專利名稱：聯合應用酶抑制劑及其藥學組合物治療和預防動脈硬化、預防和治療根據杰爾－庫姆斯 ...的制作方法
技術領域：
本發明涉及通過氨基酞酶N(APN；E.C.3.4.11.2；CD13)、二肽酰肽酶IV(DP IV；E.C.3.4.14.5；CD26)、脯氨酰基寡肽酶(POP；脯氨酰基肽鏈內切酶；PEP；E.C.3.4.21.26)、位于膜上的氨基酞酶P(X-脯氨酸-氨基酞酶；APP；XPNPEP2；E.C.3.4.11.9)、血管緊張素轉換酶(ACE；E.C.3.4.15.1；CD143)的抑制劑的聯合效果或分別通過對上述酶活性的聯合抑制作用抑制DNA合成，因此抑制免疫細胞的增殖，其抑制作用是所述酶在其氨基酸衍生物、肽或肽的衍生物的基礎上的特異抑制劑的刺激應用的結果，通過該結果抑制免疫細胞的激活、DNA合成，從而抑制免疫細胞的增殖。
本發明還涉及通過氨基酞酶N(APN；E.C.3.4.11.2；CD13)、二肽酰肽酶IV(DP IV；E.C.3.4.14.5；CD26)抑制劑的聯合作用對TH2細胞產生細胞因子(白介素4，IL-4)的抑制以及對增殖必需的DNA合成的抑制，其結果為所述的酶在其氨基酸衍生物、肽或肽的衍生物的基礎上的特異抑制劑刺激應用來抑制TH2細胞的激活、增殖(DNA合成)，以及細胞因子(IL-4)的產生。
本發明也涉及聯合使用氨基酞酶N(APN；E.C.3.4.11.2；CD13)和二肽酰肽酶IV(DP IV；E.C.3.4.14.5；CD26)的抑制劑抑制角質細胞合成所必需的DNA合成。作為同時或立即相繼應用上述酶或其氨基酸衍生物、肽或肽的衍生物的基礎上的同功酶的特異抑制劑的結果，抑制角質細胞的增殖(DNA合成)。
這類抑制劑可應用于所有與自身免疫發病相關的疾病，這類疾病及發病過程及進展基于或由免疫細胞、特別是自身反應性T細胞的激活和增殖構成。同樣的機制適用于其它-些炎癥疾病，如動脈硬化，其中T淋巴細胞在疾病的發展和導致慢性化中起重要作用。
研究顯示定位于膜上的肽酶如DP IV或APN在免疫細胞，特別是T淋巴細胞的激活和集落性表達過程中起重要作用(Fleischer BCD26-種參與T細胞激活的表面蛋白酶。今日免疫(Immunology Today)1994；15180-184；Lendeckel U等，丙氨酰氨基肽酶在人T細胞生長和功能中的作用，國際分子醫學雜志(Intenational Journal ofMolecular Medicine)1999；417-27；Riemann D等，CD13-不僅僅是白血病分型的一種標志物，今日免疫(Immunology Today)1999；2083-88)。有絲分裂素刺激的單核細胞(MNC)或聚集的T淋巴細胞的多種功能，如DNA合成和免疫刺激細胞因子(IL-2，IL-6，IL-12，IFN-γ)的產生及分泌以及B細胞的輔助功能(合成IgG和IgM)可能在DP IV或APN的特異抑制劑存在時被抑制(Schon E等二肽酰肽酶IV，一種參與T淋巴細胞增殖的膜酶。Biomed.Biochim.Acta1985；2K9-K15；Schon E等二肽酰肽酶IV在人T淋巴細胞激活中的作用，二肽酰肽酶IV的抑制劑和抗體在體外抑制淋巴細胞的增殖和免疫球蛋白的合成。歐洲免疫學雜志(Eur.J.Immunol)1987；171821-1826；Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360；Lendeckel U等通過有絲分裂原活化在人T細胞中誘導膜丙氨酰氨基肽酶基因及其在膜上的表達，生化雜志(Biochem.J.)1996；319817-823；Kahne T等二肽酰肽酶IV一種參與調節T細胞生長的細胞表面肽酶(綜述) 國際分子醫學雜志(IntenationalJournal of Molecular Medicine)1999；43-15；Lendeckel U等丙氨酰氨基肽酶在人T細胞生長和功能中的作用(綜述)。國際分子醫學雜志(Intenational Journal of Molecular Medicine)1999；417-27)。
另一方面，近年來的科學研究將動脈硬化定為一種炎癥疾病，而T淋巴細胞在該病的發展和進程中起決定性作用(Ross R動脈硬化-一種炎癥疾病。新英格蘭醫學雜志(New England J.Med.)1999；340(2)115-126)。根據那些發現，將動脈硬化損傷理解為一系列特異的細胞和分子反應，合起來即明確的特征為炎癥反應。這類損傷最初發生在大中等彈性和肌肉動脈上，導致心臟、大腦和四肢缺血(擾亂循環)以至引起以上器官的梗死。動脈硬化損傷形成于特定的動脈位置，而分支和彎曲作用特性改變了血流、偏離應力以及紊亂的產生(Gotlieb AI等流變學在冠狀動脈粥樣硬化疾病中的作用，Fuster V，RossR，Topol EJ編輯，動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病，第1卷，費城Lippincott-Raven，1996595-606)。血管內皮細胞在那些位置產生特定的分子，這些分子負責T淋巴細胞和單核細胞的趨化、結合、聚集和激活。T淋巴細胞是動脈粥樣硬化所有時期中必需的炎癥細胞。