專利名稱：來自菌類的生理活性物質eem－s、其制造方法和藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及至少一種選自香菇、火菇、真姬菇(ブナシメジ)、側耳屬、奇果菌屬、小包腳菇屬、滑菇(ナメコ)、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、多孔菌類的靈芝和木層孔菌屬(メシマコブ)的食用菌類得到的，具有抗癌活性、抗變態反應活性、免疫賦活性、抗氧化活性等生理活性的物質及其制造方法，和含有該生理活性物質的制劑。
從基于龐大的研究數據確實研究的結果得知，特別是菌類的抗癌作用，是由其含有的多糖決定的，本發明者對作為菌類多糖類的葡聚糖進行了研究。但是，判斷出純粹的單純多糖類葡聚糖雖然通過注射顯示活性，但是通過口服不顯示效果。
通過注射給藥只能在醫院等進行，另外，由于口服給藥對于接受給藥的患者來說可大大減少痛苦，因此強烈需要提供口服有效的來自菌類的活性成分。
本發明的課題是選擇高濃度含有通過口服給藥具有抗癌作用、免疫賦活作用等生理活性物質的菌類，提供高效采集這些生理活性物質的方法，同時提供適用于使用這些得到的活性物質的制劑。
即，本發明提供了用水、親水性溶劑或它們的混合溶劑萃取至少一種選自香菇、火菇、真姬菇、側耳屬、滑菇、奇果菌屬、小包腳菇屬、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇屬、靈芝和木層孔菌屬的菌類，然后，將該萃取物用分子篩法處理，通過采集分子量6,000～60,000的部分得到的生理活性物質EEM-S。
另外，本發明提供了上述生理活性物質EEM-S的制造方法。
圖2是實施例2得到的生理活性物質EEM-SS的紫外可見吸收曲線圖。溶劑是水。
圖3是實施例3得到的生理活性物質EEM-SM的紫外可見吸收曲線圖。溶劑是水。
圖4是實施例4得到的生理活性物質EEM-SN的紫外可見吸收曲線圖。溶劑是水。
圖5是實施例5得到的生理活性物質EEM-SE的紫外可見吸收曲線圖。溶劑是水。
圖6是實施例1得到的生理活性物質EEM-SB用ATR法測定的紅外吸收曲線圖。
圖7是實施例5得到的生理活性物質EEM-SE用ATR法測定的紅外吸收曲線圖。
圖8是實施例1得到的生理活性物質EEM-SB的1H-NMR(D2O)的圖。
圖9是實施例5得到的生理活性物質EEM-SE的1H-NMR(D2O)的圖。
圖10是實施例1得到的生理活性物質EEM-SB的13C-NMR(D2O)的圖。
圖11是實施例5得到的生理活性物質EEM-SE的13C-NMR(D20)的圖。
實施發明的最佳方式本發明的生理活性物質EEM-S是通過用水和/或親水性溶劑萃取至少一種選自香菇、火菇、真姬菇、側耳屬、滑菇、奇果菌屬、小包腳菇屬、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇屬、靈芝和木層孔菌屬的被供于食用的菌類的子實體和/或菌絲體的細微粉碎物(以下記載為“菌”)得到的。作為該萃取中使用的親水性溶劑，優選使用碳原子數1～4的低級醇。
從上述菌類進行的含有生理活性物質EEM-S餾分的萃取，例如，可以向作為原料的菌類中添加適量水或低級醇等親水性溶劑，例如，在80～98℃左右，在水的情況下優選在90～98℃的溫度條件下，回流下，通過1至4小時，優選2至4小時的萃取進行。萃取后，相對于菌類的重量，可使用3至10倍重量左右的溶劑。
如上得到的萃取液，可根據需要通過過濾等分離固形雜質后，通過減壓蒸除溶劑，可以固形物的形式收集萃取物。
這樣得到的固形物，即使本身口服給藥也可顯示活性，可以直接使用，但是為了提高活性，可將萃取液用分子篩處理除去不需要的部分，將再次在減壓下濃縮得到的分子量6,000～60,000的部分作為生理活性物質EEM-S使用。
作為上述目的中使用的分子篩，可列舉分子篩膜(平膜)、中空過濾膜、透析膜、分子篩色譜等，生理活性物質EEM-S的分離獲得可適當應用使用這些的方法。
