kg 白芷 白芷 白芷100mg/kg 50mg/kg 25mg/kg藥前 -0.6±1.2-0.3±1.4 -1.8±2.3 -1.3±1.6 0.3±2.91藥后0.8±1.2 1.6±2.6-0.8±2.7 1.3±2.1 0.6±2.6藥前 -0.9±1.8 0.9±1.6+0.1±2.5-0.9±1.4 1.0±2.0+3藥后0.5±2.0 0.9±2.3 1.4±2.2 0.6±1.7 0.5±2.2藥前 -0.8±2.1 0.0±3.0 0.1±2.3 0.1±2.0 0.1±2.55藥后 -0.3±2.3 1.6±1.4 0.9±2.0 1.6±2.2 1.3±1.8藥前0.6±1.0 1.7±2.2+0.8±2.2-0.5±2.0 0.0±1.87藥后0.1±2.7 3.0±1.0*2.3±1.8+1.4±1.3 1.0±2.1藥前0.5±1.8 1.2±2.3 0.4±1.7 0.9±2.1 1.0±1.8給 9藥后1.0±1.4 2.6±2.9 2.7±1.7+1.4±1.7 2.0±1.0藥藥前0.4±2.0 1.6±1.4 1.2±2.6 0.5±3.0 1.0±1.4期 11藥后 -1.0±1.6 2.6±1.4*2.7±1.6*2.9±2.1*1.0±1.8+藥前0.6±2.3 3.4±1.0*2.0±1.3 2.1±1.6 0.6±1.013藥后 -0.3±2.5 3.5±1.8*2.7±1.4*2.7±2.6+2.1±1.3+藥前0.5±2.3 2.6±1.7+2.0±2.1 1.8±0.8 0.5±0.615藥后0.8±2.7 3.1±2.2+2.7±1.7 2.2±1.3 1.8±1.6藥前0.5±1.6 2.6±2.3+2.7±1.4*2.3±2.0+1.3±1.417藥后1.2±1.3 3.1±1.3*2.3±1.7 2.3±2.1 1.7±1.2藥前0.1±1.4 2.7±1.7*2.7±1.4*1.8±1.7+1.4±2.219藥后1.0±1.0 3.0±2.1+2.9±1.2*2.2±1.6 1.6±1.2停 1 0.6±2.2 2.1±1.7 2.6±1.3+1.7±1.7 0.5±1.42 0.5±2.2 1.8±2.2 2.2±2.1 1.2±1.7 1.6±2.0藥 3 0.4±1.2 2.5±1.0*1.6±1.8 2.2±1.2*0.1±1.34 1.0±2.1 1.3±1.7 1.2±1.8 1.7±2.2 0.6±1.6期 6 1.4±2.0 0.8±1.6 0.1±1.2 1.2±2.0 0.0±1.48 0.9±2.0-0.3±2.1 0.4±1.4-0.8±1.3-0.4±2.0注t檢驗，與對照組比較，+P＜0.05，*P＜0.01實施例4 白芷有效部位對腎性高血壓大鼠的急性降壓作用受試藥物取一定量的白芷有效部位提取物，以0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)分別配成2.5，5，10mg/ml的藥液。卡托普利中美合資湖南正太藥業有限公司生產，批號000902，每片25mg，研碎，以0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)配成濃度為1.25mg/ml的藥液。
動物SD大白鼠，由西安交通大學實驗動物中心提供。動物質量合格證號分別為陜醫動證字08-005號。將動物飼養在室溫26±3℃，每日人工照明12h，按性別分籠飼養，自由飲水，顆粒飼料喂養。
腎性高血壓大鼠制備取SD大鼠70只，雌雄各半，適應環境1周后，以間接測壓法測量尾動脈血壓。乙醚麻醉，腹位固定，在一側背腰部做長約2cm的縱形切口，暴露腎蒂，以口徑約0.3mm銀夾狹窄腎動脈。切除另一側腎臟。縫合切口。術后連續3日ip青霉素。40d后，存活27只，測其血壓，選收縮壓高于145mmHg者10只，供實驗用。