T細胞從外周血浸潤至動脈硬化灶，并在損傷的位置增殖(Jonasson L等T細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞在人動脈硬化灶的區域性聚集，動脈粥樣硬化(Arteriosclerosis)，1986；6131-138；Van der Wal AC等人的動脈硬化損傷原位免疫表型分析提示為一種免疫介導的應答。Lab Invest.1989；61166-170)。這類激活的T淋巴細胞在動脈硬化損傷部位的聚集的結果是大量表達丙氨酰氨基肽酶和二肽酰肽酶IV、以及趨化因子(chemokines)、細胞因子、生長因子和蛋白酶的釋放，由于其它免疫細胞的聚集和激活，這類化合物進一步加重病情(Libby P和Ross R.細胞因子和生長調節分子，Fuster V，RossR，Topol EJ編輯，動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病，第1卷，費城Lippincott-Raven，1996585-594)。
另外，定位于動脈粥樣硬化灶的單核細胞的特征為持續性表達如丙氨酰氨基酞酶(APN)的酶，而且，如本發明所顯示的，其生長和功能可以被上述酶的抑制物有效抑制，這同樣也適應于能表達外肽酶的內皮細胞。
血管緊張素轉換酶在動脈粥樣硬化的發病機制中起特殊的作用。所述的酶可使血管緊張素I(ang I)轉換為血管緊張素II(ang II)，而ang II可顯著增加血壓。高血壓是促進動脈粥樣硬化危險性的重要因子，患高血壓的患者經常有血液ang II水平的升高。另外，ang II可通過刺激平滑肌細胞(血管)的生長成為前-動脈原(Chobanian AV等，高血壓蛋白原酶血管緊張素系統和動脈粥樣硬化性血管疾病。Fuster V，RossR，Topol EJ編輯，動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病，第1卷，費城Lippincott-Raven，1996237-242；Gibbons GH等，血管平滑肌細胞肥大與過度增生自分泌型TGF-β1的表達決定對血管緊張素II的生長反應。J Clin Invest 1992；90456-461)。此外，ang II也通過增加脂肪加氧酶活性從而大量釋放促炎癥介質來增強炎癥反應。
本發明是基于一個意外的發現，即抑制劑通過同時作用或影響以下酶活性或生物活性((1)二肽酰肽酶IV和氨基肽酶N；(2)二肽酰肽酶IV和血管緊張素轉換酶；(3)二肽酰肽酶IV和脯氨酰基寡肽酶以及(4)二肽酰肽酶IV和X-脯氨酸氨基肽酶)，從而抑制DNA合成并因此抑制單核細胞(MNC)和T細胞的增殖，而這種作用是任何單獨一種酶抑制劑即使在增加劑量時也不能達到的。盡管所述的抑制劑最終也能影響同樣的過程，即DNA合成，由此影響免疫細胞的增殖，但這種作用本質上不顯著而且也不持久。由于上述酶活性功能的相互疊加，導致同時抑制兩種或兩種以上所述酶時，如本發明所顯示的，對DNA合成以及增殖產生一種大于加成或超加成的抑制作用。
本發明顯示，同時應用上述酶的抑制劑或同時應用相應的制劑和給藥形式時，顯然適應于治療炎癥疾病如動脈粥樣硬化，在這類疾病中T淋巴細胞的增殖和激活起中心和重要的作用。
詳細地說，本發明是基于這樣一個發現，即同時給予抑制以下酶活性的物質時，對單核細胞(MNC)和T細胞的DNA合成的抑制以大于加成或超加成的方式進行(1)二肽酰肽酶IV和氨基肽酶N；(2)二肽酰肽酶IV和血管緊張素轉換酶；(3)二肽酰肽酶IV和脯氨酰基寡肽酶以及(4)二肽酰肽酶IV和X-脯氨酸氨基肽酶應用酶抑制劑是一種治療上述疾病的新方法和輔助方式。
本發明的二肽酰肽酶IV、氨基肽酶N、脯氨酰基寡肽酶、血管緊張素轉換酶和X-脯氨酸氨基肽酶的抑制劑可以以下藥學實用性復合物劑型來應用抑制劑、底物、擬底物、具抑制作用的多肽和多肽衍生物以及該酶的抗體。DP IV的優選效應物是，如Xaa-脯氨酸二肽相應的衍生物，優選的是二肽膦酸二芳基酯，二肽硼酸(boronic acid)(如脯氨酸-boro-脯氨酸)及其鹽Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n多肽(n＝從0至10)，相應的衍生物及其鹽，其中Xaa分別是一種α-氨基酸或亞氨基酸或一種α-氨基酸衍生物或亞氨基酸衍生物，優選的是Nε-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸，L-脯氨酸，L-色氨酸，L-異亮氨酸，L-纈氨酸和環胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷以及作為酰胺結構的衍生物。這類化合物及其制備物在一份早期的專利中進行了描述(K.Neubert等，DD 296 075 A5)。
抑制物與已知的載體物質同時給藥。一方面，給藥途徑可以是局部用藥，如乳劑、軟膏、糊劑、膠劑、溶液、噴霧劑、脂質體、可搖勻混合物、水狀膠質敷料和包含可滴入性藥劑的其它皮膚基/載體。另一方面，可以合適的配方或合適的蓋侖派醫學形式通過口服、經皮、靜脈內、皮下、皮內、或肌肉內途徑全身給藥。
研究發現，I型過敏反應如支氣管哮喘或花粉熱的發生是基于免疫細胞，特別是TH2細胞的激活、增殖和細胞因子(特別是白介素4)的產生(D.D.Corry等，IgG反應的誘導和調控，Nature1999；402B18-B23)。
