專利名稱：治療過敏癥的活疫苗的制作方法
技術領域：
本發明涉及治療過敏癥的活疫苗，更具體地，本發明涉及轉化的乳桿菌屬(Lactobacillus)或鏈球菌屬(Streptococcus)的細菌，該細菌具有一種DNA分子，該DNA分子包括(1)編碼蛋白質過敏原的核苷酸序列，和(2)可操縱地與此核苷酸序列連接的啟動子。
因此，本發明涉及一種具有如下DNA分子的轉化乳酸菌，該DNA分子包括(1)編碼蛋白質過敏原的核苷酸序列，和(2)可操縱地與該核苷酸序列連接的啟動子(即表達過敏原)。此細菌可以是乳酸菌的成員如乳桿菌屬成員(例如嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)，干酪乳桿菌(L.casei)，植物乳桿菌(L.plantarum)，發酵乳桿菌(L.fermentum)，德氏乳桿菌(L.delbrueckii)，約氏乳桿菌(L.johnsoniiLJI)，路氏乳桿菌(L.reuteri)和保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus))，鏈球菌屬成員(如嗜熱鏈球菌(S.thermophilus))，或雙歧桿菌屬成員(例如嬰兒雙歧桿菌(B.infantis)，雙歧雙歧桿菌(B.bifidum)，長雙歧桿菌(B.longum)，假長雙歧桿菌(B.pseudolongum)，短雙歧桿菌(B.breve)，B.lactis Bb-12，和青春雙歧桿菌(B.adolescentis))。所述細菌也可以是Lactobacillus GG，如Salminen等，在Br.J.Neutr.80147-171，1998所述將其歸為益生菌。過敏原可以是來自通常的塵螨的過敏原，如來自Dermatophagoides pteronyssinus，D.fdrinae，D.microceras，Tyophagus putesentiae，Lepidoglyphusdomesticus，L.destructor，Acarus siro，Euroglyphus maynei，和Biomiatropicalis的過敏原；或其它空氣傳播的過敏原(氣源性過敏原)如花粉，霉菌，動物皮屑，和昆蟲。已經鑒別來自塵螨的各種蛋白質過敏原，并克隆了編碼過敏原包括Der p1，Der p2和Der p5蛋白的基因。可用于在細菌中表達過敏原的啟動子包括紅霉素抗性基因啟動子，IdhL啟動子，或P25啟動子。
本發明還包括一種在接觸過敏原的個體(例如哺乳動物如人)中降低IgE產生的方法，其包括給予該個體本發明的細菌；并在個體體內以足夠量表達過敏原，以誘導個體對過敏原的免疫耐受。耐受包括使個體在隨后接觸過敏原時抑制過敏原特異性IgE的產生。另外，本發明涉及一種減輕接觸過敏原的個體支氣管肺炎的方法，包括給予個體本發明的細菌；并在個體體內足量表達過敏原，以減輕(即可測量地降低)隨后接觸過敏原的個體的支氣管肺炎。細菌可以通過口服，舌下或鼻內而給予。
本文所用術語“乳酸菌(LAB)”是指一種革蘭氏陽性細菌，其在食品發酵工業中的應用及其益生菌性質已熟知。本發明的LAB和方法提供了抗過敏癥尤其塵螨過敏癥的安全疫苗。通過對一般人群定期及安全性施用此細菌產生高水平安全性。
“過敏原”是指一種導致I型立即高敏性的物質。
“氣源性過敏原”定義為至少具有以下特性引起活性反應素應答的特異性抗原定群，與其環境接觸水平即可導致敏感個體體內明顯組織變化。氣源性過敏原是經空氣傳播的顆粒，可導致呼吸道，皮膚或結膜過敏癥。例如豚草花粉的水溶部分可影響呼吸道和結膜粘膜，豚草花粉的脂溶部分可對接觸的皮膚產生典型的接觸性皮炎。
“益生菌”是一種活的微生物，其通過改善宿主固有的微生物區系而對宿主的健康有利。對將活細菌菌株分類為益生菌沒有約定的標準。用于分離和定義益生菌細菌和特異菌株的通用標準包括(i)人來源的菌屬；(ii)抗膽汁，酸，酶和氧的穩定性；(iii)附著于小腸粘膜的能力；(iv)在人胃腸道內定居的潛力；(v)產生抗微生物物質；和(vi)可證實的功效和安全性。
“酸奶”是一種凝固的奶制品，是由保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌發酵乳中的乳酸而產生的。