分組按收縮壓將動物隨機分為5組，每組2只。(1)對照組0.5％CMC；(2)卡托普利組12.5mg/kg；(3)、(4)、(5)分別為白芷有效部位100，50，25mg/kg組。采用2個5×5拉丁方設計。1次性灌胃給藥，容積10ml/kg。藥后1、2、4、6、8h經尾間接測量血壓。清洗期3d，進行下一輪實驗，共5輪。
4.1對腎性高血壓大鼠收縮壓的急性降低作用從表4-1～表4-2可看出，對照組收縮壓藥前藥后無明顯變化。白芷有效部位100、50mg/kg組及卡托普利組藥后1h收縮壓降低值與對照組比較差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)，分別維持至藥后4、2、4h。白芷有效部位25mg/kg在藥后1h的收縮壓降低值與對照組比較差異顯著(P＜0.05)。各給藥組收縮壓在藥后1h降低最明顯，降低幅度分別為2.5±2.2、2.2±1.6、3.5±2.2、1.6±1.3mmHg。2h后各給藥組收縮壓逐漸回升，但8h仍低于藥前血壓。
表4-1.白芷有效部位對腎性高血壓大鼠收縮壓的急性降低作用(n＝10)藥后時間 血壓(kPa)(h) 對照組 卡托普利白芷100mg/kg 白芷50mg/kg 白芷25mg/kg020.3±1.719.8±1.419.2±1.0 20.5±1.0 19.6±1.9120.4±2.316.2±1.416.9±2.6 18.3±1.6 18.1±1.6219.9±1.616.6±1.216.8±1.2 18.1±2.2 18.2±2.3419.5±2.217.4±1.417.4±1.2 18.3±1.2 18.1±2.2619.6±1.417.8±1.418.1±1.4 18.6±1.3 17.7±2.9819.9±1.218.3±1.218.1±1.4 18.2±1.6 18.1±2.4表4-2.白芷有效部位對腎性高血壓大鼠收縮壓的急性降低作用(n＝10)藥后 收縮壓降低值(kPa)時間對照組卡托普利白芷100mg/kg 白芷50mg/kg 白芷25mg/kg1 -0.1±1.63.5±2.2*2.5±22+2.2±1.6*1.6±1.3+20.4±1.43.1±2.2*2.5±1.4*2.5±2.3+1.3±2.540.8±1.72.3±1.3+1.6±1.6 2.2±1.3+1.6±1.760.6±1.72.0±16 1.1±1.4 2.0±1.6 2.0±1.680.3±1.61.4±2.3 1.3±1.0 2.3±1.6*1.4±1.4注t檢驗，與對照組比較，+p＜0.05，*p＜0.014.2 對腎性高血壓大鼠舒張壓的急性降低作用從表4-3和表4-4可看出，各給藥組舒張壓有降低趨勢，但與對照組比較無顯著性意義。與藥前血壓比較，白芷有效部位100、50和25mg/kg組分別在藥后1、2、4h，藥后1、4h和藥后1h的舒張壓降低值差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)。卡托普利組藥后1、2、4h降低值差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)。
表4-3.白芷有效部位對腎性高血壓大鼠舒張壓的急性降低作用(n＝10)藥后時間 舒張壓(kPa)(h) 對照組 卡托普利白芷100mg/kg 白芷50mg/kg 白芷25mg/kg0 12.7±2.6 12.0±1.611.7±1.312.5±2.0 12.3±2.01 12.4±1.6 10.0±1.0+ 10.1±1.6+ 11.2±1.3+ 11.2±1.2+2 11.8±2.3 9.6±1.2+9.9±0.9+ 11.0±1.4 11.0±1.64 12.0±1.6 10.4±1.3+ 10.4±1.2+ 11.4±1.4+ 11.7±1.76 12.4±1.7 l0.7±0.910.5±0.611.2±1.6 11.2±1.78 11.8±16 10.9±1.011.0±0.610.9±1.7 11.2±0.8注t檢驗，與藥前血壓比較，+P＜0.05，*P＜0.0表4-4.