專利名稱：一種預防和治療艾滋病的藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術，具體地說是一種從培養的新菌株中獲取用于預防和治療艾滋病的藥物。
背景技術：
艾滋病由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起，導致被感染者免疫功能的部分或完全喪失，繼而發生機會性感染、腫瘤等。HIV侵入人體后主要攻擊的是一種帶CD4的淋巴細胞(T4淋巴細胞)，這種細胞是免疫系統的基本組成部分，HIV通過大量、不斷地復制與釋放，導致T4淋巴細胞大量死亡，使人體內T4淋巴細胞明顯減少，感染者免疫功能遭到嚴重破壞，造成免疫缺陷；臨床表現為各種機會性感染與腫瘤。HIV一進入人體，這個人就成為HIV感染者，先是處于潛伏期，以后可逐漸發展成艾滋病病人；處于潛伏期的感染者免疫功能沒有受到嚴重破壞，因而沒有明顯的臨床癥狀。從HIV感染者到艾滋病病人這段時間的長短與感染者的年齡、生活醫療條件、心理生理狀況、感染病毒的類型等多種因素有關，短則幾個月，長則20年以上；當感染者的免疫系統遭到一定程度的破壞(檢查發現T4淋巴細胞計數顯著下降，CD4/CD8淋巴細胞計數比值＜1等)，可出現一系列臨床癥狀(如發生各種細菌、真菌、病毒感染及腫瘤)，就發展成艾滋病病人；人一旦受到HIV感染將終身攜帶病毒，因此HIV攜帶者和艾滋病病人都能傳播病毒。
目前尚無可根治HIV感染的藥物，也沒有證據表明人體會對HIV產生保護性免疫，因此大多數病人會死于反復的繼發感染及腫瘤；但早期治療與預防可延緩病程的發展，提高生活質量；HIV感染者可定期檢測T4淋巴細胞計數(正常值為500～1600/微升，T4/T8比值為(1.5～1.7)∶1)，當T4淋巴細胞計數≥200/微升時，可按免疫功能正常情況對感染者進行處理。目前臨床上常用的治療方法有以下三方面(1)抗病毒治療如用疊氮胸苷(AZT)、雙脫氧胞苷(DDC)等，目前國際上認為聯合用藥效果較好，但費用昂貴，一般發展中國家的感染者難以承受。(2)各種機會性感染和腫瘤的處理由于HIV感染者免疫功能異常，發生感染時往往病情較重，難以控制，加上感染導致肝、腎功能不全，使用藥物治療時還要注意HIV感染者容易出現藥物的毒副作用或過敏反應。(3)支持療法以提高機體免疫力為主要目的，同時要重視心理治療和營養療法。
發明內容
為了克服目前臨床常用治療方法存在的不足，本發明的目的在于提供一種新的大腸埃希氏菌菌株培養物；具有預防和治療艾滋病功效；其療效確切，毒副作用小。
為實現上述目的，本發明提供了一種預防和治療艾滋病的藥物是以金黃色葡萄球菌TSST-1毒素作為預防和治療艾滋病藥物的活性組份。
其中還可加入適量的藥物輔料；經常采用的藥物輔料為右旋糖苷、甘露醇；所述金黃色葡萄球菌TSST-1毒素分離于大腸埃希氏菌(Escherichia coli)XHT CGMCC No.0662菌體中；TSST-1毒素的具體制備過程為首先以大腸埃希氏菌(Escherichia coli)XHT CGMCC No.0662于含有氨芐青霉素的培養液中培養，然后從菌體中分離出工程菌XHT表達的金黃色葡萄球菌TSST-1毒素；所述分離過程為離心收集菌體，破碎菌體，離心去除菌體碎片，去除菌體碎片的提取液進行透析或超濾后，經陽離子層析柱純化，用5～200mmol/L PB緩沖液線性梯度洗脫，收集含TSST-1峰的溶液；所述培養液中氨芐青霉素的濃度為80～120μg/ml；所述培養液為LB培養液，其PH為6.5～7.5；本發明中所涉及的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)已經于2001年12月10日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.0662；菌株代號為XHT。
菌株的情況從金黃色葡萄球菌的DNA中獲得TSST-1基因，以質粒PBV220為載體，以大腸桿菌DH5α為受體菌，自行構造表達TSST-1的工程菌。
菌株CGMCC No.0662的特征1.形態特征為兩端鈍圓的中等大腸桿菌，寬約0.6μm，長約2～3μm，單獨散在，不形成長鏈條，周圍有菌毛。
2.培養特征為需氧及兼性厭氧菌，在普通LB培養基上生長良好，最適PH7.2～7.4，最適培養增值溫度為30℃，誘導表達溫度為42℃；普通瓊脂培養18～24小時，形成凸起，光滑、濕潤，乳白色，邊緣整齊的針尖到大頭釘帽大小菌落；伊紅美藍瓊脂上產生紫黑色帶金屬光澤的菌落；遠滕瓊脂上產生黃色菌落。
3.染色特征革蘭氏陰性染色。
4.生理生化特征能分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇，產酸產氣，β-半乳糖苷部分缺失，具有氨芐青霉素抗性，可表達金黃色葡萄球菌TSST-1毒素。
本發明的藥物是通過基因工程的方法，構造出表達金黃色葡萄球菌TSST-1毒素的工程菌種，并從中純化出TSST-1毒素，制成藥物制劑，用于預防和治療艾茲病的藥物。
本發明具有如下優點克服了目前臨床常用治療方法存在的不足，能顯著提高CD4/CD8的比值，療效確切，毒副作用小，無過敏反應。
