具有選擇性雌激素活性的16,17－碳環(huán)縮合類固醇化合物的制作方法

專利名稱：具有選擇性雌激素活性的16,17－碳環(huán)縮合類固醇化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種類固醇化合物，該化合物具有與類固醇骨架上環(huán)D相連的E環(huán)，并有雌激素活性。
人們對于和雌激素受體具有親和力的新化合物有著持久的興趣。這源于兩種不同的雌激素受體亞型的發(fā)現(xiàn)，這兩種亞型稱作ERα和ERβ(見Mosselman等人，F(xiàn)EBS Letters 392(1996)49-53以及EP-A-0798 378)。有些化合物對上述受體亞型有著選擇性，這些化合物就有可能提供一種更具有選擇性的雌激素受體相關(guān)的療法。其優(yōu)勢例如可以從人組織中受體亞型的不同分布來獲得。這能夠降低治療中雌激素相關(guān)的副作用的負(fù)擔(dān)。雌激素相關(guān)的醫(yī)學(xué)治療能夠從那些有選擇性的化合物獲益，例子有避孕，絕經(jīng)期病癥的治療，骨質(zhì)疏松癥的治療，以及依賴于雌激素的腫瘤控制。
在EP 0 869 132中雌激素類固醇化合物得到了描述，其具有分子式(1) 分子式1其中
加點的鍵表示可選的雙鍵；R6是H，＝CH2，或-CH3，或-CH2-CH3；R7是H，C1-4-烷基，C2-5-鏈烯基或C2-5-炔基，其中的烷基，鏈烯基或炔基基團(tuán)可以被1至3個鹵素原子所取代，這些鹵素原子獨立地選自氟或氯原子基團(tuán)；R11是H，C1-4-烷基，C2-4-鏈烯基，C2-4-炔基或C1-4-亞烷基，其中的烷基、鏈烯基、炔基或亞烷基基團(tuán)可以被1至3個鹵素原子所取代，這些鹵素原子獨立地選自氟或氯原子基團(tuán)；E和類固醇骨架上碳原子16和17一起表示一個4至7元環(huán)，該環(huán)相對于類固醇骨架形成α順式構(gòu)型，該環(huán)可選地包含1或2個橋環(huán)鍵并可用RE代替，RE有多種含義。
在EP 0 869 132中進(jìn)一步揭示出，具有分子式(1)的類固醇化合物之中的任意烷基、鏈烯基、炔基和亞烷基基團(tuán)可以是分支的或不分支的。如果R6或R11通過單鍵與類固醇骨架相連，它們在類固醇骨架上取代處的碳原子就會包含一個氫原子或者參與形成碳碳雙鍵。該化合物可能含有不同的手性中心，其能夠以對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體存在。羥基可能用例如?；蛲榛热〈用?，從而導(dǎo)致根據(jù)分子式1的化合物的前體藥物產(chǎn)生。
目前發(fā)現(xiàn)，具有分子式1(有上述含義的符號與術(shù)語)的類固醇化合物，出人意料地對于結(jié)合了高效價雌激素α的雌激素受體α有著一致的更好的選擇性，該類固醇化合物的特征在于RE是-羥基或其前體藥物。這樣的化合物(在下文指本發(fā)明的化合物)其通常不僅在雌激素受體上具有非常低的活性，而且事實上其一般作為雌激素受體的拮抗物，該化合物不僅有助于對雌激素受體α的高度選擇性，而且使得基于雌激素受體β阻斷的選擇性治療成為可能。本發(fā)明的化合物在其范圍內(nèi)含有前述的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，每一種獨立的(R)和(S)對映異構(gòu)體基本上不以低于5％，優(yōu)選地低于2％，尤其是低于1％的比例結(jié)合其它對映異構(gòu)體和這樣的對映異構(gòu)體任意比例的混合物，包括基本上含有相等量的這兩種對映異構(gòu)體的外消旋混合物。
本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案是如前面所描述的類固醇化合物，其進(jìn)一步的特征在于R6是H，R7是分支或不分支的C1-3-烷基，E-環(huán)是一個沒有雙鍵的5或6元環(huán)，并在22位上有一個S-立體構(gòu)型的羥基，其構(gòu)型根據(jù)類固醇立體化學(xué)通告的一般含義可以換句話表述為相對于類固醇骨架形成β構(gòu)型。