可由本發明治療的過敏性疾病包括鼻炎，鼻竇炎，哮喘，過敏性肺炎，外源過敏性牙齦炎，結腸炎，風疹，濕疹，皮炎，過敏反應，血管神經性水腫，過敏性偏頭痛，和涉及由IgE介導的過敏癥的某些胃腸道疾病。
“可操縱的連接”是指基因與調節序列之間的連接關系，以此方式當適當的分子(例如轉錄激活蛋白)與調節序列結合時，使基因表達。
“啟動子”是一種核苷酸序列，其能以至少一種前后序列效應指導轉錄，例如當其在細胞中可操縱的連接于異源序列時。換而言之，啟動子可不需下游待轉錄序列而存在，只要當以不同前后序列置于異源序列的上游時，啟動子序列能指導轉錄。
本文所用術語“個體”包括人和非人動物。所述個體典型是人，例如患有過敏性疾病的病人。“耐受”是指哺乳動物在接觸一或多種過敏原時不發生過敏性免疫反應的狀態。
本文所用術語“轉基因”是指一種DNA序列，其包括一或多個選擇的DNA，該DNA部分或全部異源于生物體(例如細菌或動物)，或部分或全部同源于生物體的內源性基因，但將其設計為插入生物體基因組的與天然基因不同的位置。一個轉基因包括一或多個啟動子。
“轉基因的”是指包括一種DNA序列的任何細胞，該DNA序列人工插入細胞，并成為從該細胞或細胞子代(例如在微生物的情況下)發育的生物體基因組的一部分。
通過以下詳細闡述和所附權利要求書，將顯而易見本發明的其它特點和優點。
圖2是示出接受不同疫苗及用不同濃度乙酰甲基膽堿(Mch)處理的動物的Penh的條桿圖。數值以平均值±SEM(n＝6)表示。*代表p＜0.05的有統計學意義的數值。
圖3是示出在接受不同疫苗和用過敏原攻擊的動物不同類型白細胞數目的條桿圖。數值以平均值±SEM(n＝6)表示。*代表p＜0.05的有統計學意義的數值。
待表達以治療特定過敏癥的特異過敏原當然基于非所需的免疫應答是否針對蛋白質過敏原。如果已經鑒別了觸發此類應答的蛋白質過敏原，技術人員可將編碼過敏原的核苷酸序列克隆入細菌表達載體中，然后將此表達載體導入乳酸菌中，隨之將乳酸菌給予個體，以改善或預防隨后的過敏癥的特征性癥狀(例如皮炎或支氣管肺炎)。評價和定量呼吸道高反應性的實驗方法見下述。本領域熟知評價支氣管肺炎的其它方法。過敏性哮喘特點是呼吸道高反應性和炎癥均存在。呼吸道高反應性可通過肺部試驗改變測定(介入或非介入方法)。呼吸道炎癥可通過呼吸道中炎癥細胞尤其嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞的浸潤，及通過病理學改變測定。在一些情況中，非必需鑒別單個的蛋白質過敏原。例如，來自單一來源的多個蛋白質過敏原可用于誘導對該來源的免疫耐受性(例如治療對由不同過敏性蛋白組成的食物如水生貝殼類動物的過敏癥)。多個過敏原可在相同細菌中(用一或多個DNA載體)表達或在不同細菌中表達，每個不同細菌均表達來自相同來源的不同過敏原。在這種情況中，技術人員只需知道具體的過敏原來源和來源中存在的兩或多個蛋白質過敏原即可。
本發明可使用任何乳酸菌，只要它們能遺傳操作和表達異源蛋白即可。例如，Pouwels等，生物技術雜志44183-192，1996所述的乳桿菌屬的一些適當菌種。
本發明所述的實驗發現導致建立乳酸菌(LAB)表達載體。大多數商購的表達載體不適用于LAB中，這是因為只有一些啟動子可在LAB中起作用。這些啟動子應組成型驅動由基因編碼的過敏原的表達。過敏原基因可以是任何臨床重要的過敏原，尤其氣源性過敏原。本發明可通過抑制過敏原特異性IgE合成而負調節過敏性炎癥。因此本方法可治療任何IgE介導的過敏癥。本發明活疫苗可包括任何可攝取或可食用形式(如酸奶)的一或多種益生菌。
關于過敏原及其生理作用的進一步闡述見Aas等，過敏癥333，1978；Goldin等，Br.J.Nut.80S203-S207，1998；和Kailasapathy等，免疫細胞生物學雜志7880-88，2000。
多肽過敏原的特定例子包括Dermatophagoides pteronyssinus的Der p過敏原。Der p5多肽序列如下MKFIIAFFVATLAVMTVSGEDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQEQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTIIAMIDGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV(SEQID NO1)，也見于Lin等(1994)，過敏癥臨床免疫學雜志94989-96。