研究顯示，定位于膜上的多肽酶如DP IV或APN，在免疫細胞特別是T淋巴細胞的激活和集落性增生過程中起關鍵作用(Fleischer BCD26一種參與T細胞激活的表面蛋白酶。今日免疫(Immunology Today)1994；15180-184；Lendeckel U等，丙氨酰氨基肽酶在人T細胞生長和功能中的作用，國際分子醫學雜志(Intenational Journal ofMolecular Medicine)1999；417-27；Riemann D等，CD13-不僅僅是白血病分型的一種標志物，今日免疫(Immunology Today)1999；2083-88)。有絲分裂素刺激的單核細胞(MNC)或趨化的T淋巴細胞的多種功能，如DNA合成和免疫刺激細胞因子(IL-2，IL-6，IL-12，IFN-γ)的分泌以及B細胞的輔助功能(合成IgG和IgM)可能在DP IV或APN的特異抑制劑存在時被抑制(Schon E等二肽酰肽酶IV，一種參與T淋巴細胞增殖的膜蛋白酶。Biomed.Biochim.Acta1985；2K9-K15；Schon E等二肽酰肽酶IV在人T淋巴細胞激活中的作用，二肽酰肽酶IV的抑制劑和抗體在體外抑制淋巴細胞的增殖和免疫球蛋白的合成。歐洲免疫學雜志(Eur.J.Immunol)1987；171821-1826；Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360；Lendeckel U等通過有絲分裂原活化在人T細胞中誘導膜丙氨酰氨基肽酶基因及其在膜上的表達，生化雜志(Biochem.J.)1996；319817-823；Kahne T等二肽酰肽酶IV一種參與調節T細胞生長的細胞表面肽酶(綜述) 國際分子醫學雜志(IntenationalJournal of Molecular Medicine)1999；43-15；Lendeckel U等丙氨酰氨基肽酶在人T淋巴細胞生長和功能中的作用(綜述)。國際分子醫學雜志(Intenational Journal of Molecular Medicine)1999；417-27)。
另一方面，近年來的科學研究將I型過敏反應定為一種炎癥疾病，其中TH12淋巴細胞在該病的發展和進程中起決定性作用(D.D.Corry等，IgE反應的誘導和調控，Nature 1999；402B18-B23；P.J.Barnes過敏性疾病的治療方案，Nature 1999；402B31-B38)。
IL-4是B細胞增殖、刺激IgE的產生和低親和力的Fc-IgE受體表達的輔助細胞因子。而且，IL-4可以增強TH2細胞的自身誘導，以及調控嗜酸性細胞和肥大細胞的增殖和活性。這是IL-4在I型過敏反應中起決定性作用的原因(D.P.Stites，A.I.Terr，T.G.Parslow醫學免疫學(Medicai Immunology)。Appelton & Lange，Stamfort，CT，1997)。
本發明也是基于一個意外的發現，即同時應用二肽酰肽酶IV和氨基肽酶N的抑制劑時，其抑制有絲分裂原刺激的單核細胞(MNC)增殖(DNA合成)和IL-4產生的效果是任何單獨一種酶抑制劑即使增加劑量也不能達到的。盡管所述的抑制劑在單獨使用時，最終也能影響同樣的過程，即DNA合成以及TH2細胞產生IL-4，但這種作用本質上不顯著而且也不持久。由于上述酶活性的相互疊加，從而同時抑制兩種酶時，如本發明所顯示的，對DNA合成以及增殖產生一種大于加成或超加成的抑制作用。
本發明顯示，同時應用酶DP IV和APN的抑制物或相應的制備物和藥劑時，顯然適合于治療I型過敏反應，在I型過敏反應的發生過程中T淋巴細胞的增殖和活化起中心和重要的作用。
詳細地講，本發明是基于這樣一個發現，即單核細胞(MNC)的DNA合成和IL-4的產生可在同時應用酶DP IV和APN的抑制劑時，被以一種大于加成或超加成的形式所抑制。
應用酶抑制劑治療上述疾病是一種新方法和一種補充方式。
按照本發明，二肽酰肽酶IV、氨基肽酶N的抑制劑可以以下藥學上實用的復合物劑型來應用抑制劑、底物、擬底物、具抑制作用的肽或肽衍生物以及該酶的抗體。DP IV的優選效應物是，如Xaa-脯氨酸二肽相應的衍生物，優選的是二肽膦酸二芳基酯，二肽硼酸(如脯氨酸-boro-脯氨酸)及其鹽Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n多肽(n＝從0至10)、相應的衍生物及其鹽，其中Xaa分別是一種α-氨基酸或亞氨基酸或一種α-氨基酸衍生物或亞氨基酸衍生物，優選的是NE-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸，L-脯氨酸，L-色氨酸，L-異亮氨酸，L-纈氨酸和環胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷以及作為酰胺結構的衍生物。這類化合物及其制劑在一份早期的專利中進行了描述(K.Neubert等，DD 296 075 A5)。
丙氨酰氨基肽酶的優選抑制劑是貝他定(烏苯美司)、海葵素、脯氨酸抑制素(probestine)、苯丙氨酸抑制素、RB3014或亮氨酸抑制素。
抑制物與已知的載體物質同時給藥。一方面，給藥途徑可以是局部用藥，如乳劑、軟膏、糊劑、膠劑、溶液、噴霧劑、脂質體、可搖勻混合物、水狀膠質敷料和包含可滴入性藥劑的其它皮膚基/載體。另一方面，可以合適的配方或合適的蓋侖派醫學形式通過口服、經皮、靜脈內、皮下、皮內、或肌肉內途徑全身給藥。