最優(yōu)選的是根據(jù)分子式2的化合物，即是(7α，16β，17α，22S)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷(dinorchola)-1，3，5(10)-三烯-3，17，22-三醇，其編碼名稱為Org41621。 分子式2；Org 41621因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物對于有機(jī)體中雌激素α或β受體的活性能夠進(jìn)行進(jìn)一步定向的，換句話也就是選擇性的修飾。
前體藥物是這樣一種化合物，其在受者的身體內(nèi)能轉(zhuǎn)化成根據(jù)分子式1(RE是β羥基)的化合物。特別地，例如在3，17位和E-環(huán)上的羥基能夠轉(zhuǎn)化成醚(烷基*氧基)或者酯(如?；?氧基、磷酸酯、硫酸酯、磺酸酯或芳香羧酸酯)，因此認(rèn)為用星號(*)表示的基團(tuán)的碳鏈長度是沒有嚴(yán)格限定的。?；鶊F(tuán)來源于線性的或有分支的烷烴*，芳香羧酸酯通常包含苯基、吡啶基或嘧啶基。依據(jù)想得到的前體藥物的特性，烷基和?；拈L度是可選擇的，因此鏈更長的前體藥物(例如帶有月桂基或己酰基鏈)會更適合于持久釋放和長效制劑。已知，這樣的取代基經(jīng)過自然水解和酶催化水解，產(chǎn)生游離的化合物骨架上的羥基取代基。這樣的前體藥物的生物活性可以與它們在受者體內(nèi)轉(zhuǎn)化成的化合物相比。前體藥物轉(zhuǎn)化成的具有活性的化合物叫做親本化合物。前體藥物在體內(nèi)作用的啟動和作用的持續(xù)時間以及分布可不同于親本藥物的這些特性。
無論對于醫(yī)學(xué)治療，還是生理學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥理學(xué)實驗，現(xiàn)在所發(fā)現(xiàn)的這些具有選擇性的化合物是極其需要的。作為本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的化合物可以用于治療，這種治療是通過將化合物給予受者(人或動物，優(yōu)選哺乳動物)的方式進(jìn)行的。有機(jī)體不同組織的α和β受體分布的差異為更有選擇性地干預(yù)不同組織功能提供了目標(biāo)。已知，種屬依賴性的雌激素受體α主要在陰道組織和肝臟組織中表達(dá)，而β受體則主要在前列腺組織、大鼠膀胱上皮細(xì)胞層、血管內(nèi)皮平滑肌細(xì)胞和大腦的某些部位(例如基底前腦(basal forebrain)、新皮質(zhì)和海馬)中表達(dá)。兩種受體都存在的組織有例如垂體、下丘腦、胸腺、子宮、卵巢和骨。
本發(fā)明中化合物與雌激素受體親和性曲線，使得它們在降低雌激素相關(guān)的副作用過程中適合充當(dāng)改良的雌激素或抗-雌激素。因此，本發(fā)明揭示出了一種對雌激素受體的活性進(jìn)行選擇性修飾的方法，該方法是通過將本發(fā)明的化合物與雌激素受體相互接觸來實現(xiàn)的。這樣的方法可以是對人或動物體的治療，也可以是非醫(yī)療方法。后者的方法可以是實驗方法，例如對于具有選擇性的化合物的分析，或者是為獲得雌激素受體或化合物相互作用的信息所采用的體外實驗室方法。優(yōu)選地，這些化合物能用于選擇性的雌激素受體α或β相關(guān)的避孕、實驗或醫(yī)學(xué)治理，例子有如下病癥的治療或預(yù)防雌激素受體相關(guān)的疾病、絕經(jīng)期病癥、骨質(zhì)疏松癥、心血管疾病、垂體激素調(diào)節(jié)的調(diào)整、良性前列腺肥大、雌激素依賴性腫瘤控制、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜異位或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。這些具有選擇性的方法和治療的一個重要的共同特性就是，它們都包含有將本發(fā)明的化合物與雌激素受體相互接觸這個過程。
本發(fā)明也涉及了根據(jù)本發(fā)明的化合物在以下方面的用途，包括用于雌激素受體相關(guān)的選擇性治療的藥物和用于雌激素受體α相關(guān)疾病治療的藥物的制造，和將根據(jù)本發(fā)明的化合物給病人施用(以適當(dāng)?shù)乃幬飫┝啃问??？紤]到本發(fā)明化合物對雌激素受體β的拮抗劑作用，本發(fā)明還提供了用于制備治療雌激素受體β相關(guān)疾病的藥物的用途，包括向病人施用本發(fā)明的化合物(以適當(dāng)?shù)乃幬飫┝啃问?。