Der p1多肽序列如下MKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLESVKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL(SEQ ID NO2)Der p2多肽序列如下MMYKILCLSLLVAAVARDQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNTKTAKIEIKASIDGLEVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKVMGDDGVLACAIATHAKIRD(SEQ ID NO3)。
不用再詳細闡述，基于以上揭示本領域技術人員可使用下述活細菌疫苗進行有效治療，將本發明方法最佳程度利用。以下實施例只是舉例說明技術人員怎樣能產生和使用活細菌疫苗，無任何限制本發明之意。所引用的文獻以其全文并入參考。實施例方法和材料DNA操作為獲得在嗜熱鏈球菌和嗜酸乳桿菌中表達Der p5基因的啟動子，通過PCR產生兩個DNA片段。用于此PCR的引物如下。引物PUC1233互補于pLP3537中的4119-4096位核苷酸，并具有序列CTTACGTCACGTCTTGCGC(SEQ ID NO4)。pLP3537及其核苷酸數目見Posno等，應用環境微生物學572764-2766，1991所述。引物PSD與pLP3537的3658-3679位核苷酸相同，并具有序列AGATCTCCCTCTTTAATTTGGTTATATG(SEQ ID NO5)。在引物PSD的5’末端的另外6個核苷酸設計用于在所得PCR片段中產生Bgl II位點。
每個PCR反應混合物含有大約0.1μg的pLP3537質粒，0.25μg每種引物，0.2mM脫氧核苷三磷酸，1U的Taq DNA聚合酶，10mMTris-HCl(pH8.3)，50mM KCl，1.5mM MgCl2和0.01％(w/v)明膠。擴增包括如下30個循環在94℃1分鐘，在55℃2分鐘，在72℃2分鐘，使用MiniCycler(MJ Research；Watertown，MA)。這些反應用引物產生0.4kb的DNA片段。將此DNA用HindIII(引物PSD中的位點)和Bgl II處理，并經瓊脂糖凝膠純化。將此DNA片段與經HindIII線性化的質粒pLP3537，和405bp的pCMVD(見Hsu等，自然醫學2540-544，1996所述)的HindIII/Bgl II片段連接。所得質粒pSDDerp5含有融合于編碼Der p5的cDNA序列的擴增片段。
轉化將細菌菌株通過電穿孔轉化，使用如Walker等，FEMS微生物通信138233-237，1996所述方法。用pSDDerp5轉化的嗜酸乳桿菌稱為“LA-gm”，轉化的嗜熱鏈球菌稱為“ST-gm”。未轉化的細菌分別稱為“LA”和“ST”。
細菌培養將嗜酸乳桿菌(ATCC 4356)在MRS肉湯和瓊脂上于37℃培養。將大腸桿菌DH5α菌株在37℃保持在LB肉湯和瓊脂上。抗生素氨芐青霉素和紅霉素購自Sigma(St.Louis)。為選擇大腸桿菌，使用的氨芐青霉素和紅霉素的濃度分別為50和50-100μg/ml。為選擇嗜酸乳桿菌，所用紅霉素濃度為5μg/ml。以如嗜酸乳桿菌同樣方式培養和處理嗜熱鏈球菌(也得自ATCC)。
動物及研究6和8周齡的雌性BALB/c小鼠得自臺灣大學醫學院動物培育中心(源自Jackson實驗室，Bar Harbor，ME)，將它們分為6組進行實驗(表1)。
表1
將動物通過腹膜內注射10μg重組Der p5而活性致敏，Der p5是如Lin等在過敏癥臨床免疫學雜志94989-996，1994所述純化的。將小鼠每周中3天經口喂食LA-gm或ST-gm，共兩周。在致敏21天后，將動物接觸0.1％Der p5-谷胱甘肽-S-轉移酶融合蛋白或PBS的氣霧劑20分鐘。在吸入攻擊8小時后，對肺部抗性測定50分鐘，并收集支氣管肺泡沖洗液(BALF)和血清。