多種皮膚疾病伴有毛囊和表皮的過度角質化以及角質細胞的過度增殖。這類疾病包括表皮炎性和非炎性的過度增生(如先天性魚鱗癬和銀屑病)，良性和惡性的表皮集落性增生(如疣、濕疣、光化性角化病/癌前病變)，良性和惡性的毛囊過度增生(如毛囊角質化)以及良性和惡性上皮皮膚附屬器腫瘤和初期和反應性指(趾)甲細胞過度增生。詳細列于表1中。
多肽酶如二肽酰肽酶IV、氨基肽酶N或其它具類似作用的酶在細胞間相互作用的調控中非常重要。這是由于這類酶與其它定位于細胞質膜的胞外酶一樣，可以與細胞外結構相互作用，通過酶催化的水解作用激活或滅活肽信使物質，因此，在細胞間信息傳遞中起重要作用(Yaron A等依賴于脯氨酸的多肽和蛋白質的結構和生物學性質。Crit Rev Biochem Mol Biol 1993；2831-81；Vanhoof G等脯氨酸在多肽的基序及其生物學遞呈。FASEB J 1995；9736-744)。
研究顯示，定位于膜上的多肽酶如DPIV或APN，在免疫細胞特別是T淋巴細胞的激活和集落表達過程中起關鍵作用(Fleischer BCD26一種參與T細胞激活的表面蛋白酶。今日免疫(Immunology Today)1994；15180-184；Lendeckel U等，丙氨酰氨基肽酶在人T細胞生長和功能中的作用，國際分子醫學雜志(Intenational Journal ofMolecular Medicine)1999；417-27；Riemann D等，CD13-不僅僅是白血病分型的一種標志物，今日免疫(Immunology Today)1999；2083-88)。有絲分裂素刺激的單核細胞(MNC)或趨化的T淋巴細胞的多種功能，如DNA合成和免疫刺激細胞因子(IL-2，IL-6，IL-12，IFN-γ)的分泌以及B細胞的輔助功能(合成IgG和IgM)可能在DP IV或APN的特異抑制劑存在時被抑制(Schon E等二肽酰肽酶IV，一種參與T淋巴細胞增殖的膜蛋白酶。Biomed.Biochim.Acta1985；2K9-K15；Schon E等二肽酰肽酶IV在人T淋巴細胞激活中的作用，二肽酰肽酶IV的抑制劑和抗體在體外抑制淋巴細胞的增殖和免疫球蛋白的合成。歐洲免疫學雜志(Eur.J.Immunol)1987；171821-1826；Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360；Lendeckel U等通過有絲分裂原活化在人T細胞中誘導膜丙氨酰氨基肽酶基因和膜上表達，生化雜志1996；319817-823；Kahne T等二肽酰肽酶IV一種參與調節T細胞生長的細胞表面肽酶(綜述)國際分子醫學雜志(Intenational Journal of MolecularMedicine)1999；43-15；Lendeckel U等丙氨酰氨基肽酶在人T淋巴細胞生長和功能中的作用(綜述)。國際分子醫學雜志(Intenational Journal of Molecular Medicine)1999；417-27)。已知可以通過協同抑制劑對位于免疫細胞的二肽酰肽酶IV進行抑制，來治療自身免疫性疾病和移植排斥反應(如歐洲專利0 764 151 A1；WO 95/29691；歐洲專利0 731 789 A1；歐洲專利0 528 858 A1)。
本發明也是基于一個意外的發現，即在給定劑量時，同時應用在角質細胞內或膜上表達的二肽酰肽酶IV/CD26以及氨基肽酶N/CD13或其它類似的酶的抑制劑時，其抑制細胞增殖(DNA合成)的效果是任何單獨一種酶抑制劑所不能達到的。盡管所述的抑制劑在單獨使用時，最終也能影響同樣的過程，即抑制DNA合成從而抑制角質細胞的增殖，但這種作用本質上不顯著而且也不持久。由于上述酶活性的相互疊加，從而同時抑制兩種酶時，如本發明所顯示的，在低劑量時，對DNA合成以及細胞增殖產生一種大于加成或超加成的抑制作用。
本發明顯示，同時應用酶DP IV和APN或其類似酶的抑制物或相應的制劑和藥劑顯然適合于預防和治療表皮炎性和非炎性的過度增殖(如先天性魚鱗癬和銀屑病)，良性和惡性的表皮集落性增生(如疣、濕疣、光化性角化病/癌前病變)，良性和惡性的毛囊過度增生(如毛囊角質化)以及良性和惡性上皮皮膚附屬器腫瘤和初期和反應性指(趾)甲細胞過度增生，這是由于在這類疾病的發病過程中，表皮和毛囊角質細胞以及遷移層粘膜區的角質細胞的增殖和活化非常重要。
除角質細胞外，T淋巴細胞在皮膚炎癥疾病中也起重要作用。像角質細胞一樣，T細胞也表達上述的肽酶DP IV和APN。因此，所要求或被保護的角質細胞的治療作用被T細胞所強化。這也是德國專利申請100 25 464.0“聯合應用酶抑制劑及其藥學制劑治療自身免疫疾病如類風濕性關節炎、紅斑狼瘡、多發性硬化癥、胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、節段性回腸炎、結腸潰瘍、銀屑病、神經性皮炎、腎小球腎炎、間質性腎炎、脈管炎、自身免疫性甲狀腺疾病、自身免疫性溶血性貧血以及移植和腫瘤”的主題。
詳細地講，本發明是基于這樣一個發現，即在同時應用酶DP IV和APN的抑制劑時，HaCaT角質細胞的DNA合成被以加成或低濃度時超加成的形式所抑制。