此外，本發(fā)明涉及了根據(jù)本發(fā)明的化合物在制備具有避孕活性藥物中的用途。因此，本發(fā)明也適用于避孕的醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥，即包括了給藥于主體(婦女或雌性動物)的避孕方法，該藥是指在本領(lǐng)域常用的孕激素和雌激素，其中的雌激素是根據(jù)本發(fā)明的化合物(以適當(dāng)?shù)乃幬飫┝啃问?。
最后，本發(fā)明涉及了根據(jù)本發(fā)明的化合物在制造具有選擇性雌激素活性的藥物中的用途，這樣的藥物通常適合用在HRT(激素代替療法)領(lǐng)域，其具有緩解絕經(jīng)期病癥，尤其是有抗骨質(zhì)疏松癥的活性。
本發(fā)明化合物的藥劑數(shù)量可以采用雌激素相關(guān)化合物的正常范圍，例如每次給藥采用0.01至100mg的范圍。
最終的藥劑單位可以按照含有在上述治療劑量相同范圍內(nèi)的數(shù)量的本發(fā)明化合物來準(zhǔn)備。因此，本發(fā)明也涉及到了藥物組合物，其中包含與一種或多種藥物學(xué)上可接受的輔助物混合的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物可以用多種方法生產(chǎn)，這些方法一般在有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，尤其在類固醇化學(xué)領(lǐng)域是熟知的。例如見Fried，J.和Edwards，J.A.，《類固醇化學(xué)中的有機(jī)反應(yīng)》(“Organic Reactionsin Steroid Chemistry”)卷I和II，Van Nostrand Reinhold Company，New York，1972；和C.Djerassi，《類固醇反應(yīng)》(“SteroidReactions”)，Holden-Day，Inc.，San Francisco，1963。
為了合成根據(jù)本發(fā)明的化合物，帶有附加的16，17增加的(anellated)環(huán)的類固醇必須合成。其合成方法在EP 0 869 132中有描述。為了得到本發(fā)明的化合物，附加的羥基官能團(tuán)必須引入到增加的環(huán)上。為了達(dá)到此目的，采用下述方法進(jìn)行增環(huán)反應(yīng)是方便的，經(jīng)過合成反應(yīng)步驟可得到位置合適的雙鍵，例如通過用所熟知的烯烴置換反應(yīng)程序，該反應(yīng)程序通過使用來自例如釕、鉬或鎢的過渡元素金屬催化劑，可以將16α，17α-雙不飽和片斷關(guān)閉形成不飽和的增環(huán)5或6元環(huán)。如此合成的烯烴環(huán)首先被立體選擇性地環(huán)氧化。這一點通?？赏ㄟ^以下方式進(jìn)行使用像過酸(優(yōu)選地在緩沖介質(zhì)中)這類試劑，或者使用帶有氧化試劑(像過氧化氫或叔丁基過氧氫)的金屬復(fù)合物催化反應(yīng)體系。在本例中，在碳酸氫鈉緩沖液中的過苯甲酸一般可以給出良好的結(jié)果。環(huán)氧化物幾乎可以通過用氫化物試劑進(jìn)行區(qū)域選擇性地還原，而打開成為所需的β-醇。羥基基團(tuán)也可以很容易地通過硼氫化/氧化反應(yīng)程序來合成。在α-羥基化合物已經(jīng)獲得的情況下，Mitsunobu轉(zhuǎn)換反應(yīng)可以很容易地導(dǎo)致β-醇的產(chǎn)生，這正是所希望得到的物質(zhì)。這些羥基化合物能夠轉(zhuǎn)化成前體藥物，例如烷基醚、?；?、碳酸酯、磺酸酯或磷酸酯，只要與所需的適當(dāng)?shù)柠u代烷烴或?；确磻?yīng)即可。