具體實施例方式
實施例1接種XHT工程菌于1ml含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB培養液中，37℃搖床培養12小時后，轉接到300ml含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB培養液的三角瓶中，于恒溫搖床30℃培養8小時(8～12小時即可)至對數生長期，按5％(按體積百分含量計)接種量，接種于發酵罐中，再于30℃培養12小時，升溫至42℃，繼續培養6小時(3～6小時均可)。
離心收集菌體，高壓勻漿破碎菌體，離心去除菌體碎片，去除菌體碎片后的提取液進行透析，經透析后的樣品，上陽離子層析柱(本實施例為羧甲基纖維素層析柱)純化。依次用5mmol/L PB緩沖液(PH5.5)、30 mmol/L PB緩沖液(PH6.0)、45 mmol/L PB緩沖液(PH6.0)、200mmol/L PB緩沖液(PH6.8)分步洗脫，收集含TSST-1峰的溶液，經SDS-PAGE，免疫雙擴、ELISA等方法進行測定，檢測合格(純度≥95％)后加入5％(按重量百分含量計)的右旋糖苷，噴霧干燥，制得噴霧干粉，分別制成膠囊或片劑。
(1)膠囊中加入適量淀粉，制得膠囊劑，每粒膠囊含TSST-110ng。
(2)片劑(1000片)，分別加入適量的淀粉26g，糊精42g及硬脂酸鎂0.7g，TSST-1 10ng及丙烯酸樹脂適量(約占總重量的3～5％)制得腸溶片。
實施例2接種XHT工程菌于1ml含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB培養液中，37℃搖床培養12小時后，轉接到300ml含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB培養液的三角瓶中，于恒溫搖床30℃培養8小時至對數生長期，按5％接種量，接種于發酵罐中，再于30℃培養12小時，升溫至42℃，繼續培養6小時。
離心收集菌體，破碎菌體，離心去除菌體碎片，去除菌體碎片后的提取液在PH5.5的條件下透析，經透析后的樣品，上陽離子層析柱純化；依次用6mmol/L PB緩沖液(PH5.0)、8mmol/L PB緩沖液(PH6.6)、45mmol/L PB緩沖液(PH6.6)、100mmol/L PB緩沖液(PH6.8)分步洗脫，收集含TSST-1峰的溶液，經SDS-PAGE，免疫雙擴、ELISA等方法進行測定，檢測合格后加入5％的甘露醇，噴霧干燥，制得噴霧干粉，分別制成膠囊或片劑。
(1)膠囊中加入適量淀粉，制得膠囊劑，每粒膠囊含TSST-110ng。
(2)片劑(1000片)，分別加入適量的淀粉26g，糊精42g及硬脂酸鎂0.7g，TSST-1 10ng及丙烯酸樹脂適量制得腸溶片。
實驗例大多數愛滋病患者在發病階段呈進行性消瘦，體重減輕，免疫功能下降，T淋巴細胞分布異常，CD4/CD8降低，10例患者服用本品(膠囊)一個月后，T細胞亞群檢查的比較。
治療前及治療后T細胞亞群檢查的比較(X±S)
權利要求
1.一種預防和治療艾滋病的藥物，其特征在于以金黃色葡萄球菌TSST-1毒素為預防和治療艾滋病藥物的活性組份。
2.按照權利要求1所述的藥物，其特征在于所述金黃色葡萄球菌TSST-1毒素分離于大腸埃希氏菌(Escherichia coli)XHTCGMCC No.0662菌體中。
3.按照權利要求2所述的藥物，其特征在于首先以大腸埃希氏菌(Escherichia coli)XHT CGMCC No.0662于含有氨芐青霉素的培養液中培養，然后從菌體中分離出工程菌XHT表達的金黃色葡萄球菌TSST-1毒素。
4.按照權利要求3所述的藥物，其特征在于所述培養液中氨芐青霉素的濃度為80～120μg/ml。
5.按照權利要求3所述的藥物，其特征在于所述培養液為LB培養液，PH為6.5～7.5。
6.按照權利要求3所述的藥物，其特征在于所述分離過程為離心收集菌體，破碎菌體，離心去除菌體碎片，去除菌體碎片的提取液進行透析或超濾后，經陽離子層析柱純化，用5～200mmol/L PB緩沖液線性梯度洗脫，收集含TSST-1峰的溶液。
7.按照權利要求1所述的藥物，其特征在于可加入適量的藥物輔料。
8.按照權利要求7所述的藥物，其特征在于所述藥物輔料為右旋糖苷、甘露醇。
全文摘要
一種預防和治療艾滋病的藥物，以金黃色葡萄球菌TSST－1毒素為預防和治療艾滋病藥物的活性組份，其中金黃色葡萄球菌TSST－1毒素分離于在含有氨芐青霉素的培養液中培養后的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)XHT CGMCCNo.0662菌體中。本發明克服了目前臨床常用治療方法存在的不足，能顯著提高CD4/CD8的比值，療效確切，藥物毒副作用小，無過敏反應。
文檔編號A61K35/74GK1442200SQ0210925
公開日2003年9月17日 申請日期2002年3月6日 優先權日2002年3月6日
發明者陳巨余 申請人:沈陽協合集團有限公司