下面，以使用模型(model type)中空過濾的情況為例對生理活性物質EEM-S的分離獲得方法進行說明。即，將如前所述萃取得到的菌類的水和/或親水性溶劑萃取液(含有生理活性物質EEM-S的餾分)，首先，用低分子劃分膜模型，例如，AIP-3013、AIP-2013、或AIP-1010(旭化成工業社制)處理除去低分子量物質(分子量6,000以下的物質)。然后，將除去了低分子物質的濃縮液用高分子劃分膜模型，例如，AHP-3013、AHP-2013、或AHP-1010(旭化成制)處理除去高分子物質(分子量60,000以上)，外液再次用低分子劃分膜模型濃縮。通過劃分，可得到分子量6,000～60,000的生理活性物質EEM-S。
另外，使用一般的分子篩法時，由于分子的形狀導致在篩內的懸掛方式不同，可能與用其他方法求得的分子量不同。因此，本發明中，分子量是指用分子篩法求得的分子量，更準確地說，低分子側的分子量是使用AIP-3013或與其同等的低分子劃分膜模型測定的值。同樣，高分子側的分子量是使用AHP-3013或與其同等的低分子分化膜模型測定的值。
這樣得到的菌類的生理活性物質，總體記為EEM-S，但是來自菌類的生理活性物質，將菌類菌絲體作為原料使用時，由于培養條件不同收率不同，選擇最佳的培養基、培養溫度等是必要的。另外，由于菌類的種類不同可能顯示若干不同的物理化學性狀。
例如，以真姬菇為原料制造的生理活性物質EEM-S(以下，有時稱為“EEM-SB”)，顯示后述實施例1中所示的物理化學性狀。另外，以火菇為原料制造的生理活性物質EEM-S(以下，有時稱為“EEM-SE”)，顯示后述實施例5中所示的物理化學性狀。另外，從香菇、奇果菌屬和滑菇得到的生理活性物質EEM-S(以下，有時分別稱為“EEM-SS”、“EEM-SM”’、“EEM-SN”)，分別顯示圖1～圖5的紫外線可見光吸收。
這樣，在物理化學性質中，即使有一些不同，但如后述實施例6所示，與各種菌中單純的熱水萃取物相比都具有更高的生理活性，可以說保持有共通的性質。
以上說明的生理活性物質EEM-S，是通過口服給藥可發揮生理活性的物質，但是為使其發揮所期望的效果的口服攝取量，根據人的年齡、體重、目的等變化，通常，成人每天以EEM-S計攝取200～5000mg的范圍，優選1000～3000mg的范圍，該劑量1天分數次服用是合適的。
另外，本發明的生理活性物質EEM-S，可通過常規方法制成散劑、顆粒劑、膠囊劑、液體制劑使用，但由于其直接在大氣中放置的話會發生吸濕變色、變質，優選以施用了薄膜包衣的片劑使用。作為該目的中使用的薄膜包衣材料，優選大豆肽、貝殼樹脂材料等，其他的薄膜包衣材料有不能充分防止吸濕的情況，會發生變色、變質。
這樣得到的EEM-SS，通過冷凍干燥可制成固體粉末，進一步通過將其壓片，可制成片劑。
所得的生理活性物質EEM-SM的水溶液中的紫外線吸收曲線如圖3所示。
所得的生理活性物質EEM-SN的水溶液中的紫外線吸收曲線如圖4所示。實施例5將1000g火菇用熱水回流的同時萃取，得到熱水萃取物107g。將其溶解在水中后，放入透析管中進行透析，得到透析內膜的含有高分子物質(分子量6,000以上)的級分。將該含高分子物質的級分用分子篩膜PM-10處理，除去高分子物質(50,000以上)，冷凍干燥，得到分子量6,000～50,000的EEM-SE高含有物質。將其制成粉末劑。[EEM-SE的物理化學性質]生理活性物質EEM-SE的物理化學性質(1)紫外線吸收(測定水溶液中370～190nm的UV吸收)最大值258.4nm(吸收曲線用圖5表示)(2)紅外線吸收(用ATR法測定)最大值(cm-1)3279、2927、1578、1400、1043(吸收曲線用圖7表示)(3)1H-NMR(在D2O中測定)圖譜用圖9表示。(4)1C-NMR(在D2O中測定)圖譜用圖11表示。(5)蛋白含量12.7％(6)糖含量9.8％(7)主要糖構成比葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖＝16∶3∶1(8)氨基酸組成天冬氨酸9.1％、谷氨酸17.7％、甘氨酸14.8％、丙氨酸21.9％、纈氨酸11.8％、精氨酸；6.8％、鳥氨酸12.6％(9)元素分析C36.5％、H6.6％、N3.5％