可以制備出包含有一種或多種根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥物學(xué)組合物，其中有或者沒有混合藥物學(xué)上可接受的輔助物，這正如標(biāo)準(zhǔn)的參考文獻(xiàn)(Gennaro等人，Remmingto’s Pharmaceutical Sciences，(18th ed.，Mack publishing Company，1990，尤其要注意第八部分Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture))中所描述的一樣。一種或多種根據(jù)本發(fā)明的化合物和一種或多種藥物學(xué)上可接受的輔助物的混合物可以壓縮成固體藥劑單位(例如藥丸或藥片)，或者加入到膠囊或栓劑中。通過使用藥物學(xué)上合適的液體，這種化合物還能作為注射制劑(以溶液、懸浮液、乳濁液的形式存在)或噴霧劑(例如鼻噴霧劑)來使用。本發(fā)明的化合物還可以加入到植入物、陰道環(huán)、貼劑、凝膠，以及其他任何可持續(xù)釋放的制劑之中。為了制造藥劑單位，例如藥片，常規(guī)添加劑(例如填料或載體、顯色劑、多聚粘合劑等等)的使用是要加以考慮的。通常，任何藥物學(xué)上可接受的添加劑，只要不干擾活性化合物的功能，就可以使用。合適的載體可以和組合物一起給藥，其包括合適數(shù)量的乳糖、淀粉、纖維素衍生物等等，或者它們的混合物。
實施例在方案I和II中，圖解說明了實施例中用到的合成路線。用于識別化合物的數(shù)字在這些方案中用結(jié)構(gòu)式得到了詳細(xì)說明。方案I 方案II 化合物2在-50℃，向5.65ml乙烯基三丁基亭置于50ml無水四氫呋喃中所形成的溶液里，逐滴加入12ml 1.6M正丁基鋰的己烷溶液。其后，經(jīng)過0.5小時的攪拌，在-50℃再加入6.2格令(gr)16α-烯丙基，7α-乙基雌酮-3-O-甲基醚(1)置于20ml無水四氫呋喃中所形成的溶液。再次攪拌1/2小時之后，緊接著將混合物倒入飽和NH4Cl中，然后用乙酸乙酯提取。用硅膠色譜法將有機(jī)相濃縮，就得到4.2g油樣的2，Rf0.47(甲苯/乙酸乙酯95/5)，對于1Rf0.65。NMR(CDCl3)δ5.80(m，1，CH烯丙基)，6.07(m，1，CH乙烯基)0.98(s，CH3)，0.93(t，3，乙基)，3.78(s，3，CH3)。
化合物3向4.2g的2置于80ml二氯甲烷中所形成的溶液里加入0.32g二氯化亞芐基三環(huán)己基膦?；?Grubbs置換催化劑)。在經(jīng)過1小時的攪拌后，再加入0.3g催化劑。當(dāng)反應(yīng)完全后(2小時)，將混合物濃縮，并把殘余物用柱色譜法純化，就得到3.5g的3，Rf0.29(庚烷/乙酸乙酯8/2，對于2Rf0.55)。NMR(CDCl3)δ5.72(m，CH＝)6.02(m，1，C＝)0.99(s，3，CH3)，0.89(t，3，CH3)3.77(OCH3)0.92(m，3，CH3)。
化合物40.4g類固醇3和0.5g NaHCO3置于12ml二氯甲烷中所形成的混合物用0.34g間氯過苯甲酸處理。在環(huán)境溫度下攪拌幾個小時之后，該反應(yīng)體系用水稀釋，然后用硫代硫酸鈉溶液處理來破壞殘余的過氧化物。有機(jī)物質(zhì)用乙酸乙酯提取，并最后用色譜法提純，就得到110mg所需的β-環(huán)氧化物4；Rf0.50(甲苯-丙酮9/1)；NMR(CDCl3)δ0.98(t，3，CH3)，0.92(t，3，CH3)，3.65+3.70(2xm，環(huán)氧化物CH’s)。
化合物580mg類固醇4置于3ml四氫呋喃中所形成的溶液用10mg LiAlH4回流。2小時之后，起始物消失了。然后，混合物用加入30μl飽和Na2SO4溶液和0.20g Na2SO4來猝滅，攪拌15分鐘后用硅藻土過濾。將所得濾液濃縮，剩下的殘渣經(jīng)過短的二氧化硅柱，就得到55mg 5；Rf0.24(甲苯-丙酮9/1)；NMR(CDCl3)δ4.04(m，1，CHOH)，3.78(s，3，OCH3)2.85(m，2，CH2在C6)，0.92(s，3，CH3)。
化合物6向乙硫醇鈉(用0.7ml乙硫醇和0.27g 60％NaH分散體反應(yīng)制得)置于9ml DMF中所形成的溶液里，加入120mg類固醇5。讓該混合物回流3h。然后將反應(yīng)體系倒入水中，并用乙酸乙酯提取。有機(jī)物質(zhì)經(jīng)過色譜法純化，就得到80mg6，Mp224-226；Rf0.30(甲苯-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ4.00(m，1，CHOH)，7.12(ar H1)，6.20(ar H2)，6.45(ar H4)。
化合物7