測定Der p5特異性IgG2a，和IgEDer p5特異性IgG2a和IgE是通過ELISA確定的，如Hsu等，免疫學研究81405-1411，1996所述。將蛋白質結合平板用100μl在包被緩沖液(0.1M NaHCO3pH8.2)中的純化的Der p5(5μg/ml)包被，如Hsu等，自然醫學2540-544，1996所述。在4℃溫育過夜后，將平板沖洗3次并用在PBS中的3％(w/v)BSA在25℃阻斷2小時。將試驗動物血清1∶100稀釋進行IgG測定，1∶10稀釋進行IgE測定。將每個樣品以雙份進行分析。在4℃溫育過夜后，將生物素綴合的大鼠抗小鼠IgE(Pharmingen，San Diego，CA)或大鼠抗小鼠IgG2a(Pharmingen)在0.05％明膠緩沖液中稀釋，并加入每個試驗孔中1小時。將親和素—堿性磷酸酶(Sigma Chemical Co.St Louis，MO)1∶1000稀釋，加入孔中，并在25℃溫育1小時，然后將孔沖洗6次。
通過加入對硝基苯基磷酸二鈉(Sigma)進行呈色反應。將平板在微平板閱讀儀中于405nm閱讀。讀數參考標準血清進行，標準血清是從開始用在4mg氫氧化鋁中的10μg Der p5經腹膜內注射，并用相同劑量和配方加強21天的6只小鼠中收集的。此標準信號(對抗體應答的陽性對照)標準化為100 ELISA單位/ml(見
圖1)。
呼吸道反應性的非侵入性測定使用氣壓全身體積描記儀(WBP；Buxco，Troy，NY)，對有意識的不受限制的小鼠吸入乙酰甲基膽堿的反應進行測定，如Hamelmann等，Am.J.Respir.crit.CareMed.156766-775，1997所述。乙酰甲基膽堿是一種已知提高呼吸道抗性的藥物。在讀數之前，將1ml空氣快速注射到主腔中，以從WBP裝置中獲得1mv信號，由此校準盒。通過確定吸氣初和吸氣末記錄吸氣和呼氣情況，作為在0點交叉的盒壓力/時間曲線。吸氣初是通過從盒壓力信號的上升吸氣相的兩個水平處繪制的直線外推確定的。吸氣時間(Ti)是指從吸氣初至吸氣末的時間。呼氣時間(Te)是指從吸氣末至下一吸氣初的時間。一次呼吸期間在正負方向發生的最大盒壓力信號，分別定義為峰值吸氣壓力(PIP)和峰值呼氣壓力(PEP)。記錄每10次呼吸推斷每分鐘的呼吸頻率。松弛時間(Tr)是指達到36％總呼氣壓力信號(在呼氣中盒壓力信號之下的區域)的時間。此閾值用于將體積信號的衰減時間常數與在被動呼氣中峰值體積衰減36％相關。間歇(pause)和增強的間歇(enhanced pause，Penh)限定如下間歇＝(Te-Tr)/TrPenh＝(PEP/PIP)×間歇測定Penh的增加作為呼吸道反應指數。測量小鼠并取3分鐘的平均值。將氣霧化鹽水，接著是增加濃度的乙酰甲基膽堿(從1-100mg/ml)噴霧吸入3分鐘。在每一噴霧后，取讀數并取3分鐘平均值。呼吸道反應性以每劑乙酰甲基膽堿的Penh表示。
評定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的細胞因子在如上述測定肺功能后，將小鼠插入導管，并用5×0.5ml的0.9％緩沖鹽水經通過氣管切開術插入的聚乙烯管灌洗。將灌洗液離心(500g，10分鐘，4℃)，并將細胞沉淀再懸浮于0.5ml的Hank’s平衡的鹽溶液中。通過將10μl的細胞懸浮液加入90μl的0.4％臺盼藍中，并在光學顯微鏡下在Newbauer室中計數而獲得總細胞數。從經Leu’s染色的cytospin制備物中進行區別細胞計數。通過肉眼觀測標準形態差異，鑒別細胞并區分為嗜酸粒細胞，淋巴細胞，嗜中性粒細胞和巨噬細胞。在400×倍放大下計數500個細胞，并計算每種細胞類型的百分比和絕對值。
BALF中細胞因子的水平通過ELISA測定并用重組細胞因子標準曲線以pg/ml表示。進行捕捉和生物素酰化的單克隆抗體是R4-6A2(INF-γ的捕捉抗體名稱)和XMG1.2(生物素酰化的INF-γ的名稱)，它們得自PharMingen，San Diego，CA；及11B11(IL-4的捕捉抗體名稱)，和BVD6(生物素酰化的IL-4名稱)，它們得自PharMingen。檢測限為18pg/ml。