迄今為止，治療上述疾病所采用的是局部使用抗增殖和分化的物質(水楊酸、尿素、內源性和合成的視黃醛、維生素D3衍生物、皮質甾類)以及全身使用部分免疫抑制劑和抗增生制劑(如環孢菌素、皮質甾類、視黃醛)。特別是在全身給藥時，經常觀察到不期望的副作用。聯合應用DP IV和APN的抑制劑是一種新的，預計非常有效而且價格低廉的方法，是已知治療方法的有價值的替代療法。
按照本發明，二肽酰肽酶IV、氨基肽酶N或其它類似酶的抑制劑可以以下藥學上實用的復合物劑型來應用抑制劑、底物、擬底物、具抑制作用的肽或肽衍生物以及該酶的抗體。DP IV的優選效應物是，如Xaa-脯氨酸二肽相應的衍生物，優選的是二肽膦酸二芳基酯，二肽硼酸(如脯氨酸-boro-脯氨酸)及其鹽，Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n肽(n＝從0至10)，其相應的衍生物及其鹽，其中Xaa分別是一種α-氨基酸或亞氨基酸或一種α-氨基酸衍生物或亞氨基酸衍生物，優選的是NE-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸，L-脯氨酸，L-色氨酸，L-異亮氨酸，L-纈氨酸和環胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷以及作為酰胺結構的衍生物。這類化合物及其制劑在一份早期的專利中進行了描述(K.Neubert等，DD 296 075 A5)。
丙氨酰氨基肽酶的優選抑制劑是貝他定(烏苯美司)、海葵素、脯氨酸抑制素、苯丙氨酸抑制素、RB3014或亮氨酸抑制素。
抑制物與已知的載體物質同時給藥。一方面，給藥途徑可以是局部用藥，如乳劑、軟膏、糊劑、膠劑、溶液、噴霧劑、脂質體、可搖勻混合物、水狀膠體敷料、膏藥和其它同類的新型載體物質，噴霧注射劑和包含其它可滴入形式的其它皮膚基/載體。另一方面，可以合適的配方或合適的蓋侖派醫學形式通過口服、經皮、靜脈內、皮下、皮內、或肌肉內途徑全身給藥。
表1 表皮過度增生的情況例如 非炎癥 例如 炎癥先天性魚鱗癬 銀屑病及亞型包括指甲及毛發獲得性魚鱗癬(類瘤) 牛皮癬及亞型類牛皮癬掌跖角化病 牛皮癬角化病先天性/獲得性PARA瘤 慢性單純苔癬+活動性過度增生苔癬(如特應性皮癬)毛囊角化病 似苔癬反應表皮痣 炎性線形疣狀表皮痣頸部菱形皮膚 慢性紅斑狼瘡疾病/SCLE/系統性紅斑狼瘡黑棘皮癥 毛發紅糠疹厚皮病 M.GROVER白斑剝脫性皮炎伴隨角質細胞的過度增生表皮集落性增生良性 惡性人乳頭(狀)瘤病毒相關病(疣、濕疣) 人乳頭(狀)瘤病毒相關腫瘤皮脂溢性角化病 光化性角化病/癌前病變狀態肛門棘皮瘤炎性硬結 博溫氏病+博溫氏癌表皮囊腫 佩吉特病+佩吉特氏癌粟粒疹 血小板性上皮癌古熱羅氏綜合癥 默克爾細胞癌毛囊過度增生的情況良性 惡性毛囊角化病 毛囊細胞瘤毛囊過度角化 增生性毛鞘囊腫眉部疤痕性紅斑 混合腫瘤多毛癥毛鞘囊腫上皮皮膚附屬器腫瘤良性 惡性骨痂 外分泌型/旁分泌型癌+亞型瘺管及導管腫瘤汗腺腺瘤螺旋性腺瘤圓柱瘤原發和活動性指(趾)甲細胞過度增生先天性(如指(趾)甲肥厚癥) 非傳染性獲得性傳染性霉菌病實施例1通過DP IV和APN的合成抑制劑與人T淋巴細胞培養抑制DNA合成本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周血T淋巴細胞DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，T細胞與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽太酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。
圖1(第1/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例2DP IV和APN的合成抑制劑與人外周血單核細胞培養時對細胞DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周血單核細胞(MNC)DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，MNC與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖2(第2/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例3DP IV和POP的合成抑制劑與人T淋巴細胞培養對細胞DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala噻唑酐)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人血T淋巴細胞DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，T細胞與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖3(第3/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例4DP