在0℃，向2.7g類固醇3置于20ml二氯甲烷和3ml吡啶中形成的溶液里，加入1.9ml三甲基氯硅烷。攪拌1/2小時后，將反應(yīng)體系倒入水中，并用乙酸乙酯提取，就得到3.3g基本上純的甲硅烷氧基衍生物7，Rf0.8(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ0.03(s，9，TMS)，5.68，5.91(2xs，CH烯烴)。
化合物8在0℃，3.2g 7置于25ml無水四氫呋喃中所形成的溶液用2.2ml硼烷-二甲基硫復(fù)合物置于20ml無水四氫呋喃中所形成的溶液來處理。隨后，該反應(yīng)體系在45℃攪拌2小時。然后，小心加入4.5ml無水乙醇，接著小心加入11ml 2N NaOH和7.7ml 30％過氧化氫，來破壞剩余的試劑。該反應(yīng)體系攪拌過夜，然后用水稀釋，并用乙酸乙酯提取。所得的粗產(chǎn)品用柱色譜純化，得到1.7g所要的α-醇8。Rf0.36(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ4.42(m，1，CHOH)，0.12(s，9，TMS)，0.79(s，3，CH3)。
化合物9在0℃，1.6g 8和1.3g三苯膦置于60ml甲苯中所得溶液用0.84g對硝基苯甲酸和0.8ml偶氮二羧酸二乙酯來處理。攪拌1小時后，反應(yīng)即可完成。將混合物倒入飽和NaHCO3水溶液中，并用乙酸乙酯提取。經(jīng)過色譜法純化，就可得到2.9gβ-硝基苯甲酸酯，Rf0.64(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ5.34(m，1，CHOC(O)Ar)，0.91(s，3，CH3)，0.95(t，3，CH3)，3.80(s，3，OCH3)。將這一物質(zhì)溶解在40ml四氫呋喃-甲醇(1/1 v/v)混合液中，然后用4ml 2N NaOH溶液處理。經(jīng)過15分鐘的攪拌后，將該反應(yīng)體系倒入水中，并用乙酸乙酯將產(chǎn)物提取出來。在經(jīng)過短的二氧化硅柱后，就可獲得1.3gβ-醇9；Rf0.64(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ 4.31(m，1，CHOH)。
化合物10
1.3g9置于30ml丙酮中所形成的溶液用2ml 2N HCl來處理。1小時之后，加入飽和NaHCO3來中和混合物，并加以濃縮。殘余物用水稀釋，并用乙酸乙酯提取，就得到1.0g 10，Rf0.10(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl3)δ0.90(t，3，CH3)，0.95(s，3，CH3)，4.48(m，1，CHOH)。
化合物11向乙硫醇鈉(用0.7ml乙硫醇和0.3g 60％NaH分散體反應(yīng)制得)置于9ml DMF中所形成的溶液里，加入120mg類固醇10。將該混合物回流3h。然后，將反應(yīng)體系倒入水中，并用乙酸乙酯提取。用色譜法純化有機(jī)物質(zhì)，就得到80mg 11，MP 143-145℃(乙醇-水)；Rf0.41(甲苯-丙酮7/3)；NMR(CDCl3)δ4.45(m，1，CHOH)，0.93(s，3，CH3)，0.90(t，3，CH3)，6.62+7.10(AB，2，H1，2)，6.53(d，1，H4)。
化合物13向29ml 1M溴化烯丙基鎂的醚溶液中加入80ml無水四氫呋喃。在-50℃，加入10格令(gr)7á-丙基，16á-烯丙基雌酮-3-O-芐基醚12置于40ml四氫呋喃中所形成的溶液。經(jīng)過1/2小時的攪拌后，讓混合物回到室溫，然后倒入300ml飽和NH4Cl水溶液中。用乙酸乙酯提取出產(chǎn)品并純化(通過硅膠色譜法除去立體異構(gòu)體)，就得到7.2g所要的16á，17á-二烯丙基衍生物13。Rf0.26(庚烷-乙酸乙酯9/1)；17á-烯丙基異構(gòu)體Rf0.45。NMR(CDCl3)δ0.88(t，3，CH3)，0.96(s，3，CH3)，6.08(m，1，CH烯丙基)，5.80(m，1，CH烯丙基)，4.95-5.20(m，4，2xCH2烯丙基)5.02(CH2OBz)。