統計學分析進行ANOVA對比各組之間的不同。通過方差分析，使用Duncan多范圍試驗區分試驗組和對照組之間的差異。p＜0.05認為有統計學意義。結果在體內抑制過敏原特異性IgE應答在給予疫苗前一周，將接受載體(未重組的細菌)，pSDDerp5轉化的細菌，和重組Der p5的小鼠，用過敏原Der p5腹膜內致敏，并在致敏后3周經吸入攻擊。在用過敏原攻擊3周后，用ELISA測定血清中抗Der p5 IgE的存在情況。結果示于圖1。在載體處理組中Der p5特異性IgE明顯增加。相反，經pSDDerp5處理的小鼠呈現Der p5特異性IgE合成被抑制80％以上。通過基因修飾的乳酸菌抑制IgE合成是特異于Der p5過敏原的，因為在用Der p2對經pSDDerp5處理的小鼠進行的攻擊實驗中，仍產生Der p2特異性IgE。因此，直接口服表達過敏原的乳酸菌能有效抑制該過敏原特異性IgE產生。另外，此抑制效果遠遠高于只口服重組過敏原組(見圖1的C組)，在疫苗中包含重組過敏原未使只口服表達過敏原的細菌的效果提高到可檢測水平(對照組B和D)。在實驗組中Der p5特異性IgG2a的產生沒有明顯不同。
在體內抑制呼吸道高反應性(AHR)活乳酸菌疫苗的功效和特異性是用測定呼吸道(支氣管肺)高反應性評定的。對氣霧化乙酰甲基膽堿的呼吸道應答是在最后吸入攻擊8小時后的有意識的不受限制的小鼠中測定的。在所有小鼠中，獲得對1-100mg/ml的乙酰甲基膽堿的完整劑量應答曲線。在所有組的小鼠中，基礎Penh值和氣霧化鹽水所致的Penh值沒有明顯不同。在陰性疫苗對照動物中(A，C，和E組)，與基礎值相比，Der p5攻擊誘導明顯提高的對乙酰甲基膽堿的呼吸道反應性。相反，用LA-gm或ST-gm處理(B，D，和F組)，在10-100mg/ml的乙酰甲基膽堿范圍明顯抑制AHR(圖2)。因此Der p5誘導的AHR能通過給予表達過敏原的乳酸菌而消除。
經乙酰甲基膽堿攻擊后呼吸道抗性的提高與呼吸道高反應性相關。細胞浸潤(例如嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞浸潤)的增加與呼吸道炎癥相關。呼吸道高反應性和炎癥是過敏性哮喘的特點。
疫苗對支氣管肺泡細胞數的作用在攻擊后支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的細胞數用于作為對接觸過敏原的應答的滲入支氣管肺道中的細胞數的測量(圖3)。與載體處理的A組和重組過敏原處理的B組相比，接受表達過敏原的細菌的動物(B和D組)的BALF中嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞數明顯較低(p＜0.05)。在實驗組中，巨噬細胞和淋巴細胞的數量沒有明顯不同。因此，Der p5攻擊誘導嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞的浸潤，此浸潤可通過活乳酸菌疫苗明顯抑制。
權利要求
1.一種包含一種DNA分子的轉化的乳酸菌，該DNA分子包含(1)編碼蛋白質過敏原的核苷酸序列，和(2)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子，其中攝取足量的該細菌降低隨后接觸蛋白質過敏原的該個體體內蛋白質過敏原特異性IgE的產生。
2.權利要求1的細菌，其中該細菌是乳桿菌屬細菌。
3.權利要求2的細菌，其中該細菌是嗜酸乳桿菌。
4.權利要求1的細菌，其中該細菌是鏈球菌屬細菌。
5.權利要求4的細菌，其中該細菌是嗜熱鏈球菌。
6.權利要求1的細菌，其中該蛋白質過敏原是塵螨過敏原。
7.權利要求6的細菌，其中塵螨是Dermatophagoidespteronyssinus。
8.權利要求7的細菌，其中過敏原是Der p5。
9.權利要求1的細菌，其中啟動子是組成型基因啟動子。
10.一種包含DNA分子的轉化的嗜酸乳桿菌，該DNA分子包含表達Der p5的基因，其中攝取足量的該細菌降低在隨后接觸Derp5的該個體體內Der p5特異性IgE產生。
11.一種包含DNA分子的轉化的嗜熱鏈球菌，該DNA分子包含表達Der p5的基因，其中攝取足量的該細菌降低在隨后接觸Derp5的該個體體內Der p5特異性IgE產生。