白芷有效部位對腎性高血壓大鼠舒張壓的急性降低作用(n＝10)藥后時間 舒張壓降低值(kPa)(h) 對照組卡托普利 白芷100mg/kg 白芷50mg/kg白芷25mg/kg1 0.3±2.3 2.0±2.3 1.6±1.6 1.3±1.7 1.1±1.42 0.9±2.3 2.4±1.6 1.6±1.4 1.6±2.5 1.2±2.54 0.7±2.3 1.6±0.9 1.3±1.4 1.1±1.3 0.6±2.16 0.3±2.5 1.3±1.6 1.2±1.6 1.4±2.3 1.1±2.28 0.9±2.5 1.1±2.3 0.7±1.3 1.6±2.9 1.1±2.0注t檢驗，各組與對照組比較均P＞0.054.3 小結本實施例通過白芷有效部位對SHR血壓影響的觀察，表明白芷有效部位對腎性高血壓大鼠血壓有明顯的急性降低作用，對收縮壓的降低效果作用強于舒張壓。
權利要求
1.一種從白芷中提取用于制備治療高血壓藥物的香豆素類有效成份的超臨界提取方法，其特征在于白芷藥材，粉碎，過篩，置于萃取釜中，加溫裝置正常工作后，打開壓縮泵加壓到20～35MP，溫度40～50℃，加攜帶劑，以40～50kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力為5～10MP，溫度為30～50℃，提取3h后，分取提取物，揮干攜帶劑，得到白芷的超臨界香豆素類有效部位提取物。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于加溫裝置正常工作后，打開壓縮泵加壓到30MP，溫度30℃，加攜帶劑100ml，以45kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力和溫度分別為5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，揮干攜帶劑，得白芷的超臨界總有效部位提取物。
3.一種從白芷中提取的香豆素類有效部位，其特征在于在制備防治高血壓的功能性保健食品或藥物的應用。
4.如權利要求3所述的中藥白芷有效部位，其特征在于有效成份包括歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脫水比克白芷素、別歐前胡素等中的任何一種或數種的組合。
5.如權利要求1所述的通過提取的白芷香豆素類有效部位，其特征在于制備調節和治療高血壓疾病的功能性保健食品或藥物。
6.如權利要求5所述的治療高血壓疾病藥物，其特征在于是特別在于治療原發性和繼發性高血壓病的舒張壓和收縮壓疾病藥物。
7.如權利要求5所述的中藥白芷香豆素類有效部位及成分，其特征在于與其他中藥提取物或有效部位或有效成分的組合使用，用于制備對高血壓及其并發癥的預防和治療的功能性保健食品或藥物。
8.如權利要求7所述的中藥白芷香豆素類有效部位及成分，其特征在于其他中藥提取物可以優選山楂提取物、川芎提取物、葛根提取物、當歸提取物、三七提取物和丹參提取物的任何一種或多種的組合。
全文摘要
本發明為應用細胞膜色譜篩選技術和超臨界提取技術，獲得中藥白芷中對主動脈血管有擴張作用的香豆素類有效部位，其中歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脫水比克白芷素、別歐前胡素等為有效成分。中藥白芷香豆類素有效部位中含有與鈣通道阻滯劑維拉帕米類似作用的活性成分。白芷香豆素類有效部位對受體調控性鈣通道具有較強的非競爭性抑制作用；對電壓調控性鈣通道有抑制作用，并具有劑量依賴性。白芷有效部位對自發性高血壓大鼠(SHR)有明顯的慢性降低作用，對腎性高血壓大鼠有明顯的急性降低作用。由超臨界提取技術提取的白芷有效部位可用于制備預防和治療高血壓疾病的藥品。
文檔編號A61K31/37GK1445228SQ0211495
公開日2003年10月1日 申請日期2002年3月14日 優先權日2002年3月14日
發明者賀浪沖, 楊廣德, 曹永孝, 李西玲, 梁明金, 馬瑛, 賀煒, 黃沂 申請人:北京同源醫藥科技有限公司