化合物14將40mg二氯化亞芐基三環(huán)己基膦?；?Grubbs置換催化劑)加入到450mg 13置于10ml二氯甲烷中所形成的溶液里。攪拌1小時后，再追加400mg催化劑。2小時之后，除去溶劑，取而代之為20ml甲苯，然后混合物加入5g堿性氧化鋁，在60℃攪拌以吸收催化劑。經(jīng)過用硅藻土過濾和用甲苯與乙酸乙酯洗滌，就可得到400mg幾乎純的14；Rf0.34(庚烷-乙酸乙酯8/2)；Rf130.45。NMR(CDCl3)δ5.02(s，2，CH2O)，5.97(s，2，CH＝CH)，0.97(s，3，CH3)。
化合物15向340mg 14置于0.5ml二氯甲烷中所形成的溶液里加入8ìl吡啶，0.14ml 30％雙氧水和2mg甲基三氧合錸。經(jīng)過1小時的攪拌后，環(huán)氧化反應(yīng)就完成了，其結(jié)果主要產(chǎn)生了所要的-環(huán)氧化物，也包括一些α異構(gòu)體。將混合物倒入水和飽和Na2S2O3中，并用乙酸乙酯提取。用色譜法純化后得到230mg 15和80mg不想要的á-環(huán)氧化物。Rf0.36(甲苯-乙酸乙酯95/5；對照Rf化合物140.39)。NMR(CDCl3)δ3.31，3.38(m，2，CH(O)CH)。
化合物16將4.2g 15和350mg LiAlH4置于20ml無水四氫呋喃中所形成的混合物回流2小時。然后將混合物冷卻，接著用1ml飽和含水的Na2SO4，28ml乙酸乙酯和8g Na2SO4來處理。在環(huán)境溫度下攪拌1/2小時之后，將反應(yīng)體系用硅藻土過濾，把濾液濃縮并用色譜法純化，就得到3，4g16，Mp 147-148℃，Rf0.20(甲苯-乙酸乙酯8/2；Rf23 0.55)。NMR(CDCl3)δ4.25(寬的s，1，CHOH)，0.90(s，3，CH3)，0.86(t，3，CH3)，5.02(s，2，OCH2Ar)。
化合物17；(＝7α，16β，17α，22S)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷-1，3，5(10)-三烯-3，17，22-三醇在300mg 5％Pd/C存在的條件下，將3.3g 16置于200ml乙醇中所形成的溶液進(jìn)行氫化。當(dāng)反應(yīng)完全后，用硅藻土過濾除去催化劑，再將溶劑濃縮。把剩余物先加醚再加水進(jìn)行研制，就得到1.7g 17；Mp 146-147℃，Rf0.53(甲苯-乙酸乙酯1/1；Rf16 0.60)。NMR(CDCl3)δ4.26(寬的s，1，CHOH)，7.14，6.62(AB，2，H1，H2)，6.54(d，H4)。
雌激素活性的體外測試化合物對于雌激素受體的活性的測試，是采取使用人雌激素受體α和β的結(jié)合試驗和反式激活試驗來進(jìn)行的。
和來源于重組中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞的胞質(zhì)人雌激素受體α和β的競爭性結(jié)合，可用來測定被測化合物的相對結(jié)合親和力(＝RBA)(效價比)，這一效價比是通過與(17β)-雌二醇(E2)和重組CHO細(xì)胞溶質(zhì)中雌激素受體α或β的結(jié)合試驗相比較而獲得的，該重組CHO細(xì)胞穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染了人雌激素受體α(hERα)或β(hERβ)。
通過體外生物測試，化合物的雌激素和抗雌激素活性得到了測定，該測試使用了穩(wěn)定地共轉(zhuǎn)染了人雌激素受體α(hERα)或β(hERβ)基因、大鼠催產(chǎn)素啟動子(RO)和熒光素酶報道基因(LUC)的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。被測化合物的雌激素激動性反式激活(效價比)是和標(biāo)準(zhǔn)的雌激素雌二醇相比較而得到的，其可以刺激通過雌激素受體hERα或hERβ介導(dǎo)的熒光素酶的反式激活。被測化合物的抗雌激素活性(效價比)是和標(biāo)準(zhǔn)的ICI 164.384(＝(7α，17β)-N-丁基-3，17-二羥基-N-甲基雌烷(methylestra)-1，3，5(10)-三烯-7-十一烷酰胺相比較而得到的，其可以抑制用(17β)-雌二醇通過雌激素受體hERα或hERβ介導(dǎo)的熒光素酶的反式激活。
結(jié)果 分子式3
1)17是Org 41621化合物17在拮抗物試驗中的選擇性比Erα/Erβ＜0.1/67。