IV和POP的合成抑制劑與人外周血單核細胞培養對細胞DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala噻唑酐)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周血單核細胞(MNC)DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，T細胞與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖4(第4/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例5DP IV和ACE的合成抑制劑與人T淋巴細胞培養對細胞DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和血管緊張素轉換酶(卡托普利)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周血T淋巴細胞DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，T細胞與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖5(第5/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例6DP IV和ACE的合成抑制劑與人外周血單核細胞培養對細胞DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐(thiazolidide)＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周血單核細胞(MNC)DNA的合成。在所述的抑制劑存在的情況下，MNC與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖6(第6/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成大于加成或超加成的抑制作用。
實施例7單獨或同時給予DP IV(I49＝Lys(Z(NO2))-噻唑酐)和APN(海葵素)的抑制劑對人外周血單核細胞(MNC)增殖的抑制(圖7第7/14頁)實施例8單獨或同時給予DP IV(I49＝Lys(Z(NO2))-噻唑酐)和APN(海葵素和脯氨酸抑制素)的抑制劑對人T細胞系KARPAS-299增殖的抑制(圖8第8/14頁)實施例9單獨或同時給予DP IV(I49＝Lys(Z(NO2))-噻唑酐)和APN(海葵素和脯氨酸抑制素)的抑制劑對人外周血T細胞增殖的抑制(圖9第9/14頁)實施例10單獨或同時給予DP IV(I49＝Lys(Z(NO2))-噻唑酐)和X-脯氨酸-氨基酞酶(APP)(APSTATINE)的抑制劑對植物凝血素(PHA)激活的人單核細胞(MNC)增殖的抑制(圖10第10/14頁)實施例11通過用DP IV和APN的合成抑制劑培養對外周血中由商陸-有絲分裂素(PWM)刺激的人單核細胞(MNC)DNA合成的抑制本發明研究顯示，DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以一種加成方式抑制人外周血中由商陸-有絲分裂素(PMN)刺激的人單核細胞(MNC)DNA的合成。MNC細胞與所述抑制劑共同培養72小時，DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖11(第11/14頁)顯示劑量依賴性的、對DNA合成的加成抑制作用。
實施例12通過用DP IV和APN的合成抑制劑培養對外周血中由商陸-有絲分裂素刺激的人單核細胞產生白介素4的抑制本發明研究有趣地顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以以加成或超加成方式抑制人外周中由商陸-有絲分裂素刺激的人單核細胞(MNC)產生細胞因子IL-4(TH2細胞特性)。MNC細胞與所述抑制劑和商陸-有絲分裂素一起培養48小時，IL-4在每種培養上清液中的濃度用Reinhold等描述的商用IL-4分析試劑盒(ELISA)進行檢測(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖12(第12/14頁)顯示劑量依賴性的，對IL-4產生超加成的抑制作用。
實施例13通過DP IV和APN的合成抑制劑與人角質細胞(HaCaT細胞系)培養對DNA合成的抑制本發明研究顯示，同時給予DP IV(LYS(Z(NO2))-噻唑酐＝I49)和APN(海葵素)的抑制劑可以以加成以及在低濃度時超加成方式抑制人角質細胞(HaCaT細胞系)DNA的合成。
人角質細胞系HaCaT是已被采納的研究銀屑病表達DP IV和APN的細胞模型。DP IV在這種重要細胞中的酶活性是30.2±5pkat/106細胞，APN的酶活性是90±4pkat/106細胞。以一種對應方式在同樣細胞中可檢測到DP IV和APN的mRNA(圖13，第13/14頁)。