發明效果通過本發明，可從食用菌類高效簡單地得到生理活性強的物質，可得到作為藥品或保健品有用的制品。
權利要求
1.生理活性物質EEM-S，是用水、親水性溶劑或它們的混合溶劑萃取至少一種選自香菇、火菇、真姬菇、側耳屬、滑菇、奇果菌屬、小包腳菇屬、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、靈芝和木層孔菌屬的菌類，然后，將該萃取物用分子篩法處理，收集分子量6,000～60，000的部分得到的。
2.權利要求1記載的生理活性物質EEM-S，在水溶液中的紫外線吸收的最大值是255～260nm。
3.權利要求1至2記載的生理活性物質，親水性溶劑是碳原子數1～4的低級醇。
4.生理活性物質EEM-SB，是將真姬菇用水、碳原子數1～4的低級醇或它們的混合溶劑萃取，然后用分子篩法處理得到的，分子量是6,000～60,000，在水溶液中的紫外線吸收的最大值是255～260nm，紅外線吸收的最大吸收波數為1560、1396、1032cm-1(每個都包括±50cm-1以內的誤差)，蛋白含量是20％～30％，糖含量是22％～32％，氨基酸的組成(摩爾比)是天冬氨酸9.0％、谷氨酸16.1％、甘氨酸9.1％、丙氨酸12.5％、纈氨酸5.7％、精氨酸5.6％、鳥氨酸7.8％(每個都包括±3％以內的誤差)，作為構成糖主要是葡萄糖。
5.生理活性物質EEM-SE，是將火菇用水、碳原子數1～4的低級醇或它們的混合溶劑萃取，然后用分子篩法處理得到的，分子量是6,000～60,000，在水溶液中的紫外線吸收的最大值是255～260nm，紅外線吸收的最大吸收波數為3259、2927、1578、1400、1043cm-1(每個都包括±50cm-1以內的誤差)，蛋白含量是8％～18％，糖含量是5％～10％，氨基酸的組成(摩爾比)是天冬氨酸9.1％、谷氨酸17.7％、甘氨酸14.8％、丙氨酸21.9％、纈氨酸11.8％、精氨酸6.8％、鳥氨酸12.6％(每個都包括±3％以內的誤差)，作為構成糖主要是葡萄糖。
6.生理活性物質EEM-S的制造方法，其特征在于用水、親水性溶劑或它們的混合溶劑萃取至少一種選自香菇、火菇、真姬菇、側耳屬、滑菇、奇果菌屬、小包腳菇屬、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、靈芝和木層孔菌屬的菌類，然后，將該萃取物用分子篩法處理，收集分子量6,000～60,000的部分。
7.權利要求6記載的生理活性物質EEM-S的制造方法，親水性溶劑是碳原子數1～4的低級醇。
8.權利要求6或7記載的生理活性物質EEM-S的制造方法，分子篩法是使用分子篩膜(平膜)、中空過濾膜、透析膜或分子色譜的方法。
9.含有權利要求1至5任一項中記載的生理活性物質作為有效成分的藥物。
10.權利要求9記載的藥物是抗癌劑。
11.權利要求9或10記載的藥物是片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑或液體制劑。
12.權利要求9、10或11記載的藥物是用大豆肽和/或貝殼樹脂薄膜包衣劑包衣的片劑。
全文摘要
本發明公開了通過分子篩法處理至少一種選自香菇、火菇、真姬菇、側耳屬、滑菇、奇果菌屬、小包腳菇屬、ハタケシメジ、ェリンギ、蘑菇、靈芝和木層孔菌屬的菌類的熱水或低級醇萃取物，除去低分子和高分子部分得到的EEM－S及其制劑。該EEM－S顯示抗癌作用、免疫賦活作用、抗氧化作用、降低血壓和血糖作用等生理作用。
文檔編號A61K9/08GK1416349SQ01806435
公開日2003年5月7日 申請日期2001年1月11日 優先權日2000年1月12日
發明者池川哲郎, 池川昭子, 島田文武 申請人:有限會社生命科學研究所