在現(xiàn)有技術(shù)中根據(jù)分子式3的化合物沒有22-羥基但有R7α-丙基，R11氫和6元E-環(huán)，將其命名為(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇，其Erα/Erβ比在結(jié)合試驗中是15/7，在激動劑反式激活試驗中是0.3/＜0.1。
防止大鼠中卵巢切除術(shù)導(dǎo)致的骨質(zhì)損失的測試(抗骨質(zhì)疏松癥測試)導(dǎo)言大鼠的卵巢切除術(shù)將導(dǎo)致其骨質(zhì)的損失，這是因為雌激素的缺乏。若給予雌激素化合物可以防止這種情況的發(fā)生。本試驗可以對化合物在作了卵巢切除術(shù)的(OVX)大鼠體內(nèi)的抗骨質(zhì)疏松癥活性作出評價。對于骨骼物質(zhì)的效應(yīng)可通過外圍定量計算斷層攝影術(shù)(pQCT)或X-射線照片的定量分析來評價。血漿中的骨鈣蛋白與尿中的脫氧吡啶啉、鈣和磷酸鹽反映出了骨骼新陳代謝的狀況。子宮重量的增加及身體和胸腺重量的減少反映出雌激素的效應(yīng)。
測試動物成熟的225-250g雌性處女Wistar大鼠。品系Hsd/CpdWu，SPF-bred by Harlan，CPB，Zeist，荷蘭。
實驗實驗的第一天，將大鼠稱重，并按其重量分裝入不同的籠子，也就是最輕的大鼠裝入第一個籠子，最重的裝入最后一個。對于這些大鼠處理是隨機(jī)的。在乙醚麻醉條件下，進(jìn)行假手術(shù)和卵巢切除術(shù)。當(dāng)大鼠從麻醉狀態(tài)中恢復(fù)過來之后，在24小時內(nèi)，將載體、參照化合物或測試化合物以每日一次或兩次的方式給予大鼠，這樣持續(xù)4個星期。在此期間大鼠每星期都要稱重。4個星期之后進(jìn)行解剖。在解剖時，大鼠用乙醚麻醉，其血從腹主動脈收集。股骨、脊椎骨L1L2L3L4(可選)、子宮、胸腺、肝、腎、腎上腺、甲狀腺和垂體都要解剖開來。在解剖那天，對于新鮮組織，用pQCT進(jìn)行骨骼的礦物質(zhì)密度和右股骨幾何學(xué)的測量。股骨干骺端部分的小梁骨礦物質(zhì)密度(FBMDDISmg/cm3)用pQCT(外圍定量計算斷層攝影術(shù)儀；XCT 960A，Stratec，Birkenfeld，Germany)測量。
結(jié)果的解釋卵巢切除術(shù)導(dǎo)致股骨的遠(yuǎn)端骨骼密度和小梁骨體積在統(tǒng)計學(xué)上的顯著減少，以及血液中骨鈣蛋白和尿中脫氧吡啶啉水平在統(tǒng)計學(xué)上的顯著增加(P≤0.05，2 way ANOVA)。
與做了卵巢切除術(shù)的對照組相比較，當(dāng)遠(yuǎn)端股骨的平均骨密度值顯著增長時可以認(rèn)為測試化合物是有用的?；衔飳τ谀蛑忻撗踹拎み降挠绊懛从沉藢τ诠琴|(zhì)再吸收的作用，而其對于血漿骨鈣蛋白水平的影響反映了對于骨質(zhì)更新的作用，這可能有助于理解其作用機(jī)制。
最小有效劑量(MAD)是指，在這種劑量下，小梁骨礦物質(zhì)密度的平均比例性差異達(dá)到40至60％。
參者文獻(xiàn)Wronski T.J.和Yen C.F.卵巢切除后的大鼠作為絕經(jīng)后骨質(zhì)損失的動物模型(The ovariectomosed rat as an animal modelfor postmenopausal bone loss)。Cells and Materials，Supp.1(1991)69-76.Yamazaki I.和Yamaguchi H.卵巢切除的骨質(zhì)疏松癥大鼠模型的特征(Characteristics of an ovariectomised osteopenicrat model)。J.Bone Min.Res.4(1989)12-22.Ederveen A.G.H.和Kloosterboer H.J.替勃龍(一種具有組織特異性激素特性的類固醇)可以在性成熟大鼠中完全防止卵巢切除手術(shù)引起的骨質(zhì)損失(Tibolone，a steroid with atissue-specific hormonal profile，completely preventsovariectomy-induced bone loss in sexually mature rats)。
Bone & Mineral Research Vol 14，PP 1963-1970，1999.