HaCaT細胞與上述抑制劑共同培養48小時，隨后DNA合成用Reinhold等描述的3H-胸腺嘧啶核苷摻入法進行測定(Reinhold D等，二肽酰肽酶IV的抑制劑在PWM刺激的PBMNC和T細胞中誘導轉化生長因子β1的分泌。免疫學(Immunology)1997；91354-360)。圖14(第14/14頁)顯示對DNA合成的劑量依賴性抑制作用。
權利要求
1.聯合應用二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有相同底物的特異性酶(DP IV相似酶活性)和丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)以及具有相同底物的特異性酶(APN相似酶活性)的抑制劑以加成或超加成方式用于抑制人T淋巴細胞和單核細胞的激活和增殖(DNA合成)以及產生TH2細胞因子中的用途。
2.聯合應用二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有相同底物的特異性酶(DP IV相似酶活性)、丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)以及具有相同底物的特異性酶(APN相似酶活性)的抑制劑以加成或超加成方式抑制人表皮和毛囊角質細胞以及皮膚與粘膜過渡區角質細胞的活化和增殖(DNA合成)。
3.聯合應用二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有相同底物的特異性酶(DP IV相似酶活性)、丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)以及具有相同底物的特異性酶(APN相似酶活性)、X-脯氨酸-氨基酞酶(氨基酞酶P，APN)、血管緊張素轉換酶(ACE)和/或脯氨酰基寡肽酶(POP，脯氨酰基肽鏈內切酶肽酶，PEP)的抑制劑以加成或超加成用于方式抑制人T淋巴細胞和單核細胞的活化、DNA合成和增殖中的用途。
4.根據權利要求1-3中任何-項所述的用途，其中DP IV的抑制物優選是Xaa-脯氨酸二肽(Xaa＝α-氨基酸及側鏈受保護的衍生物)及相應的衍生物，優選的是二肽膦酸二芳基酯、二肽硼酸(如脯氨酸-boro-脯氨酸)及其鹽、Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝從0至10)、相應的衍生物及其鹽及氨基酸(Xaa)-酰胺、相應的衍生物及其鹽，其中Xaa分別是α-氨基酸或側鏈受保護的衍生物，優選的是NE-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-異亮氨酸、L-纈氨酸和環胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷以及作為酰胺結構的衍生物。
5.根據權利要求1-4中任何-項所述的用途，其中優選用作DPIV抑制劑的是酰胺氨基酸如Nε-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸-噻唑酐、吡咯烷和哌啶以及對應的2-氰基噻唑酐、2-氰基吡咯酐(cyanopyrrolidide)和2-氰基哌啶酐(cyanopiperidide)衍生物。
6.根據權利要求1所述的用途，其中作為APN的抑制劑優選使用actinoine、亮氨酸抑制素、苯丙氨酸抑制素、amastatine、bestatine、脯氨酸抑制素、β-巰基氨基酸、α-氨基膦酸、α-氨基膦酸衍生物，優選的是D-苯丙氨酸-ψ[PO(OH)-CH2]-苯丙氨酸-苯丙氨酸及其鹽。
7.根據權利要求3所述的用途，其中作為APP的抑制劑優選使用apstatine、(2S，3R)-HAMH-L-脯氨酸、(2S，3R)-HAPB-L-脯氨酸、以及相應的L-脯氨酸甲基酯、(2S，3R)-HAMH-/(2S，3R)-HAPB-吡咯酐、噻唑酐(HAMH＝3-氨基-2-羥基-5-甲基-己酰，HAPB＝3-氨基-2-羥基-4-苯基-丁酰)及其鹽。
8.根據權利要求3或權利要求7所述的用途，其中作為ACE的抑制劑使用的是卡托普利、依托普利、賴諾普利、cilazopril及其鹽。
9.根據權利要求3、7或8中任何-項所述的用途，其中用作POP(PEP)抑制劑的優選是postatin、eurystatin a或B、Nα-保護的肽醛，優選芐氧基羰基-L-脯氨酰-L-prolinal，以及芐氧基羰基-L-硫代脯氨酰基-L-硫代prolinal，Nα-保護的氨基酸(Xaa)-吡咯酐或噻唑酐(Xaa＝α-氨基酸，優選L-丙氨酸，L-纈氨酸、L-異亮氨酸)以及相應的2-氰基吡咯酐、2-氰基噻唑酐衍生物，底物類似的Nα-保護的膦酸肽二芳基酯、肽重氮甲基酮、prolinal和肽銨甲基酮及其分別的衍生物。
10.根據權利要求1和權利要求4-9任一項所述的聯合抑制劑用于預防和治療炎癥發生性慢性疾病如自身免疫性疾病和動脈粥樣硬化中的用途。
11.根據權利要求1和權利要求4-6任一項所述的聯合抑制劑用于預防和治療I型過敏反應中的用途。
12.根據權利要求1、2和權利要求4-6任何-項所述的聯合抑制劑用于預防和治療炎癥和非炎癥表皮過度增生狀態(如先天性魚鱗癬和銀屑病)、良性和惡性的表皮集落性增生(如疣、濕疣、光化性角化病/癌前病變)、良性和惡性的毛囊過度增生(如毛囊角質化)以及良性和惡性上皮皮膚附屬器腫瘤和原發和反應性指(趾)甲細胞過度增生中的用途。