12.一種降低接觸塵螨過敏原的個體體內IgE產生的方法，包括給予個體非病原性革蘭氏陽性菌，其包含(i)編碼塵螨過敏原的核苷酸序列，和(ii)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子；和在該個體體內足量表達此過敏原，以抑制隨后接觸過敏原的該個體體內過敏原特異性IgE的產生。
13.權利要求12的方法，其中該細菌是乳桿菌屬，鏈球菌屬，或雙歧桿菌屬的細菌。
14.權利要求13的方法，其中細菌是乳桿菌屬細菌。
15.權利要求14的方法，其中細菌是嗜酸乳桿菌。
16.權利要求12的方法，其中塵螨過敏原是Dermatophagoidespteronyssinus，D.farinae，D.microceras，Tyrophagus putesentiae，Lepidoglyphus domesticus，L.destructor，Acarus siro，Euroglyphusmaynei，或Biomia tropicali的一種過敏原。
17.權利要求16的方法，其中塵螨過敏原是Dermatophagoidespteronyssinus。
18.權利要求12的方法，其中過敏原是蛋白質過敏原。
19.權利要求12的方法，其中過敏原是Der p5過敏原。
20.權利要求17的方法，其中過敏原是Der p5。
21.權利要求12的方法，其中啟動子是組成型啟動子。
22.權利要求12的方法，其中表達過敏原的細菌是口服給予的。
23.權利要求22的方法，其中表達過敏原的細菌是以酸奶形式給予的。
24.一種降低接觸塵螨過敏原的個體體內IgE產生的方法，包括給予個體表達塵螨過敏原的乳酸菌；和在該個體體內足量表達該過敏原，以抑制隨后接觸過敏原的該個體體內過敏原特異性IgE的產生。
25.權利要求24的方法，其中塵螨過敏原是Dermatophagoidespteronyssinus，D.farinae，D.microceras，Tyrophagus putesentiae，Lepidoglyphus domesticus，L.destructor，Acarus siro，Euroglyphusmaynei，或Biomia tropicali的一種過敏原。
26.權利要求24的方法，其中塵螨過敏原是Dermatophagoides屬的塵螨的一種過敏原。
27.權利要求24的方法，其中細菌是乳桿菌屬細菌。
28.權利要求24的方法，其中細菌是口服給予的。
29.權利要求28的方法，其中細菌是作為酸奶的組分給予的。
30.權利要求24的方法，其中個體是人。
31.一種降低接觸氣源性過敏原的個體體內IgE產生的方法，包括給予個體非病原性革蘭氏陽性菌，其包含(i)編碼氣源性過敏原的核苷酸序列，和(ii)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子；和在該個體體內足量表達該過敏原，以抑制隨后接觸氣源性過敏原的該個體體內氣源性過敏原特異性IgE的產生。
32.一種減輕接觸塵螨過敏原的個體支氣管肺部充血的方法，包括給予個體表達塵螨過敏原的乳酸菌；和在該個體體內足量表達該過敏原，以減輕隨后接觸塵螨過敏原的該個體的支氣管肺部充血。
33.權利要求32的方法，其中細菌是乳桿菌屬細菌，塵螨過敏原是Dermatophagoides pteronyssinus。
34.一種非病原性革蘭氏陽性菌，其包含(i)編碼塵螨過敏原的核苷酸序列，和(ii)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子，其中該細菌用于降低接觸塵螨過敏原的個體體內IgE的產生。
35.一種非病原性革蘭氏陽性菌，其包含(i)編碼氣源性過敏原的核苷酸序列，和(ii)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子，其中該細菌用于降低接觸氣源性過敏原的個體體內IgE的產生。
全文摘要
本發明涉及轉化的乳桿菌屬或鏈球菌屬的細菌,該細菌具有一DNA分子,該DNA分子包括(1)編碼蛋白質過敏原的核苷酸序列,和(2)可操縱的與此核苷酸序列連接的啟動子。
文檔編號A61K39/35GK1385528SQ0210348
公開日2002年12月18日 申請日期2002年2月6日 優先權日2001年2月7日
發明者許清祥, 常玉強 申請人:景岳生物科技股份有限公司