結(jié)果化合物17(Org 41621)骨質(zhì)疏松癥試驗要口服30ìg/kg。
現(xiàn)有技術(shù)化合物(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇每次口服190ìg/kg。
雌激素活性的體內(nèi)測試體內(nèi)雌激素活性的測定，可通過Allen Doisy測試來進(jìn)行，此法在F.Allen，L.A.Doisy，J.Amer.Med.Assoc.，81，819-821(1923)中有描述。
結(jié)果化合物17(Org 41621)Allen Doisy sc 5ìg/kg，口服30ìg/kg。
現(xiàn)有技術(shù)化合物(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇Allen Doisy sc 24ìg/kg，口服125ìg/kg。
權(quán)利要求
1.具有分子式(1)的類固醇化合物或其前體藥物 分子式1其中加點的鍵表示可選的雙鍵；R6是H，＝CH2，或-CH3，或-CH2-CH3；R7是H，C1-4-烷基，C2-5-鏈烯基或C2-5-炔基，其中的烷基，鏈烯基或炔基基團(tuán)可以被1至3個鹵素原子所取代，這些鹵素原子獨立地選自氟或氯原子基團(tuán)；R11是H，C1-4-烷基，C2-4-鏈烯基，C2-4-炔基或C1-4-亞烷基，其中的烷基、鏈烯基、炔基或亞烷基基團(tuán)可以被1至3個鹵素原子所取代，這些鹵素原子獨立地選自氟或氯原子基團(tuán)；E和類固醇骨架上碳原子16和17一起表示一個4至7元環(huán)，該環(huán)相對于類固醇骨架形成α順式構(gòu)型，該環(huán)可選地包含1或2個橋環(huán)鍵
2.根據(jù)權(quán)利要求1的類固醇化合物，其特征在于R6是H，R7是C1-3-烷基，E-環(huán)是沒有雙鍵的5或6元環(huán)，并在22位有一個S立體構(gòu)型的羥基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的類固醇化合物，其特征在于該化合物具有分子式2 分子式2命名為(7α，16β，17α，22S)-7-丙基-16，24-環(huán)-19，21-二降膽烷-1，3，5(10)-三烯-3，17，22-三醇
4.用于治療的根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的類固醇化合物。
5.一種通過使根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的化合物與雌激素受體接觸對雌激素受體的活性進(jìn)行選擇性修飾的方法。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其特征在于該方法是非醫(yī)學(xué)方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其特征在于該方法是通過使根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的化合物與雌激素受體α接觸，來對雌激素受體α的活性進(jìn)行選擇性修飾。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其特征在于該方法是通過使根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的化合物與雌激素受體β接觸，來對雌激素受體β的活性進(jìn)行選擇性修飾。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的類固醇化合物，用于選擇性雌激素受體相關(guān)治療的藥物制造的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，其特征在于選擇性雌激素受體相關(guān)治療是近絕經(jīng)期或后絕經(jīng)期病癥的預(yù)防或治療。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其特征在于雌激素受體相關(guān)治療是避孕治療。
12.包含根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的類固醇化合物和藥物學(xué)上可接受的輔助物的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有分子式(1)的類固醇化合物，其中加點的鍵表示可選的雙鍵；R
文檔編號A61P15/18GK1433426SQ01810745
公開日2003年7月30日 申請日期2001年5月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月6日
發(fā)明者H·J·J·魯森 申請人:阿克佐諾貝爾公司