13.藥學制劑，其包含二肽酰肽酶IV(DP IV)或具有DP IV-類似酶活性的酶的抑制物與任-種丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)以及具有相同底物特異性的酶(APN-類似酶活性)的抑制劑聯合應用以及與任何-種已知載體、添加劑和/或輔助物聯合應用。
14.藥學制劑，包含二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有DP IV-類似酶活性的酶的抑制物與任-種丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)以及具有相同底物特異性的酶(APN-類似酶活性)的抑制劑，以及與X-脯氨酸-氨基酞酶(氨基酞酶P，APP)、血管緊張素轉換酶(ACE)和脯氨酰基寡肽酶(POP，脯氨酰基肽鏈內切酶肽酶，PEP)的抑制劑聯合應用，以及與任何一種已知載體、添加劑和/或輔助物聯合應用。
15.根據權利要求13或14任一項所述的藥學制劑，包含作為DPIV的抑制物優選Xaa-脯氨酸二肽(Xaa＝α-氨基酸及側鏈受保護的衍生物)及相應的衍生物，優選的是二肽膦酸二芳基酯，二肽硼酸(如脯氨酸-boro-脯氨酸)及其鹽、Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝從0至10)、其相應的衍生物及其鹽及氨基酸(Xaa)-酰胺，相應的衍生物及其鹽，其中Xaa分別是-種α-氨基酸或側鏈受保護的衍生物，優選的是Nε-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-異亮氨酸、L-纈氨酸和環胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷以及作為酰胺結構的衍生物。
16.根據權利要求13、14或15所述的藥學制劑，包含作為DP IV的抑制劑的優選的酰胺氨基酸如NE-4-硝基芐氧羰基-L-賴氨酸-噻唑酐，吡咯酐和哌啶酐以及對應的2-氰基噻唑酐、2-氰基吡咯酐和2-氰基哌啶酐衍生物。
17.根據權利要求13至16任-項所述的藥學制劑，包含作為APN的抑制劑的優選的ACTINOINE、亮氨酸抑制素、苯丙氨酸抑制素、AMASTATINE、BESTATINE、脯氨酸抑制素、β-巰基氨基酸、α-氨基膦酸、α-氨基膦酸衍生物，優選的是D-苯丙氨酸-ψ[PO(OH)-CH2]-苯丙氨酸-苯丙氨酸及其鹽。
18.根據權利要求14至17任一項所述的藥學制劑，包含作為APP的抑制劑優選的APSTATINE、(2S，3R)-HAMH-L-脯氨酸、(2S，3R)-HAPB-L-脯氨酸、以及相應的L-脯氨酸甲基酯、(2S，3R)-HAMH-/(2S，3R)-HAPB-吡咯酐、噻唑酐(HAMH＝3-氨基-2-羥基-5-甲基-己酰，HAPB＝3-氨基-2-羥基-4-苯基-丁酮)及其鹽。
19.根據權利要求14至18任一項所述的藥學制劑，包含作為ACE的抑制劑的卡托普利、依托普利、賴諾普利、CILAZOPRIL及其鹽。
20.根據權利要求14至19任一項所述的藥學制劑，包含作為POP(PEP)抑制劑的優選的POSTATIN、擴張抑制素A或B、Nα-保護的肽醛，優選的是芐氧基羧基-L-脯氨酰-L-prolinal，以及芐氧基羧基-L-硫代脯氨酰基-L-硫代prolinal，Nα-保護的氨基酸(Xaa)-吡咯酐或噻唑酐(Xaa＝α-氨基酸，優選的是L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-異亮氨酸)以及相應的2-氰基吡咯酐、2-氰基噻唑酐衍生物，底物類似的Nα-保護的肽膦酸二芳基酯、肽重氮基甲基酮、肽銨甲基酮及其分別的衍生物。
21.根據權利要求14至20任一項所述的藥學制劑，包含兩種或多種DP IV以及具有類似DP IV-酶活性的酶的抑制劑，APN或具有APN-類似酶活性的酶的抑制劑，ACE、POP(PEP)以及XPNPEP2以相對獨立的配方與任何一種已知載體、佐劑和/或添加劑同時或立即連續應用，以達到一種結合的效果。
22.根據權利要求13至21任一項所述的藥學制劑用于與已知載體、佐劑和/或添加劑一起使用，以口服、經皮、靜脈、皮下、皮內、肌肉內、直腸內、陰道內以及舌下用藥的全身給藥。
23.根據權利要求13至21任一項所述的藥學制劑用于局部應用時采用例如乳劑、軟膏、糊劑、膠劑、溶液、噴霧劑、脂質體、可搖勻混合物、水狀膠質敷料和包含可滴入性藥劑的其它皮膚基/載體的形式。
全文摘要
本發明涉及聯合應用二肽酰肽酶IV(DP IV)和具有相同底物特異性的酶(DP IV酶活性)的抑制劑和丙氨酰氨基酞酶(氨基酞酶N，APN)或具有相同底物特異性的酶(APN酶活性)的抑制劑以加成或超加成抑制人T淋巴細胞或單核細胞的激活和增殖(DNS合成)、抑制T
文檔編號A61P9/10GK1484533SQ01821715
公開日2004年3月24日 申請日期2001年12月21日 優先權日2001年1月2日
發明者S·安佐格, S 安佐格, U·倫德凱爾, 驢, K·諾伊貝特, 簾刺, D·賴因霍爾德, 蚧舳 , R·韋特, 崢, H·戈爾尼克 申請人:馬格德堡醫療技術研究所股份有限公司, 馬格德堡醫療技術研究所股份有限公司Imtm